Thyroid Stimulating Hormone [125I]

Thyroid Stimulating Hormone [125I]
Solid Phase
Component System
Page 1
RIA HOT LINE U.S. ONLY: 1-800-437-1705
Customer support and technical information can be
obtained at local MP Biomedicals offices
Thyroidea Stimulierend s Hormon [125J]
Solid Phase Komponentesystem
Seite 10
TSH [125I]
Système de Composants en Phase Solide
Kundenberatung und technische Informationen bei den MP
Biomedicals Niederlassungen erhältlich
Page 20
Pour toute aide et information techniques contactez votre
agence locale de MP Biomedicals
Sistema a componenti in fase solida per
il dosaggio dell'Ormone Tireotropo [125I]
Pagina 29
Per qualsiasi informazione o esigenza si prega di rivolgersi
agli uffici locali della MP Biomedicals
Hormona Estimulante del Tiroides [125I]
Sistema de componentes en fase solida
Página 37
Para información y soporte técnico dirijase a las oficinas
locales de MP Biomedicals
Catalog No.:06B-264125 (100 Tubes)
06B-264130 (200 Tubes)
Thyroid Stimulating Hormone [125I]
Solid Phase Component System
For the Quantitative Determination of Human Thyroid Stimulating Hormone (TSH) in
Serum or Plasma.
2.
3.
Summary and Explanation of the Test
Thyroid stimulating hormone (Thyrotropin, TSH) is a glycoprotein produced by the
anterior pituitary gland which stimulates the production and secretion of thyroxine (T4)
and triiodothyronine (T3) by the thyroid gland. Circulating free T 4 and free T3, in turn,
regulate TSH secretion by a direct inhibitory action on the thyrotrophic cells of the
pituitary. When thyroid secretion is too low, TSH secretion is stimulated; when thyroid
secretion is too high, TSH secretion is inhibited. As a result, the circulating
concentrations of T4 and T3 are normally maintained within narrow limits.
TSH Antibody Coated Tubes, ANTI TUBES Catalog No. 06B264901,
polystyrene tubes coated with affinity purified TSH antibody (goat); 100
tubes/bag. Storage: Refrigerate at 2-8°C in foil bags. Stability: Refer to
expiration date on bag.
TSH Serum Calibrators Set A-G, STD 1-7 Catalog No. 06B263893, containing
human TSH in human serum* with stabilizer, 0.1% sodium azide** and other
preservative. Values are given on vial labels. These calibrators have been
calibrated for TSH against the Medical Research Council, World Health
Organization, Standard WHO/MRC 80/558. Storage: Refrigerate at 2-8°C.
Stability: Refer to expiration date on vial.
Calibrator
Catalog No.
Volume/Vial, mL
Nominal TSH Value
(µU/mL)1
A
B
C
D
E
F
G
06B263711
06B263729
06B263737
06B263745
06B263753
06B263761
06B263770
8
4
4
4
4
4
4
0
0.2
1
4
10
40
80
Elevated TSH concentrations are found in patients with primary hypothyroidism. This
occurs not only in patients with obvious clinical disease but in patients with mild
hypothyroidism as well. Elevated TSH may be found in patients with various diseases,
although thyroid hormone concentrations are normal, indicating that elevation in TSH
is the first measurable change that occurs when thyroid secretion declines1-4. Low or
undetectable levels of TSH may be found in patients with hyperthyroidism.
The major clinical value of TSH levels is in the diagnosis of primary hypothyroidism due
to dysfunction within the thyroid. However, hypothyroidism may arise from a
dysfunction in the pituitary or hypothalamus and TSH may be low or normal. In
addition to basal serum TSH determinations, assessment of serum TSH after the
intravenous administration of TRH (Thyrotropin Releasing Hormone) may provide useful
clinical information5-8. It has been suggested that serum TSH is a more reliable tool
than serum T4 and FTI (free thyroxine index) for the detection of thyroid disease in
severely ill patients9.
Principle of the Test
In an immunoradiometric assay, or IRMA, labeled antibody is reacted with analyte in
the presence of antibody bound to a solid support. IRMA is often referred to as "twosite IRMA" or "sandwich assay".
The quantitation of the separated, radioactive antibody-analyte-solid phase antibody
complex shows a direct relationship between the level of radioactivity and the
concentration of analyte in the calibrator or patient sample.
Reagents
For In Vitro Diagnostic Use.
1.
TSH [125I] Tracer, 125 I TRACER Catalog No. 06B264903, ready to use
preparation of less than 10 µCi (370 kBq) [125I] TSH MAb (mouse) in buffer with
bovine albumin, goat serum, mouse serum, dye, stabilizers, 0.1% sodium azide**
and other preservatives. 25 mL. Storage: Refrigerate at 2-8°C. Stability: Refer
to expiration date on vial.
1
1
NOTE:
TSH values will vary from lot to lot. Use the values printed on the vial labels.
* CAUTION: Handle as if capable of transmitting infection: Source material from
which this product was derived was found nonreactive for HBsAg and negative
for HIV antibody when tested with licensed reagents. No known test method can
offer assurance that product derived from human blood will not be infectious.
Refer to CDC/NIH Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories
publication (HHS Publication No. [CDC] 84-8395).
** WARNING: Reagents contain sodium azide. Sodium azide may react with lead
and copper plumbing to form highly explosive metallic azides. On disposal, flush
with a large volume of water to prevent azide build-up. Very toxic if swallowed.
Contact with acids liberates very toxic gas. After contact with skin, wash
immediately with plenty of water.
WARNING: CONTAINS RADIOACTIVE MATERIAL
This MP Biomedicals TSH Solid Phase Component System contains <10 microcuries
(370 kilobecquerels) of [ 125I]. This radioactive material may be received, acquired, possessed and used only by physicians, clinical laboratories or hospitals and only for in
vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the
material, or the radiation therefrom, to human beings or animals. Its receipt,
acquisition, possession, use and transfer are subject to the regulations and a general
license of the U.S. Nuclear Regulatory Commission or a State with which the
Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority.
MP Biomedicals, LLC
2
Adherence to the basic rules of radiation safety should provide adequate protection.
The user is referred to National Bureau of Standards Handbook No. 92, "Safe Handling
of Radioactive Materials", issued March 9, 1964, Superintendent of Documents, U.S.
Government Printing Office, Washington, D.C. 20402. A summary follows:
# Do not eat, drink, smoke or apply cosmetics where radioactive materials are used.
# Do not pipet radioactive solutions by mouth. # Avoid direct contact with all
radioactive materials by using protective articles such as lab coats and disposable
gloves. # All radiological work should be done in a designated area away from traffic.
# Radioactive materials should be stored in their original containers in a designated
area. # A record book for logging receipt and disposal of all radioactive materials
should be kept. # Laboratory equipment and glassware which are subject to
contamination should be segregated to prevent cross-contamination of different
radioisotopes. # Any radioactive spills should be taken care of immediately in
accordance with established procedures. # All radioactive materials must be disposed
of in accordance with the prevailing regulations and guidelines of the agencies holding
jurisdiction over the laboratory. # Uncontaminated containers may be discarded in nonradioactive waste providing that labels and labeling are defaced.
All reagents and samples must be brought to room temperature before use, and
returned to recommended storage conditions immediately after use. Distilled water is
recommended for the wash steps.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
If data reduction techniques require total counts, label polystyrene tubes
accordingly and set aside.
Number an appropriate number of antibody coated tubes for the standard curve
and clinical samples.
Add 200 µL TSH Calibrators and clinical samples to tubes according to the
pipetting scheme shown in the outline which follows.
Add 500 µL TSH Tracer Solution to all tubes. Vortex briefly. Cover tubes.
Incubate at 37
1°C in a water bath for 3.0 hours.
Remove all tubes from the water bath and uncover them.
Aspirate or decant. Add 2.0 mL distilled water.
Repeat step 7. Aspirate or decant a final time.
Count the radioactivity in these tubes and total count tubes (if needed) in a
gamma counter for one minute.
±
TSH [125I] Solid Phase Component System
Equipment and Reagents Required but Not Provided:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Distilled water.
Any type semi-automatic pipette capable of delivering 200 µL, 500 µL and 2.0 mL
volumes. Use of pipettor/diluters is not recommended, because of possible
sample carry-over.
Test tube rack.
Vortex mixer.
Water bath capable of maintaining 37
1°C.
Gamma counter for measuring [125I].
Appropriate quality control material.
±
Specimen Collection
No special patient preparation is required. The laboratory should be advised of possible
radioactivity in the sample, from previous diagnostic in vivo studies.
1.
2.
3.
Preparation of Specimen for Analysis: Collect the blood in a 5 or 10 mL evacuated
glass tube. If plasma is desired for analysis, EDTA may be used as the
anticoagulant. Allow blood to clot at room temperature. Centrifuge and collect
the serum or plasma. Serum should be separated within one hour after collection.
Lipemic, hemolyzed or icteric samples should not be used.
Storage: Serum may be stored at 2-8°C after collection for up to 7 days or stored
frozen for up to 1 month. Repeated freezing and thawing should be avoided.
After thawing, serum should be kept cold (+2 to +8°C) and assayed within 7
days.
Shipping of Specimens: Carefully packed serum must be shipped and received
frozen.
Assay Procedure
Tube
No.
Calibrator
(µL)
Patient
Serum
(µL)
Tracer
(µL)
1, 2
3, 4
5, 6
7, 8
9,10
11,12
13,14
Controls
and
Patient
Samples
200 A
200 B
200 C
200 D
200 E
200 F
200 G
---------------
500
500
500
500
500
500
500
200
500
Wash
--Vortex
and
incubate
all tubes
at 37°C
for 3.0
hours
Aspirate
and
wash all
tubes 2
times
execpt
total
count if
used
Calculation of Results
Table 1 shows typical data.
concentrations.
Refer to the individual vials of calibrator for TSH
Automated Calculations:
Automated data reduction techniques may be used to calculate TSH results. Point-topoint interpolation, four parameter logistic fit or other types of curve fitting programs
may be utilized.
Control sera must be run concurrently with patient samples. The standard curve and
the clinical determinations must be run simultaneously.
3
Incubate
4
3.
Manual Calculations:
1.
2.
Calculate the average cpm for tubes 1-2, Calibrator A.
Subtract the average cpm for tubes 1-2 from each other succeeding tube cpm to
obtain a corrected cpm.
3.
The standard curve may be plotted using the corrected cpm for each calibrator
level on the y-axis versus the calibrator concentration on the x-axis using log-log
graph paper.
4.
See Figure 1 for a sample graph. These data are shown as a representative
example only and should not be used instead of a standard curve obtained with
each assay.
Example of Calculation for TSH:
4.
Average cpm for Calibrator A
Cpm for sample 1
Corrected cpm for sample 1
Using Figure 1, 5797 cpm
=
=
=
=
271
6068
5797
4.6 µU/mL TSH.
TSH Calibrators have been calibrated for TSH against the Medical Research Council,
World Health Organization, Standard WHO/MRC 80/558.
Test calibrators in duplicate with each run. Calibration curves may be generated using
manual or automated methods as described in the Calculation of Results section.
When changing to new lot numbers of tubes or tracer, new calibration curves must be
run. Do not intermix reagents from different lots within a run.
Quality Control
Assay at least two levels of quality control material (normal and abnormal) in duplicate
in each run.
If the results do not meet the laboratory's established criteria for acceptance, the data
should be reviewed and the run repeated as necessary according to the laboratory's
procedure manual. Technical assistance is available through the MP Biomedicals
HOTLINE; call toll-free (800) 437-1705.
Limitations of the Procedure
2.
7.
8.
9.
Expected Values
Calibration
1.
5.
6.
The standard curve covers the approximate range of 0.0 to 80 µU TSH per mL.
Refer to the labels for exact concentrations of TSH. Calibrator A acts as a nonspecific binding correction for the TSH IRMA and may be used to correct for background counts and radioactive tracer trapped by or bound non-specifically to the
tube.
For patient samples which have TSH values greater than the Calibrator G value,
dilute the sample with Calibrator A as follows: to 50 µL sample, add 400 µL of
Calibrator A. Mix gently and use 200 µL of this diluted sample per assay tube.
Read the results from the standard curve and multiply by the dilution factor nine
(9) to obtain the correct value.
A high dose hook effect has not been observed with TSH levels up to 500 µU/mL.
Do not intermix reagents from different lots. If two vials of the same reagent are
to be used in one assay run, the contents of the vials should be pooled and mixed
before starting the procedure.
The presence of radioactivity in a patient sample may interfere with the assay.
In early pregnancy, the ranges of TSH normal results will overlap the hyperthyroid
ranges; caution should be exercised in interpreting these results.
This assay has not been validated for use in testing or screening neonates.
As the radioactive tracer decays with age, increased counting times may be
required, but this will probably be unnecessary with efficient equipment.
Total pipetting time when sample and tracer are pipetted separately must be
limited to two hours when pipetting manually and when using liquid handling
systems in a sequential delivery mode. When using a liquid handling system
which pipets sample and tracer simultaneously, the total pipetting time must be
limited to one hour.
5
Sera from 132 apparently euthyroid individuals (65 male and 67 female) were analyzed
for TSH with MP Biomedicals TSH SPCS reagents. The range represents a central
95% analysis.
Normal Range
Mean
0.54 - 3.70 µU/mL
1.53 µU/mL
Each laboratory should, however, define its own normal range in a group of normal
subjects.
Sera from clinically diagnosed hyperthyroid (n = 66) and hypothyroid (n = 61)
patients were evaluated in the MP Biomedicals TSH SPCS.
Hyperthyroid Range:
≤ 0.06-0.42 µU/mL
Hypothyroid Range: > 9.0 µU/mL
Whenever laboratory data conflict with clinical findings or impressions, clinical
judgement should be exercised and additional evaluation undertaken.
Specific Performance Characteristics
Clinical Performance: Correlation Study
Three hundred and fifty five (355) human serum samples were assayed with the TSH
SPCS assay and the TSH MAb SPCS assay. The results were compared by linear
regression analysis; the results are summarized in the following tables.
6
Linear Regression Comparison of the TSH SPCS assay with the TSH MAb SPCS assay:
All Samples.
A normal human serum pool was spiked with various amounts of TSH (WHO MRC
80/558). The following recoveries were obtained:
TSH SPCS assay (y) versus TSH MAb SPCS (x)
Slope
Recovery:
0.92
Intercept (µU/mL)
-0.12
Correlation Coefficient (r)
0.991
Range of Values (µU/mL)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0.06 - 69.7
≤ 0.06 - 70.3
n
355
Linear Regression Comparison of the TSH SPCS assay with the TSH MAb SPCS assay:
Samples < 6 µU/mL.
Added
Expected
Found
Percent
Recovered
0
0.5
1.0
5.0
10.0
25.0
50.0
--1.58
2.08
6.08
11.08
26.08
51.08
1.08
1.44
1.90
5.17
10.3
24.0
53.2
--91
91
85
93
92
104
Sensitivity:
TSH SPCS assay (y) versus TSH MAb SPCS (x)
Sensitivity, defined as +2 S.D. of twenty zero calibrator determinations for TSH, is
0.06 µU/mL.
Slope
0.86
Dilutional Linearity:
Intercept (µU/mL)
0.02
Correlation Coefficient (r)
0.980
Dilutional linearity was determined by diluting a hypothyroid sample with zero
calibrator. The results are summarized in the following table.
Range of Values (µU/mL)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0.06 - 4.47
≤ 0.06 - 5.33
n
294
Dilution
TSH SPCS Result
(µU/mL)
Expected Value
(µU/mL)
% Recovery
Neat
53.2
---
---
1:2
27.1
26.6
102.1
Precision:
1:4
13.0
13.3
97.8
Four commercial control sera on repetitive testing (at least 20 determinations) gave the
following inter-assay and intra-assay variations:
1:8
6.62
6.65
99.6
1:16
3.27
3.32
98.4
1:32
1.60
1.66
96.3
1:64
0.76
0.83
91.5
Inter-assay
Intra-assay
Sample
1
2
3
4
1
2
3
4
Mean,
µU/mL
S.D.
% CV
0.52
0.08
16.2
1.10
0.10
9.4
4.69
0.23
4.8
25.6
1.3
5.0
0.43
0.06
13.3
1.11
0.07
6.0
4.76
0.23
4.9
27.0
1.13
4.2
7
8
Specificity:
The MP Biomedicals TSH SPCS contains an antibody to intact TSH. Interferences with
other protein hormones were measured by spiking physiologically high levels of these
hormones into normal serum. The results obtained are as follows:
TSH (µU/mL)
Normal Serum
50 mU/mL LH
200 mU/mL LH
1000 mU/mL LH
1.90
2.04
1.91
1.86
50 mU/mL FSH
200 mU/mL FSH
1000 mU/mL FSH
1.91
1.62
1.06
1,000 mU/mL hCG
10,000 mU/mL hCG
100,000 mU/mL hCG
1.95
1.74
0.78
THYROIDEA STIMULIERENDES HORMON [125J]
SOLID PHASE KOMPONENTENSYSTEM
Zur quantitativen Bestimmung des humanen, TSH (Thyroidea Stimulierendes Hormon,
Thyreotropin) in Serum oder Plasma.
Zusammenfassung und Erläuterung des Tests
TSH ist ein Glycoprotein, das von der Hypophyse produziert wird. Es stimuliert die
Schilddrüse zur Produktion und Sekretion von Thyroxin (T4) und Trijodthyronin (T3).
Zirkulierendes freies T3 (FT 3) und freies T4 (FT 4) wiederum reguliert über eine negative
Rückkopplung die TSH-Sekretion, indem es direkt die thyreotropen Zellen der
Hypophyse hemmt. Sinkt die Sekretion der Schilddrüse, wird die TSH-Sekretion
stimuliert. Umgekehrt gilt, daß eine hohe Sekretionsrate der Schilddrüse die TSHFreisetzung hemmt. Dieser Regelkreis bewirkt, daß die zirkulierende Konzentration an
T4 und T3 unter Normalbedingungen innerhalb von engen Grenzen konstant gehalten
wird.
Patienten mit einer primären Hypothyreose weisen erhöhte TSH-Konzentrationen auf.
Dies trifft nicht nur für Patienten mit einem eindeutigen klinischen Bild zu, sondern
auch bei einer leichten Hypothyreose. Erhöhte TSH-Konzentrationen lassen sich bei
Patienten mit Erkrankungen verschiedener Genese nachweisen, obwohl die
Schilddrüsenhormone im Normalbereich liegen. Die TSH-Erhöhung ist als erstes Indiz
für eine herabgesetzte Schilddrüsenfunktion zu sehen.1-4 Niedrige oder nicht meßbare
TSH-Werte können bei Patienten mit Hyperthyreose auftreten.
Der wichtigste klinische Nutzen der TSH-Bestimmung besteht in der Diagnose einer
primären Hypothyreose, der eine Fehlfunktion der Schilddrüse zugrunde liegt. Eine
Hypothyreose kann jedoch auf eine Fehlfunktion der Hypophyse oder des
Hypothalamus zurückzuführen und mit normalen oder niedrigen TSH-Werten verbunden
sein. Zusätzlich zum basalen TSH-Wert kann deshalb eine Bestimmung des TSHSpiegels nach i.v. Gabe von TRH (Thyrotropin Releasing Hormon) von klinischer
Bedeutung sein.5-8 Der TSH-Test wird zum Nachweis von Schilddrüsenerkrankungen
bei schwerkranken Patienten als sicherere Methode angesehen, als die Bestimmung von
T4 und FTI9 (Free Thyroxin Index).
Testprinzip
In einem immunoradiometrischen Assay (IRMA) läßt man den markierten Antikörper
und das Antigen mit einem zweiten, fest an einen Träger gebundenen Antikörper
reagieren. Oft wird der IRMA daher als "2-Lagen IRMA" oder als "Sandwich-Test"
bezeichnet. Die Messung des radioaktiven "Antikörper-Antigen-2. Antikörper"Komplexes zeigt, daß ein proportionales Verhältnis zwischen der Radioaktivität und der
Konzentration des Antigens im Standard bzw. in der Patientenprobe besteht.
9
10
VORSICHT, ENTHÄLT RADIOAKTIVES MATERIAL
Reagenzien
Zur Erstellung der in-vitro-Diagnose.
1.
2.
3.
1
TSH [125J]-Tracer, 125 I TRACER Bestell-Nr. 06B264903, gebrauchsfertig, enthält
weniger als 370 kBq (10 µCi) [125J] TSH MAb (Mäuse) pro Fläschchen in Puffer
mit Rinderalbumin, Ziegen-Serum, Farbstoff, 0,1% Natrium azid** und anderen
Konservierungsstoffen. 25 ml. Lagerung: gekühlt bei 2 bis 8°C aufbewahren.
Haltbarkeit: gemäß Verfalldatum auf dem Fläschchen.
Mit TSH-Antikörpern beschichtete Röhrchen, ANTI TUBES
Bestell-Nr.
06B264901, Polystyrol-Röhrchen, beschichtet mit gereinigten TSH-Antikörpern
(Ziege). Lagerung: gekühlt bei 2 bis 8°C in Folienbeutel aufbewahren.
Haltbarkeit: gemäß Verfalldatum auf dem Beutel.
TSH Standards A-G. STD 1-7 Bestell-Nr. 06B263893, mit humanem TSH in
Humanserum* mit 0,1% Natriumazid** und anderen Konservierungsstoffen.
Konzentrationen sind auf den Etiketten der Fläschchen angegeben. Diese
Standards sind für TSH gegen den WHO/MRC 80/558-Standard, der dem
Standard WHO/MRC 68/38 entspricht, geeicht worden. Lagerung: gekühlt bei 2
bis 8°C aufbewahren. Haltbarkeit: gemäß Verfalldatum auf dem Fläschchen.
Standard
Bestell-Nr.
ml pro
Fläschchen
TSH Werte
(µU/ml)1
A
B
C
D
E
F
G
06B263711
06B263729
06B263737
06B263745
06B263753
06B263761
06B263770
8
4
4
4
4
4
4
0
0,2
1
4
10
40
80
BITTE BEACHTEN:
Die TSH-Werte variieren von Charge zu Charge. Bitte die
Werte benutzen, die auf den Fläschchen aufgedruckt sind.
* ACHTUNG: DAS PRODUKT SO HANDHABEN, ALS KÖNNE ES INFEKTIONEN
ÜBERTRAGEN: Das Ausgangsmaterial, aus dem dieses Produkt abgeleitet
wurde, reagierte negativ auf HBsAg und auf HIV-Antikörper bei Versuchen mit
genehmigten Reagenzien. Keine bekannte Testmethode kann gewährleisten,
daß Stoffe, die aus Humanblut abgeleitet werden, nicht infektiös sind. Siehe
dazu CDC/NIH Veröffentlichung über Biologische Sicherheit in
mikrobiologischen und biomedizinischen Laboratorien (HHS Veröffentlichung
Nr. 84-8395.
** Achtung: Die Reagenzien enthalten Natriumazid. Natriumazid kann mit Bleiund Kupferrohren reagieren und bildet hochexplosive metallische Azide. Bei
der Beseitigung deshalb mit viel Wasser nachspülen, um Azidanreicherungen zu
verhindern. Sehr giftig beim Verschlucken. Entwickelt bei Berührung mit
Säure sehr giftige Gase. Bei Berührung mit der Hat sofort abbwaschen mit viel
Wasser.
11
Dieses MP Biomedicals Solid-Phase Komponentensystem enthält weniger als 370
kBq (10 Microcurie) [125J] pro Tracer-Fläschchen. Das radioaktive Material von MP
Biomedicals darf nur durch Ärzte, klinische Laboratorien oder Krankenhäuser
bezogen, gelagert oder verwendet werden. Es ist für klinische In-vitro oder
Laboratoriumtests bestimmt, die nicht mit innerer oder äußerer Applikation des
Materials oder seiner Strahlung an Mensch und Tier in Zusammenhang stehen. Die
Annahme, der Erwerb, der Besitz, die Verwendung und der Transport dieses
Materials unterliegen der Aufsicht und bedürfen einer Umgangsgenehmigung der
zuständigen Behörden.
MP Biomedicals, LLC
Das Befolgen der grundsätzlichen Regeln des Strahlenschutzes bietet ausreichend
Sicherheit. Der Benutzer wird dazu auf das Handbuch Nr. 92 des National Bureau
of Standards "Safe Handling of Radioactive Materials" verwiesen, erschienen am
9.3.1964, Superintendent of Documents, U.S. Government Printing Office,
Washington, D.C. 20402. Siehe dazu folgende Zusammenfassung:
# Wo mit radioaktivem Material gearbeitet wird, darf weder gegessen, getrunken,
geraucht, noch dürfen kosmetische Mittel benutzt werden. # Radioaktives Material
darf nicht mit dem Mund pipettiert werden. # Der direkte Kontakt mit radioaktivem
Material ist durch Beachtung von Sicherheitsmaßnahmen, z.B. der Verwendung von
Laborkleidung und Einmalhandschuhen zu verhindern. # Mit radioaktivem Material
sollte nur in einem abgetrennten Bereich gearbeitet werden. # Radioaktives Material
sollte in den Originalbehältern in einem gekennzeichneten Raum aufbewahrt
werden. # Ein Berichtsheft zur Verzeichnung des Erhalts und der Beseitigung
radioaktiven Materials sollte geführt werden. # Der Kontamination ausgesetzte
Laboreinrichtungen und Glasgeräte sind voneinander zu trennen, um eine mehrfache
Kontamination mit verschiedenen Radioisotopen zu vermeiden. # Verschüttetes
radioaktives Material muß sofort gemäß empfohlener Verfahren behandelt werden. #
Jegliches radioaktive Material muß in Übereinstimmung mit den geltenden
Vorschriften und Richtlinien der für das Laboratorium zuständigen Behörde beseitigt
werden. # Nicht kontaminierte Behälter können zusammen mit nicht-radioaktivem
Abfall beseitigt werden, vorausgesetzt, daß Aufschrift und Etikett unkenntlich
gemacht worden sind.
Erforderliches Zubehör und Reagenzien, die jedoch nicht mitgeliefert werden:
1.
2.
3.
4.
Destilliertes Wasser
Mikroliterpipette für 200 µl, 500 µl, und 2,0 ml.
Pipettors/Dilutors ist nicht empfehlenswert,
Probenverschleppung führen könnte.
Gestell für Teströhrchen
Vortex-Mixer
5.
6.
7.
Wasserbad mit Temperatur von 37
1°C
Gamma-Counter zur Messung von [125J].
Geeignete Qualitäts Kontrollen.
±
12
Die Verwendung eines
da
dies
zu
einer
TSH MAb [125J] Solid Phase Komponentensystem
Probenentnahme
Eine besondere Vorbereitung des Patienten ist nicht erforderlich. Das Laboratorium
sollte auf die möglicherweise in den Proben vorhandene Radioaktivität hingewiesen
werden, die von früheren In-vivo-Untersuchungen herrühren kann.
1.
2.
3.
Vorbereitung der Proben für die Analyse: Entnehmen Sie das Blut in ein 5 oder
10 ml Glasröhrchen. Wenn zur Analyse Plasma gewünscht wird, kann EDTA
als Antikoagulationsmittel verwendet werden.
Lassen Sie das Blut bei
Zimmertemperatur gerinnen. Zentrifugieren Sie und entnehmen Sie das Serum
oder das Plasma. Das Serum sollte innerhalb einer Stunde nach der Entnahme
abgetrennt und eingefroren bis zum Versuch gelagert werden. Lipämische,
hämolysierte oder ikterische Proben sollten nicht weiterverwendet werden.
Lagerung: Serum Kann bis zu 7 Tage bei 2-8°C bzw. bis zu 1 Monat
tiefgefroren gelagert werden. Wiederholtes Auftauen und Einfrieren ist zu
vermeiden. Nach dem Auftauen sollte das Serum bei 2-8°C gelagert und
innerhalb von 7 Tagen untersucht werden.
Versand der Proben: Sorgfältig verpacktes Serum muß gefroren verschickt und
erhalten werden.
Röhrchen
Nr.
Standard
(µl)
Patiente
nserum
(µl)
Tracer
(µl)
Inkubieren
Waschen
1, 2
3, 4
5, 6
7, 8
9,10
11,12
13,14
Kontrollseren und
Patientenproben
200 A
200 B
200 C
200 D
200 E
200 F
200 G
---------------
500
500
500
500
500
500
500
--Mischen
und alle
Röhechen
bei 37°C
3 Stunden
inkubieren
--Absaugen
und alle
Röhrchen 2
mal
waschen
außer der
Totalaktivität
200
500
Testansatz
Berechnung der Ergebnisse
Kontrollseren sollten parallel zu den Patientenproben bestimmt werden.
Die
Standardkurve und die klinischen Proben müssen gleichzeitig angesetzt werden.
Alle Reagenzien und Proben müssen vor dem Gebrauch auf Zimmertemperatur
erwärmt werden. Allerdings sollten sie dieser Temperatur nicht länger als unbedingt
notwendig ausgesetzt werden. Für die Waschvorgänge wird destilliertes Wasser
empfohlen.
Tabelle 1 zeigt typische Werte.
Standard fläschchen.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Wenn die Datenauswertung eine Totalaktivität erfordert, dann die PolystyrolRöhrchen kennzeichnen und beiseite stellen.
Numerieren Sie die mit Antikörpern beschichteten Röhrchen für die
Standardkurve und für jede klinische Probe.
Je 200 µl TSH-Standards und klinische Proben in die Röhrchen nach dem
folgenden Schema pipettieren.
500 µl Tracer-Lösung in alle Röhrchen geben. Kurz mischen, dann die
Röhrchen abdecken.
±
3 Stunden bei 37
1°C im Wasserbad inkubieren.
Alle Röhrchen aus dem Wasserbad nehmen und die Abdeckung entfernen.
Absaugen oder dekantieren. 2,0 ml destilliertes Wasser hinzufügen.
Schritt 7 wiederholen. Ein letztes Mal absaugen oder dekantieren.
Die Radioaktivität in diesen Röhrchen und in den Röhrchen für
Gesamtzählwerte (wenn erforderlich) eine Minute lang in einem GammaCounter zählen.
Beachten Sie die TSH-Konzentration auf den
Automatische Auswertung:
Die automatische Datenauswertung kann zur Berechnung der TSH-Ergebnisse
verwendet werden. Eine Punkt-zu-Punkt-Interpolation, eine "4-Parameter Logistik"Auswertung oder andere Programmarten zur Kurvenzeichnung können hierzu
verwendet werden.
Manuelle Berechnungen:
1.
2.
3.
4.
Den durchschnittlichen IpM-Wert der Röhrchen 1-2 (Standard A) berechnen.
Den durchschnittlichen IpM-Wert der Röhrchen 1-2 von den IpM-Werten aller
folgenden Röhrchen subtrahieren, um einen korrigierten IpM-Wert zu erhalten.
Die Standardkurve wird aufgetragen, indem die korrigierten IpM-Werte für
jeden Standard auf der Y-Achse gegen die Konzentration der Standards auf der
X-Achse (auf log-log Papier) aufgetragen werden.
In Abb. 1 ist eine typische Standardkurve aufgetragen. Diese Daten werden
lediglich als repräsentatives Beispiel gezeigt und sollten nicht anstelle der
Standard-Kurven verwendet werden, die man mit jedem Assay erhält.
Berechnungsbeispiel für TSH:
Durchschnittlicher IpM-Wert für Std. A
IpM für Probe 1
Berichtigter IpM-Wert für Probe 1
Bei Verwendung von Abb. 1 5797 IpM
13
14
=
=
=
=
271
6068
5797
4,6 µU/ml TSH
Kalibration
Erwartete Werte
Die TSH-Standards wurden gegen WHO/MRC 80/558 Kalibriert.
Seren von 132 gesundenen euthyreoten Individuen (65 Männer und 67 Frauen
wurden mit dem MP Biomedicals TSH SPCS untersucht. Die angegebenen Werte
repräsentieren den 95% -Bereich.
Standards sollten in jedem Lauf in Doppelbestimmung gemessen werden. Zur
Berechnung der Standard Kurven Können manuelle oder automatisierte Verfahren
herangezogen werden, wie in Abschnitt "Berechnung der Ergebnisse" beschrieben.
Bei Ver wendung einer neuen Röhrchen - oder Tracer - Charge muß eine neue
Standard Kurve erstellt werden. Reagenziem aus verschiedenen Chargen dürfen
nicht innerhalb eines Laufs gemischt werden.
Normalbereich
Mittelwert
0,54 - 3,70 µU/ml (mU/l)
1,53 µU/ml (mU/l)
Qualitäts Kontrolle
Jedes Laboratorium sollte jedoch seinen eigenen Normalbereich mit einer Gruppe
von gesunden Personen bestimmen.
Mindestens zwei Konzentrations bereiche (normal und pathologisch) in
Doppelbestimmung pro Lauf einsetzen. Sollten die Ergebnisse nicht den festgelegten
Kriterien entsprechen, müssen die Daten sorgfältig untersucht und der Lauf
erforderlichen falls wiederholt werden. Kudenberatung und technische
Informationen bei den MP Biomedicals Niederlassungen erhältlich.
Seren von Patienten, bei denen die klinische Diagnose auf Hyperthyreose (n = 66)
und Hypothyreose (n = 61) lautete, wurden mit dem MP Biomedicals TSH SPCS
untersucht.
Bereich für Hyperthyreose:
0,06 - 0,42 µU/ml
Bereich für Hypothyreose: > 9,0 µU/ml
Grenzen des Verfahrens
Sollten die Werte des Laboratoriums mit den klinischen Befunden oder Eindrücken in
Widerspruch stehen, so sollte die klinische Beurteilung im Vordergrund stehen und
eine weitere Untersuchung vorgenommen werden.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Da der radioaktive Tracer mit der Zeit zerfällt, können längere Zählzeiten
erforderlich werden. Dies wird jedoch mit einer effizienten Ausrüstung nicht
notwendig sein.
Werden Probe und Tracer separat pipettiert, darf die gesamte Pipettierzeit bei
manueller Durchführung sowie bei sequentieller Pipettierung mit einer
Pipettierstation zwei Stunden nicht überschreiten. Bei simultaner Pipettierung
von Probe und Tracer mit einem Automaten darf eine Stunde nicht
überschritten werden.
Die Standard-Kurve deckt den Meßbereich von 0,0 bis 80 µU TSH pro ml ab.
Beachten Sie die Etiketten für die genaue TSH Konzentration. Standard A wird
für die unspezifische Bindung in dem TSH-IRMA eingesetzt.
Im Falle von Patientenproben, die höhere TSH-Werte als der Standard G
aufweisen, kann die Probe mit Standard A wie folgt verdünnt werden: auf 50
µl Probe 400 µl Standard A hinzugeben, leicht mischen und 200 µl dieser
verdünnten Probe pro Teströhrchen einsetzen.
Die Ergebnisse von der
Standard-Kurve ablesen und mit dem Verdünnungsfaktor 9 multiplizieren, um
den richtigen Wert zu erhalten.
Bis 500 µU/mL TSH wurde Kein high dose hook - Effekt beobachtet.
Reagenzien mit verschiedenen Chargen nummern dürfen nicht in einem Assay
eingesetzt werden. Sollte der Inhalt von 2 Fläschchen eingesetzt werden , so
müssen diese vor Assaybeginn gut gemischt werden.
Das Vorhandensein von Radioaktivität in einer Patientenprobe kann den
Versuch beeinträchtigen.
Die erstellten Normalbereiche können während einer Schwangerschaft nicht
immer angewendet werden.
Dieser Test wurde nicht validiert für untersuchungen oder screening bei
Neugeborenen.
15
≤
Spezifische Leistungsmerkmale
Klinische Studien: Korrelation
355 Human seren wurden mit dem vorliegenden TSH SPCS Test und mit dem
früheren TSH MAb SPCS Test untersucht.
Lineare Regression, alle Proben:
TSH SPCS (y) und TSH MAb SPCS (x)
Steigung
0,92
Y-Achsenabschnitt (µU/mL)
-0,12
Korrelations Koeffizient (r)
0,991
Wertebereich (µU/mL)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0,06 - 69,7
≤ 0,06 - 70,3
n
355
16
Lineare Regression, Proben < 6 µU/mL:
Wiederfindung:
Humanserum wurde mit verschiedenen Mengen einer bekannten TSH (WHO MRC
80/558) versetzt. Folgende Wiederfindungswerte wurden ermittelt:
TSH SPCS (y) und TSH MAb SPCS (x)
Steigung
0,86
Y-Achsenabschnitt (µU/mL)
0,02
Korrelations Koeffizient (r)
0,980
Wertebereich (µU/mL)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0,06 - 4,47
≤ 0,06 - 5,33
n
294
Präzision:
Zugegeben
Erwartet
Gefunden
Wiederfindung %
0
0,5
1,0
5,0
10,0
25,0
50,0
--1,58
2,08
6,08
11,08
26,08
51,08
1,08
1,44
1,90
5,17
10,3
24,0
53,2
--91
91
85
93
92
104
Linearität bei Verdünnung:
Vier handelsübliche Kontrollseren ergaben bei Mehrfachbestimmungen (mindestens
20) die folgende Inter-Assay und Intra-Assay-Präzision:
Die Linearität wurde durch Verdünnung einer hypothyreoten Probe mit Nullstandard
ermittelt.
Inter-assay
Probe
Durchschnittswert µU/ml
Standardabweichung
CV in %
1
2
3
4
0,52
0,08
16,2
1,10
0,10
9,4
4,69
0,23
4,8
25,6
1,3
5,0
Intra-assay
Probe
Durchschnittswert µU/ml
Standardabweichung
CV in %
1
2
3
4
0,43
0,06
13,3
1,11
0,07
6,0
4,76
0,23
4,9
27,0
1,13
4,2
Verdünnung
TSH SPCS Ergebnis
(µU/mL)
Erwarteter Wert
(µU/mL)
% Wiederfindung
Keine
53,2
---
---
1:2
27,1
26,6
102,1
1:4
13,0
13,3
97,8
1:8
6,62
6,65
99,6
1:16
3,27
3,32
98,4
1:32
1,60
1,66
96,3
1:64
0,76
0,83
91,5
Empfindlichkeit
Die Empfindlichkeit, definiert für +2 Standardabweichungen von 20 A-StandardBestimmungen für TSH, liegt bei 0,06 µU/ml.
17
18
Spezifität:
Das MP Biomedicals TSH SPCS enthält Antikörper gegen intaktes TSH. Die
Kreuzreaktionen mit anderen Proteohormonen sind wie folgt:
TSH (µU/ml)
Normales Serum
50 mU/mL LH
200 mU/mL LH
1000 mU/mL LH
1,90
2,04
1,91
1,86
50 mU/mL FSH
200 mU/mL FSH
1000 mU/mL FSH
1,91
1,62
1,06
1,000 mU/mL hCG
10,000 mU/mL hCG
100,000 mU/mL hCG
1,95
1,74
0,78
TSH [125I] SYSTEME DE COMPOSANTS EN PHASE
SOLIDE
Destiné au dosage quantitatif de la TSH (Thyroïd Stimulating Hormon ou Thyréostimuline) dans du sérum ou du plasma humain.
Explication sommaire du test
La thyréostimuline (TSH) est une glycoprotéine produite par l'adénohypophyse, et
qui stimule la production et la sécrétion de la thyroxine (T4) et de la triiodothyronine
(T3) par la glande thyroïde. A leur tour, la T4 libre (T4L) et la T3 libre (T3L)
circulantes modulent la sécrétion de TSH par une action inhibitrice directe sur les
cellules thyréotropes de l'hypophyse. Lorsque la sécrétion thyroïdienne est trop
faible, la sécrétion de TSH est stimulée; lorsque la sécrétion thyroïdienne est trop
élevée, la sécrétion de TSH est inhibée. Il en résulte que les concentrations de T4 et
de T3 circulantes sont en général maintenues dans des limites étroites.
On trouve des taux de TSH élevés chez des malades à hypothyroïdie primaire. Ceci
se rencontre non seulement chez des sujets présentant des signes cliniques
évidents, mais également chez des malades souffrant d'hypothyroïdie bénigne. On
peut constater des taux élevés de TSH chez des personnes souffrant de diverses
maladies, bien que les concentrations en hormones thyroïdiennes soient normales,
ce qui indique qu'une augmentation du taux de TSH est la première modification
mesurable qui se produit lorsque la sécrétion thryoïdienne diminue1-4. On peut
relever des taux faibles, voire indétectables de TSH chez des malades
hyperthyroïdiens.
L'intérêt clinique principal du dosage de la TSH réside dans le diagnostic des
hypothyroïdies primaires dues à un dysfonctionnement au niveau de la thyroïde.
Toutefois, l'hypothyroïdie peut provenir d'un disfonctionnement de l'hypophyse ou
de l'hypothalamus, et le taux de TSH peut être faible ou normal. En complément
des dosages de TSH sérique de base, une mesure du taux de TSH sérique après
injection intraveineuse de TRH (Thyrotropin Releasing Hormone) peut fournir des
renseigne-ments cliniques fort utiles. 5-8 Certains auteurs ont suggéré que la TSH
sérique est un outil plus fiable que la T4 sérique et que l'Index de Thyroxine Libre
(ITL) pour la détection d'une maladie thyroïdienne chez des sujets gravement
malades. 9
Principe du test
Dans un dosage immuno-radiométrique (IRMA), l'anticorps marqué réagit avec
l'analyte en présence d'un anticorps fixé sur un support solide. On appelle
couramment le dosage IRMA un dosage "IRMA à deux sites" ou un dosage
"sandwich".
La mesure quantitative du complexe séparé, anticorps-analyte radioactif-anticorps en
phase solide indique une relation directe entre le taux de radio-activité et la
concentration de l'analyte dans l'étalon ou dans l'échantillon du malade.
19
20
Réactifs
Destinés à un diagnostic in vitro
1.
2.
3.
1
Solution de marquage de la TSH [125I], 125 I TRACER N° de Réf.:
06B264903; préparation prête à l'emploi; contient moins de 10,0 µCi (370
kBq) d'anticorps monoclonal (souris) anti-TSH [125I] tamponné dans de
l'albumine bovine, du sérum de chèvre, du sérum de souris, un colorant, 0,1%
d'azide de sodium** et d'autres agents de conservation. 25 ml. Stockage:
conserver au réfrigérateur entre 2 et 8°C. Date de péremption: se reporter à la
date indiquée sur le flacon.
Tubes revêtus d'anticorps anti-TSH, ANTI TUBES N° de Réf.: 06B264901,
tubes en polystyrène revêtus d'anticorps purifiés anti-TSH (chèvre). Stockage:
conserver au réfrigérateur (entre 2 et 8°C) dans le sachet protecteur. Date de
péremption: se reporter à la date indiquée sur l'emballage.
Etalons A-G de sérum contenant de la TSH, STD 1-7 N° de Réf.:
06B263893; contiennent de la TSH humaine dans du sérum humain* avec
0,1% d'azide de sodium** et d'autres agents de conservation. Les
concentrations sont indiquées sur les étiquettes des flacons. Ces étalons ont
été calibrés pour la TSH par rapport à l'étalon WHO/MRC 80/558 du Medical
Research Council, Organisation Mondiale de la Santé (cet étalon est équivalent
au WHO/MRC 68/38). Stockage: conserver au réfrigérateur entre 2 et 8°C.
Date de péremption: se reporter à la date indiquée sur le flacon.
Etalon
N° référence
Volume/flacon, ml
Valeurs TSH
(µU/ml)1
A
B
C
D
E
F
G
06B263711
06B263729
06B263737
06B263745
06B263753
06B263761
06B263770
8
4
4
4
4
4
4
0
0,2
1
4
10
40
80
NOTE:
Les valeurs de TSH peuvent varier d'un lot à l'antre. Utiliser les valeurs
figurant sur l'etiquckage des étalons.
* ATTENTION:
A
MANIPULER
COMME AGENT POTENTIELLEMENT
INFECTIEUX: Les matières premières d'origine humaine utilisées pour la
fabrication des composants de cette trousse ont été analysées et révélées
négatives en antigène HBs, anticorps VIH 1/2 et anticorps VHC lors de tests
réalisés avec des réactifs homologués. Toutefois, aucune méthode d'analyse
connue ne pouvant garantir l'absence totale d'agents pathogènes dans des
produits d'origine humaine, il faut les manipuler comme des agents
potentiellement infectieux.
21
** ATTENTION: Ces réactifs contiennent de l'azide de sodium. L'azide de sodium
peut provoquer des réactions avec le plomb et le cuivre des canalisations et
former des azides métalliques très explosifs. Lorsqu'on les évacue, faire couler
de l'eau en abondance pour éviter tout risque de concentration d'azide. Très
toxique en cas d'ingestion. Au contact d'un acide dégage un gaz très toxique.
Après contact avec la peau, se lavar immédiatement et abondamment avec de
l'eau.
ATTENTION: COMPOSANT RADIOACTIF
Le systéme de composants en phase solide pour TSH de MP Biomedicals contient
moins de 10 microcuries (370 kilobecquerels) d'Iode 125. Ce produit radioactif ne
peut être reçu, acquis, détenu et utilisé que par des médecins, des laboratoires
cliniques ou des hôpitaux pour des analyses cliniques ou de laboratoire in vitro qui
ne demandent pas l'administration interne ni externe du produit ou des radiations
émises par celui-ci à l'homme ou à l'animal. Sa réception, son acquisition, sa
détention, son utilisation et sa transmission sont soumises aux réglementations de la
législation française.
MP Biomedicals, LLC
Pour information, nous indiquons ci-après un résumé des règlementations
américaines:
# Ne pas manger, boire, fumer ni se maquiller dans le local où les produits
radioactifs sont utilisés. # Ne pas se servir de pipettes à aspiration par la bouche
pour des solutions radioactives. # Eviter tout contact direct avec tout produit
radioactif: utiliser des blouses de laboratoire et des gants à usage unique. # Tout
travail radiologique doit être effectué dans un endroit spécial à l'écart de toute
circulation. # Les produits radioactifs doivent être stockés dans leur emballage
d'origine en un lieu spécifique. # Tenir un journal dans lequel on indiquera l'entrée
et la sortie de tout produit radioactif. # Le matériel de laboratoire et la verrerie qui
sont soumis à contamination doivent être tenus à l'écart pour éviter toute
contamination croisée par les différents isotopes radioactifs. # S'il se produit un
débordement de liquide radioactif, suivre immédiatement les procédures de
nettoyage établies. # Tout produit radioactif doit être mis au rebut conformément
aux règlementations légales. # Les récipients non contaminés peuvent étre jetés
comme du matériel non radioactif, à condition que les étiquettes et toutes autres
marques d'identification soient retirées.
Matériel et réactifs nécessaires mais non fournis
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Eau distillée.
N'importe quel type de pipette semi-automatique capable de distribuer des
volumes de 200 µl, 500 µl et 2,0 ml. L'utilisation de pipetteurs/diluteurs est
déconseillée en raison des risques de contamination d'un échantillon à l'autre.
Portoir de tubes.
Agitateur Vortex.
Bain-marie à 37
1°C
Compteur gamma pour mesurer l'Iode 125.
Contrôles de qualité comme.
±
22
Systéme de composants en phase solide anti-TSH [125I]
Prélèvement de l'échantillon
Aucune préparation spéciale du patient n'est nécessaire. Le laboratoire doit être
prévenu si l'échantillon contient une certaine radioactivité provenant d'études
diagnostiques in vivo.
1.
2.
3.
Préparation de l'échantillon pour analyse: Prélever le sang dans un tube en
verre sous vide de 5 ou 10 ml. Si on a besoin de plasma, on peut utiliser de
l'EDTA comme anticoagulant. Laisser le sang former un caillot à température
ambiante. Centrifuger et prélever le sérum ou le plasma. Le sérum doit être
séparé dans l'heure qui suit le prélèvement et congelé jusqu'au moment du
dosage. Ne pas utiliser d'échantillons lipémiques, hémolysés ou icterique.
Stockage: On peut conserver les sérums à 2-8°C pendant 7 jours apìes le
prélèvement; congeler l'échantillon si le dosage doit être effectué dans le mois
suìvant le prélèvement. Eviter de le soumettre à une décongélation, puis à une
nouvelle congélation. Une fois décongelé, le sérum doit être conservé au
réfrigérateur (entre 2 et 8°C) et dosé les 7 jours qui suivent.
Transport des échantillons: Les échantillons, soigneusement emballés, doivent
rester congelés pendant toute la durée du transport.
Tubes
N°
Etalon
(µl)
Sérum du
patient
(µl)
Marqueur
(µl)
1, 2
3, 4
5, 6
7, 8
9,10
11,12
13,14
Contrôles
& Ech. du
patients
200 A
200 B
200 C
200 D
200 E
200 F
200 G
---------------
500
500
500
500
500
500
500
200
500
Incubation
Lavage
--Agiter au
Vortex et
incuber
tous les
tubes à
37°C
pendant
3,0 heures
Aspirer
et laver
tous les
tubes
deux fois
sauf
pour le
comptag
e total
(le cas
échéant)
Calcul des résultats
Procédure de dosage
Des sérums de contrôle doivent être analysés en même temps que les échantillons
cliniques. L'établissement de la courbe étalon et les dosages cliniques doivent être
effectués simultanément.
Le Tableau 1 donne des chiffres types. Se reporter à chaque flacon d' étalon pour
connaître les concentrations de TSH.
Calculs automatisés:
Ous les réactifs et tous les échantillons doivent être amenés à température ambiante
avant utilisation, mais ne pas les laisser à cette température plus longtemps que
nécessaire. Il est conseillé d'utiliser de l'eau distillée pour le lavage des puits.
On peut utiliser des techniques de réduction des données pour calculer les taux de
TSH. On peut se servir de l'interpolation point-par-point, de la logistique à quatre
paramètres ou d'autres types de programmes d'adaptation des courbes.
1.
Calculs manuels:
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Si les techniques de réduction des données demandent des comptages totaux,
marquer les tubes en polystyrène à cet effet et les mettre de côté.
Numéroter les tubes appropriés revêtus d’anticorps pour la courbe étalon, et
des tubes
supplémentaires pour les échantillons clinique ansi que pour les sérums de
contrôle.
Ajouter 200 µl de chaque étalon de TSH et 200 µl d'échantillon clinique dans
les tubes comme indiqué dans le tableau ci-dessous.
Ajouter 500 µl de solution de marquage de la TSH dans chaque tube. Agiter
brièvement les tubes au Vortex. Recouvrir les tubes.
±
Incuber au bain-marie à 37
1°C pendant 3,0 heures.
Retirer tous les tubes du bain-marie et les découvrir.
Aspirer ou décanter tous les tubes. Ajouter 2,0 ml d'eau distillée.
Répéter l'étape 7. Aspirer ou décanter une derniére fois.
Mesurer la radioactivité dans les tubes vides et procéder à un comptage total
des tubes (si nécessaire) dans un compteur gamma pendant une minute.
23
1.
2.
3.
4.
Calculer le cpm moyen des tubes 1 et 2. (étalon A.)
Soustraire le cpm moyen des tubes 1 et 2 de chaque cpm des tubes suivants
pour obtenir un cpm corrigé.
La courbe étalon peut être tracée e portant le cpm corrigé de chaqueniveau
étalon en ordonnées, et la concentration de l'étalon en abscisses sur du papier
pour graphique à échelle log-log.
Se reporter à la Figure 1 qui donne un exemple de courbe. Ces chiffres ne
sont donnés qu'à titre d'exemple, et ne doivent pas être utilisés à la place de la
courbe étalon qui doit être tracée pour chaque dosage.
Exemple de calcul pour TSH:
Cpm moyen pour l'etalon A de TSH, conc.
Cpm de l'échantillon 1
Cpm corrigé pour échantillon 1
A partir de la Figure 1: 5 797 cpm
24
= 271
= 6 068
= 5 797
=4,6 µU/ml TSH
Etalonnage
Valeurs prévues
Les étalons TSH ont étí calíbrés par rapport à la TSH provenant du Medical
Research Council, Organisation Mondiale de la Santé, Standard WHO/MRC 80/558.
Le sérum de 132 individus (65 hommes et 67 femmes) apparemment euthyroïdiens
a été soumis à un dosage de la TSH avec le système MP Biomedicals TSH SPCS.
La zone normale a été définie à partir de 95% des résultats centraux de cette
population.
On doit analyser les étalons en double lors de chaque série. Les courbes étalons
peuvent étre obtenues par méthode manuelle ou automatique comme décrit dans le
paragraphe Calcul des Résultats. Lors d' un changement de lot de tubes ou de
traceur, une nouvelle courbe étalon doit être réalisée. Ne pas mélanger les réactifs
de lots différents au cours d'ume même série.
Tester au moins 2 miveaux de contrôle (normal et pathologique) en double par
série.
Si les résultats ne répondent pas aux critères établis par le laboratoire, les résultats
peuvent être reuus et, si nécessaite, la série recommencée selon la procédure
interne au laboratoire. Pour toute aide et information techniques contactez votre
agence locale de MP Biomedicals.
Limites de la procédure
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Moyenne
0,54 - 3,70 µU/ml (mU/l)
1,53 µU/ml (mU/l)
Chaque laboratoire doit néanmoins établir lui-même sa propre zone de normalité à
partir d'un groupe d'individus normaux.
Contrôle de Qualité
1.
Valeurs extrêmes
Etant donné que le marqueur radioactif se désintègre en vieillissant, on peut
être amené à augmenter le temps de comptage, mais ceci ne sera
probablement pas nécessaire avec du matériel performant.
Le temps total de pipettage lorsque les échantillons et le traceur sont pipettés
séparément ne doit pas dépasser 2 heures en pipettage manuel ou avec un
système de distribution automatique. Pour un système de distribution
automatique simultanée des échantillons et du traceur, le temps total de
pipettage doit ètre limité à 1 heur.
La courbe-étalon englobe les taux compris entre environ 0,0 et 80 µU de TSH
par ml. Se reporter aux étiquettes pour connaître les concentrations exactes de
TSH. On peut utiliser l'étalon A pour corriger une fixation non spécifique pour
le test IRMA TSH, et pour corriger les comptages dus spécifiquement au tube.
Pour les échantillons sériques cliniques qui ont des taux de TSH supérieurs à
celui de l'étalon, diluer le sérum avec l'étalon A comme suit: pour un
échantillon de sérum de 50 µl, ajouter 400 µl l'étalon A. Mélanger doucement
et utiliser 200 µl de cet échantillon dilué par tube. Lire les résultats sur la
courbe étalon et multiplier par le facteur de dilution de 9 pour obtenir le taux
réel.
On n'observe pas d'effet crochet à haute dose jusqú à 500 µU/mL.
Ne pas panacher de réactifs provenant de différents lots. Si deux flacons de
réactif du même lot sont utilisés pour une série d'analyses, il convient de
regrouper et de mélanger le contenu des deux flacons avant de commencer la
procédure.
La présence de radioactivité dans un échantillon clinique risque d'avoir une
influence sur les résultats du dosage.
Les valeurs normales indiquées risquent de ne pas être applicables pendant la
grossesse.
Ce test n'a pas été validé pour être utilisé avec des échantillons provenant de
nouveaux-nés.
25
Des sérums provenant de malades dont le diagnostic d'hyperthyroïdie (n = 66) et
d'hypothyroïdie (n = 61) avait été établi cliniquement ont été analysés avec le
Système de composants en phase solide anti-TSH.
≤
Valeurs limites en cas d'hyperthyroïdie:
0,06 - 0,42 µU/ml (mU/l)
Valeurs limites en cas d'hypothyroïdie : > 9,0 µU/ml (mU/l)
Chaque fois que les données du laboratoire sont en contradiction avec le diagnostic
clinique, le jugement clinique doit primer et des explorations complémentaires
doivent être entreprises.
Caractéristiques des performances spécifiques
Etude de corrélation
Trois cent cinquante cinq (355) sérums humains ont été testés avec les trousses
TSH SPCS et TSH MAb SPCS. Les résultats ont été comparés par analyse de la
régression linéaire; les résultats figurent dans les tableaux suivants.
Comparaison de la régression linéaire entre la trousse TSH SPCS (y) et TSH MAb
SPCS (x) pour tous les échantillons.
Pente
0,92
Intercept (µU/ml)
-0,12
Coefficient de Corrélation (r)
0,991
Valeurs (µU/mL)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0,06 - 69,7
≤ 0,06 - 70,3
n
355
26
Comparaison de la régression linéaire entre la trousse TSH SPCS (y) et la trousse
TSH MAb SPCS (x) pour des échantillons < 6 µU/mL.
Pente
0,86
Intercept (µU/ml)
0,02
Coefficient de Corrélation (r)
0,980
Valeurs (µU/ml)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0,06 - 4,47
≤ 0,06 - 5,33
n
294
Linéarité:
La linéarité a été étudiée en diluant un échantillon hypothyroïdien avec l'étalon 0.
Les résultats sont résumés daus le tableau suivant:
Facteur de
dilution
TSH SPCS
Résultats
(µU/ml)
Valeurs attendues
(µU/ml)
% Trouvé
0
53,2
---
---
1:2
27,1
26,6
102,1
1:4
13,0
13,3
97,8
1:8
6,62
6,65
99,6
1:16
3,27
3,32
98,4
Précision:
1:32
1,60
1,66
96,3
Quatre sérums de contrôle du commerce, analysés de façon répétée (au moins 20
dosages) ont donné les résultats inter-dosages et intra-dosage suivants:
1:64
0,76
0,83
91,5
Spécificité:
Inter dosages
Numéro de
l'échantillon
Moyenne (µU/ml)
Ecart-type
% CV
Intra dosages
1
2
3
4
1
2
3
4
0,52
0,08
16,2
1,10
0,10
9,4
4,69
0,23
4,8
25,6
1,3
5,0
0,43
0,06
13,3
1,11
0,07
6,0
4,76
0,23
4,9
27,0
1,13
4,2
Récupération:
Le sérum humain a été additionné de quantités variables de TSH (WHO MRC
80/558) à teneur connue. Les récupérations suivantes ont été obtenues:
Ajout
Attendu
Trouvé
% de Récupération
0
0,5
1,0
5,0
10,0
25,0
50,0
--1,58
2,08
6,08
11,08
26,08
51,08
1,08
1,44
1,90
5,17
10,3
24,0
53,2
--91
91
85
93
92
104
Le système de composants en phase solide anti-TSH de MP Biomedicals contient un
anticorps monoclonal dirigé contre la TSH intacte. Les réactivités croisées avec les
autres hormones protéiniques sont les suivantes:
TSH (µU/ml)
Serum normal
50 mU/ml LH
200 mU/ml LH
1000 mU/ml LH
1,90
2,04
1,91
1,86
50 mU/ml FSH
200 mU/ml FSH
1000 mU/ml FSH
1,91
1,62
1,06
1,000 mU/ml hCG
10,000 mU/ml hCG
100,000 mU/ml hCG
1,95
1,74
0,78
Sensibilité:
Elle a été définie comme étant égale à +2 S.D de 20 dosages de Bo: 0,06 µU/ml.
27
28
ORMONE TIREOTROPO [125I] SISTEMA A
COMPONENTI IN FASE SOLIDA
Per la determinazione quantitativa dell'ormone tireotropo umano (TSH) nel siero o
plasma.
2.
3.
Generalità e Metodologia di Dosaggio
L'ormone tireostimolante (tireotropo, TSH) è una glicoproteina prodotta dall'ipofisi
anteriore che stimola la produzione e la secrezione di tiroxina (T4) e triiodotironina
(T 3) da parte della ghiandola tiroide. Le forme circolanti libere di T4 e T3 , a loro
volta, regolano la secrezione di TSH tramite un'azione inibitoria diretta sulle cellule
tireotrope dell'ipofisi. Quando la secrezione tiroidea è troppo bassa, la secrezione di
TSH risulta stimolata; quando la secrezione tiroidea è troppo alta, la secrezione di
TSH risulta inibita. Ne risulta pertanto che le concentrazioni di T4 e T3 sono
normalmente mantenute entro limiti ristretti.
Provette sensibilizzate con anticorpo anti-TSH (coated tubes). ANTI TUBES
Catalogo n° 06B264901. Provette in polistirene ricoperte con anticorpo
purificato peraffinitá diretto contro il TSH (capra). Conservazione: refrigerare a
2-8°C, chiuse nella confezione originale. Stabilità: vedi la data di scadenza
sulla confezione.
TSH Calibratori - Livelli A-G. STD 1-7 Catalogo n° 06B263893; contenenti
TSH umano in siero umano* con sodio azide allo 0,1%** ed altri conservanti.
I valori sono riportati sulle etichette dei flaconi. Questi calibratori sono stati
calibrati per il TSH contro lo standard WHO/MRC 80/558 Medical Research
Council, World Health Organization (equivalente allo St. WHO/MRC 68/38).
Conservazione: refrigerare a 2-8°C. Stabilità: vedi la data di scadenza sul
flacone.
Calibratori
Catalogo n°
Volume per
flacone, ml
A
B
C
D
E
F
G
06B263711
06B263729
06B263737
06B263745
06B263753
06B263761
06B263770
8
4
4
4
4
4
4
Concentrazioni elevate di TSH si riscontrano in pazienti con ipotiroidismo primario.
Ciò accade non solo in pazienti con manifesta malattia clinica, ma anche in pazienti
con lieve ipotiroidismo. Livelli elevati di TSH possono essere presenti in pazienti con
varie malattie, sebbene permangano normali i livelli di ormoni tiroidei, indicando
quindi che l'innalzamento della concentrazione di TSH costituisce il più prococe
indice misurabile di comparsa del declino della secrezione tiroidea.1-4 Livelli bassi o
non dosabili di TSH possono riscontrarsi in caso di ipertiroidismo.
Il maggior valore clinico del TSH consiste nella diagnosi di ipotiroidismo primario,
dovuto cioè a disfunzione tiroidea. L'ipotiroidismo comunque può originare a livello
ipofisario o ipotalamico ed il TSH può pertanto essere basso o normale. In aggiunta
alla determinazione basale di TSH, la valutazione delle concentrazioni di TSH dopo
somministrazione endovenosa di TRH (Ormone rilasciante il tireotropo) può fornire
utili informazioni cliniche.5-8 E' stato riportato che il TSH plasmatico costituisce un
mezzo diagnostico più affidabile del T4 plasmatico e dell'indice di tiroxina libera (FTI)
per l'individuazione della malattia tiroidea in pazienti gravemente malati.9
Principio di Dosaggio
In un dosaggio immunoradiometrico (IRMA), l'anticorpo marcato viene posto a
reagire con l'analita in presenza di anticorpo adeso ad un supporto solido. Il
sistema IRMA è anche detto "a due siti" o dosaggio "sandwich". Una volta
separata, la radioattività del complesso "anticorpo-analita-anticorpo in fase solida" si
presenta in relazione diretta con la concentrazione dell'antigene nel campione o
nello standard.
NOTE:
I valori di TSH variano da lotto a lotto.
sullétichetta del flacone.
0
0,2
1
4
10
40
80
Utilizzare i valori indicati
* ATTENZIONE: MANEGGIARE COME SE FOSSE CAPACE DI TRASMETTERE
INFEZIONE. Il materiale da cui e derivato questo prodotto é stato trovato non
reattivo per HBsAg é negativo per l'anticorpo Anti-HIV quando testato con
reagenti autorizzati. Nessun test puo offrire garanzia che i prodotti derivati da
sangue umano non siano infettivi. Fare riferimento alla pubblicazione CDC/NIH
sulla Biosicurezza nei Laboratori di Microbiologia e Biomedica (Pubblicazione
HHS n. CDC 84-8395).
** ATTENZIONE: i reagenti contengono sodio-azide. Il sodio-azide può reagire
con il piombo e il rame delle tubature idrauliche formando composti metallici
altamente esplosivi. All'atto dello scarico, far fluire grandi volumi d'acqua così
da prevenire l'accumulo. Altamente tossico per ingestione. A contatto con
acidi libera gas altamente tossico. In caso di contatto con la pelle lavarsi
immediatemente ed abbondantemente cond'acqua.
IMPIEGO DI MATERIALE RADIOATTIVO: AVVERTENZE
Reagenti
Per uso diagnostico in vitro
1.
1
Valori nominali di
TSH(µU/ml)1
Tracciante. 125 I TRACER Catalogo n°06B264903; preparazione pronta per
l'uso contenente meno di 10 µCi (370 kBq) di TSH-MAb-[125I] (topo) in
tampone con albumina bovina, siero di capra, siero di topo, colorante, sodio
azide allo 0,1%** ed altri conservanti. 25 ml. Conservazione: refrigerare a 2 8°C. Stabilità: vedi la data di scadenza sul flacone.
29
L'acquisto, la ricezione, la detenzione, l'uso, il trasferimento e lo smaltimento di
materiale radioattivo, sono soggetti ai regolamenti ed ai permessi previsti dalle
autorità legislative. Nella manipolazione di sostanze radioattive devono essere
osservate le seguenti precauzioni:
30
Il materiale radioattivo deve essere conservato e manipolato in un'area del laboratorio specificamente designata a tale uso. L'ambiente di lavoro deve essere ben
illuminato e arieggiato. Le superfici di lavoro devono essere non porose in modo da
ridurre al minimo la contaminazione dovuta allo spargimento di liquidi radioattivi.
Considerata la piccola radioattività contenuta nel flacone del tracciante (circa* µCi),
l'uso del kit non pone alcun problema di pericolo di radiazioni. Tuttavia per evitare
inalazione o ingestione di materiale radioattivo è necessario rispettare le buone
norme generali di laboratorio. In particolare si raccomanda di: non pipettare con la
bocca soluzioni radioattive; non mangiare, bere, fumare o usare cosmetici nell'area
di lavoro designata; pulire immediatamente le superfici di lavoro dei materiali
radioattivi eventualmente versati; raccogliere il materiale contaminato solido e liquido
in appositi contenitori ed effettuarne lo smaltimento secondo le procedure previste;
lavarsi accuratamente le mani dopo l'uso di materiale radioattivo.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Attrezzature e reagenti richiesti ma non forniti
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Provetta
±
2.
3.
Calibratori
(µl)
1, 2
3, 4
5, 6
7, 8
9,10
11,12
13,14
Controlli
e
campioni
Non è necessario alcun particolare accorgimento per la preparazione del paziente.
Si raccomanda comunque di verificare l'evenienza di precedenti trattamenti recenti
del paziente con sostanze radioattive a scopo scintigrafico o terapeutico.
Preparazione del campione per l'analisi: raccogliere il campione in una provetta
(con EDTA se si desidera il plasma) da 5 o 10 ml. Si raccomanda di non
sottoporre ad analisi campioni emolizzati, fortemente lipemici o itterici. Qualora
si utilizzi il siero, attendere la coagulazione a temperatura ambiente.
Centrifugare e raccogliere il siero o il plasma.
Conservazione: Dopo la raccolta, il siero puó essere conservato a 2-8°C fino a
8 giorni, oppure congelato fino a 30 giorni. Non sgelare e ricongelare
ripetutamente. Dopo lo scongelamento, il siero dovrebbe essere mantenuto a
2-8°C e dosato entro 7 giorni.
Spedizione dei campioni: il siero dovrebbe essere spedito a 2-8°C. Qualora il
tempo di spedizione dovesse superare le 48 ore, si raccomanda il
congelamento.
±
SISTEMA A COMPONENTI IN FASE SOLIDA TSH-MAb-[125I]
Acqua distillata
Pipetta semiautomatica per la dispensazione di 200 µl, 500 µl e 2,0 ml. E'
sconsigliato l'impiego di pipettatori/diluitori per evitare la possibilità di
contaminazioni.
Portaprovette
Agitatore tipo vortex
Bagno termostatico in grado di mantenere 37
1°C
Contatore a scintillazione per la rilevazione delle radiazioni gamma dello [125I]
Materiale appropriato per controllo quolitá.
Raccolta dei Campioni
1.
Se il procedimento d'elaborazione dei dati richiede l'Attività Totale, numerare la
provette in polistirene e tenere da parte.
Numerare una quantità appropriata di provette per la curva standard e per I
campione.
Aggiungere 200 µl di TSH calibratori campioni secondo lo schema di
pipettamento più avanti riportato.
Aggiungere 500 µl di tracciante ad ogni provetta, mescolare breve-mente.
Coprire le provette.
Incubare tutte le provette in bagno termostatico a 37
1°C per 3 ore.
Togliere tutte le provette dal bagno e scoprirle.
Aspirare o decantare. Aggiungere 2,0 ml di acqua distillata.
Ripetere il passaggio 7. Aspirare o decantare un'ultima volta.
Contare la radioattività delle provette e dell'Attività Totale in un contatore
gamma per un minuto.
200 A
200 B
200 C
200 D
200 E
200 F
200 G
Siero
(µl)
Tracciante
(µl)
---------------
500
500
500
500
500
500
500
200
500
Incubazione
Lavaggio
--Agitare e
incubare
tutte le
provette a
37°C per 3
ore
Aspirare e
lavare tutte
le provette
2 volte ad
esclusione
dell'Attività
Totale, se
richiseta
Calcolo dei Risultati
La Tabella 1 mostra dati tipici. Fare riferimento alle singole etichette dei flaconi per
le concentrazioni dei calibratori di TSH.
Calcolo automatico
I procedimenti di elaborazione automatica dei dati possono essere impiegati per il
calcolo dei risultati di TSH. Possono essere usati l'interpolazione punto a punto, la
trasformazione logistica a quattro parametri o altri metodi di interpolazione
matematica.
Calcolo manuale
Procedimento di Dosaggio
Portare i reagenti e i campioni a temperatura ambiente prima dell'uso. Al fine
comunque di ridurre il deterioramento, evitare di mantenerli non refrigerati se non
per il tempo necessario al loro uso. L'allestimento delle provette dei campioni e dei
calibratori, così come dei controlli, deve essere effettuato simultaneamente. Per il
lavaggio, si raccomanda l'uso di acqua distillata.
31
1.
2.
3.
Calcolare la media dei cpm per le provette 1 e 2. Calibratore A.
Sottrarre la media dei cpm delle provette 1 e 2 da ogni altro conteggio
ottenendo i cpm corretti.
La curva standard può essere riportata su grafico riportando sull'asse y i cpm
corretti per ogni livello di calibratore in funzione delleconcentrazioni di
calibratori di TSH sull'asse x su grafico log-log.
32
4.
Vedi un esempio in fig. 1. I dati riportati nella tabella sono a titolo
rappresentativo e non devono essere usati al posto della curva standard
ottenuta per ogni dosaggio.
Esempio di calcolo per il TSH
Media cpm per il calibratore A
Cpm per il campione 1
Cpm corretti per il campione 1
Dal grafico in fig. 1, 5797 cpm
= 271
= 6068
= 5797
= 4,6 µU TSH/ml
Calibrazione
I calibratori di TSH sono stati calibrati contro lo Standard WHO/MRC 80/558 del
Medical Research Council, World Health Organization.
Dosare i calibratori in duplicato ad ogni dosaggio. La curva di calibrazione puó
essere generata con metodi manuali o automatici, come descritto nalla sezione
Calcolo dei Risultati. Quando si passa ad un nuovo numero di lotto di tubi o
tracciante deve essere dosata una nuova curva. Non scambiare reagenti di lotti
diversi nello stesso dosaggio.
5.
6.
7.
8.
9.
Non é stato osservato effetto fancio a dosi di TSH fino a 500 µU/mL.
Non mescolare reagenti di lotti diversi. Qualora si debbano usare due flaconi
dello stesso reagente per lo stesso dosaggio, il contenuto dei flaconi dovrebbe
essere miscelato prima di iniziare il procedimento.
La presenza di radioattività nel campione può interferire sul dosaggio.
Gli intervalli di normalità determinati possono non essere applicabili in
gravidanza.
Questo dosaggio non é stato convalidato per il dosaggio o lo screening
neonatale.
Valori Attesi
Sono stati dosati sieri di 132 individui apparentemente eutiroidei (65 uomini e 67
donne) cora il kit TSH della MP Biomedicals. El Rango de TSH representa un análisis
del 95%.
intervallo di normalità
media
0,54 - 3,70 µU/ml (mU/l)
1,53 µU/ml (mU/l)
Ogni laboratorio dovrebbe comunque stabilire il proprio intervallo di normalità su di
una popolazione di soggetti normali.
I campioni serici di 66 pazienti clinicamente ipertiroidei e 61 pazienti clinicamente
ipotiroidei sono stati dosati con il sistema MP Biomedicals TSH-SPCS
Controllo Qualita
Intervallo ipertiroidismo:
Intervallo ipotiroidismo :
≤
0,06 - 0,42 µU/ml (mU/l)
> 9,0 µU/ml (mU/l)
Dosare almeno due livelli di sieri di controllo (normale e patologico) in duplicato ad
ogni dosaggio. Se i risultati non incontrano i criteri di accettabilitá stabiliti dal
laboratorio, i dati dovrebbero essere riesaminati e se necessario, ridosati in accordo
con le procedure del laboratorio. Per qualsiasi informazione o esigenza si prega di
rivolgersi agli uffici locali della MP Biomedicals.
Qualora il dato laboratoristico non si accordi con il giudizio clinico, quest'ultimo
dovrebbe essere seguito edulteriori indagini dovrebbero essere eseguite.
Considerazioni Procedurali
Caratteristiche Tecnologiche
1.
Prestazioni Cliniche: Studi di Correlazione
2.
3.
4.
Poichè il tracciante radioattivo decade, possono rendersi necessari tempi
superiori di conteggio, ma ciò non è probabilmente necessario se l'attrezzatura
è efficiente.
Il tempo totale di pipettamento quando campione e tracciante sono aggiunti
separatamente deve essere limitato a 2 ore in caso di pipettamento manuale e
in caso di pipettamento automatico a dispensazione sequenziale. Se si utilizza
una stazione di pipettamento che dispensa campione e tracciante
simultaneamente, il tempo di pipettamento deve essere limitato ad 1 ora.
La curva standard copre il range approssimativo: 0 - 80 µU TSH/ml. Vedere le
etichette dei flaconi per le concentrazioni esatte di TSH. Lo standard A
rappresentà il legame non specifico del sistema TSH-IRMA e può essere usato
per correggere i conteggi per la quota di radioattività di fondo e per quella
quantità di tracciante assorbito o co munque legato non specifica-mente alle
pareti della provetta.
Per quei campioni che risultino a concentrazione superiore allo calibratori G, si
consiglia di diluire con calibratori A come segue: aggiungere 400 µl di
calibratori A a 50 µl di campione. Mescolare e dosare 200 µl del diluito.
Leggere il valore sulla curva standard e moltiplicarlo per il fattore di diluizione 9,
ottenendo così il valore corretto.
33
Trecentocinquantacinque (355) campioni di siero umano sono stati dosati con il kit
TSH MAb. I risultati sono stati comparati per regressione lineare e riassunti nelle
tarole seguenti.
Regressione Lineare: correlazione del kit TSH con il kit TSH MAb (Tutti i campioni).
Kit TSH (y) versus Kit TSH MAb (x)
Pendenza
0,92
Intercetta (µU/ml)
-0,12
Coefficiente di correlazione (r)
0,991
Intervallo di Valori (µU/ml)
Kit TSH
Kit TSH MAb
≤ 0,06 - 69,7
≤ 0,06 - 70,3
n
355
34
Regressione Lineare: Correlazione del kit TSH con il kit TSH MAb assay (Campioni
< 6 µU/mL.
Linearitá:
La linearitá é stata valutata diluendo un campione ipotiroideo con lo standard zero.
Kit TSH (y) versus Kit TSH MAb (x)
Pendenza
0,86
Diluizione
TSH (µU/ml)
Valore trovato
TSH (µU/ml)
Valore alteso
Recupero
percentuale
Intercetta (µU/ml)
0,02
Toto
53,2
---
---
Coefficiente di correlazione (r)
0,980
1:2
27,1
26,6
102,1
Intervallo di valori (µU/ml)
Kit TSH
Kit TSH MAb
≤ 0,06 - 4,47
≤ 0,06 - 5,33
1:4
13,0
13,3
97,8
n
294
Precisione:
Quattro sieri commerciali di controllo, sottoposti a dosaggi ripetuti (almeno 20
determinazioni) hanno fornito i seguenti risultati:
fra i saggi
Campione
Media, µU/ml
D.S.
CV %
nel saggio
1
2
3
4
1
2
3
4
0,52
0,08
16,2
1,10
0,10
9,4
4,69
0,23
4,8
25,6
1,3
5,0
0,43
0,06
13,3
1,11
0,07
6,0
4,76
0,23
4,9
27,0
1,13
4,2
Recupero:
Un siero umano è stato arricchito con quantità variabili di TSH (WHO MRC 80/558).
Sono stati ottenuti i seguenti recuperi:
Aggiunto
Atteso
Trovato
Recupero
percentuale
0
0,5
1,0
5,0
10,0
25,0
50,0
--1,58
2,08
6,08
11,08
26,08
51,08
1,08
1,44
1,90
5,17
10,3
24,0
53,2
--91
91
85
93
92
104
1:8
6,62
6,65
99,6
1:16
3,27
3,32
98,4
1:32
1,60
1,66
96,3
1:64
0,76
0,83
91,5
Specificità:
Il kit MP Biomedicals TSH-MAb-SPCS prevede l'impiego di anticorpi monoclonali per
il TSH intatto. Le reazioni crociate con altri ormoni proteici sono riportate qui di
seguito:
TSH (µU/ml)
Suero Normal
50 mU/ml LH
200 mU/ml LH
1000 mU/ml LH
1,90
2,04
1,91
1,86
50 mU/ml FSH
200 mU/ml FSH
1000 mU/ml FSH
1,91
1,62
1,06
1,000 mU/ml hCG
10,000 mU/ml hCG
100,000 mU/ml hCG
1,95
1,74
0,78
Sensibilità:
La sensibilità, definita in termini di +2D.S. su venti determinazioni di standard zero,
è risultata essere: 0,06 µU TSH/ml.
35
36
HORMONA ESTIMULANTE DEL TIROIDES [125I]
SISTEMA DE COMPONENTES DE FASE SÓLIDA
Reactivos
Para determinación cuantitativa de la hormona estimulante del tiroides humana
(TSH) en suero o plasma.
1.
Para uso diagnóstico "in vitro"
Resumen y explicación de la prueba
2.
La hormona estimulante del tiroides (Tirotropina, TSH) es una glicoproteína
producida por la glándula pituitaria anterior, que estimula la producción y secreción
de tiroxina (T4) y Triyodotironina (T3) por la glándula tiroides. A su vez, la T4 libre
circulante (FT 4) y T3 libre (FT 3) regulan la secreción de TSH por una acción
inhibitoria sobre las células tirotióficas de la pituitaria. Cuando la secreción tiroidea
es demasiado baja, se estimula la secreción de TSH; cuando es demasiado elevada,
se inhibe. El resultado es que las concentraciones circulantes de T3 y T4 se
mantienen dentro de límites normal-mente estrechos.
3.
En pacientes con hipotiroidismo primario se encuentran concentraciones altas de
TSH. Esto sucede no sólo en pacientes con enfermedad clínica obvia, sino también
en casos de hipotiroidismo leve. Se pueden encontrar niveles elevados de TSH en
pacientes con distintas enfermedades, aún con concentraciones normales de
hormona tiroidea, lo que indica que el primer cambio apreciable cuando desciende
la secreción tiroidea, es el aumento de TSH. 1-4 En pacientes con hipertiroidismo se
pueden encontrar niveles bajos o no detectables de TSH.
El valor clínico principal de los niveles de TSH es el diagnóstico del hipotiroidismo
primario, debido a una disfunción interna del tiroides. Sin embargo puede aparecer
hipotiroidismo como consecuencia de una disfunción en la pituitaria o el
hipotálamo, siendo la TSH baja o normal. Además de las determinaciones de TSH
basal sérica, su evaluación después de la administración intravenosa de TRH
(Hormona estimulante de Tirotiopina) puede proporcionar una información clínica
útil.5-8 Se ha indicado que la TSH sérica es un medio más fiable que la T4 sérica y el
FTI (Indice de tiroxina libre) para detectar la enfermedad tiroidea en pacientes
gravemente enfermos. 9
Fundamento de la prueba
En un ensayo immunoradiométrico (o IRMA), el anticuerpo marcado reaccioná con
el analito en presencia de anticuerpo ligado a un soporte sólido. El IRMA se
denomina frecuenteménte "IRMA de dos puntos" o "ensayo sandwich".
La cuantificación del complejo (anti-cuerpo radioactivo-analito-anticuerpo de la fase
sólida) muestra una relación directa entre el nivel de radiactividad y la concentración
del analito en el estándar o en la muestra del paciente.
37
Trazador TSH [125I], 125 I TRACER N°. de catálogo 06B264903, preparación
lista para ser utilizada, con menos de 10 µCi (370 kBq) TSH MAb [125I] (ratón)
en tampón con albúmina bovina, suero de cabra, suero de ratón, colorante,
azida sódica al 0,1%** y otros conservantes. 25 ml. Conservación: Refrigerar
a 2-8°C. Estabilidad: Consultar la fecha de caducidad del vial.
Tubos Recubiertos de Anticuerpo TSH. ANTI TUBES N°. de Catálogo
06B264901, tubos de poliestireno recubiertos de anticuerpo purificado de TSH
(cabra). Conservación: Refrigerar a 2-8°C en bolsas de papel de aluminio.
Estabilidad: consultar la fecha de caducidad en la bolsa.
Juego de Calibradores A-G de Suero TSH. STD 1-7 N°. de Catálogo
06B263893 que contiene TSH humana en suero humano* con azida sódica al
0,1%** y otro conservante. Los valores figuran en las etiquetas de los viales.
Se ha calibrado la TSH de estos calibradores frente al Standard WHO/MRC
(Organización Mundial de la Salud. Consejo de Investigación Médica) 80/558,
que se ha demostrado que es equivalente al WHO/MRC 63/38.
Calibrador
N°. Catalogo
A
B
C
D
E
F
G
06B263711
06B263729
06B263737
06B263745
06B263753
06B263761
06B263770
Volumen/vial, ml
Valor Nominal de
TSH
(µU/ml)1
8
4
4
4
4
4
4
0
0,2
1
4
10
40
80
1
NOTA: Los valores de TSH vaviarán de lote a lote. Utilizer los valores impresos
en las etiquetas del vial.
* PRECAUCION: MANIPULAR COMO POSIBLE TRANSMISOR DE INFECCIONES:
El material original del que se ha obtenido este producto no reaccionaba frente
a HBsAg y era negativo en anti-cuerpos anti-HIV cuando se analizó con
reactivos autorizados. No se conoce ningún método que asegure que los
productos derivados de sangre humana no sean infecciosos.
Consultar
CDC/NIH, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (Publicación
HHS N° CDC 84-8395).
** ADVERTENCIA: Los reactivos contienen azida sódica, que puede reaccionar
con el plomo y cobre de las cañerías, formando azidas metálicas explosivas.
Para impedir la acumulación de azida, eliminarlos utilizando grandes volúmenes
de agua. Muito tóxico em caso de ingestao. Em contacto com ácido liberta
um gaz muito tóxico.
Após contacto com a pele, lavar imediata e
abundantemente com de agua.
38
ADVERTENCIA: CONTIENE MATERIAL RADIACTIVO
1.
Este Sistema de componentes de Fase Sólida TSH MP Biomedicals contiene < 10
microcuries (370 kBq) de [125I]. Este material radiactivo sólo pueden recibirlo,
adquirirlo, poseerlo y utilizarlo los médicos, laboratorios clínicos u hospitales, y
solamente para pruebas clínicas o de laboratorio in vitro, que no impliquen la
administración interna o externa del producto, o de sus radiaciones, a los seres
humanos o animales. Su recepción, adquisición, posesión, utilización y
transferencia, están sometidas a regulaciones y a una licencia general de la
Comisión Reguladora Nuclear de los EEUU o de un Estado con el que la Comisión
haya establecido un acuerdo para el ejercicio de la autoridad reguladora.
2.
MP Biomedicals, LLC
El cumplimiento de las normas básicas para seguridad de las radiaciones
proporcionará una protección adecuada. El usuario debe consultar el National
Bureau of Standards Handbook No. 92, "Safe Handling of Radioactive Materials",
publicado el 9 de marzo de 1964, Superintendent of Documents, U.S. Government
Printing Office, Washington, D.C. 20402. A continuación recogemos un resumen
del mismo:
#No comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos donde se utilicen materiales
radiactivos. # No pipetear soluciones radiactivas oralmente. # Evitar el contacto
directo con todo material reactivo, utilizando artículos protectores tales como batas
de laboratorio y guantes desechables. # Todo trabajo radiológico se realizará en
zonas especiales, que no sean de paso. # Los materiales radiactivos deben ser
conservados en sus envases originales, en una zona especial. # Debe llevarse un
libro de registro con las entradas y salidas de material radiactivo. # El equipo de
laboratorio y material de vidrio sometido a contaminación debe estar separado de
forma que se evite la contaminción cruzada de diferentes radioisótopos. # Cualquier
posible contaminación por material reactivo se tratará inmediatamente según los
métodos establecidos. # El material radiactivo será eliminado de acuerdo con las
normas y regulaciones de las agencias que tengan jurisdicción sobre el laboratorio.
# Los envases no contaminados se desecharán junto con el material de desecho no
radiactivo, después de destruir sus etiquetas.
Equipo y reactivos necesarios pero no suministrados
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
3.
Preparación de la muestra para su análisis. Recoger la sangre en un tubo de 5
ó 10 ml. Si se prefiere analizar el plasma, puede utilizarse EDTA como
anticoagulante. Dejar que la sangre se coagule a temperatura ambiente.
Centrifugar y recoger el suero o plasma. El suero debe separarse en la hora
siguiente a su obtención y se mantendrá congelado hasta el momento del
análisis. No deben utilizarse muestras lipémicas, hemolizadas o ictéricas.
Conservación: El suero debe se conservado a 2-8°C tras ser tomado durante
7 dias o congelado durante 1 mes. Evitar la congelación y descongelación
repetida. El suero descongelado debe mantenerse en frío (2° a 8°C) y
analizarse antes de 7 días.
Envío de muestras: El suero, cuidadosamente envasado, se enviará y recibirá
congelado.
Procedimiento del ensayo
Los sueros controles deben analizarse paralelamente a las muestras de pacientes.
La curva patrón y las determinaciones clínicas deben realizarse simultáneamente.
Todos los reactivos y muestras deben ponerse a temperatura ambiente antes de
utilizarlos, pero no deben mantenerse a esa temperatura más tiempo del necesario.
Se recomienda utilizar agua destilada para los pasos de lavado.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Si las técnicas de reducción de datos requieren recuentos totales, marcar tubos
de poliestireno adecuadamente y reservarlos.
Numerar una cantidad de tubos recubiertos de anticuerpo para la curva
estándar y muestras de los pacientes.
Añadir 200 µl de los calibradores de TSH y muestras clínicas a los tubos, de
acuerdo con el esquema de pipeteo indicado a continuación.
Añadir 500 µl de Solución Trazador de TSH a todos los tubos. Agitar (Vortex)
brevemente. Tapar los tubos.
Incubar a 37
1°C en baño de agua durante 3,0 horas.
Sacar todos los tubos del baño de agua y destaparlos.
Aspirar o decantar. Añadir 2,0 ml de agua destilada.
Repetir el paso 7. Aspirar o decantar una última vez.
Contar la radiactividad en estos tubos y en los de recuento total (si fuera
necesario) en un contador gamma, durante 1 minuto.
±
Agua destilada.
Qualquier tipo de pipeta semiautomática para 200 µl, 500 µl y 2,0 ml. No se
recomienda usar pipetas/diluidoras por el posible arrastre de muestra.
Gradilla para tubos.
Agitador vortex.
Baño de agua capaz de mantener 37
1°C.
Contador gamma para medir [125I].
Material de control de calidad apropiado, tal como los Controles de
Immunoensayo de Tres Nireles.
±
Recogida de Muestras
No es precisa una preparación especial del paciente. Debe advertirse al laboratorio
acerca de la posible radiactividad de la muestra, procedente de estudios
diagnósticos "in vivo" previos.
39
40
Sistema de Componentes de Fase Sólida TSH MAb [125I]
Tubo
N°
Calibrador
(µl)
Suero
paciente
(µl)
Marcador
(µl)
1, 2
3, 4
5, 6
7, 8
9,10
11,12
13,14
Controles
y muestras
de pacientes
200 A
200 B
200 C
200 D
200 E
200 F
200 G
---------------
500
500
500
500
500
500
500
200
500
Incubar
Lavar
--Agitar
(Vortex) e
incubar
todos los
tubos a
37°C
durante
3,0 h.
Aspirar y
lavar 2
veces
todos
los
tubos
excepto
recuento
total (si
se usa)
Analizer los calibradores en duplicado con cada ensayo. Las curves de calibración
se pueden generar utilizando métiodos manuales o automáticos tal como se
describe en la sección de Cáculo de Resultados. Cuando se cambia a números de
lote nuevos de tubos o de trazador, se deben realizer nuevas curvas de calibración.
No mezclar reactivos de lotes diferentes dentro de in ensayo.
Control de Calidad
Analizer al menos dos nireles de material de control de calidad (normal y anormal)
en duplicado en cada ensayo.
Si los resultados no encajan con el cuterio de aceptación establecido por el
laboratorio, se deberian revisor los datos y repetir el ensayo si fuera necesario
sequin el manual de procedimento del laboratorio. Para información y soporte
técnico dirijase a las oficinas locales de MP Biomedicals.
Limitaciones del Procedimiento
Cálculo de resultados
1.
La tabla 1 muestra unos datos típicos.
concentraciones de TSH.
Consultar en los viales de calibrador las
2.
Cálculos automáticos:
Pueden utilizarse técnicas automáticas de reducción de datos para calcular los
resultados de TSH: interpolación punto-por-punto, logística de 4 parámetros u
otros tipos de programas para ajuste de curvas.
3.
Cálculos manuales:
1.
2.
3.
4.
Calcular cpm para los tubos 1-2. Calibrador A.
Sustraer la cpm promedio para los tubos 1-2 de cada cpm en los tubos
sucesivos para obtener la cpm corregida.
Puede trazarse la curva patrón utilizando la cpm corregida para cada punto del
calibrador sobre el eje-y frente a la concentración del calibrador en el eje-x,
utilizando papel de gráficas log-log.
La Figura 1 muestra una gráfica de ejemplo los datos se ofrecen únicamente a
modo de ejemplo representativo y no deben utilizarse en lugar de la curva
patrón obtenida con cada ensayo.
Ejemplo del cálculo de TSH:
Cpm promedio para el Calib. A
Cpm para muestra 1
Cpm corregidas para muestra 1
Utilizando la Figura 1, 5797 cpm
4.
5.
6.
=
=
=
=
271
6068
5797
4,6 µU/ml TSH
Calibración
7.
8.
9.
Como el trazador radiactivo decae con el tiempo, podrán ser necesarios
tiempos de recuento más prolongados, aunque un buen equipo resolverá
seguramente ese problema.
El tiempo total de pipeteado, cuando la muestra y el trazador sean pipeteados
separadamente, debe de ser limitado a dos horas curando se pipetee
manualmente y curando se utilizen sistemas de manipulatción liquidos en un
modo secuencial. Cuando se use un sistema de manipulación liquids que
pipetee la muestra y el trazador simultáneamente, el tiempo total de pipteado
se deberá limitar a una hora.
La curva patrón cubre aproximadamente desde 0,0 a 80 µU de TSH por ml.
Consultar en las etiquetas las concentraciones exactas de TSH. El Estándar A
actúa como corrección de fijación inespecífica para el IRMA TSH y se puede
utilizar para corregir las cuentas de fondo y el trazador radiactivo fijado
inespecíficamente al tubo.
Para las muestras de suero de paciente con valores de TSH por encima del
valor Calibrador G, se prediluye el suero con Calibrador A de la forma
siguiente: Añadir 400 µl de Calibrador A a una muestra de suero de 50 µl.
Mezclar cuidadosamente y usar 200 µl de esta muestra diluida por tubo del
ensayo. Leer los resultados a partir de la curva patrón y multiplicar por el
factor de dilución nueve 9 para obtener el valor correcto.
No se la observado el efecto "high dose hook" con niveles de TSH de hasta
500 µU/mL.
No mezclar reactivos de distintos lotes. Si se van a utilizar dos viales del mismo
lote de reactivo en un ensayo, deben reunirse sus contenidos y mezclarlos
antes de empezar.
La presencia de radiactividad en una muestra de un paciente puede interferir
con el ensayo.
Los valores normales en uso pueden no ser aplicables durante el embarazo.
Este ensayo no ha sido validado para utilizarse en análisis o screening de
neonatos.
Los calibradores de TSH lan sido calibrados par la TSH frente al estándar
WHO/MRC 80/558 (consejo de Investigación Médica, Organización Mundial de al
Salud.
41
42
Comparación de Regresión Linear de la ticnica TSH SPCS con la TSH MAb SPCS:
Muestras < 6 µU/mL.
Valores esperados
Se analizaron los sueros de 132 individuos aparentemente eutiroideos (65 varones y
67 hambras) para las TSH con los reactivos TSH SPCS de MP Biomedicals. El
rango representa un análisis central del 95%.
Rango normal
Media
0,54 - 3,70
1,53 µU/ml (mU/l)
Sin embargo cada laboratorio debe definir su propio rango normal en un grupo de
sujetos normales.
Se evaluaron sueros de pacientes con diagnóstico clínico de hipertiroidismo (n=66)
e hipotiroidismo (n=61) con el SPCS MAb TSH de MP Biomedicals.
Rango hipertiroides:
Rango hipotiroideo:
Técnica TSH SPCS (y) frente a TSH MAb SPCS (x)
Pendiente
0,86
Intercepto (µU/ml)
0,02
Coeficiente de Correlación (r)
0,980
Rango de Valores (µU/ml)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0,06 - 4,47
≤ 0,06 - 5,33
n
294
≤ 0,06 - 0,42 µU/ml (mU/l)
> 9,0 µU/ml (mU/l)
Precisión:
Siempre que los datos de laboratorio estén en contradicción con los resultados o
impresiones clínicas, se debe aplicar el criterio clínico y realizar una evaluación
adicional.
Cuatro sueros comerciales testigos dieron las variaciones inter- e intraensayo
siguientes, en pruebas repetidas (mínimo de 20 determinaciones):
Características específicas de la prueba
Interensayo
Funcionamiento Clínico: Estudio de Correlación
Muestra
Se analizaron trescientas cinquenta y cinco muestras séricas humanas con la técnica
TSH SPCS y la TSH MAb SPCS. Se compararon los resultados por análisis de
regresión linear; se resumieron los resultados en las tablas siquientes.
Media, µU/ml
D.S.
% CV
Comparación de regresión linear del ensayo TSH SPCS con el de TSH MAb SPCS;
Todas las muestras.
Recuperación:
Técnica TSH SPCS (y) frente a TSH MAb SPCS (x)
Intraensayo
1
2
3
4
1
2
3
4
0,52
0,08
16,2
1,10
0,10
9,4
4,69
0,23
4,8
25,6
1,3
5,0
0,43
0,06
13,3
1,11
0,07
6,0
4,76
0,23
4,9
27,0
1,13
4,2
Se añadieron diferentes cantidades de TSH (WHO MRC 80/558) conocida a suero
humano. Se recuperaron los porcentajes siguientes:
Pendiente
0,92
Intercepto (µU/ml)
-0,12
Añadida
Esperada
Encontrada
% Recuperada
Coeficiente de Correlación (r)
0,991
Rango de Valores (µU/ml)
TSH SPCS
TSH MAb SPCS
≤ 0,06 - 69,7
≤ 0,06 - 70,3
n
355
0
0,5
1,0
5,0
10,0
25,0
50,0
--1,58
2,08
6,08
11,08
26,08
51,08
1,08
1,44
1,90
5,17
10,3
24,0
53,2
--91
91
85
93
92
104
Sensibilidad:
La sensibilidad, definida como +2 D.S. de 20 determinaciones del estándar cero de
TSH, es 0,06 µU/ml.
43
44
Linearidad Dilucional:
TABLE 1
TSH [125I] Solid Phase Component System
Tabulated Data
La linearidad dilucional se determinó diluyendo una muestra hipotiroidea con el
calibrador cero. Los resultados se resumer en la tabla siquiente.
Resultado TSH
SPCS
(µU/ml)
Valor Esperado
(µU/ml)
Neto
53,2
---
---
1:2
27,1
26,6
102,1
1:4
13,0
13,3
97,8
Dilución
% Recuperación
Tube No.
Counts per
Average cpm
minute
Total
242905
Total
248233
Calibrator A
280
Corrected
cpm
245569
Calibrator A
261
1:8
6,62
6,65
99,6
Calibrator B
592
321
1:16
3,27
3,32
98,4
1:32
1,60
1,66
96,3
Calibrator B
Calibrator C
608
1654
327
1383
Calibrator C
1600
1329
1:64
0,76
0,83
91,5
Calibrator D
5387
5116
Especificidad:
El SPCS MAb TSH de MP Biomedicals contiene anticuerpo monoclonal frente a TSH
intacta. Las reactividades cruzadas con otras hormonas proteicas son las siguientes:
TSH (µU/ml)
Suero Normal
50 mU/ml LH
200 mU/ml LH
1000 mU/ml LH
1,90
2,04
1,91
1,86
50 mU/ml FSH
200 mU/ml FSH
1000 mU/ml FSH
1,91
1,62
1,06
1,000 mU/ml hCG
10,000 mU/ml hCG
100,000 mU/ml hCG
1,95
1,74
0,78
45
271
Calibrator D
5349
5078
Calibrator E
12375
12104
Calibrator E
12335
12064
Calibrator F
38367
38096
Calibrator F
Calibrator G
38303
60359
38032
60088
Calibrator G
61005
60734
Sample 1
6054
5783
Sample 1
6082
5811
46
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Thyrotrophin in Symptomless Autoimmune Thyroiditis. Lancet, I, 551554, 1972.
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Lancet, II, 1036-1037, 1986.
Technical information and assistance can be obtained from the MP
Biomedicals HOT LINE; call toll-free (800) 437-1705.
47
48
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Prodotto da:
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MP Biomedicals, Diagnostics Division
13 Mountain View Avenue
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(800) 888-7008
(949) 260-1079
(800) 437-1705
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Thüringer Straße 15
37269 Eschwege
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FAX 05651/921-151
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Doornveld 10
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Telefon: 32 2 466 0000
FAX: 32 2 466 2642
06B62595-R7
QER No. Q03-177
Revised 04/04
49