40280-Insert Booklet-Rev3

Chang Medium® In Situ
For Human Amniotic Fluid Cells
Catalog No. T104
For in vitro diagnostic use.
Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.
Per uso diagnostico in vitro.
Para uso en diagnóstico in vitro.
Pour l’usage diagnostique in vitro.
Para a utilização em diagnóstico in vitro.
PRODUCT DESCRIPTION
Chang Medium® In Situ was developed for the primary culture
of human amniotic fluid cells for use in karyotyping and other
antenatal genetic testing. This formula has been optimized for In
Situ methodologies.
COMPONENT CONCENTRATION
mg/L
Salts ................................................................................. 7862
Dextrose ............................................................................ 921
Amino Acids ...................................................................... 731
L-Glutamine ...................................................................... 220
Polypeptides ....................................................................... 60
Vitamins ............................................................................... 46
Deoxyribonucleosides ....................................................... 28
Ribonucleosides ................................................................. 28
Sodium Pyruvate ................................................................ 90
Other Components .............................................................. 8
Steroid Hormones .................................................... 0.00038
Newborn Calf Serum ................................................. 2% v/v
Fetal Bovine Serum ................................................. 16% v/v
Phenol Red ........................................................................... 7
STORAGE INSTRUCTIONS
Store Chang Medium In Situ frozen at -10°C to -30°C. Unused
Chang Medium In Situ can be refrozen or stored at 2°C to 8°C.
Protect from fluorescent light.
STABILITY
See bottle label for specific expiration date. Chang Medium In
Situ may be refrozen a maximum of 2 times and stored thawed at 2°C
to 8°C for 14 days without affecting its function. Storage for longer
than 14 days is not recommended.
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QUANTITY SUPPLIED
Chang Medium In Situ is available in both 100 mL and 500 mL
square plastic bottles.
STERILITY
Serum used in the production of Chang Medium In Situ has
been tested for viral contamination per CFR Title 9 Part 113.53. It
has also been screened for mycoplasma contamination. Chang
Medium In Situ is sterilized by filtration through a 0.2 micron filter.
Samples of Chang Medium In Situ are tested for possible
bacteriological contamination following the sterility testing protocol
described in the current CFR Title 21 Part 610.12.
RECOMMENDED USE
Chang Medium In Situ may be used for the following applications:
1. the primary culture of amniotic fluid cells
2. growing passaged amniotic fluid cells
3. solid amnion tissue from chorionic villi sampling.
This medium has been designed for use in CO2 incubators
(cultures equilibrated with 5%-8% CO2 atmosphere).
The final pH must be 6.8-7.2. Please see Directions for Use.
Precaution: Do not use Chang Medium In Situ beyond the
expiration date indicated on the label.
PREPARATION FOR USE
1. Thaw Chang Medium In Situ rapidly by swirling bottle in a 37°C
water bath.
2. Antibiotics may be added if desired.
ALIQUOTING CHANG MEDIUM® In Situ
1. Thaw Chang Medium In Situ according to instructions.
2. Distribute aseptically into convenient sized aliquots and re-freeze.
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3. Thaw aliquots in 37°C water bath when ready to use.
DIRECTIONS FOR USE
Use of Chang Medium In Situ for Primary Cultures: in situ
Methodologies
1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate the cells.
2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patient's own
amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of
spun amniotic fluid to 0.5 mL above the cell pellet and
resuspend. Add sufficient Chang Medium In Situ to the
concentrated cell suspension to allow for final plating volume of
0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips) or 2 mL per
flaskette.
3. Incubate cultures undisturbed at 37° C 5%-8% CO2
atmosphere.
4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of Chang Medium In
Situ.
5. After 4 to 5 days, the cultures should be checked for growth.
Cultures should be fed once growth has been observed. Feed
cultures by removing all of the culture supernatant and
replacing with 2 mL fresh Chang Medium In Situ. It is
recommended that cultures be fed every 2 days thereafter.
6. Check cultures for growth on/or after day 5, and harvest when
sufficient colonies are observed.
7. Best results are obtained when the cultures are fed with Chang
Medium In Situ the day before the harvest.
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Use of Chang Medium In Situ for Growing Passaged Amniotic Fluid
Cells:
To passage the cells, treat the cultures with trypsin (or
pronase, etc.) as you would normally do when cells are grown
in conventional medium. However, protease treatment should
be carefully monitored. Amniotic fluid cells grown in Chang
Medium In Situ tend to be more sensitive to protease treatment
than amniotic fluid cells grown in conventional medium. It may
be necessary to modify your protocol to take this into account.
The pH of the medium used to feed the cultures must be
between 6.8–7.2 (i.e. the medium must be slightly yellowish
salmon color). pH can easily be adjusted by placing the
medium in a 5%-8% CO 2 incubator with the cap slightly
loosened for about 30 minutes.
Note: Calcium Oxalate crystals commonly form in chang
Medium In Situ. The presence of these crystals has not been
shown to cause any detrimental effect on product performance.
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PRODUKTBESCHREIBUNG
Chang Medium® In Situ wird verwendet zur Primärkultur von
humanen Amnionzellen, Karyotyping und anderen pränatalen
genetischen Testmethoden. Die Zusammensetzung wurde sowohl
für Flaschen- als auch für In Situ-Methoden optimiert.
KOMPONENTEN
mg/L
Salze ................................................................................. 7862
Dextrose .............................................................................. 921
Aminosäuren ....................................................................... 731
L-Glutamin .......................................................................... 220
Polypeptides ......................................................................... 60
Vitamine ................................................................................ 46
Deoxyribonukleoside ............................................................ 28
Ribonukleoside ..................................................................... 28
Natrium Pyruvat .................................................................... 90
andere Komponenten ............................................................ 8
Steroid Hormone ......................................................... 0.00038
Newborn Calf Serum ..................................................... 2% v/v
Fetal Bovine Serum .................................................... 16% v/v
Phenol-Rot .............................................................................. 7
LAGERBEDINGUNGEN
Chang Medium In Situ gefroren bei -10° C bis -30° C.
Ungebrauchtes Chang Medium In Situ kann wieder eingefroren
oder bei 2° C to 8° C im Kühlschrank aufbewahrt werden.
Vor fluoreszierendem Licht schützen.
STABILITÄT
Das Verfallsdatum steht chargenspezifisch auf dem
Flaschenetikett. Chang Medium In Situ kann maximal 2 mal wieder
eingefroren werden oder bei 2° C bis 8° C für 14 Tage ohne
Qualitätsverlust aufbewahrt werden. Eine längere
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Kühlschranklagerung kann nicht empfohlen werden.
PACKUNGSGROESSEN
Chang Medium In Situ ist in 100 ml und 500 ml
Vierkantflaschen erhältlich.
STERILITÄT
Serum für die Produktion von Chang Medium In Situ wurde
auf virale kontamination nach CFR Title 9 Part 113.53 und
mycoplasma kontamination getestet. Chang Medium In Situ
wurde sterilisiert durch Filtration mit einem 0.2 µ filter. Proben
von Chang Medium In Situ sind auf mögliche bakterielle
kontamination getestet nach dem Sterilitäts Test Protokoll
beschrieben unter CFR Title 21 Part 610.12.
GEBRAUCHSHINWEISE
Chang Medium In Situ kann für folgende Methoden eingesetzt werden:
1. Primär Kultur von Amnionzellen
2. Kultur passagierter Amnionzellen
3. Amniongewebe aus Chorion Villi Probenentnahme.
Dieses Medium wurde hergestellt für die verwendung in
CO 2 inkubatoren (KULTUREN EQUILIBRIERT MIT 5%-8%
CO2 ATMOSPHÄRE). Siehe Gebrauchshinweise.
Der pH Wert muss 6.8-7.2 betragen.
Achtung: Chang Medium In Situ sollte nicht über das
verfallsdatum (siehe Etikett) hinaus verwendet werden.
GEBRAUCHSVORBEREITUNG
1. Chang Medium In Situ durch Schwenken im 37° C Wasserbad
schnell auftauen.
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2. Antibiotika können, falls gewünscht, zugefügt werden.
ALIQUOTIEREN VON CHANG MEDIUM IN SITU
1. Chang Medium In Situ entsprechend den instruktionen
auftauen.
2. Aseptisch in gewünschte aliquots aufteilen und einfrieren.
3. Aliquots vor gebrauch im 37° C wasserbad auftauen.
GEBRAUCHSHINWEISE
Chang Medium In Situ für Primärkulturen: In Situ Methoden
1. . Amnionflüssigkeit bei niedrigen Drehzahlen zentrifugieren, um
die Zellen zu konzentrieren.
2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener
Amnionflüssigkeit resuspendieren.
zB : den Überstand von 10 ml der zentrifugierten
Amnionflüssigkeit bis auf 0,5 ml über dem Zellpellet aspirieren
und resuspendieren. Ausreichend Chang Medium In Situ zu
der konzentrierten Zellsuspension zugeben: 0.5 ml pro
Deckglas (maximal 4 Deckgläser) oder 2 ml pro Kulturflasche
3. Kulturen ungestört bei 37°C in 5%-8% CO2 Atmosphäre
inkubieren.
4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml Chang Medium In Situ fluten.
5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturen überprüft
werden. Die Kulturen sollten gefüttert werden, sobald sie
wachsen. Dazu wird der Zellkulturüberstand entfernt und durch
2 ml neues Chang Medium In Situ ersetzt. Danach sollten die
Kulturen alle 2 Tage neu gefüttert werden.
6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag überprüfen, und
wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.
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7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag vor der
Ernte nochmals mit Chang Medium In Situ gefüttert wird.
Anwendung von Chang Medium In Situ zur Kultur passagierter
amnionzellen
Zum Passagieren der zellen werden die kulturen mit Trypsin (oder
Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als wären die zellen in einem
konventionellen Medium gewachsen. Allerdings sollte die Protease
Behandlung sorgfältig beobachtet werden, da amnionzellen, die in
Chang Medium In Situ kultiviert wurden, sensitiver reagieren als Zellen
nach Behandlung in konventionellen Medien. Unter Umständen muss
das protokoll entsprechend modifiziert werden.
Der pH des medium mit dem die Kulturen gefüttert werden,
muss im Bereich 6.8–7.2 liegen. (d.h. das Medium sollte eine
leichte gelb-rosa Färbung haben). Der pH kann einfach
eingestellt werden, indem das Medium mit leicht geöffnetem
Verschluss für ca. 30 Minuten in einen 5%-8% CO2 Inkubator
gestellt wird.
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DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
Chang Medium® In Situ estato sviluppato per la coltura
principale delle cellule umane del fluido amniotico per uso nel
karyotyping ed altri analisi genetiche prenatali. QUESTA
FORMULA E STATA OTTIMIZATA PER ENTRAMBI FIASCHETTE
E LE METODOLOGIE IN SITU.
CONCENTRAZIONE DEI COMPONENTI
mg/L
Sale .................................................................................. 7862
Dextrosio ........................................................................... 921
Aminoacido ....................................................................... 731
Glutamina-L ...................................................................... 220
Polipeptide .......................................................................... 60
Vitamine .............................................................................. 46
Deoxiribonucleosidi ........................................................... 28
Ribonucleosidi .................................................................... 28
Pirovate di Sodio ................................................................ 90
Altri Componenti .................................................................... 8
Ormoni Steroide .......................................................... 0.00038
Siero Neonato Del Vitello ............................................. 2% v/v
Siero Di Bue Fetale ..................................................... 16% v/v
Rosso Fenolo ....................................................................... 10
ISTRUZIONI DI CONSERVAZIONE DEL PRODOTTO
Conservare Chang Medium In Situ congelato da -10° C a -30° C.
Chang Medium In Situ non usato puo essere recongelato o conservato
da 2° C a 8° C.
Proteggere il prodotto dalla luce fluorescente.
STABILITA
Vedere la etichetta della bottiglia per la data di scadenza
precisa. Chang Medium In Situ puo essere ricongelata al massimo
due volteve conservato disgelato da 2° C a 8° C per 14 giorni
senza intaccare la sua funzione. Non e raccomandato di
conservare il prodotto per piu di 14 giorni.
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QUANTITA RIFORNITA
Chang Medium In Situ e disponibile in bottiglie quadrati di
plastica di misure 100 mL e 500 mL.
STERILITA
Siero utilizzato in la produzione di Chang Medium In Situ e
stata analizzata per la contaminazione virale via CFR Title 9
Part 113.53. Il prodotto e stato purre analizzato per la
contaminazione micoplasmica. Chang Medium In Situ e
sterilizzata via filtrazione attraverso un filtro microno di 0.2.
Seguendo il protocollo di analisi di sterilita descritto nel attuale
CFR Title 21 Part 610.12, campioni di Chang Medium In Situ
sono analizzati per la possibilita della contaminazione
batteriologica.
USO RACCOMANDATO
Chang Medium In Situ puo essere utilizzato nelle applicazioni
seguenti:
1. la coltura principale delle cellule umane di fluido amniotico
2. lo sviluppare delle cellule di fluido amniotico incubati
3. tessuto amnio solido da campionamento corionico de villi.
QUESTA SOSTANZA E STATA PROGETTATA PER USO IN
INCUBATRICE DI CO 2 (COLTURE EQUILIBRATE CON
AMBIENTE DI 5% FINO A 8% CO 2).
Il pH finale deve essere 6.8 – 7.2. Per favore vedi le Istruzioni
per Uso.
Precauzione: Non usare Chang Medium In Situ oltre la data
de scadenza indicata sulla etichetta.
PREPARAZIONE PER L’USO
1. Disgelare Chang Medium In Situ velocamente mescolando la
bottiglia in un bagno di acqua di 37° C.
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2. Antibiotici possono essere aggiunti se e desiderato.
ALIQUOTARE CHANG MEDIUM IN SITU
1. Disgelare Chang Medium In Situ secondo le istruzioni.
2. Distribuire asetticamente in aliquoti di misure comode e
ricongelare.
3. Disgelare aliquote in 37° C bagno d’acqua quando e pronto per
usare.
ISTRUZIONI PER L’USO DEL PRODOTTO
USO DI CHANG MEDIUM IN SITU PER COLTURE PRINCIPALI:
METODOLOGIE IN SITU.
1. Centrifugare fluido amniotico a velocita bassa per concentrare
le cellule.
2. Risospendere la tavoletta cellulare in un piccolo volume del
fluido amniotico della paziente. Per esempio, aspirare il
supernate di 10 mL di fluido amniotico mescolato a 0.5 mL
sopra della tavoletta cellulare e risospendere. Aggiungere
suficiente Chang Medium In Situ alla sospensione concentrata
della cellula per permettere un volume di placcagio finale di 0.5
mL per copertura (un totale di 4 coperture) o 2 mL per pallone.
3. Incubare colture non disturbati a ambiente di 37° C 5%-8% CO2.
4. Inondare colture a giorno 2 via agguingere 2 mL di Chang
Medium In Situ.
5. Dopo 4 o 5 giorni, le culture devono essere controllate per
sviluppo. Le colture devono essere nutrite appena quando lo
sviluppo sia stata osservato. Nutrire le colture via rimuovere
tutto il supernate di coltura e sostituire con 2 mL di Chang
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Medium In Situ nuovo. E raccomandato che le colture siano
nutrite ogni 2 giorni dopo di che.
6. Controllare le colture per sviluppo in/o dopo giorno 5, e
raccogliere quando le colonie sufficienti sono osservati.
7. I migliori risultati sono ottenuti quando le colture sono nutrite
con Chang Medium In Situ il giorno prima della raccolta.
USO DELLA CHANG MEDIUM IN SITU PER CELLULE FLUIDE,
AMNIOTICI E SVILUPPATE
Per sviluppare le cellule, trattare le colture con tripsino (o
pronase, etc.) come lo farai quando le cellule sono sviluppate in
una sostanza normale. Comunque, trattamento di protease deve
essere controllato attentamente. Cellule di fluido amniotico
sviluppate in Chang Medium In Situ tendono a essere piu sensitive
al trattamento di protease di cellule di fluido amniotico sviluppate in
sostanza normale. Puo essere necessario che si deve modificare il
suo protocollo per rendere questo in conto.
IL Ph DELLA SOSTANZA UTILIZATTA DEVE ESSERE FRA
6.8 A 7.2 (per esempio la sostanza deve essere leggermente
gialla salmone di colore). Il pH puo essere aggiustato
facilmente mettendo la sostanza in una incubatrice di 5% - 8%
CO2 con il coperchio leggermente aperto per circa 30 minuti.
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DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
Chang Medium® In Situ es un medio desarrollado para el
cultivo primario de células humanas de líquido amniótico, para
análisis de cariotipo y otras pruebas genéticas de diagnóstico
prenatal. ESTA FORMULA SE HA OPTIMIZADA PARA
METODOLOGIAS EN FRASCO E IN SITU.
COMPOSICIÓN
mg/L
Sales ................................................................................ 7862
Dextrosa ............................................................................ 921
Aminoácidos ...................................................................... 731
L-Glutamina ...................................................................... 220
Polipéptidos ......................................................................... 60
Vitaminas ............................................................................. 46
Desoxirribonucleósidos ...................................................... 28
Ribonucleósidos ................................................................. 28
Piruvato de Sodio ............................................................... 90
Otros Componentes ............................................................. 8
Hormonas Esteroides ............................................... 0.00038
Proteínas de Suero Bovino ....................................... 2% v/v
Proteínas de Suero Bovino ..................................... 16% v/v
Rojo Fenol ............................................................................. 7
INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
Conservar Chang Medium In Situ congelado entre -10°C y 30°C. Una vez descongelado, se puede recongelar o se puede
conservar refrigerado entre 2°C y 8°C.
Proteger este producto de la luz fluorescente.
ESTABILIDAD
Chang Medium In Situ es estable hasta la fecha de caducidad
indicada en el envase. Una vez descongelado, se puede
conservar refrigerado entre 2ºC y 8ºC un máximo de 14 días sin
que ello altere su funcionalidad. Es posible hacer alícuotas y
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recongelar Chang Medium In Situ un máximo de 2 veces.
PRESENTACIÓN
Chang Medium In Situ está disponible en botellas de plástico
cuadradas de 100 mL y 500 mL.
ESTERILIDAD
El suero usado en la producción de Chang Medium In Situ
se ha testado para contaminación viral de acuerdo a la
normativa CFR capítulo 9, apartado 113.53. Asímismo, se ha
comprobado la contaminación por Micoplasma. Chang Medium
In Situ está esterilizado por fitración en filtros de 0.2 micras.
Las muestras de Chang Medium In Situ se comprueban para
posible contaminación bacteriológica siguiendo los protocolos
de esterilidad descritos en el CFR, capítulo 21 apartado
610.12.
APLICACIONES RECOMENDADAS
Chang Mediumâ In Situ se puede utilizar en las siguientes
aplicaciones:
1. Cultivo primario de células de líquido amniótico.
2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas del
cultivo primario.
3. Tejido amniótico sólido obtenido de vellosidades
coriónicas.
ESTE MEDIO HA SIDO DISEÑADO PARA SER UTILIZADO EN
INCUBADORES DE CO2 (CULTIVOS EQUILIBRADOS EN UNA
ATMOSFERA CON 5% - 8% CO2).
El pH final debe ser de 6.8 a 7.2. Por favor ver Instrucciones de
uso.
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Precaución: No usar Chang Medium In Situ después de la fecha
de caducidad indicada en la etiqueta.
PREPARACIÓN DEL PRODUCTO
1. Descongelar Chang Medium In Situ rápidamente poniendo la
botella al baño María a 37ºC y moviéndola en círculos.
2. Si se desea, se puede añadir antibióticos.
PARA ALICUOTAR CHANG MEDIUM IN SITU
1. Descongelar Chang Medium In Situ de acuerdo a las
instrucciones.
2. En condiciones de esterilidad, distribuir en alícuotas de tamaño
conveniente, y recongelar.
3. Descongelar las alícuotas al baño María a 37°C en el momento
de utilizarla.
INSTRUCCIONES DE USO
Utilización de Chang Medium In Situ en cultivos primarios:
Metodología In Situ
1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para
concentrar las células.
2. Resuspender el precipitado de células en un volumen
pequeño del propio líquido amniótico de la paciente. Por
ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 0.5 mL
de líquido, y resuspender. Añadir suficiente Chang Medium
In Situ a la suspensión concentrada de células para
alcanzar un volumen de cultivo final de 0.5 mL por cubreobjetos (un total de 4 cubre-objetos por muestra), o 2 mL
por frasco.
3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una
atmosfera de 5% - 8% CO2.
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4. En el día 2 del cultivo, añadir 2 mL de Chang Medium In
Situ.
5. A los 4 o 5 días, comprobar el crecimiento en los cultivos.
Una vez que se observe crecimiento, aspirar todo el medio
de cultivo y añadir 2 mL de Chang Medium In Situ fresco. A
partir de este momento, es recomendable cambiar el medio
de los cultivos cada 2 días.
6. Comprobar el crecimiento de los cultivos durante o
después del quinto día, y sacrificar cuando se observe que
hay suficientes colonias.
7. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un
cambio de medio con Chang Medium In Situ el día anterior
al sacrificio.
UTILIZACIÓN DE CHANG MEDIUM IN SITU EN EL CULTIVO DE
CÉLULAS DEL LÍQUIDO AMNIÓTICO DERIVADAS DE CULTIVO
PRIMARIO.
Para realizar pases de los amniocitos cultivados, tratar los
cultivos con tripsina ( o pronasa, etc.) como se tratan normalmente
las células en un medio convencional. Los amniocitos cultivados
en Medio Chang In Situ tienden a ser más sensibles al tratamiento
con proteasas que los cultivados en medios convencionales.
Aunque se puede utilizar el mismo tratamiento con tripsina,
pronasa, etc..., es recomendable controlar el proceso para
reajustar el protocolo en caso que sea necesario.
El pH usado de los medios debe estar entre 6.8 y 7.2 (el
medio debe ser de color ligeramente asalmonado). El pH
puede ajustarse fácilmente poniendo el medio en un
incubador al 5% a 8% CO2, con el tapón ligeramente
desenroscado durante unos 30 minutos.
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DESCRIPTION DU PRODUIT
Le milieu de Chang® In Situ est développé pour la culture
primaire de cellules amniotiques humaines utilisées pour les
caryotypes et autres tests de diagnostic antenatal. Cette formule a
été optimisée pour les systèmes ouverts et fermés.
COMPOSITION
mg/L
Sels .................................................................................. 7862
Dextrose ............................................................................. 921
L-Glutamine ....................................................................... 731
Acides aminés .................................................................... 220
Polypeptides ......................................................................... 60
Vitamines .............................................................................. 46
Désoxyribonucléotides ......................................................... 28
Ribonucléotides .................................................................... 28
Pyruvate de sodium ............................................................. 90
Autres composants ................................................................ 8
Hormones stéroïdes .................................................... 0.00038
Sérum de veau nouveau né ......................................... 2% v/v
Sérum de veau foetal .................................................. 16% v/v
Rouge De Phénol ................................................................... 7
CONSIGNES DE CONSERVATION
Conserver le milieu de Chang In Situ congelé entre -10°C et 30 °C. Le milieu de Chang In Situ non utilisé peut être recongelé
ou conservé entre 2°C et 8°C.
STABILITÉ
La date d’expiration figure sur l’étiquette. Le milieu de Chang In
Situ peut être recongelé 2 fois au maximum et conservé entre 2°C
et 8°C pendant 14 jours sans altération de ses capacités. Il n’est
pas recommandé de le conserver au delà.
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QUANTITÉ FOURNIE
Le milieu de Chang In Situ est conditionné en flacons PETG
carrés de 100 ml ou 500 ml.
STÉRILITÉ
Le sérum utilisé pour la production du milieu de Chang In
Situ est testé pour les contaminations virales et par
mycoplasmes (CFR 9 title part 113.53). Le milieu de Chang In
Situ est stérilisé par filtration avec des filtres de 0,2 µm. Des
échantillons de milieu de Chang In Situ sont testés pour une
éventuelle contamination bactérienne en suivant le protocole de
stérilité décrit dans CFR title 21 part 610.12.
UTILISATION CONSEILLÉE
Le milieu Chang In Situ peut être utilisé pour les applications suivantes
:
1. La culture primaire des cellules du liquide amniotique.
2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.
3. La culture des tissus des prélèvements de villosités
choriales.
Ce milieu est destiné à une utilisation en incubateur (CULTURES
EQUILIBREES EN ATMOSPHERE CO2 (5%-8%)).
Suivre les instructions d’utilisation. Le pH final doit être entre 6.8-7.2.
Attention: Ne pas utiliser le milieu de Chang In Situ au delà de
la date d’expiration figurant sur l’étiquette.
PRÉPARATION DU MILIEU CHANG IN SITU
1. Décongeler le milieu de Chang In Situ rapidement en agitant le
flacon dans un bain marie à 37°C.
2. Ajouter les antibiotiques.
PRÉPARATION D’ALIQUOTS DE MILIEU DE CHANG IN SITU
1. Décongeler le milieu de Chang In Situ en suivant les
instructions.
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2. Distribuer stérilement en volumes utiles et recongeler.
3. Décongeler les aliquots au bain marie à 37 °C avant l’emploi.
INSTRUCTIONS D’UTILISATION
UTILISATION DU MILIEU CHANG IN SITU POUR CULTURES
PRIMAIRES : METHODE IN SITU
1. Centrifuger le liquide amniotique à 1000 tours/min pendant 5
minutes pour concentrer les cellules.
2.
Resuspendre le culot dans un petit volume du liquide
amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant
obtenu en centrifugeant 10 ml de liquide amniotique et
resuspendre le culot dans 0,5 ml de ce liquide. Ajouter
suffisamment de milieu de Chang In Situ au culot de cellules
concentrées resuspendues pour obtenir un volume final
nécessaire pour 4 lamelles (0,5 ml par lamelle) ou 2 ml par
flaskette.
3.
Incuber les cultures sans agitation à 37°C en atmosphère CO2
(5% - 8%).
4.
Alimenter les cellules à J2 en ajoutant 2 ml de milieu de Chang In
Situ.
5.
Après 4 à 5 jours, la croissance des cultures doit être
surveillée. Dès que des foyers ont été observés, les cultures
doivent être supplémentées en enlevant le surnageant et en le
remplaçant par 2 ml de milieu de Chang In Situ frais. Il est
ensuite recommandé de changer le milieu tous les 2 jours.
6. Analyser la croissance des cellules au jour 5 et après et
récolter les cellules lorsque suffisamment de colonies sont
observées (15 à 20).
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7.
Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cultures sont
supplémentées la veille de la récolte avec du milieu de Chang
In Situ frais.
UTILISATION DU MILIEU CHANG IN SITU POUR LE
REPIQUAGE DES CELLULES DU LIQUIDE AMNIOTIQUE
Pour les subcultures, traiter les cultures avec la trypsine (ou
pronase, etc.) comme vous le faites normalement lorsque les
cellules poussent dans un milieu conventionnel. Cependant, le
traitement avec des protéases doit être conduit prudemment. Les
cellules amniotiques qui croissent dans le milieu de Chang In Situ
ont tendance à être plus sensibles aux protéases que celles qui
poussent dans un milieu traditionnel. Il est nécessaire d’en tenir
compte dans votre protocole.
Le pH du milieu utilisé pour supplémenter les cultures doit
être situé entre 6.8-7.2 (le milieu est légèrement rose clair). Le
pH peut facilement être ajusté en plaçant le flacon dans un
incubateur CO2 (5% - 8%), le bouchon légèrement dévissé,
pendant 30 minutes.
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DESCRIÇÃO DO PRODUTO
O Chang Medium® In Situ foi desenvolvido para a cultura
primária de células humanas de líquido amniótico, para análises de
cariótipo e outras provas genéticas de diagnóstico pré-natal. ESTA
FÓRMULA ESTÁ OPTIMIZADA PARA METODOLOGIAS EM
RECIPIENTE E IN SITU.
COMPOSIÇÃO
mg/L
Sais .................................................................................. 7862
Dextrose ............................................................................ 921
Aminoácidos ...................................................................... 731
L-Glutamina ....................................................................... 220
Polipéptidos ......................................................................... 60
Vitaminas ............................................................................ 46
Desoxirribonucleósidos ...................................................... 28
Ribonucleósidos ................................................................. 28
Piruvato de Sódio ............................................................... 90
Outros Componentes ........................................................... 8
Hormonas Esteróides ............................................... 0.00038
Soro Vitelo Recém Nascido ..................................... 2% v/v
Soro Bovino Fetal .................................................... 16% v/v
Vermelho de Fenol ............................................................... 7
INSTRUÇÕES DE CONSERVAÇÃO
Conservar o Chang Medium In Situ congelado entre -10°C e 30°C. Uma vez descongelado, o Chang Medium In Situ pode ser
recongelado ou conservado refrigerado entre 2°C e 8°C.
Proteger este produto da luz fluorescente.
ESTABILIDADE
O Chang Medium In Situ é estável até à data de expiração
indicada no rótulo do frasco. Uma vez descongelado, pode ser
recongelado no máximo 2 vezes e conservado refrigerado entre
2ºC e 8ºC no máximo 14 dias sem alterar a sua funcionalidade. O
armazenamento para além de 14 dias não é recomendado.
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APRESENTAÇÃO
O Chang Medium In Situ está disponível em recipientes de
plástico quadrados de 100 mL e 500 mL.
ESTERILIDADE
O soro utilizado na produção de Chang Medium In Situ foi
testado para a contaminação viral de acordo com a norma
CFR capítulo 9, parte 113.53. Foi também testado para a
contaminação por Micoplasma. O Chang Medium In Situ é
esterilizado por filtração com filtros de 0.2 micras. As
amostras de Chang Medium In Situ foram testadas para a
possível contaminação bacteriológica seguindo os protocolos
de esterilidade descritos no CFR, capítulo 21, parte 610.12.
APLICAÇÕES RECOMENDADAS
O Chang Medium In Situ pode ser utilizado nas seguintes
aplicações:
1. Cultura primária de células de líquido amniótico.
2. Cultura de células do líquido amniótico derivadas da
cultura primária.
3. Tecido amniótico sólido obtido de amostras de vilosidades
coriónicas.
ESTE MEIO FOI CONCEBIDO PARA SER UTILIZADO EM
INCUBADORAS DE CO2 (CULTURAS EQUILIBRADAS NUMA
ATMOSFERA COM 5% - 8% CO2).
O pH final deve ser entre 6.8 - 7.2. Por favor, ver Instruções de
utilização.
Atenção: Não utilizar o Chang Medium In Situ depois da data de
expiração indicada no rótulo.
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PREPARAÇÃO DO PRODUTO
1. Descongelar o Chang Medium In Situ rapidamente pondo o
recipiente em banho Maria a 37ºC e agitando com movimentos
circulares.
2. Se desejar, pode adicionar antibióticos.
PARA ALIQUOTAR O CHANG MEDIUM IN SITU
1. Descongelar o Chang Medium In Situ de acordo com as
instruções.
2. Em condições de esterilidade, distribuir em alíquotas de
tamanho conveniente, e recongelar.
3. Descongelar as alíquotas em banho Maria a 37°C no momento
de utilização.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Utilização de Chang Medium In Situ em culturas primárias:
Metodologia In Situ.
1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para
concentrar as células.
2. Ressuspender o precipitado de células num volume
pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por
exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 0.5
mL de líquido, e ressuspender. Adicionar suficiente Chang
Medium In Situ à suspensão concentrada de células para
alcançar um volume de cultura final de 0.5 mL por lamela
(num total de 4 lamelas), ou 2 mL por recipiente.
3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numa atmosfera
de 5% - 8% CO2.
4. No dia 2 de cultura, adicionar 2 mL de Chang Medium In
Situ.
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5. Após 4 ou 5 dias, comprovar o crescimento das culturas.
Uma vez que se observe crescimento, aspirar todo o meio
de cultura e adicionar 2 mL de Chang Medium In Situ
fresco. A partir deste momento, é recomendável mudar o
meio de cultura de 2 em 2 dias.
6. Verificar o crescimento das culturas durante ou depois do
quinto dia, e colher quando se observem números
suficientes de colónias.
7. Obtém-se melhores resultados quando se muda o meio
com Chang Medium In Situ no dia anterior à colheita.
UTILIZAÇÃO DE CHANG MEDIUM IN SITU NA CULTURA DE
CÉLULAS DO LÍQUIDO AMNIÓTICO DERIVADAS DE
CULTURAS PRIMÁRIAS.
Para passar as células cultivadas, tratar as culturas com
tripsina (ou pronase, etc.) tal como se tratam normalmente as
células num meio convencional. Contudo, o tratamento com
pronase deve ser monitorizado cuidadosamente. Os amniócitos
cultivados em Meio Chang In Situ tendem a ser mais sensíveis ao
tratamento com proteases que os cultivados em meios
convencionais. Tendo este aspecto em conta, pode ser por vezes
necessário reajustar o protocolo.
O pH do meio utilizado deve estar entre 6.8 e 7.2 (o meio
deve apresentar uma coloração ligeiramente cor de salmão).
O pH pode ajustar-se facilmente colocando o meio numa
incubadora a 5% - 8% CO2, com a tampa ligeiramente
desenroscada durante 30 minutos.
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Chang Medium® ist eine registrierte handelsmarke von Irvine Scientific.
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