BIO-FLASH® Toxo IgG

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BIO-FLASH Rubella IgG
3000-8557
50 tests
BIO-FLASH Rubella IgG est un immunoessai chimiluminescent en deux étapes, entièrement automatisé,
destiné à la détermination quantitative d’anticorps IgG contre le virus de la rubéole dans le sérum ou le
plasma humain au moyen de l’instrument BIO-FLASH.
Sommaire
La rubéole, ou « rougeole allemande », est une maladie infectieuse causée par un togavirus du genre Rubivirus.
Lorsqu’elle affecte les adultes, elle est généralement banale et bénigne. La maladie de la rubéole se caractérise
par une éruption cutanée maculo-papuleuse, de la fièvre, un malaise et une adénopathie. Pendant la grossesse,
cependant, le virus peut avoir des effets potentiellement dévastateurs sur le fœtus en développement, en
1
particulier au cours des trois premiers mois de grossesse. Le virus de la rubéole peut produire une infection intrautérine et causer la mort du fœtus, un avortement spontané, ou diverses anomalies congénitales. Dans le monde,
2
on estime qu'il y a plus de 100 000 enfants nés avec le syndrome de rubéole congénitale chaque année. Le
dépistage et la vaccination des femmes susceptibles sont extrêmement importants dans la prévention du
syndrome de rubéole congénitale. La persistance des anticorps IgG dirigés contre le virus de la rubéole, soit par
3-6
l’infection naturelle soit par la vaccination, a démontré son efficacité dans la protection contre l'infection.
La détection d’anticorps de la rubéole par des méthodes sérologiques permet de déterminer l’état immunitaire d’un
individu quant à sa résistance ou à sa sensibilité à une primo-infection par rubéole. Un diagnostic précis de la
primo-infection rubéoleuse aiguë pendant la grossesse est un impératif et requiert des tests sérologiques, car un
1
nombre important de cas sont subcliniques.
Principe
Lorsque les microparticules paramagnétiques de BIO-FLASH Rubella IgG sont mélangées et incubées avec
l’échantillon, si des anticorps spécifiques anti-rubéole sont présents dans celui-ci, ces anticorps se lient aux antigènes
de rubéole recouvrant les microparticules. Après une séparation magnétique et un lavage afin d’éliminer l’échantillon
résiduel, on ajoute un traceur consistant en un anticorps monoclonal anti-IgG humaine marqué à l’isoluminol qui se lie
aux anticorps IgG anti-rubéole capturés par les microparticules. Après une seconde incubation, une séparation
magnétique et un autre lavage, les réactifs activant la réaction chimiluminescente sont ajoutés. Le luminomètre du
BIO-FLASH mesure la lumière émise exprimée en unités relatives de lumière (URL) qui sont directement
proportionnelles à la concentration d’IgG anti-rubéole de l’échantillon.
Le BIO-FLASH utilise une méthode de réduction de données avec un ajustement à une courbe logistique de 4
paramètres (4PLC) afin de générer une courbe maîtresse d’étalonnage (CME). Cette courbe est fournie prédéfinie,
dépend du lot et est enregistrée dans l’instrument dans le code-barres de la cartouche. Grâce à la mesure des
calibrateurs (fournis dans un kit à part), la CME prédéfinie se transforme en une nouvelle courbe d’étalonnage de
travail (CET) spécifique à l’instrument. Les concentrations des calibrateurs sont enregistrées dans les codes-barres
des tubes des calibrateurs.
Schéma de la réaction :
Activateurs
(Triggers)
Activadores
(Triggers)
Particule magnétique
Échantillon
Traceur
URL
URL
Émission de lumière
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Composants
Cartouche de réactifs
Le kit BIO-FLASH Rubella IgG contient une cartouche de réactifs pour 50 déterminations (REF 3000-8557).
Remarque : la conception de la cartouche est protégée par un brevet (US D565,741/Conception CE 000762992-0001)
Composition de la cartouche de réactifs :
La cartouche comprend 4 fioles contenant :
A.
1
fiole
cylindrique
de
suspension
de
microparticules recouvertes d’un antigène de
rubéole dans un tampon phosphate. Contient
< 0,1% d’azide de sodium ;
B.
1 fiole de tampon d’essai. Contient <0,1 %
d’azide de sodium ;
C.
1 fiole opaque d’un traceur consistant en un
anticorps monoclonal murin anti-IgG humaine
marqué à l’isoluminol. Contient < 0,1% d’azide de
sodium ;
D.
1 fiole vide.
Préparation
Voir la figure ci-dessous.
Cartouche : les microparticules sédimentent pendant leur transport et leur stockage, par conséquent, il convient de
les mélanger afin de les remettre en suspension.

Lors de la première utilisation de la cartouche, retournez-la doucement 30 fois en veillant à éviter la
formation de mousse (les bulles d’air peuvent altérer la lecture des capteurs de liquide de l’instrument).

Vérifiez que les microparticules soient complètement remises en suspension. Si ce n’est pas le cas, continuez
à retourner la cartouche jusqu’à la remise en suspension complète.

NE PAS UTILISER LA CARTOUCHE si les microparticules ne sont pas remises en suspension ou en cas de
rupture de la bande qui scelle les réactifs.

Une fois les microparticules remises en suspension, placez la cartouche sur une surface solide et retirez avec
prudence la languette rouge de sécurité pour le transport.

Tout en maintenant la cartouche sur la surface solide, appuyez sur les deux languettes situées de part et
d’autre du bouchon perforateur (partie grise) et appuyez sur la partie supérieure de la cartouche jusqu’à
atteindre la position de blocage. Une fois la cartouche en position de blocage, les languettes doivent rester
invisibles. Ne retournez pas la cartouche ouverte.

Laissez reposer la cartouche pendant 5 minutes avant de l’insérer dans l’instrument.

Une fois la cartouche insérée, l’instrument mélange son contenu de façon automatique à des intervalles réguliers.
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Précautions
Les réactifs BIO-FLASH sont destinés à un usage diagnostique IN VITRO.
Utilisation réservée aux professionnels.
L’azide de sodium peut réagir avec les canalisations et les tuyaux d’écoulement en plomb ou en cuivre, provoquant
la formation d’azides métalliques fortement explosifs. Lors de l’élimination des restes de réactifs, laissez couler
l’eau abondamment.
ATTENTION : MATIÈRE PRÉSENTANT UN RISQUE BIOLOGIQUE.
Jetez toutes les matières utilisées dans des récipients destinés aux biocontaminants.
Veuillez ne pas réutiliser ou réintroduire des réactifs dans les cartouches ou fioles.
Prélèvement et conservation des échantillons
Utilisez du sérum frais (des tubes contenant du gel séparateur de sérum peuvent aussi être utilisés) ou du plasma
(EDTA, Li-héparine, Li-héparine en tube contenant du gel séparateur, Na-héparine et Na-citrate). D’autres
anticoagulants doivent être vérifiés avant utilisation. Les anticoagulants liquides, tels que le Na-citrate, exercent un
effet de dilution et peuvent réduire la concentration d’échantillons des patients. Les échantillons ne doivent pas être
inactivés par la chaleur. Les particules en suspension doivent être retirées par centrifugation. Les directives
CLSI H18-A3 et H21-A5 offrent des informations supplémentaires sur la manipulation, le transport, le traitement et
la conservation des échantillons.
Sérum
Les échantillons de sérum peuvent être stockés à une température comprise entre 2 et 8°C pendant 8 jours. Pour
une période de temps plus longue, ils doivent être congelés à une température égale ou inférieure à -20°C. Les
échantillons ne peuvent pas être congelés/décongelés plus de 3 fois. Il convient de bien mélanger après
décongélation. Assurez-vous de l’absence de bulles d’air dans les échantillons et, dans le cas contraire, retirez-les
totalement avant de procéder à l’analyse.
Plasma
Les échantillons de plasma peuvent être stockés à une température comprise entre 2 et 8°C pendant 8 jours. Pour
une période de temps plus longue, ils doivent être congelés à une température égale ou inférieure à -20°C.
Décongelez le plasma à 37°C. Ne décongelez les échantillons qu’une seule fois. Bien mélanger après
décongélation. Assurez-vous de l’absence de bulles d’air dans les échantillons et, dans le cas contraire, retirez-les
totalement avant de procéder à l’analyse.
Volume d’échantillon
Le volume d’échantillon nécessaire pour réaliser un seul test avec BIO-FLASH Rubella IgG varie en fonction du
type de récipient utilisé. Un essai nécessite au moins 24 µL plus le volume mort, qui correspond à 200 µL si la
coupelle à échantillon recommandée est utilisée (REF 3000-8209).
Autres matériels
Les matériels suivants ne sont pas fournis avec la cartouche de réactifs et doivent être achetés séparément.
REF 3000-8558
BIO-FLASH Rubella IgG Calibrators (Calibrateurs)
REF 3000-8559
BIO-FLASH Rubella IgG Controls (Contrôles)
Pour de plus amples informations, veuillez lire attentivement les instructions correspondantes.
N’utilisez pas d’autres calibrateurs. Les informations requises par l’instrument BIO-FLASH pour étalonner l’essai
BIO-FLASH Rubella IgG sont enregistrées dans les codes-barres des fioles.
L’utilisation de contrôles d’autres fabricants peut provoquer des résultats inattendus.
Assurez-vous que l’instrument BIO-FLASH possède une quantité suffisante des consommables suivants, avant le
traitement des échantillons, calibrateurs ou contrôles :
REF 3000-8206
BIO-FLASH Cuvettes (Cuvettes)
Remarque : la conception des cuvettes est protégée par un brevet (US D560,816/Conception CE 000762984-0001)
REF 3000-8204
BIO-FLASH Triggers (Activateurs)
REF 3000-8205
BIO-FLASH System Rinse (Solution du système)
REF 3000-8207
BIO-FLASH Sample Diluent (Diluant des échantillons)
Instrument / réalisation de l’essai
Vous trouverez les instructions complètes pour réaliser l’essai dans le manuel d’utilisation du BIO-FLASH.
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Étalonnage
Le code-barres de la cartouche contient une courbe maîtresse d’étalonnage (CME) valable pour le lot de réactifs.
Néanmoins, tous les réactifs requièrent une courbe d’étalonnage de travail (CET), qui est spécifique à chaque lot et
valable jusqu’à la date de péremption de celui-ci. Une nouvelle CET doit être obtenue lorsque les résultats des contrôles
sont en dehors des limites de l’intervalle d’acceptabilité ou lorsque des ajustements de l’instrument ont été réalisés.
Veuillez lire attentivement le manuel d’utilisation du BIO-FLASH afin de configurer une CET.
Contrôle de qualité
Afin de réaliser un programme complet de contrôle de la qualité, trois niveaux de contrôle sont recommandés.
Les contrôles BIO-FLASH Rubella IgG négatif, positif et fortement positif ont été conçus pour ce programme.
Les contrôles doivent être analysés au moins toutes les 24 heures par jour d’utilisation. Assurez-vous que les
résultats des contrôles sont dans les limites de l’intervalle d’acceptabilité car, si ce n’est pas le cas, il peut s’agir
de résultats non valables, face auxquels l’utilisateur devra prendre des mesures correctives. Dans ce cas,
vérifiez tous les résultats obtenus depuis la dernière vérification de contrôle de qualité acceptable de l’analyte
concerné. Il peut être nécessaire de réétalonner l’instrument. Vous trouverez de plus amples informations dans
le manuel d’utilisation de l’instrument. Afin d’identifier et de résoudre des situations de contrôle de qualité
7
anormales, consultez Westgard et al.
Conservation et stabilité
Les réactifs n’ayant pas été ouverts restent stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette de la
cartouche à condition qu’ils soient stockés à une température comprise entre 2 et 8°C en position verticale.
Après ouverture, la stabilité de la cartouche chargée dans l’instrument BIO-FLASH ou stockée à une température
comprise entre 2 et 8°C est de 5 semaines.
Traçabilité des calibrateurs et des contrôles
Les valeurs sont exprimées en UI/mL et ont été assignées par de multiples essais au moyen de l’instrument
BIO-FLASH en utilisant des lots spécifiques de réactifs versus des étalons internes titrés par rapport à l’étalon
international de l’OMS pour immunoglobuline humaine anti-rubéole (code NIBSC : RUBI-1-94).
Interprétation des résultats
La quantité d’analyte dans chaque échantillon est déterminée à partir de la lumière émise (URL), par interpolation
sur la courbe d’étalonnage de travail mémorisée.
La détermination quantitative des IgG anti-rubéole à l’aide de l’essai BIO-FLASH Rubella IgG permet de
déterminer l’état immunitaire du patient :



Les échantillons présentant une concentration < 10,0 UI/mL sont considérés comme non réactifs (négatifs).
Les échantillons présentant une concentration ≥ 10,0 et < 15,0 UI/mL sont considérés comme non
interprétables (douteux). Les échantillons considérés comme non interprétables doivent être à nouveau
analysés. Si un résultat non interprétable est obtenu lors de la seconde analyse, il doit être enregistré comme
tel et il convient soit de réaliser un autre essai en utilisant une méthode alternative, soit d’obtenir et d’analyser
un second échantillon.
Les échantillons présentant une concentration ≥ 15,0 UI/mL sont considérés comme réactifs (positifs).
Chez les patients susceptibles de présenter une séroconversion, il convient de prélever un second échantillon de sérum
entre 2 et 4 semaines après le premier et d’évaluer conjointement les deux échantillons pour les anticorps IgG
anti-rubéole. Une élévation significative de la concentration d’anticorps IgG contre le virus de la rubéole entre le
premier et le second échantillon de sérum peut être considérée comme un signe d’une séroconversion due à une
8
infection ou une vaccination récente. En cas de suspicion d’une infection récente, il est fortement recommandé
d’analyser l’échantillon pour la recherche d’anticorps IgM contre la rubéole. Un résultat négatif d’IgG anti-rubéole
n’écarte pas la survenue d’une infection récente. Vu que les anticorps IgG anti-rubéole peuvent se manifester
légèrement plus tard que les anticorps IgM, il est recommandé d’analyser aussi les anticorps IgM anti-rubéole pendant
le suivi sérologique de la femme enceinte. L’essai BIO-FLASH Rubella IgM REF 3000-8560 est approprié à cette fin.
Limitations
Le résultat d’un seul échantillon s’avère insuffisant pour diagnostiquer une primo-infection par rubéole. Par
conséquent, outre les résultats du BIO-FLASH Rubella IgG, il convient de tenir compte d’autres données, telles
que, par exemple, la symptomatologie, l’histoire clinique, les résultats d’autres tests et toutes autres informations
importantes.
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Résultats attendus
Dans les pays appliquant des programmes de vaccination, plus de 90 % des jeunes adultes sont déjà immunisés
9
contre le virus de la rubéole, soit par l’infection naturelle soit par la vaccination. Les anticorps spécifiques IgG sont
détectés en cas de primo-infection ou après la vaccination, lorsque, en général, le résultat est clairement positif
(plus du double de la valeur seuil), ou en cas d’infection antérieure, lorsque, en général, le résultat est faiblement
positif.
Caractéristiques fonctionnelles
REMARQUE : les données suivantes sont représentatives ; les résultats obtenus dans des expériences isolées
peuvent varier par rapport à ces données.
Comparaison de méthodes
BIO-FLASH Rubella IgG a été évalué dans les études comparatives avec d’autres essais commercialisés.
Évaluation interne
Un panel d’échantillons de provenance différente comprenant des sérums positifs et négatifs d’anticorps IgG
anti-rubéole a été analysé à l’aide du BIO-FLASH Rubella IgG et les résultats ont été comparés avec ceux
obtenus par une méthode d’EIA Rubéole IgG commercialisée. Les calculs n’ont pas tenu compte des résultats non
interprétables (IND).
Méthode de référence
BIO-FLASH
Rubella IgG
IND
NÉG
POS
Total
IND
NÉG POS Total
2
0
2
4
7
60
2
69
1
0
243
244
10
60
247
317
Les résultats initiaux de sensibilité et de spécificité relatives, ainsi que de concordance globale, suivants ont été obtenus :
Sensibilité relative
Valeur
IC de 95%
100,0% 98,5% à 100,0 %
N
305
Spécificité relative
Valeur
IC de 95%
96,8% 88,8% à 99,6%
Concordance globale
Valeur
IC de 95%
99,3% 97,3% à 99,9%
Le même panel a été testé par d’autres méthodes commercialisées de rubéole IgG et les échantillons discordants ont
été analysés. Le tableau ci-dessous affiche un résumé des résultats du consensus, à l’exception des 10 échantillons
non interprétables à l’aide du BIO-FLASH Rubella IgG et des 3 échantillons pour lesquels un consensus n’a pas été
obtenu :
Consensus
BIO-FLASH
Rubella IgG
NÉG
POS
Total
NÉG POS Total
60
1
61
0
243
243
60
244
304
Par rapport au consensus, les résultats de sensibilité, de spécificité et de concordance globale suivants ont été obtenus :
N
304
Sensibilité vs consensus
Valeur
IC de 95%
100,0% 98,5% à 100,0%
Spécificité vs consensus
Valeur
IC de 95%
98,4% 91,2% à 100,0%
Concordance vs consensus
Valeur
IC de 95%
99,7%
98,2% à 100,0%
Évaluation externe
Une évaluation externe a été réalisée dans le Servei de Microbiologia (service de microbiologie) de l’Hospital de la
Santa Creu i Sant Pau de Barcelone (Espagne). Les échantillons ont été caractérisés par une autre méthode
commercialisée, MEIA Rubéole IgG, et analysés à l’aide du BIO-FLASH Rubella IgG. Les calculs n’ont pas tenu
compte des résultats non interprétables (IND).
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Méthode de référence
BIO-FLASH
Rubella IgG
IND
NÉG
POS
Total
IND
2
3
1
6
NÉG POS Total
0
70
2
72
11
3
252
266
13
76
255
344
Les résultats initiaux de sensibilité et de spécificité relatives, ainsi que de concordance globale, suivants ont été
obtenus :
N
327
Sensibilité relative
Valeur
IC de 95 %
98,8 % 96,6 % à 99,8 %
Spécificité relative
Valeur
IC de 95 %
97,2 % 90,3 % à 99,7 %
Concordance globale
Valeur
IC de 95 %
98,5 % 96,5 % à 99,5 %
Les échantillons discordants ont été analysés par une méthode CLIA Rubéole IgG commercialisée et deux faux
positifs ont été résolues comme négatif ou indéterminé en faveur du BIO-FLASH Rubella IgG. Après l’essai
supplémentaire, les résultats finaux de sensibilité, de spécificité et de concordance globale suivants ont été
obtenus :
N
325
Sensibilité finale
Valeur
IC de 95%
98,8% 96,6% à 99,8%
Spécificité finale
Valeur
IC de 95%
100,0% 94,9% à 100,0%
Concordance globale finale
Valeur
IC de 95%
99,1%
97,3% à 99,8%
Panel SeraCare-BBI
Le panel commercialisé de BBI « panel de titrage mixte anti-rubéole PTR201 », comprenant 25 échantillons
caractérisés a été analysé. Les résultats de l’essai BIO-FLASH Rubella IgG ont concordé dans tous les cas avec
le consensus des résultats de la majorité des fabricants.
Panel CDC
Le panel de sérums rubéole IgG de la CDC comprenant 82 échantillons de sérum positifs et 18 échantillons de
sérum négatifs a été analysé à l’aide de l’essai BIO-FLASH Rubella IgG avec un résultat de sensibilité et de
spécificité de 100,0%. Les calculs n’ont pas tenu compte quatre des résultats non interprétables (IND).
Précision
Conformément aux directives CLSI EP05-A, la précision intra-essai et totale (pour chaque essai et jour après jour)
a été évaluée lors de multiples essais. Le tableau ci-dessous affiche le résumé des résultats :
Contrôle négatif
Contrôle positif
Contrôle fortement positif
Proche de la valeur seuil
Moyenne (UI/mL)
2,8
25,1
81,0
8,6
CV% (Intra-essai)
5,4
3,6
5,3
3,6
CV% (Totale)
7,5
7,6
9,5
6,3
Reproductibilité
La reproductibilité a été évaluée entre les réplicats, entre les lots et entre les instruments. Le tableau ci-dessous
affiche les résultats :
Réplicat 2 vs réplicat 1
Lot 2 vs lot 1
Instrument 2 vs instrument 1
N
50
50
50
Valeur
0,98
0,98
0,96
Pente
IC de 95%
0,96 à 1,01
0,95 à 1,03
0,93 à 0,97
Intersection
Valeur IC de 95%
0,11
0,00 à 1,18
0,00
-2,48 à 0,16
0,19
0,00 à 0,58
Valeur
1,00
0,99
1,00
R
IC de 95%
1,00 à 1,00
0,99 à 1,00
0,99 à 1,00
Interférences
Conformément aux directives CLSI EP7-A, des études ont démontré que les substances suivantes potentiellement
interférentes n’altèrent pas les résultats du BIO-FLASH Rubella IgG :
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Substance potentiellement interférente
Hémoglobine
Bilirubine indirecte
Bilirubine directe
Triglycérides
Concentration
500 mg/dL
18 mg/dL
18 mg/dL
1300 mg/dL
% Interférence
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
Réactivité croisée
L’analyse de 109 échantillons potentiellement susceptibles de produire une réaction croisée avec l’essai
BIO-FLASH Rubella IgG et la comparaison des résultats obtenus avec des tests commercialisés de rubéole IgG
ont mis en évidence la concordance suivante :
Réaction croisée potentielle
Anti-Toxo IgG (anticorps contre le Toxoplasma gondii)
Anti-CMV IgG (anticorps contre le cytomégalovirus)
Anti-HIV (anticorps contre le virus de l’immunodéficience humaine)
HAMA (anticorps humain antimurin)
SLE (Lupus érythémateux systémique)
ANA (anticorps antinucléaires)
Anti-EBV (anticorps contre le virus Epstein-Barr)
Anti-PV B19 (anticorps contre le parvovirus B19)
Anti-HSV 1 (anticorps contre le virus herpès simplex de type 1)
Anti-VZV (anticorps contre le virus varicelle-zona)
Paraprotéines IgG et IgM
Concentration élevée d’IgG et d’IgM
Anticorps hétérophiles
RF (Facteur rhumatoïde)
Femme enceinte (multipare comprise)
Concordance
3/3
16/16
6/6
4/4
1/1
10/10
6/6
6/6
5/5
5/5
6/6
4/5
5/5
10/10
21/21
Limite de détection
Conformément aux directives CLSI EP17-A, la limite de détection (LD) est de 0,3 UI/mL.
Limite de quantification
Conformément aux directives CLSI EP17-A, la limite de quantification (LQ) est de 0,4 UI/mL.
Linéarité
Le test BIO-FLASH Rubella IgG est linéaire entre 0,4 et 500 UI/mL conformément aux directives CLSI EP6-A.
Cependant, la linéarité peut être amplifiée jusqu’à 7 500 UI/mL par dilution si l’option de re-run automatique est
sélectionnée. Consultez le manuel d’utilisation du BIO-FLASH afin de sélectionner l’option de re-run automatique.
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