35_36 Geste leuco
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35_36 Geste leuco
Fiche geste techniques de leucoconcentration chez le chien et le chat D PRINCIPE La leucoconcentration consiste à obtenir de façon simple, c’est-à-dire par centrifugation, un prélèvement enrichi en leucocytes à partir de sang périphérique récolté sur anticoagulant (E.D.T.A., le plus souvent). ● Il convient alors d’étaler et de colorer ce prélèvement pour procéder à son examen direct, comme dans le cadre d’un frottis sanguin. Il peut aussi être utilisé pour réaliser des infections expérimentales, par exemple, pour une mise en culture sur lignées cellulaires. ● Unité de médecine interne et laboratoire d’hématologie clinique Département des Animaux de Compagnie E.N.V.L. 1, avenue Bourgelat 69280 Marcy l’Étoile Objectif pédagogique L’examen d’un leucoconcentré présente une efficacité diagnostique bien supérieure à celui d’un frottis sanguin traditionnel. Cette fiche décrit des techniques simples à réaliser par le praticien. ans le cadre du diagnostic des maladies vectorielles, la recherche des inclusions leucocytaires (ou plaquettaires) caractéristiques de l’affection s’avère souvent fastidieuse lors de l’examen du frottis sanguin*. ● Elle est d’autant plus difficile, et parfois infructueuse, que les cellules parasitées sont en nombre limité, notamment dans les phases chroniques de maladies, et que les lignées cellulaires concernées sont peu représentées. Ainsi, dans une étude portant sur 50 chiens en phase aiguë d’ehrlichiose monocytaire, l’examen de 1 000 champs en immersion (soit, pour un œil averti, une heure de lecture), n’a permis de mettre en évidence qu’une à trois morulas par frottis sanguin … [Mylonakis M.E. et al., 2003]. ● Pour pallier la faible sensibilité d’un tel examen, estimée en moyenne autour de 4 p. cent, des techniques de leucoconcentration ont été proposées. ● Ces techniques simples, qui peuvent être réalisées par le praticien, permettent d’augmenter nettement la sensibilité de l’examen direct : selon les études, des valeurs comprises entre 20 et 66 p. cent de frottis positifs sont en effet atteintes. ● Ces techniques peuvent être également employées pour le diagnostic de la piroplasmose [Hugnet C. et al., 2000]. Thomas Normand Luc Chabanne Définir et réaliser un leucoconcentré. Geste 1 Aspect d’un tube à microhématocrite après centrifugation. Visualisation du "buffy coat" (flèche) (photo Laboratoire d’hématologie clinique, E.N.V.L.). ❚ Facile à réaliser. ❚ Praticien généraliste. Figure 1 Vue schématique d’un leucoconcentré NOTE * Cf. D. Ledieu, "Le frottis sanguin. Comment le réaliser et le lire chez le chien et le chat", Le Nouveau Praticien Vétérinaire, 2004;16:19-20. Essentiel COMMENT RÉALISER UN LEUCOCONCENTRÉ ? ● Différentes méthodes, plus ou moins élaborées, ont été décrites pour réaliser un leucoconcentré. ● La méthode la plus simple et la plus rapide consiste à étaler le "buffy coat" (la couche leuco-plaquettaire) après avoir centrifugé un tube à hématocrite contenant du sang périphérique, lui-même récolté sur un anticoagulant. Le "buffy coat" est la zone blanche d’aspect velouté qui constitue la couche intermédiaire entre le surnageant (le plasma) et le culot (les hématies) (photo 1, figure 1). Pour cela, scier à l’aide d’une petite lime pour ampoules ou d’une pointe de diamant le tube à microhématocrite entre le culot d’hématies et le "buffy coat", puis étaler le prélèvement sur une lame de verre dégraissée, comme pour un frottis sanguin classique. ● Pour obtenir un prélèvement de meilleure qualité, réaliser plutôt deux centrifugations successives selon la méthode développée par Cabassu et Haroutunian (figure 2) : ❚ La leucoconcentration consiste à obtenir par centrifugation un prélèvement sanguin enrichi en leucocytes. ❚ L’utilisation d’un leucoconcentré permet d’augmenter la sensibilité de l’examen direct du frottis. ❚ Pour obtenir un prélèvement de meilleure qualité, réaliser deux centrifugations successives. CANINE - FÉLINE 35 LE NOUVEAU PRATICIEN VÉTÉRINAIRE AOÛT / SEPTEMBRE 2005 - 303