Module 7 - EU

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Module 7 - EU

Analyse d’échantillons alimentaires pour la
présence d’organismes génétiquement modifiés
Module 7
Caractéristiques du soja Roundup Ready®, du maïs
MON810 et du maïs Bt-176
M. Querci, M. Mazzara
WORLD HEALTH ORGANIZATION
REGIONAL OFFICE FOR EUROPE
WELTGESUNDHEITSORGANISATION
REGIONALBÜRO FÜR EUROPA
ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE
BUREAU REGIONAL DE L’EUROPE
ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
ЕВРОПЕЙСКОЕ РЕГИОНАЛЬНОЕ БЮРО
Caractéristiques du soja Roundup Ready®, du maïs MON810 et du maïs Bt-176
2
Table des matières
Module 7
Caractéristiques du soja Roundup Ready®, du maïs MON810 et du
maïs Bt-176
CARACTERISTIQUES DU SOJA ROUNDUP READY®
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CARACTERISTIQUES DU MAÏS MON810
8
CARACTERISTIQUES DU MAÏS BT-176
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REFERENCES
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Analyse d’échantillons alimentaires pour la présence d’organismes génétiquement modifiés
Module 7
3
Caractéristiques du soja Roundup Ready®1
Identification
Désignation
GTS 40-3-2
Demandeur
Monsanto Canada Inc.
Espèce végétale
Glycine max L. (soja)
Nouvelles
Tolérance nouvelle au glyphosate, matière active
caractéristiques
de l’herbicide Roundup®
Méthode d’introduction
Accélération de particules (biolistique)
des caractéristiques
Utilisation proposée
Production de soja pour l’alimentation animale
(essentiellement de la farine déshuilée grillée et
des
flocons)
et
(essentiellement
la
de
consommation
l’huile,
des
humaine
fractions
protéiques et des fibres alimentaires).
Contexte
Monsanto Canada Inc. a mis au point la lignée de soja GTS 40-3-2 afin de permettre
l’utilisation de glyphosate en tant que solution alternative pour le désherbage dans le
cadre de la production de soja.
La mise au point de la lignée GTS 40-3-2 repose sur la technique de l’ADN
recombinant, le principe consistant à introduire dans la variété commerciale de soja
« A5403 » (société Asgrow Seed) un gène EPSPS (5-énolpyruvyl-shikimate-3phosphate
synthétase)
tolérant
au
glyphosate,
isolé
de
la
souche
CP4
d’Agrobacterium tumefaciens.
1
Source : Agence Canadienne d’Inspection des Aliments, Décision DD95-05.
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Description des nouvelles caractéristiques
Tolérance au glyphosate
Le glyphosate, matière active du Roundup®, est un désherbant systémique de postlevée utilisé dans le monde entier en tant qu’herbicide total. Le glyphosate agit en
tant qu’inhibiteur compétitif de la synthétase 5-énolpyruvyl-shikimate-3-phosphate
synthétase (EPSPS), une enzyme essentielle de la voie métabolique du shikimate,
qui joue un rôle dans la production des acides aminés aromatiques phénylalanine,
tyrosine et tryptophane (Figure 1). Cette inhibition de l’EPSPS provoque un arrêt de
la croissance ainsi que la mort de la plante.
Phosphoénolpyruvate
+
Eritrose-4-phosphate
Shikimate-3-phosphate
Phosphoénolpyruvate
Glyphosate (Roundup)
N-(phosphonométhyl)
glycine
5-énolpyruvyl-shikimate-3-phosphate
Phénylalanine
Tyrosine
Figure 1
L’EPSPS catalyse la réaction
du shikimate-3-phosphate et du
phosphoénolpyruvate (PEP)
pour former du 5-énolpyruvylshikimate-3-phosphate (EPSP)
et du phosphate. L’EPSP est un
élément intermédiaire dans le
cadre de la synthèse des
acides aminés aromatiques.
Suite à l’inhibition de cette voie
métabolique, la synthèse des
protéines est interrompue,
provoquant la mort de la plante.
L’EPSPS est la seule cible
physiologique du glyphosate
dans les plantes, et aucune
autre enzyme utilisant du PEP
n’est inhibée par le glyphosate.
Tryptophane
Le gène inséré conférant la tolérance au glyphosate code une version bactérienne
(dérivée de la souche CP4 de l’Agrobacterium tumefaciens) de cette enzyme
essentielle, omniprésente chez les végétaux, les champignons et les micro-
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5
organismes, et est extrêmement insensible au glyphosate, répondant ainsi aux
besoins métaboliques de la plante en matière d’acides aminés aromatiques.
Le gène EPSPS est sous le contrôle d’un puissant promoteur constitutif du virus de
la mosaïque du chou-fleur (P- CaMV E35S) et se termine par le terminateur du gène
de la nopaline synthase (T-nos) d’Agrobacterium tumefaciens (Figure 2). Une
séquence d’ADN d’origine végétale codant un peptide de transport vers les
chloroplastes (CTP4 de Petunia hibrida) a été clonée au 5’ du gène de tolérance au
glyphosate. Ce peptide signal, associé au gène EPSPS, facilite l’importation de
l’enzyme nouvellement traduite dans les chloroplastes, où sont situés à la fois la voie
métabolique du shikimate et les sites d’activité du glyphosate. Après son importation,
le peptide de transport est éliminé et rapidement dégradé par une protéase
spécifique.
L’EPSP synthétase est omniprésente dans la nature et ne devrait pas avoir d’effet
toxique ou allergène. Dans le cadre d’analyses comparatives avec des bases de
données sur les séquences de polypeptides toxiques ou allergènes, la séquence
d’acides aminés de l’enzyme ne présentait d’homologie majeure avec aucune toxine
ni aucun allergène connus.
P-E35S
CTP4
CP4 EPSPS
T-nos
Figure 2. Représentation schématique de la cassette génique du soja Roundup
Ready® (modifié par Padgette et al., 1995).
Méthode de développement
La variété commerciale de soja A5403 (société Asgrow Seed) a été transformée par
le biais d’un processus de bombardement de particules d’or, à l’aide du vecteur
plasmidique PV-GMGT04 recueilli sur Escherichia coli (cf. Figure 3). Le plasmide PVGMGT04 contenait le gène EPSPS CP4 codant la tolérance au glyphosate, le gène
gus pour la production de ß-glucuronidase en tant que marqueur de sélection, et le
gène nptII pour l’antibiorésistance (kanamycine). Le transformant original sélectionné
présentait deux sites d’intégration, l’un avec le marqueur de sélection gus et l’autre
avec le gène de la tolérance au glyphosate. Il y a eu ségrégation indépendante de
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ces deux sites à la génération sexuée suivante et une analyse a montré que la lignée
GTS 40-3-2 ne présentait qu’un seul site d’insertion dans lequel est uniquement
intégré le gène de la tolérance au glyphosate.
Figure 3. Carte plasmidique comprenant les éléments génétiques du vecteur PVGMGT04 mis en œuvre dans le cadre de la transformation de la lignée 40-3-2 du
soja RR (source : Monsanto, 2000)
Stabilité de l’insertion des nouvelles caractéristiques
Les données initiales (Padgette et al., 1995, 1996) indiquaient que la lignée GTS 403-2 contenait une cassette génique fonctionnelle EPSPS CP4 unique, comprenant le
promoteur E35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV), un peptide de
transport vers les chloroplastes, la séquence codante de l’EPSPS CP4 et le signal de
polyadénylation nos.
Aucune intégration d'une région codante de l’extérieur du gène de fusion par le
vecteur plasmidique original n’a été observée. Les générations suivantes n’ont révélé
aucune ségrégation supplémentaire du gène de fusion décrit ci-dessus, indiquant
que la lignée GTS 40-3-2 était homozygote pour ce dernier. Des analyses d’ADN sur
six générations ont démontré que l’intégration était stable.
Des études de caractérisation plus récentes ont montré que lors de l’introduction de
l’ADN, plusieurs réaménagements sont survenus, et qu’outre l’insert fonctionnel
primaire, la lignée 40-3-2 du soja Roundup Ready® contient deux petits segments
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non fonctionnels d’ADN inséré, respectivement de 250 bp et 72 bp (Monsanto, 2000 ;
Windels et al., 2001).
Décision réglementaire
Le soja Roundup Ready® (RR) est actuellement la seule lignée de soja transgénique
homologuée pouvant être commercialisée dans l’UE. Après avoir été autorisée aux
Etats-Unis en 1994, l’importation dans l’Union Européenne a également été
accordée suite à la Décision 96/281/CE de la Commission du 3 avril 1996. Cette
décision prévoit l’importation de graines dans l’UE en vue de leur transformation en
produits non viables, englobant exclusivement l’alimentation animale, les produits
alimentaires et tout autre produit contenant des fractions de soja.
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Caractéristiques du maïs MON8102
Identification
Désignation
Maïs
MON810
(appellation
commerciale
YieldGard®)
Demandeur
Monsanto Canada Inc.
Espèce végétale
Zea mays L. (maïs)
Nouvelles
Résistance à la pyrale du maïs (Ostrinia nubilalis)
caractéristiques
Accélération de particules (biolistique)
Production de Z. mays destiné à la consommation
humaine (mouture sèche ou humide ou huile de
graines), la production de farine et l’ensilage pour
l’alimentation animale.
Contexte
La société Monsanto Canada Inc. a créé une lignée de maïs MON810 (YieldGard®)
résistant spécifiquement à la pyrale du maïs (Ostrinia nubilalis), permettant ainsi de
réduire les pertes de rendement dues aux dégâts causés par la chenille de pyrale,
sans avoir à recourir aux pesticides classiques.
La lignée MON810 a été mise au point par la technique de l’ADN recombinant et en
bombardant les cellules végétales de microprojectiles, ce qui permet d’y introduire un
gène codant la production d’une protéine insecticide naturelle (dérivée du Bacillus
thuringiensis ssp. kurstaki). Cette protéine lutte activement contre certaines espèces
de lépidoptères (ordre d’insectes comprenant les papillons et les mites), dont la
pyrale du maïs. Plus précisément, la protéine de la lignée MON810 est une forme
tronquée de la protéine insecticide δ-endotoxine CRYIA(b), qui protège les plants de
maïs contre les dégâts dus à l’alimentation de la chenille de la pyrale au niveau des
feuilles et des tiges.
2
Source : Agence Canadienne d’Inspection des Aliments, Décision 97-19.
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Résistance à la pyrale du maïs
Le Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki est une bactérie terricole à Gram positif qui
produit des endospores. Au stade de la sporulation, il produit (outre les endospores)
plusieurs cristaux de protéines insecticides, dont la protéine δ-endotoxine CRYIA(b),
qui lutte activement contre certains insectes lépidoptères comme la pyrale du maïs,
la tordeuse des bourgeons de l’épinette, la livrée, le bombyx disparate (connu
également sous le nom de spongieuse), la fausse teigne des crucifères, l’arpenteuse
du chou, la noctuelle verdoyante et la piéride du chou. Il a été démontré à maintes
reprises que cette protéine n’est pas toxique pour les humains, les autres vertébrés
et les insectes utiles (Lee et al., 1995).
La lignée MON810 a été transformée avec une copie du gène cryIA(b) sous le
contrôle du puissant promoteur constitutif 35S amélioré du virus de la mosaïque du
chou-fleur, et la séquence de tête de l’intron HSP70 du maïs (Figure 4).
La séquence codante cryIA(b) de la souche HD-1 du Bacillus thuringiensis ssp.
kurstaki a été modifiée afin d’optimiser l’expression de la protéine δ-endotoxine
CRYIA(b) des plantes. La protéine devient toxique pour les chenilles de lépidoptères
suite à une scission en plusieurs fragments, dont le noyau bioactif qui résiste à la
trypsine. On pense que l’activité insecticide résulte du fait que le fragment actif se
fixe à des récepteurs spécifiques situés au niveau des cellules épithéliales de
l’intestin moyen des insectes sensibles, ce qui provoque la formation de pores,
déséquilibre l’équilibre osmotique et finit par entraîner la lyse des cellules. Les
lépidoptères ravageurs du maïs spécifiquement sensibles à la protéine sont la pyrale
du maïs et le ver de l’épi de maïs.
La séquence d’acides animés de la toxine exprimée dans le maïs modifié s’est
révélée être identique à la séquence naturelle, et équivalente à la protéine produite
en tant que biopesticide répandu dans l’industrie des aliments biologiques.
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P-E35S
hsp70
cryIA(b)
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T-nos
Figure 4. Représentation schématique du gène chimère cryIA(b) du plasmide PVZMBK07 utilisé dans le cadre de la transformation de la lignée MON810, y compris le
promoteur 35S amélioré du virus de la mosaïque du chou-fleur, l’intron 1 hsp70 du
maïs et le gène synthétique δ-endotoxine cryIA(b) suivi du terminateur nos (modifié
par le BATS, 2003).
La lignée MON810 résulte du génotype Hi-II du maïs à la suite d’une transformation
biolistique avec un mélange d’ADN plasmidiques : le plasmide PV-ZMBK07 porteur
du gène cryIA(b) (Figure 5) et le plasmide PV-ZMGT10 porteur des gènes EPSPS
CP4 et gox. Les deux plasmides étaient également porteurs du gène nptII (pour la
sélection bactérienne) sous le contrôle d’un promoteur bactérien, et une origine de
réplication d’un plasmide pUC (ori-pUC) nécessaire pour la réplication des plasmides
dans E. coli. Les deux vecteurs ont été introduits dans des cellules végétales
cultivées par bombardement de microprojectiles. Les cellules ayant ainsi acquis une
tolérance au glyphosate ont été sélectionnées puis cultivées dans un milieu de
culture tissulaire en vue de la régénération du végétal (Armstrong et al., 1991).
Des analyses moléculaires fournies par les auteurs indiquent que seuls les éléments
du gène chimère PV-ZMBK07 ont été intégrés dans le génome de la lignée MON810
en tant qu’insert unique, comprenant le promoteur 35S amélioré du virus de la
mosaïque du chou-fleur, la séquence de tête de la hsp70 et le gène tronqué cryIA(b).
Le signal de terminaison nos 3’, présent dans le plasmide PV-ZMBK07, s’est perdu
suite à une troncature 3’ de la cassette génique et n’a donc pas été intégré dans le
génome hôte (BATS, 2003).
Les données fournies par les auteurs montrent que la ségrégation et la stabilité
correspondaient avec un site d’insertion unique du gène cryIA(b) dans le génome
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MON810. La stabilité de l’insertion a été confirmée par de nombreuses générations
de croisement.
CryIA(b)
Figure 5. Représentation schématique du plasmide PV-ZMBK07 utilisé pour la
modification de la lignée MON810 (source : base de données Agbios sur la
biosécurité essentielle)
La lignée de maïs a été croisée avec divers génotypes de maïs pendant 4
générations et a conservé ses propriétés de résistance contre la pyrale du maïs. La
lignée MON810 est issue de la troisième génération de rétrocroisement. La stabilité
de l’intégration de l’insert unique a été démontrée dans les trois générations par
analyse Southern Blot.
Les plantations de maïs (lignée MON810) ont été approuvées aux Etats-Unis en
juillet 1996 par l’Agence pour la protection de l’environnement. La commercialisation
de cette lignée de maïs dans l’Union Européenne a été autorisée suite à la Décision
98/294/CE de la Commission du 22 avril 1998.
L’Agence Canadienne d’Inspection des Aliments a émis la Décision 97-19 en vue de
son homologation en tant qu’aliment et fourrage. La lignée MON810 est également
homologuée en Argentine, en Australie, au Japon, en Afrique du Sud et en Suisse.
Cette lignée de maïs est destinée à la consommation humaine (mouture humide ou
sèche ou huile de graines), la production de farine et l’ensilage pour l’alimentation
animale.
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Caractéristiques du maïs Bt-1763
Identification
Désignation
Maïs Bt-176
Demandeur
Ciba Seeds, filiale de Ciba-Geigy et Mycogen
Corporation
Espèce végétale
Zea mays L. (maïs)
Nouvelles
Résistance à la pyrale du maïs (Ostrinia nubilalis) ;
caractéristiques
tolérance à l’herbicide glufosinate-ammonium
Bombardement
accélération de particules (biolistique)
Culture à titre de maïs-grain hybride
d’embryons
immatures
par
Contexte
Ciba Seeds et Mycogen Corporation ont mis au point conjointement une lignée de
maïs résistant à la pyrale du maïs. Cette lignée, baptisée Bt-176, a été transformée
par la technique de l’ADN recombinant et par bombardement d’embryons au moyen
de microprojectiles, afin qu’elle produise une protéine insecticide issue de Bacillus
thuringiensis ssp. kurstaki, active contre certaines espèces de lépidoptères (ordre
d’insectes comprenant les papillons et les mites), dont la pyrale du maïs. Cette
protéine, forme tronquée de la δ-endotoxine CRYIA(b), protège spécifiquement les
plants de maïs contre les dégâts dus à l’alimentation des chenilles de pyrale. De
plus, cette lignée de maïs a été co-transformée par l’ajout d’un gène conférant une
tolérance à l’herbicide glufosinate-ammonium, utilisé pour sélectionner les plantes
transformées à un stade très précoce de leur développement.
Résistance à la pyrale du maïs
Bacillus thuringiensis ssp. kurstaki est une bactérie terricole à Gram positif qui
produit des endospores. Au stade de la sporulation, il produit (outre les endospores)
plusieurs cristaux de protéines insecticides, dont la protéine δ-endotoxine CRYIA(b),
3
Source : Agence Canadienne d’Inspection des Aliments, Décision DD96-09.
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active contre certains insectes lépidoptères comme la pyrale du maïs, la tordeuse
des bourgeons de l’épinette, la livrée, le bombyx disparate (connu également sous le
nom de spongieuse), la fausse teigne des crucifères, l’arpenteuse du chou, la
noctuelle verdoyante et la piéride du chou. Il a été démontré à maintes reprises que
cette protéine n’est pas toxique pour les humains, les autres vertébrés et les insectes
utiles (Lee et al., 1995).
Un gène synthétique cryIA(b) a été élaboré à partir de la souche HD-1 de Bacillus
thuringiensis ssp. kurstaki, codant une forme tronquée de la δ-endotoxine CRYIA(b),
et modifié de manière à mieux s’exprimer chez le maïs. Ce gène synthétique
présente une homologie d’environ 65% au niveau des nucléotides avec le gène
naturel (Koziel et al., 1993). La protéine CRYIA(b) tronquée conserve la région
insecticide de la CRYIA(b) naturelle. On pense que l’activité insecticide résulte du fait
que le fragment actif se fixe à des récepteurs spécifiques situés au niveau des
cellules épithéliales de l’intestin moyen des insectes sensibles, ce qui provoque la
formation de pores, déséquilibre l’équilibre osmotique, entraîne la lyse des cellules,
interrompt l’alimentation de l’insecte et finit par le tuer.
Le maïs Bt-176 a été transformé par l’ajout de deux gènes chimères cryIA(b)
synthétiques. L’un est lié au promoteur de transcription de la phosphoénolpyruvate
carboxylase du maïs (P-PEPC), assurant son expression dans les tissus verts. Le
second est lié au promoteur d’une protéine kinase du maïs dépendante du calcium
(P-CDPK), assurant son expression dans le pollen. Ces deux chimères se terminent
par un terminateur du virus de la mosaïque du chou-fleur (T-CaMV 35S) et
comprennent également un intron 9 du gène phosphoénolpyruvate carboxylase du
maïs (cf. Figure 6 et Figure 7).
P-CDPK
cryIA(b)
T-35S
Intr. PEPC N° 9
Figure 6. Représentation schématique du gène synthétique cryIA(b) sous le contrôle
du promoteur CDPK (source : Matsuoka et al., 2000).
L’expression de la protéine CRYIA(b) dans les tissus verts vise à rendre la plante
résistante contre les chenilles de la pyrale de la première génération, qui se
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nourrissent de feuilles. Son expression dans le pollen vise les chenilles de la pyrale
de la seconde génération, qui consomment du pollen.
La protéine CRYIA(b) produite par les feuilles de maïs Bt-176 a été soumise à des
essais de digestibilité in vitro en présence de substances simulant les sucs
gastriques des mammifères. On a constaté que cette protéine est digérée de la
même manière que les protéines normalement présentes dans le régime alimentaire.
Intr. PEPC N° 9
T-35S
cryIA(b)
P-PEPC
Figure 7. Représentation schématique du gène synthétique cryIA(b) sous le contrôle
du promoteur PEPC (source : Matsuoka et al., 2000).
Tolérance à l’herbicide glufosinate-ammonium
Le gène bar, conférant une tolérance au glufosinate-ammonium, provient d’une
bactérie terricole commune : Streptomyces hygroscopicus. Ce gène code la
phosphinotricine acétyltransférase (PAT) sous le contrôle de transcription du
promoteur constitutif 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur, actif dans tous les
tissus de la plante, à l’exception du pollen. La phosphinotricine, un inhibiteur de la
glutamine synthétase, est la partie active du glufosinate-ammonium. L’activité
herbicide de la phosphinotricine se caractérise par une inhibition de la glutamine
synthétase, ce qui provoque une accumulation létale d’ammoniaque dans la plante.
La PAT catalyse l’acétylation de la phosphinotricine, éliminant ainsi l’activité
herbicide de cette dernière.
L’isomère L de la phosphinotricine (L-PPT) est couramment utilisé en tant
qu’herbicide total. Le L-PPT est la matière active de l’herbicide glufosinateammonium mis au point par Hoechst et est connu sous le nom de BASTA. Cet
isomère est un analogue structural du glutamate, le substrat de la glutamine
synthétase (cf. la comparaison entre le L-PPT et le glutamate à la Figure 8).
Module 7
O
CH3 —
H
H
P — CH2 — CH2 — C — COOH
OH
15
HOOC — CH2— CH2 — C— COOH
NH2
NH2
Figure 8. L’isomère L de la phosphinotricine (à gauche) comparé au glutamate (à
droite)
Le L-PPT était initialement isolé de Streptomyces viridochromogenes, qui synthétise
uniquement l’isomère L de la phosphinotricine. Le glufosinate-ammonium synthétique
est un mélange racémique équimolaire des isomères D et L du PPT (le D-PPT ne
présente aucune activité herbicide). On a démontré que la PAT agit spécifiquement
sur la phosphinotricine, aucune autre activité n’ayant été observée pour les autres
substrats ordinaires d’acétyltransférase, dont le pyruvate, la choline ou la sérine.
La PAT produite par E. coli a été soumise à des essais de digestibilité in vitro en
présence de substances simulant les sucs gastriques des mammifères. On a
constaté que cette protéine est digérée de la même manière que les protéines
normalement présentes dans le régime alimentaire.
Le gène de tolérance au glufosinate-ammonium a été co-introduit en tant que
marqueur de sélection afin que les embryons transformés puissent être identifiés en
milieu sélectif et que les gènes introduits puissent être suivis durant la sélection des
plantes. Selon un rapport de l’organisme Food Standards Australia New Zealand
(FSANZ, 2000), les données moléculaires ont révélé que la lignée Bt-176 contient
une copie du gène bar, sous le contrôle de transcription du promoteur 35S et du
terminateur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (respectivement P-CaMV 35S
et T-CaMV 35S) (Figure 9).
P-35S
bar T-35S
Figure 9. Représentation schématique du gène bar (source : Matsuoka et al., 2000)
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Le maïs Bt-176 résulte de la transformation biolistique de la lignée de maïs
consanguine CG00526 (Zea mays L.) avec deux plasmides. Les deux gènes
chimères synthétiques cryIA(b) ont été insérés par clonage dans un même vecteur
plasmidique (pCIB4431). Un second vecteur plasmidique (pCIB3064) renfermait le
gène bar conférant la tolérance à l’herbicide, isolé de la bactérie terricole
Streptomyces hygroscopicus. Ces deux vecteurs ont ensuite été introduits dans la
lignée de maïs CG00526 par bombardement d’embryons immatures au moyen de
microprojectiles. Des analyses moléculaires de la plante transformée ont révélé
qu’au moins deux copies de chaque construction plasmidique ont pu s’insérer dans
le génome de la lignée de maïs. Des essais ainsi que des analyses Northern Blot ont
révélé que le gène conférant la résistance à l’ampicilline (gène bla), sous le contrôle
d’un promoteur bactérien (utilisé pour la sélection des vecteurs dans les milieux
bactériens) ne s’est exprimé ni dans les feuilles, ni dans le pollen de la plante. Deux
lignées de maïs transgénique indépendantes ont été sélectionnées en vue
d’améliorer le croisement et la caractérisation : 171 et 176 (Koziel, et al., 1993).
Des études de caractérisation supplémentaires ont confirmé la présence dans le
maïs Bt-176 des gènes cryIA(b) (Koziel et al 1993), bar et bla (Privalle, 1994). Les
données communiquées par Food Standards Australia New Zealand (FSANZ, 2000)
ont également révélé qu’il peut y avoir jusqu’à six copies des gènes cryIA(b) et bla
présents dans le Bt-176, et au moins deux copies du gène bar (avec le promoteur
35S), comme démontré par l’analyse de transfert d’ADN de type Southern contre
l’ADN du maïs Bt-176 (Privalle, 1994).
Selon Food Standards Australia New Zealand (FSANZ, 2000), la production de
protéines CRYIA(b) et PAT dans les feuilles et le pollen des plantes de serre a été
jugée stable sur quatre générations de rétrocroisement successives. Des analyses
de ségrégation ont révélé une co-ségrégation mendélienne des caractéristiques de
résistance à la pyrale du maïs et de tolérance à l’herbicide. Une étude de 3240
plantes a révélé que seules cinq d’entre elles (0,15%) ont été identifiées comme
étant tolérantes au glufosinate-ammonium mais susceptibles de subir des dégâts
causés par la chenille de la pyrale du maïs.
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En août 1995, l’Agence pour la protection de l’environnement aux Etats-Unis a
approuvé à certaines conditions la commercialisation du maïs dérivé de la lignée
176, jusqu’à l’an 2000.
La commercialisation de cette lignée de maïs a été autorisée dans l’UE suite à la
décision 97/98/CE de la Commission du 23 janvier 1997. Cette lignée de maïs est
destinée à la culture, à la production de graines, à l’ensilage, à la production de
fourrage pour l’alimentation animale et à la production de graines en vue d’un
traitement industriel (Décision 97/98/CE de la Commission).
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18
Références
Agbios database on Essential Biosafety. Molecular Characterization of MON810
inserted DNA. http://www.agbios.com/main.php (Dernière connection Janvier '10)
Armstrong, C. L., Green, C. E. and Phillips, R.L. (1991). Development and availability
of germplasm with high type II culture formation response. Maize Genetics
Cooperation NewsLetter 65, 92-93.
BATS (2003). Genetically Modified (GM) Crops: molecular and regulatory details.
http://www.bats.ch/gmo-watch/index.php (Dernière connection Janvier 2010)
Canadian Food Inspection Agency, Plant Products Directorate, Plant Biosafety
Office. Decision Document DD96-09: Determination of Environmental Safety of
Event 176 Bt Corn (Zea mays L.) Developed by Ciba Seeds and Mycogen
Corporation.
http://www.inspection.gc.ca/english/plaveg/bio/dd/dd9609e.shtml
(Dernière connection Janvier 2010)
Office. Decision Document DD95-05: Determination of Environmental Safety of
Monsanto Canada Inc.'s Glyphosate Tolerant Soybean (Glycine max L.) Line GTS
40-3-2. http://www.inspection.gc.ca/english/plaveg/bio/dd/dd9505e.shtml (Dernière
connection Janvier 2010)
Office. Decision Document 97-19: Determination of the Safety of Monsanto
Canada Inc.'s YieldgardTM Insect Resistant Corn (Zea mays L.) Line MON810.
(http://www.inspection.gc.ca/english/plaveg/bio/dd/dd9719e.shtml)
(Dernière
connection Janvier 2010)
Décision 97/98/CE de la Commission du 23 janvier 1997 concernant la mise sur le
marché de maïs génétiquement modifié (Zea mays L.) ayant subi la modification
combinée lui assurant les propriétés insecticides conférées par le gène Btendotoxine et une meilleure tolérance à l’herbicide glufosinate-ammonium, en
application de la directive 90/220/CEE du Conseil (JO L 31, 1.2.1997, p. 69).
Module 7
19
Décision 96/281/CE de la Commission du 3 avril 1996 concernant la mise sur le
marché de fèves de soja (Glycine max L.) génétiquement modifiées pour
améliorer la résistance à l’herbicide glyphosate, présentée conformément à la
directive 90/220/CEE du Conseil (JO L 107, 30.4.1996, p. 10).
Décision 98/294/CE de la Commission du 22 avril 1998 concernant la mise sur le
marché de semences de maïs génétiquement modifié (Zea mays L. lignée
MON810) en application de la directive 90/220/CEE du Conseil (JO L 131,
5.5.1998, p. 33).
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Module 7

Module 7 - EU

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