0843 IVD - Medcorp Produtos Hospitalares Ltda

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Bibliography/Literatur/Bibliographie/Bibliografia/Bibliografía/
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in a two-site immunoassay for creatine kinase MB by using F(ab’)2
conjugate and polyclonal mouse IgG. Clin Chem 1992; 38:1737-42.
Symbols Key
Symbolschlüssel
Explication des
Symboles
Interpretazione simboli
Clave de los Símbolos
1st fold
Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par/ Prodotto
da / Fabricado por / Fabricado por
EC REP
IVD
LOT
Authorized Representative / Bevollmächtigter/ Mandataire
/ Rappresentanza autorizzata/ Representante Autorizado
/ Representante Autorizado
In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum
/ Dispositif Médical Diagnostic In Vitro/ Dispositivo Medico
per Diagnostica in Vitro / Producto sanitario para el
Diagnóstico In Vitro / Dispositivo Médico para Diagnóstico
In Vitro
Batch Code / Charge / Numéro de Lot / Lotto/
Código de Lote / Código do Lote
“Use By” date in year-month-day format / Verfalldatum
im Jahr-Monat-Tag Format / Utiliser jusqu’à la date:
AAAA-MM-JJ / Scadenza: AAAA-MM-GG / Caducidad
año-mes-día / A data em “Utilizar antes de” encontrase no formato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)
EXP
YYYY-MM-DD
8° C
2° C
Temperature Limitation / Lagertemperatur / Limite de
Température / Conservazione / Limitación de Temperatura
/ Limitação da Temperatura
CE Mark / CE Zeichen / Marquage CE/ Marchio CE/
Marca CE / Marca CE
REF
Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence/ Codice
Catalogo / Número de Catálogo / Número de Catálogo
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beachten/ Consulter la Notice d’Utilisation / Istruzioni per
l’uso/ Consultar Instrucciones para el Uso / Consulte as
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12" @ 100%
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0800-170417
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Brooklin - São Paulo - SP - CEP 04575-060
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Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714, U.S.A.
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Dade Behring Limited
Regus House, Atterbury
Milton Keynes MK10 9RG
United Kingdom
0843
6.0" @ 100 %
Dimension® TPSA Insert Sheet
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2003-06 D PN 755451.001
Importado e distribuído por
DADE BEHRING LTDA .
®
REF RF451
Dimension® clinical chemistry system
Heterogeneous Immunoassay Module
Flex® reagent cartridge
TPSA
Total Prostate Specific Antigen Flex® reagent
cartridge
Reagents
CAUTION: United States Federal law restricts this device to sale
and distribution by or on the order of a physician, or to a clinical
laboratory; and use is restricted to, by or on the order of a
physician.
Warning: The concentration of TPSA in a given specimen
determined with assays from different manufacturers can vary due
to differences in assay methods and reagent specificity. The
results reported by the laboratory to the physician must include
the identity of the PSA assay used. Values obtained with different
assay methods cannot be used interchangeably. If, in the course
of monitoring a patient, the assay method used for determining
PSA levels serially is changed, additional sequential testing should
be carried out. Prior to changing assays, the laboratory MUST
confirm baseline values for patients being serially monitored.
1
Liquid PSA Ab-ß-galactosidased 0.09 mg/mL Mouse, monoclonal
2
Liquid Chrome diluent
4.8 mg/mL
3
Tablete Antibody-CrO2d
1.8 mg/mL Mouse, monoclonal
4,5,6 Tabletse CPRG
10.3 mg/mL
7
Liquid CPRG diluent
42 mg/mL
b. Wells are numbered consecutively from the wide end of the cartridge.
c. Nominal value in hydrated cartridge.
d. Antibody titer and conjugate activity may vary from lot to lot.
e. Tablets contain excipients, buffers, and stabilizers.
Intended Use: The TPSA method for the Dimension® clinical
chemistry system with the heterogeneous immunoassay module
is an in vitro diagnostic test intended to quantitatively measure
total prostate specific antigen (PSA) in human serum and plasma:
1. as an aid in the detection of prostate cancer when used in
conjunction with digital rectal exam (DRE) in men 50 years or
older. Prostate biopsy is required for diagnosis of cancer
2. as an aid in the management (monitoring) of prostate cancer
patients.
Summary: Prostate specific antigen (PSA) is a serine protease of
approximately 30,000 Daltons produced by the epithelial cells of
the prostate gland.1.2 The level of PSA in serum and other tissues
is normally very low. In malignant prostate disease (prostatic
adenocarcinoma) and in non-malignant disorders such as benign
prostate hypertrophy (BPH) and prostatitis, the serum level of PSA
may become elevated.3
In serum, PSA exists primarily as three forms: complexed with
either α 1-antichymotrypsin (ACT) or α 2-macroglobulin and
free.4,5 The PSA protein associated with α 2-macroglobulin is
encapsulated and unavailable for measurement by current
immunoassay systems. The Dimension® TPSA assay measures
both the free and the ACT bound components of serum PSA.
The specificity of PSA to prostate tissue makes it a significant
marker in the early detection and management of prostate
diseases.
Prostate cancer is the most common type of cancer found in men
in the United States and the second leading cause of male cancer
mortality, accounting for more than 30,000 deaths in 1999.6 Prior
to the use of PSA for early detection of prostate cancer, the
traditional method of digital rectal examination (DRE) detected
considerably fewer tumors.3,6 The most sensitive method for
early detection of prostate cancer uses both DRE and PSA. The
American Cancer Society and the American Urological Association
(AUA) recommend that early detection of prostate cancer should
be offered to asymptomatic men 50 years of age or older with an
estimated life expectancy of more than 10 years. An abnormal
DRE and/or an elevated PSA may suggest the presence of prostate
cancer, however a prostate biopsy is required for final diagnosis. 6
PSA testing is also accepted as an adjunctive test in the
management of prostate cancer. 7,8 Serum levels of PSA are most
useful when sequential values are obtained and monitored over
time. After complete removal of the prostate gland (radical
prostatectomy), PSA levels should decline to a very low or
nondetectable level. A rise of the serum PSA level in
prostatectomy patients indicates residual prostate tissue,
recurrence or metastasis of the disease.9 Serum PSA levels
during radiation treatment should decline and remain at baseline
while the patient is in remission.10
Principles of Procedure: The TPSA method is a one step enzyme
immunoassay based on the “sandwich” principle. Sample is
incubated with chromium dioxide particles and ß-galactosidase
conjugate reagent; each coated with monoclonal antibodies
recognizing different binding sites on PSA. A chrome particle/
PSAa/conjugate sandwich forms during the incubation period. The
incubation conditions are optimized to produce equivalent
immunoreactions with both free PSA and PSA-ACT. Unbound
conjugate is removed by magnetic separation and washing. The
sandwich-bound ß-galactosidase is combined with the
chromogenic substrate chlorophenol red-ß-d-galactopyranoside
(CPRG). Hydrolysis of CPRG releases a chromophore,
chlorophenol red (CPR). The color change measured at 577 nm
due to formation of CPR is directly proportional to the
concentration of PSA present in the patient sample.
PSAa
+
CrO2-Ab
————————>
+
F(ab')2-β-galactosidase
CrO2-Ab-PSA-F(ab')2-β-gal
+
CrO2-Ab
+
+
wash
CrO2-Ab
———————>
+
+
CrO2-Ab
(transferred to cuvette)
CPRG
(non-absorbing ——————————> CPR (absorbs at 577 nm)
at 577 nm)
a. The PSA term used here includes the free PSA and PSA-ACT complexes.
Ingredient
Concentrationc
Source
Precautions: Used cuvettes contain human body fluids; handle
with appropriate care to avoid skin contact or ingestion.
For in vitro diagnostic use
Reagent Preparation: Mixing and diluting are automatically
performed by the Dimension® system.
Storage Instructions: Store at 2-8°C.
Expiration: Refer to carton for expiration date of individual
unopened reagent cartridges. Sealed or unhydrated cartridge
wells on the instrument are stable for 30 days. Once wells 1, 2, 3
and 7 have been entered by the instrument, they are stable for
15 days. Once wells 4, 5 and 6 have been entered by the
instrument, they are stable for 5 days.
Specimen collection:
Serum and lithium heparin plasma can be collected by normal
procedures.11
Serum and plasma specimens should be separated from cells
within 4 hours after venipuncture. Samples should be kept at 4°C
and analyzed within 8 hours. For longer storage, samples may be
frozen at -20°C or colder. Samples are stable for at least four
months if stored at –80 °C. 12
Specimens should be free of particulate matter. To prevent the
appearance of fibrin in serum samples, complete clot formation
should take place before centrifugation. Clotting time may be
increased due to thrombolytic or anticoagulant therapy.
An erroneously elevated PSA level can be observed if the serum
specimen from a patient is collected following digital rectal
examination (DRE), needle biopsy or transurethral resection.13
Each laboratory should determine the acceptability of its own
blood collection tubes and serum separation products. Variations
in these products may exist between manufacturers and, at times,
from lot to lot.
Known Interfering Substances
The following substances do not interfere with the TPSA method
when present in serum at the concentrations indicated. Systemic
inaccuracies (bias) due to these substances are less than 10 % at
a PSA level of 4.5 ng/mL.
Compound
Acetaminophen
Albumin
Amikacin
Aminoglutethimide
Ampicillin
Ascorbic acid
Bilirubin
Caffeine
Carbamazepine
Chloramphenicol
Chlordiazepoxide
Chlorpromazine
Cimetidine
Cholesterol
Creatinine
Cyclophosphamide
Dextran 75
Diazepam
Diethylstilbestrol
Digoxin
Doxorubicin-HCl
Erythromycin
Estramustine phosphate
Ethanol
Ethosuximide
Finasteride
Flutamide
Furosemide
Gentamicin
Goserelin acetate
Hemoglobin
Heparin
Human plasma kallikrein
Ibuprofen
Immunoglobulin G
Ketoconazole
Leuprolide acetate
Lidocaine
Lipemia
Lithium
Megestrol acetate
Methotrexate
Nicotine
Penicillin G
Pentobarbital
Phenobarbital
Phenytoin
Primidone
Propoxyphene
Prostatic Acid Phosphatase
Protein (low)
Protein (high)
Rheumatoid factor
Salicylic acid
Theophylline
Urea
Uric acid
Valproic acid
Concentration
20 mg/dL [1322 µmol/L]f
6.8 g/dL [68 g/L]
15 mg/dL [256 µmol/L]
6 ng/mL [26 nmol/L]
3 mg/dL [170.3 µmol/L]
500 mg/dL [12.9 mmol/L]
2500 mg/dL [25 g/L]
0.02 mg/dL [700 nmol/L]
5 ng/mL [6.4 nmol/L]
350 mg/dL [76 mmol/L]
0.2 mg/dL [5.4 µmol/L]
0.01 mg/dL [79 nmol/L]
1000 mg/dL [0.62 mmol/L] (monomer)
8000 U/L [8000 U/L]
100 µg/mL [1 µmol/L]
6 g/dL [60 g/L]
3000 mg/dL [33.9 mmol/L] (triglyceride)
3.5 mg/dL [5.04 mmol/L]
25 U/mL [25,000 U/L]
0.4 mg/dL [12 µmol/L]
1000 ng/mL [1000 µg/L]
4 g/dL [40 g/L]
12 g/dL [120 g/L]
571 IU/mL [571 IU/mL]
50 mg/dL [3.62 mmol/L]
500 mg/dL [83.3 mmol/L]
20 mg/dL [1.2 mmol/L]
50 mg/dL [3.467 mmol/L]
f. Système International d’Unités [SI units] are in brackets.
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
1st fold
2nd fold
12" @ 100%
Wellsb Form
Distribution of results:
Procedure
Materials Needed
TPSA Flex® reagent cartridge, Cat. No. RF451
Reaction Vessels, Cat. No. RXV1A
Chemistry Wash, Cat. No. RD701
Sample Probe Cleaner, Cat. No RD703
Test Steps
Sampling, reagent delivery, mixing, separation, processing and
printing of results are automatically performed by the Dimension®
system with the heterogeneous immunoassay module. For details of
this processing, refer to your Dimension® system manual.
Test Conditions
Reaction Vessel
40 µL
30 µL
50 µL
37.0° C
9 minutes
60 µL
150 µL
37.0 ± 0.1° C
5 minutes
577 and 700 nm
Bichromatic Rate
ng/mL[µg/L]
0.05 - 100.0 ng/mL [µg/L]
T/F PSA Calibrator Cat. No. RC452g
0.0, 4.0, 20.0, 50.0, 108.0 ng/mL[µg/L]
5, 2, 3, 2, 3 (levels in order, low to high)
Each new reagent cartridge lot.
Every 90 days for any lot.
• Assigned Coefficients:
C0 -1000.0
C1
3000.0
C2
-2.0
C3
200.0
C4
0.5
g. The T/F PSA calibrator has 6 levels. To calibrate TPSA, use levels: 1, 2, 4,
5, 6. Do not use vial labeled 3.
Quality Control
At least once each day of use, analyze two levels of a quality control
material with known PSA concentrations. The results obtained should
fall within acceptable limits defined by the laboratory. For further
details refer to your Dimension® system manual.
A system malfunction may exist if the following five-test precision is
observed:
PSA Concentration
S.D.
4.0 ng/mL [µg/L]
> 0.22 ng/mL [µg/L]
50.0 ng/mL [µg/L]
> 2.63 ng/mL [µg/L]
*Results: The instrument automatically calculates and prints the
concentration of total PSA in ng/mL[µg/L] using the calculation
scheme illustrated in your Dimension® system manual.
For purposes of diagnosis and treatment, results of this test should
always be interpreted in conjunction with the patient’s medical
history, clinical presentation and other findings.
Limitations of Procedure
Results:
Total
242
962
7.73
1204
778
160
938
184
82
266
Method
PPV%
DRE+ only
PSA>4.0 only
PSA >4.0 or DRE+
PSA>4.0 and DRE+
PSA>4.0 and DRE-
48.0
39.0
37.8
60.6
34.6
95% Confidence Interval
41.7 – 54.0
35.9 – 42.1
34.8 – 40.7
50.9 – 80.0
29.2 – 40.0
Distribution of PSA Values, Percent (%)
Number
of
0-4
4.1-10 10.1-30 30.1- 60 >60
Subjects (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL)
Healthy Subjects
Males 50-59 yrs
160
Males 60-69 yrs
130
Males 70+ yrs
103
Prostate Diseases
BPH
373
Prostatitis
89
Prostatic Intraepithelial
Neoplasm (PIN)
264
Suspicious
of Cancer
63
Prostate Cancer
424
PSA levels may be lower in patients who receive hormonal therapy
and may not adequately reflect the presence of residual or recurrent
disease.9
One step sandwich immunometric assays are susceptible to a highdose “hook effect”, where an excess of antigen prevents simultaneous
binding of the capture and detection antibodies to a single analyte
molecule.14 The TPSA method shows no hook effect up to
15000 ng/mL[µg/L].
Patient samples may contain heterophilic antibodies that could react
in immunoassays to give falsely elevated or depressed results. This
assay has been designed to minimize interference from heterophilic
antibodies.15
The instrument reporting system contains error messages to warn the
operator of specific malfunctions. Any report slip containing such
error messages should be held for follow-up. Refer to your
Dimension® system manual.
Expected values in detection of prostate cancer
The following table summarizes the results of a retrospective study
using samples from 1204 men aged 50 years and older who were
referred to a urologist for determination of the presence of prostate
cancer. These samples were collected from five clinical sites across
the United States. All of these men had a biopsy performed. Samples
were tested for PSA using the Dimension® TPSA method. The PSA
results and corresponding DRE and biopsy results are shown below.
The study demonstrated that TPSA testing when used in conjunction
with DRE, was more effective in detecting prostate cancer than DRE
alone.
8.0
9.0
19
0.0
2.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
30.9
28.6
56.8
58.7
11.8
12.7
0.5
0.0
0.0
0.0
25.0
59.0
16.0
0.0
0.0
30.1
11.8
52.9
54.0
17.0
27.6
0.0
3.3
0.0
3.3
Each laboratory should establish its own expected values for PSA as
performed on the Dimension® system.
When changing PSA assays in the course of monitoring a patient,
additional sequential testing should be carried out to confirm baseline
values.
Specific Performance Characteristics h
Reproducibility i,j
Material
> 100 ng/mL [µg/L]
Make appropriate dilution with Purified Water to
obtain results within assay range. Enter dilution
factor. Reassay. Resulting readout is corrected by
dilution.
Refer to your Dimension® system manual.
Recommended Auto Dilute volume is 2 µL.
< 0.05 ng/mL [µg/L] should be reported as "less than
0.05 ng/mL [µg/L]".
92.0
89.0
81
Mean
ng/mL [µg/L]
Within-Run
SD (%CV)
1st fold
Total
SD (%CV)
Plasma pool
0.79
0.02 (2.0)
0.03 (4.6)
Serum pool 1
3.64
0.08 (2.2)
0.14 (3.8)
Serum pool 2
76.42
1.04 (1.4)
2.30 (3.0)
Liquichek™ 1
0.45
0.02 (5.0)
0.03 (5.8)
Liquichek™ 2
2.40
0.04 (1.5)
0.07 (3.1)
Liquichek™ 3
17.77
0.24 (1.3)
0.50 (2.8)
Liquichek™ Immunoassay Plus Control is a trademark of Bio-Rad Laboratories,
Irvine, CA 92618.
h. All specific performance characteristics tests were run after normal
recommended equipment quality control checks were performed (refer to
your Dimension® system with heterogeneous immunoassay module
manual).
i. Reproducibility testing was done in accordance with the NCCLS Approved
Guideline for Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry
Devices (EP5-A, Feb.1999).
j. Specimens at each level were analyzed in duplicate, twice a day, for 20 days.
The within-run and total standard deviations were calculated by analysis of
variance method.
Analytical Sensitivity
The sensitivity of the TPSA method is 0.05 ng/mL [µg/L] and
represents the lowest concentration of PSA that can be distinguished
from zero. This sensitivity is defined as the concentration at two
standard deviations above the level 1(0 ng/mL [µg/L] ) Calibrator
(n= 20).
Analytical Specificity
See known interfering substances section for details.
The TPSA assay recognizes free PSA and PSA-ACT on an equimolar
basis.
Recovery
Multiple dilutions of serum and plasma samples with PSA values of
1.54 to 22.40 ng/mL[µg/L] were made with water.
Sample TPSA concentrations were measured and the percent
recovery calculated. Recovery ranged from 96.0 to 103 % with an
average recovery of 101 %.
Symbols Key: See adjacent panel.
Bibliography: See adjacent panel.
Dimension® and Flex® are registered trademarks of Dade Behring
Inc., in the U. S. Patent and Trademark Office, in Germany and many
other countries.
* An asterisk in the margin dentoes a revised section.
Dade Behring Inc.
EC REP
United Kingdom
0843
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2nd fold
12" @ 100%
• Assay Range
• Reference Material
• Suggested Calibration Levels
• Calibration Scheme, Replicates
• Calibration Frequency:
Autodilution:
116
299
10.07
415
269
97
366
30
19
49
Serum PSA concentrations, regardless of the value, should not be
interpreted as definitive evidence for the presence or absence of
prostate cancer. Prostate biopsy is required for the diagnosis of
cancer.
Expected values in management of prostate cancer patients – The
distribution of TPSA values determined in 393 healthy and 1213
subjects referred to an urologist for determination of the presence of
prostate cancer is shown in the table below:
*Calibration
The general calibration procedure is described in your Dimension®
system manual. The following information should be considered
when calibrating the TPSA method:
Results:
Manual dilution:
126
663
6.68
789
509
63
572
154
63
217
The Predictive Power (PPV) was estimated as the probability of
having a positive biopsy given a positive result for DRE, PSA, and
PSA with DRE. The results are as follows:
Reaction Cuvette
• Transfer Volume
• CPRG Reagent Volume
• Temperature
• Reaction period
• Wavelength
• Type of measurement
• Units
DRE +
DRE Mean PSA (ng/mL)
Total
PSA > 4.0, DRE PSA > 4.0, DRE +
Total
PSA ≤ 4.0, DRE PSA ≤ 4.0, DRE +
Total
2003-06 D PN 755451.001-US
• Sample size
• Antibody- CrO2
• Antibody-ß-galactosidase
• Temperature
• Incubation period
Biopsy Result
Benign
Malignant
®
TPSA
Gesamt-prostatapezifisches Antigen Flex® Reagenzkassette
ACHTUNG: Die US Bundesgestzgebung besagt, daß dieses Test
in den USA nur durch oder auf Anweisung eines Arztes
vertrieben oder an ein klinisches Labor ausgeliefert werden darf.
Der Gebrauch darf nur durch oder auf Anweisung eines Arztes
erfolgen.
Warnung: Die mit Hilfe von Tests verschiedener Anbieter in einer
Probe ermittelten TPSA-Konzentrationen können auf Grund von
Unterschieden in Testmethode und Reagenzspezifität variieren.
Das Labor muss den Typ des verwendeten PSA-Tests
zusammen mit den Ergebnissen an den Arzt übermitteln. Mit
Hilfe verschiedener Methoden ermittelte Testergebnisse können
nicht einfach im Austausch verwendet werden. Wenn im Verlauf
einer Patientenbeobachtung die zur seriellen Bestimmung der
PSA-Werte verwendete Methode gewechselt wird, sollten
zusätzliche, sequenzielle Tests durchgeführt werden. Vor dem
Wechsel der Testart MUSS das Labor die Basiswerte für seriell
beobachtete Patienten bestätigen.
Anwendungsbereich: Die TPSA-Methode für das Klinischchemische System Dimension® mit heterogenem ImmunoassayModul ist ein in vitro diagnostischer Test zur quantitativen
Bestimmung von Gesamt-prostata-spezifischem Antigen (PSA) in
Human-Serum und -Plasma:
1. als Hilfsmittel bei der Erkennung von Prostata-Krebs bei
Verwendung zusammen mit der digitalen rektalen Examination
(DRE) bei Männern oberhalb des 50. Lebensjahres. Eine ProstataBiopsie ist zur gesicherten Krebsdiagnose notwendig.
2. als ein Hilfsmittel bei der Überwachung von Patienten mit einer
Prostata-Krebserkrankung.
Diagnostische Bedeutung: Prostata-spezifisches Antigen (PSA) ist
eine Serin-Protease mit ca. 30,000 Dalton Molekulargewicht und
wird von den Epithelialzellen der Prostata produziert.1, 2 Die
Konzentrationen von PSA im Serum und anderen Geweben ist
normalerweise sehr niedrig. Bei malignen Prostataerkrankungen
(Prostatisches Adenokarzinom) und bei nicht-malignen Störungen
wie benigner Prostatahyperplasie (BPH) und Prostatitis kann der
PSA-Spiegel im Serum erhöht sein.3
Im Serum kommt PSA hauptsächlich in drei Formen vor: als
Komplex mit α 1-Antichymotrypsin (ACT), als Komplex mit α 2Makroglobulin und frei.4,5 Das an α 2-Makroglobulin komplexierte
PSA-Protein ist eingekapselt und Messungen mit aktuellen
Immunoassay-Systemen nicht zugänglich. Der Dimension® TPSATest misst sowohl den freien als auch den an ACT gebundenen
Anteil des Serum-PSA.
Die Spezifität von PSA auf Prostatagewebe macht es zu einem
signifikanten Marker bei der Früherkennung und Behandlung von
Prostataerkrankungen.
Prostatakrebs ist die verbreitetste Krebsform bei Männern in den
Vereinigten Staaten und steht bei den Ursachen für Krebsmortalität
bei Männern auf Platz zwei mit mehr als 30,000 Todesfällen im
Jahre 1999.6 Vor der Verwendung von PSA in der Früherkennung
von Prostatakrebs wurden durch die Methode der digitalen rektalen
Examination (DRE) deutlich weniger Tumore erkannt.3, 6 Die
sensitivste Methode zur Früherkennung von Prostatakrebs
verwendet sowohl PSA, als auch DRE. Eine anomale DRE oder
erhöhte PSA können das Vorhandensein von Prostatakrebs
anzeigen; zur endgültigen Diagnose ist jedoch eine Prostatabiopsie
notwendig.6 Der PSA Test ist auch anerkannt als ein Testverfahren
bei der Überwachung von Patienten bei denen zuvor eine ProstataKrebserkrankung diagnostiziert worden ist.7,8 Die Ermittlung der
Serumkonzentrationen von PSA sind bei sequenzieller Messung
und langfristiger Beobachtung sehr hilfreich. Nach vollständiger
Entfernung der Prostata (radikale Prostatektomie) sollten die PSASpiegel auf sehr niedrige oder nicht-detektierbare Werte sinken. Ein
Anstieg der Konzentration von Serum-PSA nach einer
Prostatektomie zeigt verbliebenes Prostatagewebe, Wiederauftreten
der Erkrankung oder Metastasierungen an.9 Die Konzentration an
Serum-PSA sollte während einer Bestrahlungstherapie abfallen und
in der Remissionsphase auf einem unteren Niveau verbleiben.10
Grundlagen des Verfahrens: Diese TPSA Nachweismethode ist ein
Einschritt-Enzym-Immunoassay, der auf dem “Sandwich” Prinzip
basiert. Die Probe wird mit Chromdioxyd Partikeln, die mit spezifischen
monoklonalen Antikörpern gegen PSA beschichtet sind, inkubiert. Ein
Konjugatreagenz (ß-Galactosidase markierter monoklonaler Antikörper,
der ein anderes zweites Bindungsepitop auf dem PSA Molekül erkennt)
wird gleichzeitig inkubiert, um ein Sandwich aus Magnetpartikeln, PSAa
und Konjugat zu formen. Ungebundenes Antikörperkonjugat und
ungebundener Analyt werden durch magnetische Abtrennung und
Waschung entfernt. Dem Sandwich gebundendenen ßGalactosidasekomplex wird das chromogene Substrat Chlorphenol-RotD-Galactopyranosid (CPRG) zugefügt. Durch Hydrolyse des CPRG wird
ein Chromophor (CPR) erzielt. Die Farbänderung wird bei 577nm
gemessen. Die Farbänderung ist abhängig von der Menge des
freigesetzten CPR und direkt proportional zur Konzentration des PSA
aus der Patientenprobe.
PSAa
+
CrO2-Ak
——————————>
+
F(ab')2-β-Galactosidase
CrO2-Ak-PSA-F(ab')2-β-gal
+
CrO2-Ak
+
+
waschen
CrO2-Ak
——————————>
+
+
CrO2-Ak
(in die Küvette überführt)
CPRG
(keine Absorption —————————> CPR (Absorption bei 577 nm)
bei 577 nm)
a. Unter PSA wird in diesem Dokument die Summe aus freiem PSA und
den PSA-ACT-Komplexen verstanden.
Reagenzien:
Zellenb Form
Konzentrationc
Inhalt
PSA Ak-β-Galactosidased
1
Flüssig
2
3
Flüssig Chrom-Diluent
Tablettee Antikörper-CrO2d
0.09 mg/ml
4.8 mg/ml
1.8 mg/ml
Quelle
Maus,
monoklonal
Maus,
monoklonal
Tablettene CPRG
4,5,6
10.3 mg/ml
7
Flüssig CPRG-Diluent
42 mg/ml
b. Die Zellen sind durchgehend nummeriert angefangen vom breiten Ende
der Reagenzkassetten.
c. Nominaler Wert in der hydrierten Vorratskassette.
d. Antikörper titer und Konjugataktivität koennen sich von Charge zu Charge
ändern.
e. Tabletten enthalten Füllmittel, Puffer und Stabilisatoren.
Vorsicht: Gebrauchte Küvetten enthalten menschliche
Körperflüssigkeiten; mit der nötigen Sorgfalt handhaben.
Hautkontakt und Einnehmen vermeiden.
In vitro Diagnosticum
Reagenzbereitung: Mischung und Verdünnung werden vom
System automatisch durchgeführt.
Lagerung: Bei 2 – 8° C lagern.
Verfallzeit: Siehe Verfalldatum für die einzelnen, ungeöffneten
Reagenz-Kassetten auf dem Karton. Reagenzien in ungeöffneten
oder nicht aufgelösten Kassetten-Zellen sind im Gerät 30 Tage
haltbar. Wenn die Zellen 1,2, 3 und 7 einmal durch das Gerät
geöffnet wurden, sind die Reagenzien noch 15 Tage haltbar. Wenn
die Zellen 4, 5 und 6 einmal durch das Gerät geöffnet wurde, sind
sie noch 5 Tage haltbar.
Probengewinnung: Serum und Lithiumheparin-Plasma können
mit normalen Verfahren entnommen werden.11
Serum- oder Plasmaproben sollten innerhalb von 4 Stunden nach
Entnahme aus der Vene von den Zellen getrennt werden. Proben
sollten bei 4 °C gelagert und innerhalb von 8 Stunden getestet
werden. Für eine längere Lagerung können die Proben bei -20 °C
oder darunter tiefgefroren werden. Proben sind mindestens vier
Monate stabil, wenn Sie bei -80 °C gelagert werden. 12
Proben sollten partikelfrei sein. Um die Bildung von Fibrin in
Serumproben zu verhindern, sollte die Gerinnung beendet sein,
bevor die Probe zentrifugiert wird. Die Blutgerinnungzeit kann
durch thrombolytische oder antikoagulierende Therapien
verlängert sein.
Falsch hohe PSA Werte können in Proben nach einer erfolgten
digitalen rektalen Untersuchung (DRE), einer Nadelbiopsie oder
einer transurethral Resektion beobachtet werden. 13
Jedes Labor sollte die Verträglichkeit der verwendeten
Blutentnahmesysteme mit der Test-Methode prüfen. Diese können
in Abhängigkeit vom Hersteller und, in Ausnahmefällen, auch von
der Herstellungscharge unterschiedlich ausfallen.
Bekannte Störsubstanzen
Die folgenden Substanzen haben in den angegebenen
Konzentrationen keinen signifikanten (weniger als 10%) Einfluß
auf die TPSA Methode wenn sie zu einem Serumpool mit einer
Konzentration von 4.5 ng/ml PSA gegeben werden:
Acetaminophen
Albumin
Amikacin
Aminoglutethimid
Ampicillin
Ascorbinsäure
Bilirubin
Coffein
Carbamazepin
Chloramphenicol
Chlordiazepoxid
Chlorpromazin
Cholesterin
Cimetidin
Creatinin
Cyclophosphamid
Dextran 75
Diazepam
Diethylstilbestrol
Digoxin
Doxorubicin-HCl
Erythromycin
Estramustin Phosphat
Ethanol
Ethosuximid
Finasterid
Flutamid
Furosemid
Gentamicin
Goserelin Acetat
Hämoglobin
Harnstoff
Harnsäure
Humanes Plasma Kallikrein
Ibuprofen
Immunoglobulin G
Ketoconazol
Leuprolid Acetat
Lidocain
Lipemia
Lithium
Megestrol Acetat
Methotrexate
Natriumheparin
Nicotin
Penicillin G
Pentobarbital
Phenobarbital
Phenytoin
Primidon
Propoxyphen
Proteingehalt (niedrig)
Proteingehalt (hoch)
6.0" @ 100 %
20 mg/dl
6.8 g/dl
15 mg/dl
6 ng/ml
5 mg/dl
3 mg/dl
60 mg/dl
10 mg/dl
12 mg/dl
25 mg/dl
2 mg/dl
5 mg/dl
500 mg/dl
10 mg/dl
30 mg/dl
25 mg/dl
2500 mg/dl
2 mg/dl
0.02 mg/dl
5 ng/ml
7 mg/dl
20 mg/dl
20 mg/dl
350 mg/dl
30 mg/dl
0.2 mg/dl
1 mg/dl
2 mg/dl
12 mg/dl
0.01 mg/dl
1000 mg/dl
500 mg/dl
20 mg/dl
100 µg/ml
40 mg/dl
6 g/dl
7 mg/dl
10 mg/dl
6 mg/dl
3000 mg/dl
3.5 mg/dl
2 mg/dl
300 mg/dl
8000 U/l
2 mg/dl
25 U/ml
10 mg/dl
15 mg/dl
10 mg/dl
10 mg/dl
0.4 mg/dl
4 g/dl
12 g/dl
[1322 µmol/l]f
[68 g/l]
[256 µmol/l]
[26 nmol/l]
[143 µmol/l]
[170.3 µmol/l]
[1026 µmol/l]
[515 µmol/l]
[508 µmol/l]
[774 µmol/l]
[67 µmol/l]
[157 µmol/l]
[12.9 mmol/l]
[397 µmol/l]
[2652 µmol/l]
[896 µmol/l]
[25 g/l]
[70 µmol/l]
[700 nmol/l]
[6.4 nmol/l]
[121 µmol/l]
[272 µmol/l]
[343 µmol/l]
[76 mmol/l]
[2125 µmol/l]
[5.4 µmol/l]
[36 µmol/l]
[60 µmol/l]
[251 µmol/l]
[79 nmol/l]
[0.62 mmol/l] (monomer)
[83.3 mmol/l]
[1.2 mmol/l]
[1 µmol/l]
[1939 µmol/l]
[60 g/l]
[132 µmol/l]
[86 µmol/l]
[256 µmol/l]
[33.9 mmol/l] (triglyceride)
[5.04 mmol/l]
[52 µmol/l]
[7 mmol/l]
[8000 U/l]
[123 µmol/l]
[25000 U/l]
[442 µmol/l]
[646 µmol/l]
[396 µmol/l]
[458 µmol/l]
[12 µmol/l]
[40 g/l]
[120 g/l]
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
1st fold
2nd fold
12" @ 100%
German
REF RF451
Rheuma Factor
571 IU/ml [571 IU/ml]
Salicylsäure
50 mg/dl [3.6 mmol/l]
Saure Prostata Phosphatase 1000 ng/ml [1000 µg/l]
Theophyllin
25 mg/dl [1388 µmol/l]
Valproinsäure
50 mg/dl [3.467 mmol/l]
f. Système International d’Unités (S.I. Einheiten) sind in Klammern.
getestet. Die PSA- und die korrespondierenden DRE- und BiopsieErgebnisse sind unten aufgeführt. Die Studie zeigte, dass PSAUntersuchungen zusammen mit DRE-Untersuchungen Prostatakrebs
effektiver erkennen können als DRE allein.
Verteilung der Ergebnisse:
Biopsie-Ergebnisse
gutartig
bösartig
Testverfahren
Testmaterial
TPSA Flex® Reagenz-Kassette, Kat. Nr. RF451
Reaktionsgefäße, Kat. Nr. RXV1A
Waschlösung, Kat. Nr. RD701
Probennehmer-Reinigungslösung, Kat. Nr. RD703
Testschritte
Probenbearbeitung, Reagenzzugabe, Misch- und Trennschritte sowie
der Ausdruck der Ergebnisse werden automatisch vom System
Dimension® mit dem heterogenen Immunoassaymodul durchgeführt.
Weitere Informationen finden Sie in Ihrem Dimension® Handbuch.
Testbedingungen
Reaktionsgefäß
• Probenmenge:
40 µl
• Antikörper-CrO2:
30 µl
• Ab-β-Galactosidase:
50 µl
• Temperatur:
37.0°C
• Inkubationszeit:
9 Minuten
Reaktions Küvette
• Transfervolumen:
60 µl
• Reagenzvolumen (CPRG):
150 µl
• Temperatur:
37 ± 0.1°C
• Inkubationszeit:
5 Minuten
• Wellenlänge:
577 und 700 nm
• Meßtyp:
kinetisch, bichromatisch
• Einheiten:
ng/ml [µg/l]
gesamt
242
962
7.73
1204
778
160
938
184
82
266
Methode
DRE+ allein
PSA>4.0 allein
PSA >4.0 oder DRE+
PSA>4.0 und DRE+
PSA>4.0 und DRE-
0.05 - 100.0 ng/ml [µg/l]
T/F PSA Kalibrator Kat. Nr. RC452g.
0.0, 4.0, 20.0, 50.0, 108.0 ng/ml [µg/l]
5, 2, 3, 2, 3 (In aufsteigender Reihenfolge der
Konzentration)
Jede neue Reagenz-Kassetten-Charge oder
alle 90 Tage
C0 -1000.0
C3 200.0
C1 3000.0
C4 0.5
C2 -2.0
g. Der T/F PSA Kalibrator besteht aus 6 Konzentrationsstufen. Verwenden Sie
zur Kalibration nur von TPSA nur die Flaschen mit den Aufschriften 1, 2, 4,
5 und 6. Flasche 3 nicht verwenden.
Qualitätskontrolle
Mindestens einmal pro Tag sollten Sie zwei verschiedene Level der
PSA Kontrolle analysieren. Liegt das Ergebnis außerhalb der vom
Labor festgesetzten Grenzen, ist das in Abschnitt “Fehlersuche” im
Dimension® Handbuch dargestellte Verfahren anzuwenden.
Eine Störung des Systems liegt vor, wenn bei 5 Tests in Serie folgende
Präzision beobachtet wird:
PSA Konzentration
S.D.
4.0 ng/ml [µg/l]
> 0.22 ng/ml [µg/l]
50.0 ng/ml [µg/l]
> 2.63 ng/ml [µg/l]
*Ergebnisse: Das Gerät berechnet die Gesamt-PSA-Konzentration
nach dem Berechnungsschema, das im Dimension®-Handbuch
dargestellt ist, und druckt sie automatisch in ng/ml[µg/l] aus.
Wenn die Ergebnisse aus diesem Test Diagnose- und
Behandlungszwecken dienen sollen, müssen sie stets in
Zusammenhang mit der Anamnese des Patienten, dem klinischen
Erscheinungsbild und anderen Befunden interpretiert werden.
Grenzen des Verfahrens
> 100 ng/ml [µg/l]
Stellen Sie eine geeignete Verdünnung mit
Reinstwasser her, um Ergebnisse innerhalb des
Messbereichs zu erhalten. Verdünnungsfaktor
eingeben. Test wiederholen. Im Ergebnisausdruck
wird die Verdünnung berücksichtigt.
Autom. Verdünnung (AD): Bitte Dimension® System handbuch beachten.
Empfohlene Probenvolumen für automatischen
Verdünnung ist 2 µl.
Ergebnisse:
Ergebnisse < 0.05 ng/ml[µg/l] sollten als “unter
0.05 ng/ml[µg/l]” weitergegeben werden.
PSA Werte können bei Patienten, die eine Hormontherapie bekommen,
erniedrigt sein und unter Umständen nicht den adäquaten Stand des
Erkrankungsbildes des Patienten wiedergeben.9
Sandwich-Immunoassays sind empfindlich gegen den “Hook-Effekt”,
wobei ein Überschuß von Antigen die simultane Bindung der
markierten Antikörper an ein einzelnes Molekül des Analyten
verhindert.14 Die TPSA-Methode zeigt bis mindestens
15000 ng/ml [µg/l] keinen Hook-Effekt.
Patientenproben können heterophile Antikörper enthalten, die mit
Immunoassays reagieren und dadurch falsch erhöhte oder falsch
erniedrigte Werte ergeben. Dieser Assay wurde so entwickelt, daß die
Einflüsse durch heterophile Antikörper auf ein Minimum reduziert
werden.15
Das Ergebnisausgabesystem des Geräts zeigt Fehlermeldungen, die
den Anwender bei spezifischen Störungen warnen. Jeder
Ergebnisausdruck, der solche Fehlermeldungen enthält, sollte
aufbewahrt werden, damit der Ursache des Fehlers nachgegangen
werden kann.
Erwartungswerte bei der Erkennung von Prostatakrebs: Die folgende
Tabelle fasst die Ergebnisse einer retrospektiven Studie mit 1204
Männern zusammen, die 50 Jahre oder älter waren und zur
Untersuchung auf Prostatakrebs zu einem Urologen überwiesen
wurden. Die Proben wurden an 5 Orten verteilt über die Vereinigten
Staaten gesammelt. Alle Patienten wurden einer Biopsie unterzogen.
Die Proben wurden mit Hilfe der Dimension® TPSA-Methode auf PSA
95% Vertrauensbereich
41.7 – 54.0
35.9 – 42.1
34.8 – 40.7
50.9 – 80.0
29.2 – 40.0
Unabhängig vom Wert sollten PSA-Konzentrationen im Serum nicht
als eindeutiges Anzeichen für die An- oder Abwesenheit von
Prostatakrebs interpretiert werden. Zur Diagnose von Krebs ist eine
Prostatabiopsie erforderlich.
Erwartungswerte beim Management von Patienten mit
Prostatakrebs – Nachfolgende Tabelle zeigt die Verteilung der TPSAWerte zu 393 gesunden Probanden und 1213 Patienten, die zur
Untersuchung auf Prostatakrebs an einen Urologen überwiesen
wurden:
Verteilung der PSA Werte in Prozent(%)
Anzahl
der
Personen
Gesunde
Männer 50-59 jahre
Männer 60-69 jahre
Männer 70+ jahre
Prostata-Erkrankungen
BPH
Prostatitis
Prostatisch Intraepithiel
Neoplasma (PIN)
Verdacht auf
Krebs
Prostata Krebs
0-4
4.1-10 10.1-30 30.1- 60 >60
(ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml)
160
130
103
92.0
89.0
81
8.0
9.0
19
0.0
2.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
373
89
30.9
28.6
56.8
58.7
11.8
12.7
0.5
0.0
0.0
0.0
264
25.0
59.0
16.0
0.0
0.0
63
424
30.1
11.8
52.9
54.0
17.0
27.6
0.0
3.3
0.0
3.3
Jedes Labor sollte seinen eigenen Erwartungswert für PSA auf dem
System Dimension® ermitteln.
Spezifische Leistungs Charakteristikh
Reproduzierbarkeit i,j
Mittelwert
Standardabweichung (% VK)
ng/ml [µg/l] In der Serie
Total
Plasma Pool
0.79
0.02 (2.0)
0.03 (4.6)
Serum Pool 1
3.64
0.08 (2.2)
0.14 (3.8)
Serum Pool 2
76.42
1.04 (1.4)
2.30 (3.0)
Liquichek™ 1
0.45
0.02 (5.0)
0.03 (5.8)
Liquichek™ 2
2.40
0.04 (1.5)
0.07 (3.1)
Liquichek™ 3
17.77
0.24 (1.3)
0.50 (2.8)
Liquichek™ Immunoassay Plus Controlist ein eingetragenes Warenzeichen von
Bio-Rad Laboratories, Irvine, CA 92618.
h. Alle Tests wurden durchgeführt, nachdem die normalen, empfohlenen
Qualitätskontrollprüfungen ausgeführt wurden (siehe Gerätehandbuch).
i. Reproduzierbarkeitstests wurden in Übereinstimmung mit der durch die
NCCLS genehmigten Richtlinie für die Evaluierung der Präzision von
klinisch-chemischen Geräten (EP5-A, Februar 1999) durchgeführt.
j. Proben jeder Konzentration wurden in Zweichfachbestimmung an zwanzig
Tagen analysiert. Die Standardabweichungen in der Serie und von Total
wurden anhand der Varianz-Analyse errechnet.
Analytische Sensitivität
Die Sensitivität der TPSA-Methode ist 0.05 ng/ml [µg/l] und die
kleinste Konzentration des PSA die von Null unterschieden werden
kann. Diese Sensitivität ist definiert als die zweifache
Standardabweichung über dem Level 1 (0 ng/ml [µg/l]) Kalibrator
(n=20).
Analytische Spezifität
Details siehe Tabelle der bekannten Störsubstanzen.
Der TPSA-Test erkennt freies PSA und PSA-ACT auf äquimolarer
Basis.
Wiederfindung
Proben die bekannte Mengen von PSA enthalten, wurden mit
humanen Serumproben und Plasmaproben gemischt welche PSA
Werte zwischen 1.54 - 22.40 ng/ml [µg/l] aufwiesen. Die TPSAKonzentrationen wurden gemessen und die Prozent-Wiederfindung
berechnet. Die Wiederfindung lag zwischen 96.0 bis hin zu 103%
bei einem Mittelwert von 101%.
EC REP
2nd fold
Symbolschlüssel: Siehe Verzeichnis im Anhang.
Literatur: Siehe Verzeichnis im Anhang.
Dimension® und Flex® sind eingetragene Warenzeichen von Dade
Behring Inc., im US Patent and Trademark Office, in Deutschland sowie
in vielen anderen Lädern.
*Ein Sternchen am Rand Kennzeichnet einen abgeändern Teil.
Dade Behring Inc.
1st fold
Sollte während der Überwachung eines Patienten der Test
gewechselt werden, ist es nötig sequentielle Untersuchungen
durchzuführen, um die neuen Basalwerte zu bestätigen.
Material
Ergebnisse:
Manuelle Verdünnung:
PPV%
48.0
39.0
37.8
60.6
34.6
12" @ 100%
Zugeordnete Koeffizienten:
116
299
10.07
415
269
97
366
30
19
49
United Kingdom
0843
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2003-06 D PN 755451.001-DE
Kalibrierhäufigkeit:
126
663
6.68
789
509
63
572
154
63
217
Der prediktive Voraussagewert (PPV) stellt den Grad für ein
wahrscheinlich positives Biopsieergebniss dar, wenn ein positives
Ergebniss für DRE, PSA und PSA zusammen mit DRE vorliegt.
*Kalibrierung
Die folgenden Informationen sollten bei der Kalibrierung der TPSAMethode berücksichtigt werden:
Testbereich:
Referenzmaterial:
Empfohlene Konzentrationen:
Kalibrierschema, Replicates:
DRE +
DRE Mean PSA (ng/ml)
Gesamt
PSA > 4.0, DRE PSA > 4.0, DRE +
Gesamt
PSA ≤ 4.0, DRE PSA ≤ 4.0, DRE +
Gesamt
®
TPSA
Cartouche de réactifs Flex® Antigène Spécifique de la
Prostate totale
Réactifs
Puitsb Forme
Précaution: Aux Etats Unis, la loi limite la vente et la distribution
de ce dispositif uniquement par ou sur ordre d’un médecin, ou
pour un laboratoire clinique et son utilisation uniquement par ou
sur ordre d’un médecin.
Attention: La concentration de TPSA dans un échantillon donné,
déterminée avec des dosages de différents fabricants peut varier
en raison des différences de méthodes et de spécificité des
réactifs. Les résultats communiqués par le laboratoire au
médecin doivent mentionner le nom du dosage utilisé. Des
valeurs obtenues avec différentes méthodes ne peuvent pas être
interverties. Lors du suivi d’un patient, si la méthode de dosage utilisée pour déterminer en série le taux de PSA change, des
tests séquentiels supplémentaires doivent être effectués. Avant
tout changement de méthode, le laboratoire DOIT confirmer les
valeurs de base pour les patients suivis en série.
Utilisation: La méthode TPSA utilisée sur le système de chimie
clinique Dimension® équipé du module d’immunodosage en
phase hétérogène est un test de diagnostic in vitro destiné à la
mesure quantitative de l’antigène spécifique de la prostate (PSA)
total dans le sérum et le plasma humain dans les cas suivants:
1. pour l’aide à la détection du cancer de la prostate simultanément
avec un examen de toucher rectal (TR) chez les hommes de
50 ans et plus. Une biopsie prostatique est nécessaire pour le
diagnostic
2. pour l'aide au suivi (monitoring) des patients atteints d'un cancer
de la prostate.
Résumé: L’antigène spécifique de la prostate (PSA) est une sérine
protéase d’approximativement 30000 daltons produite par les
cellules épithéliales de la glande prostatique.1, 2 Le taux de PSA
dans le sérum et dans les autres tissus est normalement très bas.
Dans la maladie maligne de la prostate (adénocarcinorme
prostatique) et dans les troubles non malins comme
l’hypertrophie bénigne de la prostate (HBP) et la prostatite, le taux
sérique de PSA peut devenir très élevé.3
Dans le sérum, le PSA se rencontre principalement sous trois
formes: complexé avec du α 1-antichymotrypsine (ACT) ou de
l’α 2-macroglobuline et libre.4,5 La protéine PSA associée avec
l’α 2-macroglobuline est encapsulée et ne peut être dosée à l’aide
des immunodosages actuels. Le dosage TPSA Dimension®
mesure à la fois des fractions du PSA sérique libre et des
fractions du PSA sérique liées à l’ACT. La spécificité du PSA pour
le tissu prostatique en fait un marqueur significatif pour la
détection précoce et pour le suivi des maladies de la prostate.
Aux Etats Unis, le cancer de la prostate est le type de cancer le
plus fréquent chez les hommes et représente la seconde cause de
mortalité masculine par suite de cancers, avec plus de 30000
décès en 1999.6 Avant l’utilisation du PSA pour la détection
précoce du cancer de la prostate, l’examen du toucher rectal (TR)
détectait beaucoup moins de tumeurs.3, 6 La méthode la plus
sensible pour la détection précoce du cancer de la prostate utilise
le TR et le PSA, L’Association Américaine d’Urologie (AUA)
approuve l’examen annuel à partir de 50 ans pour la détection
précoce du cancer de la prostate utilisant le TR et le PSA. Un TR
anormal ou un taux élevé de PSA peuvent suggérer la présence
d’un cancer de la prostate cependant une biopsie prostatique est
nécessaire pour le diagnostic final.6
Le dosage de PSA est également un test de monitoring des
patients atteints d'un cancer de la prostate préalablement
diagnostiqué.7,8 Les taux sériques de PSA sont surtout utiles
lorsque des valeurs séquentielles sont obtenues et suivies dans le
temps. Après une ablation complète de la glande prostatique
(prostatectomie radicale), les taux de PSA doivent diminuer à un
niveau très faible ou non détectable. Une augmentation du taux de
PSA sérique chez des patients prostatectomisés indique
l’existence de tissu résiduel prostatique, la récurrence ou une
métastase de la maladie.9 Les taux sériques de PSA doivent
diminuer au cours d’un traitement par irradiation et rester à un
taux de base tant que le patient est en rémission. 10
Principes de la Méthode: La méthode TPSA est un
immunodosage enzymatique en une étape basé sur le principe du
« sandwich ». L’échantillon est incubé avec des particules de
dioxyde de chrome recouvertes d’anticorps monoclonaux
spécifiques d’un site de liaison sur le PSA, et un réactif conjugué
(anticorps monoclonal spécifique d’un second site de liaison sur
la molécule PSA marqué à la β-galactosidase) pour former un
« sandwich » particule/PSAa/conjugué. Le conjugué non lié est
éliminé par séparation magnétique et lavage. La β-galactosidase
portée par le sandwich est combinée avec le substrat
chromogénique rouge de chlorophénol-β-d-galactopyranoside
(RCPG). L’hydrolyse du RCPG libère un chromophore : le rouge
de chlorophénol (RCP). Le changement de couleur dû à la
formation de RCP mesuré à 577 nm est directement
proportionnel à la concentration de PSA présente dans
l’échantillon de patient.
PSAa
+
CrO2-Ac
————————>
+
CrO2-Ac-PSA-F(ab')2-β-gal
+
CrO2-Ac
+
+
lavage
CrO2-Ac
————————>
+
+
CrO2-Ac
(transféré dans la cuvette)
RCPG
(n’absorbant
–––––––––––––––––> RCP (absorbant à 577 nm)
pas à 577 nm)
a. Les termes PSA utilisés ici incluent le PSA libre et les complexes PSA-ACT.
Composition
1
Liquide
PSA-Ac-βgalactosidase
Diluant chrome
Anticorps--CrO2d
2
3
Liquide
Comprimée
4,5,6
7
Comprimése RCPG
Liquide
Diluant RCPG
Concentrationc
0.09 mg/ml
4.8 mg/ml
1.8 mg/ml
Origine
Souris,
monoclonal
Souris,
monoclonal
10.3 mg/ml
42 mg/ml
b. Les puits sont numérotés successivement à partir de l’extrémité la plus
large de la cartouche.
c. Valeur nominale dans la cartouche hydratée.
d. Le titre de l'anticorps et l'activité du conjugué varient d'un lot à l'autre.
e. Les comprimés contiennent des excipients, des tampons et des
stabilisants.
Précautions: Après utilisation, les cuves optiques contiennent
des liquides d’origine humaine: manipuler avec soin pour
éviter tout contact cutané et toute ingestion.
Pour usage diagnostic in vitro
Préparation du Réactif: Le mélange et la dilution sont
automatiquement effectués par l’appareil.
Conservation: A conserver entre 2 – 8° C.
Expiration: Se référer à l'emballage pour connaître la date de
péremption des cartouches de réactifs restées fermées. Les puíts
des cartouches scellés ou non hydratés restent stables dans
l'appareil pendant 30 jours. Une fois percés par l'appareil, les
puits 1, 2, 3 et 7 sont stables 15 jours. Une fois percés par
l'appareil, les puits 4, 5 et 6 sont stables 5 jours.
Recueil des Echantillons: Le sérum et le plasma prélevés sur
héparinate de lithium peuvent être recueillis par la procédure
habituelle.11
Les échantillons de sérum et de plasma doivent être séparés des
cellules dans un intervalle de 4 heures après la ponction veineuse.
Les échantillons doivent être conservés à 4 °C et analysés dans
un intervalle de 8 heures. Pour les conservations plus longues,
les échantillons peuvent être congelés à –20 °C ou moins. Les
échantillons sont stables pendant au moins quatre mois s’ils sont
conservés à –80 °C. 12
Les échantillons doivent être exempts de toute particule en
suspension. Pour prévenir l’apparition de fibrine dans les
l'échantillons de sérum, laisser le caillot se former complètement
avant la centrifugation. Le temps de formation du caillot peut être
augmenté lors d'un traitement thrombolytique ou anticoagulant.
Un taux de PSA faussement élevé peut être observé si
l'échantillon sérique est prélevé chez le patient à la suite d’ un
toucher rectal (TR), d’une biopsie à l’aiguille ou une résection
endo-urétrale.13
Chaque laboratoire doit déterminer l’acceptabilité de ses propres
tubes de prélèvement et des produits de séparation du sérum.
Ces produits peuvent varier d’un fabricant à l’autre et parfois d’un
lot à l’autre.
1st fold
Substances Interférentes Connues
Les substances suivantes n'interfèrent pas avec la méthode TPSA
quand elles sont présentes dans le sérum aux concentrations
indiquées. L'inexactitude systématique (biais) due à ces
substances est inférieure à 10% pour des taux de PSA de
4.5 ng/ml:
Acétaminophène
20 mg/dl
Acide Ascorbique
3 mg/dl
Acide Salicylique
50 mg/dl
Acide Urique
20 mg/dl
Acide Valproïque
50 mg/dl
Albumine
6.8 g/dl
Amikacine
15 mg/dl
Aminoglutéthimide
6 ng/ml
Ampicilline
5 mg/dl
Bilirubine
60 mg/dl
Caféine
10 mg/dl
Carbamazépine
12 mg/dl
Chloramphénicol
25 mg/dl
Chlordiazépoxide
2 mg/dl
Chlorpromazine
5 mg/dl
Cholestérol
500 mg/dl
Cimétidine
10 mg/dl
Créatinine
30 mg/dl
Cyclophosphamide
25 mg/dl
Dextran 75
2500 mg/dl
Diazépam
2 mg/dl
Diéthylstilbestrol
0.02 mg/dl
Digoxine
5 ng/ml
Doxorubicine, HCl
7 mg/dl
Erythromycine
20 mg/dl
Estramustine phosphate
20 mg/dl
Ethanol
350 mg/dl
Ethosuximide
30 mg/dl
Finastéride
0.2 mg/dl
Flutamide
1 mg/dl
Furosémide
2 mg/dl
Gentamicine
12 mg/dl
Goséréline acétate
0.01 mg/dl
Hémoglobine
1000 mg/dl
Héparine
8000 U/l
Ibuprofène
40 mg/dl
Immunoglobuline G
6 g/dl
Kallicréine plasmatique humaine 100 µg/ml
Presente Kétoconazole
7 mg/dl
Leuprolide acétate
10 mg/dl
Lidocaïne
6 mg/dl
Lipémie
3000 mg/dl
Lithium
3.5 mg/dl
Megestrol acétate
2 mg/dl
Methotrexate
300 mg/dl
Nicotine
2 mg/dl
Pénicilline G
25 U/ml
Pentobarbital
10 mg/dl
Phénobarbital
15 mg/dl
Phénytoïne
10 mg/dl
Primidone
10 mg/dl
Protéines (basses)
4 g/dl
6.0" @ 100 %
[1322 µmol/l]f
[170.3 µmol/l]
[3.62 mmol/l]
[1.2 mmol/l]
[3.467 mmol/l]
[68 g/l]
[256 µmol/l]
[26 nmol/l]
[143 µmol/l]
[1026 µmol/l]
[515 µmol/l]
[508 µmol/l]
[774 µmol/l]
[67 µmol/l]
[157 µmol/l]
[12.9 mmol/l]
[397 µmol/l]
[2652 µmol/l]
[896 µmol/l]
[25 g/l]
[70 µmol/l]
[700 nmol/l]
[6.4 nmol/l]
[121 µmol/l]
[272 µmol/l]
[343 µmol/l]
[76 mmol/l]
[2125 µmol/l]
[5.4 µmol/l]
[36 µmol/l]
[60 µmol/l]
[251 µmol/l]
[79 nmol/l]
[0.62 mmol/l] (monomer)
[8000 U/l]
[1939 µmol/l]
[60 g/l]
[1 µmol/l]
[132 µmol/l]
[86 µmol/l]
[256 µmol/l]
[33.9 mmol/l](triglyceride)
[5.04 mmol/l]
[52 µmol/l]
[7 mmol/l]
[123 µmol/l]
[25,000 U/l]
[442 µmol/l]
[646 µmol/l]
[396 µmol/l]
[458 µmol/l]
[40 g/l]
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2nd fold
12" @ 100%
French
REF RF451
Protéines (elevées)
12 g/dl [120 g/l]
Propoxyphène
0.4 mg/dl [12 µmol/l]
Phosphatase acide prostatique 1000 ng/ml [1000 µg/l]
Facteur rhumatoïde
571 IU/ml [571 IU/ml]
Théophylline
Urée (masse d'azote)
500 mg/dl [83.3 mmol/l]
f. Système International d'Unités [Unités S.I.] entre crochets.
Les résultats de PSA, du TR et de la biopsie sont indiqués ci-dessous.
L’étude a montré que le test TPSA simultanément avec le TR, était
plus efficace dans la détection du cancer de la prostate que le TR seul.
Distribution des résultats:
Résultat de la biopsie
Bénin
Malin
Procédure
Matériels Nécessaires
Cartouche de réactifs Flex® TPSA, Cat. N° RF451
Tubes de Réaction, Cat. N° RXV1A
Nettoyant Chimique, Cat. N° RD701
Solution de Nettoyage de la Sonde Echantillon, Cat. N° RD703
Etapes de la Détermination
L’échantillonnage, la distribution des réactifs, le mélange, la
séparation, le traitement et l’impression des résultats sont réalisés
automatiquement par le système Dimension® équipé du module
d’immunodosage en phase hétérogène. Pour plus de détails sur ce
processus, se référer au manuel du système Dimension®.
Conditions du Dosage
60 µl
Les concentrations sériques de PSA, sans tenir compte de la valeur,
ne doivent pas être interprétées comme la mise en évidence définitive
de la présence ou de l’absence d’un cancer de la prostate. Une biopsie
prostatique est nécessaire au diagnostic du cancer.
Valeurs attendues dans le suivi des patients atteints du cancer de
la prostate – Le tableau suivant indique la distribution des valeurs de
TPSA dans une population composée de 393 sujets sains et 1213
sujets qui ont consulté un urologue pour déterminer la présence d’un
cancer de la prostate:
Distribution des valeurs de PSA
150 µl
37.0 ± 0.1°C
5 minutes
577 et 700 nm
Cinétique bichromatique
ng/ml [µg/l]
*Etalonnage
La procédure générale d’étalonnage est décrite dans le Manuel du
Dimension®.
Lors de l’étalonnage de la méthode TPSA, il faut tenir compte des
données suivantes:
Domaine de mesure
Produits de référence:
Niveaux d’étalonnage
recommandés:
Protocole d’étalonnage
(résultats reproductibles):
Fréquence d’étalonnage:
Nombre
de
Sujets
0.05 - 100.0 ng/ml [µg/l]
Etalon T/F PSA Cat. N° RC452g
0.0, 4.0, 20.0, 50.0, 108.0 ng/ml [µg/l]
5, 2, 3, 2, 3 (niveaux par ordre croissant)
A chaque nouveau lot de cartouche de
réactifs. Tous les 90 jours quel que soit le
lot.
Coefficients attribués:
C0 -1000.0
C3 200.0
C1 3000.0
C4 0.5
C2 - 2.0
g. L’étalon T/F PSA comprend 6 niveaux. Pour étalonner le TPSA uniquement,
utiliser des fioles portant les numéros suivants: 1, 2, 4, 5 et 6. Ne pas
utiliser de fiole portant le numéro 3.
Contrôle de qualité
Au moins une fois par jour d'utilisation, analyser deux niveaux du
contrôle PSA. Les résultats doivent se trouver dans les limites
acceptables du laboratoire. Pour plus de détails, se reporter au
Manuel du Dimension®.
Le système présente une défaillance si lors de 5 essais consécutifs on
observe:
Concentration du PSA
Ecart–type
4.0 ng/ml [µg/l]
> 0.22 ng/ml [µg/l]
50.0 ng/ml [µg/l]
> 2.63 ng/ml [µg/l]
*Résultats : Le Dimension® calcule automatiquement et imprime la
concentration du PSA total en ng/ml[µg/l] suivant le protocole de
calcul expliqué dans le manuel d’utilisation Dimension®.
A des fins de diagnostic et de traitement, les résultats de ce test
doivent toujours être interprétés en relation avec le dossier médical du
patient, le tableau clinique et les autres conclusions.
Limites de la Méthode
Résultats:
Dilution Manuelle:
Autodilution (AD):
Résultats:
> 100 ng/ml [µg/l]
Faire la dilution appropriée avec de l’Eau Purifiée
pour obtenir le résultat dans le domaine de mesure.
Entrer le facteur de dilution. Redoser. Le résultat lu
tient compte de la dilution.
Se reporter au Manuel du Dimension®.
Volume d'echantillon soumis à l'auto dilution: 2 µl.
Pour les dosages inférieurs à 0.05 ng/ml[µg/l], il
convient de rendre le résultat “inférieur à
0.05 ng/ml[µg/l]” au lieu des valeurs numériques.
Les taux de PSA peuvent être plus faibles chez les patients recevant un
traitement hormonal et ne pas refléter convenablement la présence d’une
maladie résiduelle ou récurrente.9
Les dosages immunométriques sandwich en une étape sont susceptibles
de présenter un effet crochet (Hook effect) à haute concentration, où un
excès d’antigène empêche la liaison simultanée d’une seule molécule
d’analyte avec les anticorps de capture et de détection.14 La méthode
TPSA ne montre pas d’effet crochet jusqu’à 15000 ng/ml [µg/l].
Les échantillons de patient peuvent contenir des anticorps hétérophiles qui
pourraient réagir avec les immunodosages pour donner des résultats
faussement élevés ou abaissés. Ce dosage a été conçu pour minimiser
l’interférence due aux anticorps hétérophiles.15
Le système d’impression de l’appareil comporte des messages d’erreur,
permettant d’avertir l’utilisateur des défauts de fonctionnement spécifiques.
Toute feuille de résultats comportant un tel message doit être conservée
pour investigation. Se reporter au Manuel du Dimension®.
Valeurs Attendues dans la détection du cancer de la prostate: Le
tableau suivant résume les résultats d’une étude rétrospective sur des
échantillons prélevés chez 1204 hommes âgés de 50 ans et plus qui
ont consulté un urologue pour déterminer la présence d’un cancer de
la prostate. Ces échantillons provenaient de 5 sites cliniques
américains. Tous ces patients ont subi une biopsie. Les échantillons
ont été testés pour le PSA en utilisant la méthode TPSA Dimension®.
Dade Behring Inc.
EC REP
Sujets Sains
Hommes 50-59 ans
160
Hommes 60-69 ans
130
Hommes 70+ ans
103
Maladie de la prostate
HBP
373
Prostatite
89
Néoplasme Intraépithélial
de la prostate (PIN)
264
Suspicion de cancer
63
Cancer de la prostate
424
0-4 4.1-10
(ng/ml) (ng/ml)
10.1-30 30.1- 60 >60
(ng/ml) (ng/ml) (ng/ml)
92.0
89.0
81
8.0
9.0
19
0.0
2.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
30.9
28.6
56.8
58.7
11.8
12.7
0.5
0.0
0.0
0.0
25.0
30.1
11.8
59.0
52.9
54.0
16.0
17.0
27.6
0.0
0.0
3.3
0.0
0.0
3.3
Chaque laboratoire doit établir son propre intervalle de référence
établi pour le dosage du PSA sur le système Dimension®.
Si la méthode de dosage du PSA change au cours du suivi d’un
patient, des dosages séquentiels supplémentaires doivent être
effectués pour confirmer les valeurs du taux résiduel.
1st fold
Caractéristiques Spécifiquesh
Reproductibilitéi,j
Matériel
Moyenne
ng/ml [µg/l]
Ecart–type (% CV)
Dans la série
Total
Pool de plasmas
0.79
0.02 (2.0)
0.03 (4.6)
Pool de sérum 1
3.64
0.08 (2.2)
0.14 (3.8)
Pool de sérum 2
76.42
1.04 (1.4)
2.30 (3.0)
Liquichek™ 1
0.45
0.02 (5.0)
0.03 (5.8)
Liquichek™ 2
2.40
0.04 (1.5)
0.07 (3.1)
Liquichek™ 3
17.77
0.24 (1.3)
0.50 (2.8)
Liquichek™ Immunoassay Plus Control est une marque déposée de Bio-Rad
Laboratories, Irvine, CA 92618.
h. Tous les dosages concernant les caractéristiques spécifiques ont été faits
après avoir effectué les contrôles de qualité recommandés (voir le Manuel du
Dimension®).
i. Les essais de reproductibilité ont été effectués en accord avec la
Recommandation du NCCLS pour la Précision des Dispositifs de Chimie
Clinique - NCCLS Approved Guideline for Evaluation of Precision
Performance of Clinical Chemistry Devices (EP5-A, Feb.1999).
j. A chaque niveau, les spécimens ont été analysés en double pendant 20 jours.
Les écarts-types (dans la série et total) ont été calculés par la méthode
d’analyse de variance.
Sensibilité Analytique
La sensibilité de la méthode TPSA est de 0.05 ng/ml [µg/l] et
représente la plus faible concentration de PSA qui peut être distinguée
de zéro. Cette sensibilité est définie comme la concentration à deux
écarts-types au-dessus de la concentration 0 ng/ml [µg/l] de l'étalon
de niveau 1 (n=20).
Spécificité Analytique
Se reporter au chapitre Substances interférentes connues pour plus
de détails. Le dosage TPSA reconnaît le PSA libre et le PSA-ACT sur
une base équimolaire.
Récupération
Les dilutions multiples des échantillons de sérum et de plasma avec
des valeurs PSA de 1.54 à 22.40 ng/ml [µg/l] ont été faites avec de
l’eau.
Les concentrations en TPSA de ces échantillons ont été mesurées et
le pourcentage de récupération calculé. La récupération allait de
96.0 à 103% avec une récupération moyenne de 101%.
Explication des Symboles: Voir page annexe.
Bibliographie: Voir page annexe.
Dimension® et Flex® sont des marques déposées de Dade Behring
Inc., aux U.S.A. Bureau des Brevets et des Marques Déposées, en
Allemagne et dans beaucoup d’autres pays.
*Un astérisque dans la marge correspond à une section modifee.
United Kingdom
0843
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2nd fold
12" @ 100%
Cuvette
• Volume transféré:
• Volume de réactif
substrat (RCPG):
• Température:
• Temps de réaction:
• Longueur d’onde:
• Type de mesure:
• Unités:
40 µl
30 µl
50 µl
37.0°C
9 minutes
2003-06 D PN 755451.001-FR
Tube de Réaction
• Volume échantillon:
• Anticorps-CrO2:
• PSA Ac-β-Galactosidase:
• Température:
• Temps d’incubation:
Total
TR +
126
116
242
TR 663
299
962
Moyenne PSA (ng/ml) 6.68
10.07
7.73
Total
789
415
1204
PSA > 4.0, TR 509
269
778
PSA > 4.0, TR +
63
97
160
Total
572
366
938
PSA ≤ 4.0, TR 154
30
184
PSA ≤ 4.0, TR +
63
19
82
Total
217
49
266
Le pourcentage de la valeur prédictive (PVP) est estimé comme la
probabilité d'avoir une biopsie positive lors d' un résultat positif de
toucher rectal ou de PSA ou de toucher rectal et de PSA.
Les résultats sont les suivants:
Méthode
PVP %
Intervalle de Confiance 95%
TR+ exclusivement
48.0
41.7 – 54.0
PSA>4.0 exclusivement
39.0
35.9 – 42.1
PSA >4.0 ou TR+
37.8
34.8 – 40.7
PSA>4.0 et TR+
60.6
50.9 – 80.0
PSA>4.0 et TR34.6
29.2 – 40.0
®
REF RF451
TPSA
Reagenti
Cartuccia Reagente Flex® Antigene Prostatico
Specifico Totale
Scompartib Forma
PRECAUZIONI: La legge Federale degli Stati Uniti obbliga la
vendita e la distribuzione di questo prodotto solo su richiesta
del medico o di un laboratorio analisi; e l’impiego avviene solo
su richiesta del medico.
Attenzione: La concentrazione di TPSA in un dato campione
determinata con dosaggi di differenti produttori può variare per
differenze nei metodi e nelle specificità dei reagenti. I risultati
refertati da un laboratorio ad un medico devono includere
l’identificazione del metodo PSA impiegato. I valori ottenuti con
metodi diversi non possono essere intercambiabili. Se, nel
corso del monitoraggio di un paziente , il metodo impiegato per
la determinazione dei livelli di PSA viene sostituito, si
dovrebbero effettuare dosaggi sequenziali addizionali. Prima di
modificare i metodi, il laboratorio DEVE confermare i valori di
base dei pazienti che devono essere monitorati.
Utilizzazione: Il metodo TPSA per il sistema di chimica clinica
Dimension® con il modulo etereogeneo è un prodotto
diagnostico in vitro impiegato per misurare quantitativamente
l’antigene prostatico specifico (PSA) nel siero e plasma umano:
1. come ausilio diagnostico nella rilevazione del tumore alla prostata
unitamente alla esplorazione digitale in uomini di 50 anni o piú anziani.
Viene richiesta la biopsia per la diagnosi del tumore alla prostata.
2. quale test ausiliare nel monitoraggio di pazienti affetti da tumore alla
prostata.
Riassunto: L’antigene prostatico specifico (PSA) è una proteasi
sierica di circa 30,000 Dalton prodotta dalle cellule epiteliali del
glande .1.2 Il livello di PSA nel siero ed in altri tessuti è
normalmente molto basso. Nelle situazioni maligne
(adenocarcinoma prostatico) e nei disordini non-maligni come
l’ipertrofia benigna della prostata (BPH) e nelle prostatiti, i livelli
di PSA possono diventare elevati.3
Nel siero il PSA esiste principalmente in tre forme: complessato
con l’α 1-antichimotripsina (ACT) o l’α 2-macroglobulina e
libera.4,5 La proteina PSA associata con l’α 2-macroglobulina è
incapsulata e non disponibile per la misura con gli attuali sistemi
per immunodosaggi. Il metodo TPSA Dimension® misura sia la
forma libera che quella legata dell’ACT del PSA nel siero.
La specificità del PSA al tessuto prostatico lo rende un marker
significativo nella rilevazione iniziale e nella gestione dei disordini
della prostata.
Il tumore alla prostata è il tumore più diffuso trovato negli uomini
negli Stati Uniti ed è la seconda causa di morte per tumore, si
contano oltre 30,000 morti nel l999.6 Prima dell’impiego del PSA
per la rilevazione precoce del tumore prostatico, il metodo
tradizionale era l’esame digitale rettale.3,6 Il metodo più sensibile
per la rilevazione precoce del tumore alla prostata usa sia DRE
che PSA. l’American Urological Association (AUA) assunse come
pratica l’esame annuale per la rilevazione precoce del tumore con
DRE e PSA iniziando con uomini di 50 anni. Un anomalo DRE od
un’elevata PSA può significare la presenza di tumore alla
prostata, tuttavia per la diagnosi finale viene richiesta una biopsia
alla prostata.6
Il test PSA viene anche accettato come test per il monitoraggio di
pazienti per i quali sia stata formulata in precedenza una diagnosi
di tumore alla prostata. 7,8
Livelli nel siero di PSA sono per la maggior parte utili i valori
sono ottenuti in modo sequenziale e monitorati per tutto il tempo.
Dopo la completa rimozione del glande (prostatectomia radicale),
i livelli di PSA dovrebbero scendere a valori molto bassi e non
rilevabili. La presenza significativa di PSA nel siero dei pazienti
prostatectomizzati indica un residuo di tessuto prostatico,
ricorrenza o metastasi. 9 I livelli di PSA nel siero durante la
radiazione dovrebbero diminuire e rimanere alla linea di base
mentre il paziente è in remissione.10
Principi del metodo: Il metodo PSA è un immunodosaggio ad
una fase basato sul principio “sandwich”. Il campione viene
incubato con le particelle al biossido di cromo sensibilizzate con
anticorpi specifici monoclonali per un sito di legame sul PSA, ed
il reagente coniugato (anticorpi specifici monoclonali marcati con
β-Galattosidasi per un secondo sito di legame sulla molecola di
PSA) per formare un “sandwich” particella/PSAa/coniugato. Il
coniugato non legato e l’analita sono rimossi con la separazione
magnetica ed il lavaggio. La β-Galattosidasi legata al sandwich si
combina con il substrato cromogenico clorofenolo rosso-βgalattopiranoside (CPRG). L’idrolisi del CRPG rilascia un
cromoforo (CPR). La variazione di colore misurata a 577 nm
causata dalla formazione di CRP è direttamente proporzionale alla
concentrazione di PSA presente nel campione paziente.
PSAa +
CrO2-Ac-PSA-F(ab')2-β-gal +
CrO2-Ac +
————————————> CrO2-Ac +
F(ab')2-β-galattosidasi
CrO2-Ac +
lavaggio
——————> CrO2-Ac
(trasferito alla cuvetta)
CPRG
(non assorbe a 577nm)
——————>
CPR (assorbe a 577nm)
a. Il termine PSA utilizzato in questa sede include il PSA libero e i
complessi PSA-ACT.
1
2
3
Liquido
Ingrediente
Concentrazionec Provenienza
PSA
Ab-β-galattosidasid 0.09 mg/ml
Liquido
Diluente cromo
4.8 mg/ml
Compressae Anticorpo-CrO2d 1.8 mg/ml
Topo,
monoclonale
Topo,
monoclonale
4,5,6
Compressae CPRG
10.3 mg/ml
7
Liquido
Diluente CPRG
42 mg/ml
b. Gli scomparti sono numerati progressivamente a partire dalla estremità
larga della cartuccia.
c. Valore nominale come da analisi in produzione.
d. Il titolo anticorporale e l'attività del coniugato possono variare da lotto a
lotto nominale nella cartuccia idratata.
e. La compresse contengono eccipienti, tamponi e stabilizzatori.
Precauzioni: Le cuvette utilizzate contengono fluidi provenienti
dal corpo umano; maneggiare con la dovuta cautela, evitare il
contatto con la pelle e l’ingestione.
Per uso diagnostico in vitro
Preparazione del reagente: La miscelazione e la diluizione sono
effettuati dallo strumento.
Conservazione: Conservare a 2 – 8° C.
Scadenza: Per la data di scadenza delle singole cartucce reagenti
non aperte riferirsi alla confezione. Gli scomparti sigillati o non
idratati delle cartucce inserite nello strumento sono stabili per
30 giorni. Una volta che gli scomparti 1,2,3 e 7 sono stati aperti
dall’apparecchio, essi sono stabili per 15 giorni. Una volta che gli
scomparti 4, 5 e 6 sono stati aperti dall'apparecchio, essi sono
stabili per 5 giorni.
Raccolta del campione: Il siero e il plasma con eparina di litio
possono essere raccolti secondo le normali procedure.11
Separare i campioni di siero e plasma dalle cellule entro 4 ore
dalla venopuntura. I campioni devono essere mantenuti a 4 °C e
analizzati entro 8 ore. Per conservazioni più lunghe, è possibili
congelarli a -20°C o a temperature inferiori. I campioni sono
stabili per almeno quattro mesi se conservati a -80 °C. 12
I campioni dovrebbero essere privi di materiale particellare. Per
evitare la formazione di fibrina nei campioni di siero, la
formazione completa di coagulo dovrebbe avvenire prima della
centrifugazione. Il tempo di coagulazione può essere aumentato a
causa della terapia trombolitica o anticoagulante.
Possono essere osservati valori erroneamente elevati di PSA se il
campione del paziente viene raccolto attraverso un esame digitale
rettale (DRE) con l’ago da biopsia o con resezione transurettale.13
Ciascun laboratorio dovrebbe determinare l’accettabilità delle
proprie provette di raccolta del sangue e dei prodotti di
separazione del siero. E' possibile rilevare differenze di prodotto
tra fomitori diversi e, talvolta, differenze tra lotto e lotto.
Sostanze interferenti note
Le seguenti sostanze non hanno evidenziato effetti significativi
(meno del 10%) sul metodo TPSA quando è stato aggiunto a
4.5 ng/ml PSA un pool di siero alle seguenti concentrazioni:
Acetaminofene
20 mg/dl [1322 µmol/l]f
Acido Salicilico
Acido Urico
Acido Valproico
Albumina
6.8 g/dl [68 g/l]
Amicacina
Aminoglutetimide
6 ng/ml [26 nmol/l]
Ampicillina
5 mg/d [143 µmol/l]
Acido Ascorbico
3 mg/d [170.3 µmol/l]
Bilirubina
Caffeina
Carbamazepina
Ciclofosfamide
Cimetidina
Cloramfenicolo
Clordiazepossido
Clorpromazina
Colesterolo
500 mg/dl [12.9 mmol/l]
Creatinina
Destrano 75
2500 mg/dl [25 g/l]
Diazepam
Dietilstilbestrolo
0.02 mg/dl [700 nmol/l]
Digossina
5 ng/ml [6.4 nmol/l]
Doxorubicina-HCl
Emoglobina
1000 mg/dl [0.62 mmol/l](monomero)
Eparina
8000 U/l [8000 U/l]
Eritromicina
Etanolo
350 mg/dl [76 mmol/l]
Etosuccimide
Fenitoina
Fenobarbitale
Finasteride
0.2 mg/dl [5.4 µmol/l]
Flutamide
Fosfatasi Acida Prostatica 1000 ng/ml [1000 µg/l]
Fosfato Estramustina
20 µg/ml [343 µmol/l]
Furosemide
Gentamicina
Goserelina Acetato
0.01 mg/dl [79 nmol/l]
Ibuprofen
Immunoglobina G
6 g/dl [60g/l]
Leuprolide acetato
Lidocaina
Lipemia
3000 mg/dl [33.9 mmol/l] (trigliceridi)
Litio
3.5 mg/dl [5.04 mmol/l]
Megestrolo acetato
Methotrexate
300 mg/dl [7 mmol/l]
Nicotina
Penicillina G
25 U/ml [25,000 U/l ]
Pentobarbital
Callicreina plasm. umana
100 µg/ml [1 µmol/l]
Primidone
Propossifene
0.4 mg/dl [12 µmol/l]
Proteine (bassa conc.)
4 g/dl [40 g/l]
Proteine (elevata conc.)
12 g/dl [120 g/l]
Chetoconazolo
Fattore Reumatoide
571 IU/ml [571 IU/ml]
Teofillina
Urea
500 mg/dl [83.3 mmol/l]
f. Le unità S.I.—Système International d’Unités–sono tra parentesi.
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
1st fold
2nd fold
12" @ 100%
Italian
Distribuzione dei risultati:
Procedura
Risultato Biopsia
Benigno
Malignano
Materiali necessari
Cartuccia reagente (Flex®) TPSA, Cod. RF451
Provette di reazione, Cod. RXV1A
Soluzione di Lavaggio, Cod. RD701
Pulitore del campionatore, Cod. RD703
Fasi della misura
Il campionamento, l’aspirazione del reagente, la miscelazione, la
separazione, il processamento e la stampa dei risultati sono effettuati
automaticamente dal sistema Dimension® con il modulo per
immunodosaggi in fase etereogenea. Per maggiori dettagli su questo
processo, fare riferimento al manuale del sistema Dimension®.
Condizioni di analisi
60 µl
150 µl
37.0 ± 0.1°C
5 minuti
577 e 700 nm
Bicromatica in cinetica
ng/ml (µg/l)
0.05 - 100.0 ng/ml [µg/l]
Calibratore per T/F PSA Cod. RC452g
0.0, 4.0, 20.0, 50.0, 108.0 ng/ml [µg/l]
5, 2, 3, 2, 3 (ordine dei livelli crescente)
Ogni nuovo lotto di cartucce reagenti. Ogni
90 giorni per lo stesso lotto.
C0 -1000.0
C3 200.0
C4 0.5
C1 3000.0
C2 - 2.0
g. Il calibratore del T/F PSA ha 6 livelli. Per calibrare solo il TPSA,
utilizzare i flaconi con le sequenti etichette: 1, 2, 4, 5, 6 non utilizzare il
flacone con l'etichetta 3.
Controllo di qualità
Almeno una volta per ogni giorno di effettuazione dell'esame,
analizzare due livelli del Controllo PSA. Se i risultati cadono fuori dei
limiti accettabili del laboratorio, seguire la procedura illustrata nella
sezione Ricerca Guasti del Manuale di Istruzioni.
La seguente precisione su 5 test indica la possibilità di un cattivo
funzionamento del sistema:
PSA Concentrazione
D.S.
4.0 ng/ml [µg/l]
> 0.22 ng/ml [µg/l]
50.0 ng/ml [µg/l]
> 2.63 ng/ml [µg/l]
*Risultati: Lo strumento calcola e stampa automaticamente la
concentrazione PSA totale in ng/ml[µg/l] utilizzando lo schema di
calcolo illustrato nel manuale del sistema Dimension®.
A scopo diagnostico e terapeutico, i risultati di questo test
dovrebbero essere sempre interpretati alla luce della storia medica
del paziente, della presentazione clinica e valutando contestualmente
l’esito di altri accertamenti.
Limiti del metodo
Risultati:
Diluzione manuale:
Autodiluzione (AD):
Risultati:
> 100 ng/ml [µg/l]
Per ottenere risultati che cadano all’interno
dell’intervallo di misura, diluire in modo appropriato
con acqua purificata. Introdurre il fattore di diluizione.
Ripetere i dosaggi. Il risultato ottenuto è corretto per il
fattore di diluizione
Fare riferimento al manuale del sistema Dimension®.
Il volume di Campione per autodiluizione consigliato è
2 µl.
< 0.05 ng/ml [µg/l] dovrebbero essere indicati come
“inferiori a 0.05 ng/ml [µg/l]” invece del valore
numerico.
I livelli di PSA possono essere più bassi nei pazienti che ricevono
una terapia ormonale e potrebbero riflettere non adeguatamente la
presenza di residui o di ricorrenza della malattia.9
I dosaggi immunometrici sandwich ad uno step sono sensibili
all’effetto “gancio” ad alte dosi, dove un eccesso di antigene ostacola
il simultaneo legame della cattura e del rilascio degli anticorpi ad una
singola molecola dell’analita.14 Tali campioni devono essere diluiti e
ridosati prima di riportare il risultati (vedere l’informazione sulla
diluizione). Il metodo PSA non mostra l’effetto gancio fino ad almeno
15,000 ng/ml [µg/l].
I campioni pazienti possono contenere anticorpi eterofili che
potrebbero reagire con immunodosaggi per dare risultati falsamente
elevati o bassi. Questo metodo è stato concepito per minimizzare
l’interferenza dovuta agli anticorpi eterofili.15
Il sistema di refertazione dell’analizzatore contiene messaggi di
errore per segnalare all’operatore specifici cattivi funzionamenti.
Ogni foglietto referto contenente tali messaggi dovrebbe essere
accantonato per il controllo. Riferirsi al Manuale di Istruzioni per la
Ricerca guasti.
Valori attesi nella diagnosi del tumore alla prostata
La seguente tabella riassume i risultati di uno studio retrospettivo
utilizzando i campioni di 1204 uomini di 50 anni o più anziani che
sono stati di riferimento ad un urologo per la determinazione della
presenza di tumore alla prostata. Questi campioni sono stati raccolti
in 5 ospedali degli Stati Uniti. A questi uomini è stata fatta una
biopsia. I campioni sono stati testati per il PSA utilizzando il metodo
TPSA Dimension® . I risultati di PSA, il corrispondente DRE ed i
risultati della biopsia sono mostrati in basso.
Dade Behring Inc.
EC REP
Totale
242
962
7.73
1204
778
160
938
184
82
266
Metodo
PPV%
DRE+ solo
PSA>4.0 solo
PSA >4.0 o DRE+
PSA>4.0 e DRE+
PSA>4.0 e DRE-
48.0
39.0
37.8
60.6
34.6
Intervallo di confidenza al 95%
41.7 – 54.0
35.9 – 42.1
34.8 – 40.7
50.9 – 80.0
29.2 – 40.0
La concentrazione di PSA nel siero non dovrebbe essere interpretata
come evidenza definitiva della presenza/assenza del tumore.
E’richiesta la biopsia alla prostata per la diagnosi del tumore.
Valori attesi nella gestione dei pazienti con tumore alla prostata –
La distribuzione dei valori di TPSA determinati in 393 soggetti sani e
1213 soggetti inviati da un urologo per la determinazione della
presenza di tumore alla prostata è mostrata in tabella:
Distribuzione dei valori PSA, Percentuale (%)
Numero
di
0-4
4.1-10 10.1-30 30.1- 60 >60
soggetti (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml) (ng/ml)
Soggetti sani
Maschi 50-59 anni
Maschi 60-69 anni
Maschi 70+ anni
Danni Prostatici
BPH
Prostatitis
Neoplasma prostatico
intraepiteliale (PIN)
Sospetto di
tumore
Tumore prostatico
160
130
103
92.0
89.0
81
8.0
9.0
19
0.0
2.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
373
89
30.9
28.6
56.8
58.7
11.8
12.7
0.5
0.0
0.0
0.0
264
25.0
59.0
16.0
0.0
0.0
63
424
30.1
11.8
52.9
54.0
17.0
27.6
0.0
3.3
0.0
3.3
Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire il proprio intervallo di
riferimento per PSA come effettuato sul sistema Dimension®.
Quando si cambia il dosaggio di PSA nel corso del monitoraggio di
un paziente, si dovrebbero effettuare dei doaggi sequenziali per
confermare i valori di base.
Caratteristiche specifiche di prestazioneh
Riproducibilitài,j
Media
Deviazione Standard (C. V. %)
Materiale
ng/ml [µg/l]
Intra-serie
Totale
1st fold
Plasma pool
0.79
0.02 (2.0)
0.03 (4.6)
Pool di Siero 1
3.64
0.08 (2.2)
0.14 (3.8)
Pool di Siero 2
76.42
1.04 (1.4)
2.30 (3.0)
Liquichek™ 1
0.45
0.02 (5.0)
0.03 (5.8)
Liquichek™ 2
2.40
0.04 (1.5)
0.07 (3.1)
Liquichek™ 3
17.77
0.24 (1.3)
0.50 (2.8)
Liquichek™ Immunoassay Plus Control sono un marchio registrato della BioRad Laboratories, Irvine, CA 92618.
h. Tutte le prove delle caratteristiche specifiche di prestazione sono state
eseguite dopo aver effettuato le normali verifiche del controllo di qualità
raccomandate per lo strumento (vedere le Istruzioni d'uso).
i. Prove di riproducibilità effettuate con la NCCLS Approved Guideline for
Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices
(EP5-A, Feb.1999).
j. I campioni a ciascun livello sono stati analizzati in duplicato per 20 giorni. Le
deviazioni standard intra-serie e tra-serie sono state calcolate mediante
l’analisi della varianza del metodo.
Sensibilità analitica
La sensibilità del metodo PSA è 0.05 ng/ml [ug/l] e rappresenta la più
bassa concentrazione di PSA che possa essere distinta dallo 0.
Questa sensibilità è definita come la concentrazione a due deviazioni
standard sopra gli Livello 1 (0 ng/ml [ug/l]) del Calibratore (n=20).
Specificità analitica
Vedere la sezione Sostanze interferenti note per ulteriori dettagli.
Il test TPSA riconosce il PSA e il PSA-ACT in forma libera su una base
equimolare.
Recupero
Sono state eseguite più diluizioni con acqua dei campioni di siero e
plasma con valori PSA pari a 1.54-22.40 ng/ml [µg/l].
Sono state misurate le concentrazioni di TPSA di tali campioni ed è
stata calcolata la percentuale di recupero. Tale percentuale oscillava
tra 96.0 e il 103% con un valore medio del 101%.
Interpretazione Simboli: Vedere la sezione aggiunta.
Bibliografia: Vedere la sezione aggiunta.
Dimension® e Flex® sono un marchio registrato della Dade Behring
Inc. presso l’Ufficio Brevetti e Marchi in U.S. in Germania ed in molti
altri paesi.
Un asterisco (*) indica una sezione aggiornata.
United Kingdom
0843
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2nd fold
12" @ 100%
Coefficienti assegnati:
116
299
10.07
415
269
97
366
30
19
49
Il valore predittivo (PPV) è stato stimato come probabilità di avere
una biopsia positiva sulla base di un risultato positivo per DRE, PSA e
PSA con DRE. I risultati sono i seguenti:
40 µl
30 µl
50 µl
37.0 °C
9 minuti
*Calibrazione
Si devono tenere in considerazione le seguenti specifiche durante la
calibrazione del metodo TPSA:
Ambito di misura
Materiale di riferimento:
Livelli di calibrazione suggeriti:
Schema di Calibrazione:
Frequenza di calibrazione:
126
663
6.68
789
509
63
572
154
63
217
2003-06 D PN 755451.001-IT
Provetta di reazione
• Volume del Campione:
• CrO2-Anticorpo:
• PSA Ab-β-galattosidasi:
• Temperatura:
• Periodo d’incubazione:
Cuvetta
• Volume trasferito:
• Volume del reattivo (CPRG):
• Temperatura:
• Periodo d’incubazione:
• Lunghezza d’onda:
• Tipo di misura:
• Unità:
DRE +
DRE Media PSA (ng/ml)
Totale
PSA > 4.0, DRE PSA > 4.0, DRE +
Totale
PSA ≤ 4.0, DRE PSA ≤ 4.0, DRE +
Totale
®
TPSA
Cartucho de Reactivos Flex® Antígeno Específico Total de
la Próstata
AVISO: La ley Federal de los Estados Unidos restringe la venta y
distribución de este producto a o por orden de un médico, a un
laboratorio clínico, y su uso está restringido a o por orden de
un médico.
Atención: La concentración de TPSA en un espécimen dado
determinada con ensayos de diferentes fabricantes puede variar
debido a diferencias en los métodos del ensayo y a la
especificidad del reactivo. Los resultados enviados por el
laboratorio al médico deben incluir la identidad del ensayo de
PSA utilizado. Los valores obtenidos con diferentes métodos no
se pueden intercambiar. Si, en el transcurso del seguimiento de
un paciente, el método para determinar las concentraciones de
PSA cambia en serie, se deben llevar a cabo pruebas
secuenciales adicionales. Antes de cambiar los ensayos, el
laboratorio DEBE confirmar los valores de línea de base de los
pacientes que están sometidos a seguimiento en serie.
Uso: El método para TPSA del sistema de química clínica
Dimension® con el módulo de inmunoensayo heterogéneo es un
análisis de diagnóstico in vitro que tiene por objeto la
determinación cuantitativa del antígeno específico prostático
(PSA) en suero y plasma humano:
1. como ayuda en la detección de cáncer de próstata cuando se
usa junto con un examen rectal digital (DRE) en hombres de
50 años o mayores. La biopsia de la próstata se necesita para
el diagnóstico del cáncer
2. como ayuda para el seguimiento (monitorización) de los
pacientes con cáncer de próstata.
Resumen: El antígeno específico prostático (PSA) es una proteasa
sérica de aproximadamente 30000 Daltons producida por las
células epiteliales de la glándula prostática.1.2 La concentración de
PSA en el suero y otros tejidos es normalmente muy baja. En
enfermedades malignas de la próstata (adenocarcinoma
prostático) y en trastornos no malignos tales como la hipertrofia
benigna de la próstata (BPH) y prostatitits, la concentración de
PSA en el suero se puede elevar.3
En suero, el PSA se encuentra básicamente en tres formas: ligado
a α 1-antiquimiotripsina (ACT) o a α 2-macroglobulina, y libre.4,5
La proteína PSA ligada a α 2-macroglobulina está encapsulada, no
pudiendo medirse con los actuales sistemas de inmunoensayo. El
ensayo TPSA del Dimension® mide tanto la fracción libre como la
ligada a ACT de PSA en suero.
La especificidad del PSA en los tejidos de la próstata lo convierten
en marcador significativo para la detección precoz y el tratamiento
de las enfermedades de la próstata.
El cáncer de próstata es el tipo de cáncer más habitual en los
hombres en los Estados Unidos y la segunda causa de muerte por
cáncer de los varones, con un total de más de 30000 muertes en
1999.6 Antes del uso del PSA para la detección precoz del cáncer
de próstata, el tradicional método del examen rectal digital (DRE)
detectaba considerablemente pocos tumores.3,6 El método más
sensible para la detección precoz del cáncer de próstata utiliza
ambos métodos la DRE y el PSA. La Asociación Americana de
Urología (AUA) ratificó la necesidad de un examen anual para la
detección precoz del cáncer de próstata con DRE y PSA a partir de
los 50 años de edad. Una DRE anormal o un PSA elevado puede
sugerir la presencia de cáncer de próstata, sin embargo se
requiere una biopsia de la próstata para el diagnóstico final.6
Los análisis de PSA también se aceptan como una prueba para la
monitorización de paciententes con cáncer de próstata
previamente diagnosticados.7,8 Las concentraciones de PSA en
suero son más útiles si se obtienen de una manera secuencial y se
siguen en el tiempo. Después de una extirpación de la glándula
prostática (prostactectomía radical), las concentraciones de PSA
descienden a valores indetectables o muy bajos. Una subida en la
concentración de PSA en el suero en pacientes
prostatectomizados indica la existencia de residuos de tejido
prostático, recurrencia o metástasis de la enfermedad.9 Las
concentraciones de PSA en el suero durante un tratamiento con
radiación bajan y permanecen estables mientras el paciente está
en remisión.10
Principios del Procedimiento: El método del TPSA es un
enzimoinmunoensayo de una etapa basado en el principio
“sandwich”. La muestra se incuba con partículas de dióxido de
cromo (IV) recubiertas con anticuerpos monoclonales específicos
contra una parte del PSA, y conjugado (β-galactosidasa unida a
anticuerpos monoclonales específicos contra una segunda parte
de la molécula del PSA) para formar un “sandwich” partícula/
PSAa/conjugado. Las condiciones de incubación se han
optimizado para producir inmunorreacciones equivalentes tanto
con el PSA libre como con el complejo PSA-ACT. El conjugado
que queda libre y el analito se separan de la mezcla de reacción
mediante una separación magnética y un lavado. El “sandwich”
que contiene la β-galactosidasa se combina con el sustrato
cromogénico rojo de clorofenol-β-d-galactopiranósido (CPRG).
La hidrólisis del CPRG libera un cromóforo (CPR). El cambio de
color medido a 577 nm debido a la formación de CPR es
directamente proporcional a la concentración de PSA presente en
la muestra del paciente.
PSAa
+
CrO2-Ac
————————>
+
F(ab')2-β-galactosidasa
+
CrO2-Ac
+
+
lavado
CrO2-Ac
——————————>+
+
CrO2-Ac
(transferido a la cubeta)
CPRG
(no absorbe a 577 nm)————————> CPR (absorbe a 577 nm)
a. El término PSA aquí utilizado incluye el PSA libre y los complejos PSA-ACT.
Reactivos
Pocillosb Forma
Ingrediente
1
Líquido
2
3
Líquido
Tabletae
PSA Ac-β-d
galactosidasa
Diluyente Cr
Anticuerpo-CrO2d
Concentraciónc
Origen
0.09 mg/mL
Ratón,
monoclonal
4.8 mg/mL
1.8 mg/mL
Ratón,
monoclonal
4,5,6
Tabletase CPRG
10.3 mg/mL
7
Líquido Diluyente CPRG
42 mg/mL
b. Los pocillos están numerados consecutivamente a partir del extremo
ancho del cartucho.
c. Valor nominal en el cartucho hidratado.
d. El título del anticuerpo y la actividad del conjugado pueden variar de lote
a lote.
e. Las tabletas contienen excipientes, tampones y estabilizantes
Precauciones: Las cubetas usadas contienen fluidos orgánicos
humanos; manejar con el cuidado apropiado para evitar el
contacto con la piel o la ingestión.
Para uso diagnóstico in vitro
Preparación del Reactivo: La mezcla y la dilución son efectuadas
automáticamente por el instrumento.
Conservación: Guardar a 2 – 8° C.
Fechas de Caducidad: Ver la fecha de caducidad en la caja de
cada cartucho de reactivo cerrado. Los pocillos sellados o no
hidratados de cartuchos en el instrumento, son estables 30 días.
Los pocillos 1,2,3 y 7 abiertos por el instrumento son estables 15
días. Los pocillos 4, 5 y 6 abiertos por el instrumento son estables
5 días.
Recogida de muestras: El suero y el plasma con heparina de litio
pueden recogerse siguiendo procedimientos normales.11
Las muestras de suero y plasma deben separarse de las células
dentro de las cuatro horas posteriores a la extracción venosa. Las
muestras deben conservarse a 4 °C y analizarse en un plazo de 8
horas. Para un almacenamiento más prolongado, las muestras
deben congelarse a una temperatura de –20 °C o inferior. Las
muestras son estables durante al menos cuatro meses si se
almacenan a -80 °C.12
Las muestras deben estar libres de partículas. Para prevenir la
formación de fibrina en las muestras de suero, se debe esperar
hasta la completa formación del coágulo antes de centrifugar. El
tiempo de coagulación puede verse incrementado debido a una
terapia con anticoagulantes o trombolítica.
Se puede observar una concentración del PSA falsamente elevada
si la muestra de suero es tomada siguiendo una palpación rectal,
una biopsia o una resección transuretal.13
Cada laboratorio debe determinar la aceptabilidad de sus propios
tubos de recogida de sangre y de productos de separación del
suero. Pueden presentarse variaciones entre fabricantes, y a
veces, entre lotes.
Sustancias de Interferencia Conocida
Las sustancias siguientes no tienen efectos (menos del 10%) en
el método TPSA a las concentraciones indicadas cuando se
añadieron a un "pool" de sueros de 4.5 ng/mL de PSA:
Acetaminofeno
20 mg/dL
Acetato de Goserelina
0.01 mg/dL
Acetato de Leuprolida
10 mg/dL
Acetato de Megestrol
2 mg/dL
Acido Ascórbico
3 mg/dL
Acido Salicílico
50 mg/dL
Acido Urico
20 mg/dL
Acido Valproico
50 mg/dL
Albúmina
6.8 g/dL
Amicacina
15 mg/dL
Aminoglutetimido
6 ng/mL
Ampicillina
5 mg/dL
Bilirrubina
60 mg/dL
Cafeína
10 mg/dL
Calicreína plasmática humana 100 µg/mL
Carbamazepina
12 mg/dL
Cetoconazol
7 mg/dL
Ciclofosfamida
25 mg/dL
Cimetidina
10 mg/dL
Cloranfenicol
25 mg/dL
Clordiazepóxido
2 mg/dL
Clorpromazina
5 mg/dL
Colesterol
500 mg/dL
Creatinina
30 mg/dL
Dextran 75
2500 mg/mL
Diazepam
2 mg/dL
Dietilstilbestrol
0.02 mg/dL
Digoxina
5 ng/mL
Doxorrubicina-HCl
7 mg/dL
Eritromicina
20 mg/dL
Etanol
350 mg/dL
Etosuximida
30 mg/dL
Fenobarbital
15 mg/dL
Fenitoína
10 mg/dL
Finasterida
0.2 mg/dL
Flutamida
1 mg/dL
Fosfato de estramustina
20 mg/dL
Furosemida
2 mg/dL
Gentamicina
12 mg/dL
Hemoglobina
1000 mg/dL
Heparina
8000 U/L
Ibuprofeno
40 mg/dL
Hemoglobina G
6 g/dL
Factor Reumatoide
571 IU/mL
Lidocaína
6 mg/dL
Lipemia
3000 mg/dL
6.0" @ 100 %
[1322 µmol/L]f
[79 nmol/L]
[86 µmol/L]
[52 µmol/L]
[170.3 µmol/L]
[3.62 mmol/L]
[1.2 mmol/L]
[3.467 mmol/L]
[68 g/L]
[256 µmol/L]
[26 nmol/L]
[143 µmol/L]
[1026 mmol/L]
[515 µmol/L]
[1 µmol/L]
[508 µmol/L]
[132 µmol/L]
[896 µmol/L]
[397 µmol/L]
[774 µmol/L]
[67 µmol/L]
[157 µmol/L]
[12.9 mmol/L]
[2652 µmol/L]
[25 g/L]
[70 µmol/L]
[700 nmol/L]
[6.4 nmol/L]
[121 µmol/L]
[272 µmol/L]
[76 mmol/L]
[2125 µmol/L]
[646 µmol/L]
[396 µmol/L]
[5.4 µmol/L]
[36 µmol/L]
[343 µmol/L]
[60 µmol/L]
[251 µmol/L]
[0.62 mmol/L] (monómero)
[8000 U/L]
[1939 µmol/L]
[60 g/L]
[571 IU/mL]
[256 µmol/L]
[33.9 mmol/L] (triglicérido)
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
1st fold
2nd fold
12" @ 100%
Spanish
REF RF451
Litio
3.5 mg/dL [5.04 mmol/L]
Metotrexato
300 mg/dL [7 mmol/lL]
Nicotina
Penicilina G
25 U/mL [25,000 U/L]
Pentobarbital
Primidona
Propoxifeno
0.4 mg/dL [12 µmol/L]
Fosfatasa Acida Prostática
1000 ng/mL [1000 µg/L]
Proteína (alta)
4 g/dL [40 g/L]
Proteína (baja)
12 g/dL [120 g/L]
Teofilina
Urea
500 mg/dL [83.3 mmol/L]
f. Las unidades del Système International d’Unités se indican entre paréntesis.
Valores esperados en la detección del cáncer de próstata: La tabla
siguiente resume los resultados de un estudio retrospectivo de 1204
muestras de hombres de 50 o más años que fueron remitidos al
urólogo para determinar la presencia de un cáncer de próstata. Estas
muestras se recogieron en 5 lugares diferentes de los Estados
Unidos. A todos estos hombres se les había practicado una biopsia.
Se determinó el PSA de las muestras con el método de TPSA del
Dimension® . Más abajo se muestran los resultados del PSA con sus
correspondientes DRE y resultados de las biopsias. El estudio
demostró que el uso del PSA junto con la DRE, fue más efectivo en la
detección del cáncer de próstata que solamente usando la DRE.
Distribución de los resultados:
Procedimiento
Materiales Necesarios
Cartucho de reactivos TPSA Flex®, Cat. No. RF451
Cubiletes de Reacción, Cat. No. RXV1A
Solución de Lavado, Cat. No. RD701
Solución de Limpieza de la Cánula de Muestra, Cat. No. RD703
Resultado Biopsia
Benigna
Maligna
Proceso del Análisis
El muestreo, dispensación de reactivos, mezcla, separación, proceso e
impresión de los resultados, son automáticamente efectuados por el
sistema Dimension® con el módulo de inmunoensayo heterogéneo.
Para más detalles, referirse al manual de su sistema Dimension®.
Condiciones de la Prueba
5, 2, 3, 2, 3 (niveles ordenados, del más bajo
al más alto)
Cada lote nuevo de cartuchos de reactivo o cada
90 días para el mismo lote
C0 -1000.0
C3 200.0
C1 3000.0
C4 0.5
C2 -2.0
g. El calibrador T/F PSA tiene 6 niveles. Para calibrar únicamente el TPSA,
utilice los frascos con las etiquetas 1, 2, 4, 5 y 6. No utilice el frasco con la
etiqueta 3.
Control de Calidad
Al menos una vez cada día de uso, analizar dos niveles control de
PSA. Si los resultados no están dentro de los límites aceptables del
laboratorio, seguir los procedimientos descritos en el manual de su
sistema Dimension®.
Existe la posibilidad de un funcionamiento incorrecto del instrumento si se
observa la precisión siguiente en 5 pruebas consecutivas:
Concentración de PSA
D.E. (Desviación Estándar)
4.0 ng/mL [µg/L]
> 0.22 ng/mL [µg/L]
50.0 ng/mL [µg/L]
> 2.63 ng/mL [µg/L]
*Resultados: : El instrumento calcula e imprime automáticamente la
concentración de PSA total en ng/mL[µg/L] utilizando el esquema de
cálculos que aparece en el manual del sistema Dimension®.
Si van a utilizarse en el diagnóstico y tratamiento, los resultados de
este análisis deben interpretarse considerando además el historial
clínico del paciente, la sintomatología y otros resultados diagnósticos.
Limitaciones del Procedimiento
Resultados:
Dilución manual:
Autodilución (AD):
Resultados:
> 100 ng/mL [µg/L]
Realice la dilución adecuada con agua destilada para
obtener resultados dentro del intervalo del ensayo.
Introduzca un factor de dilución. Reanalice. Los
resultados queda corregidos por la dilución efectuada.
Consulte el manual del sistema Dimension®. El volumen
recomendado para la autodilución es de 2 µL.
<0.05 ng/mL [µg/L] deben informarse como “menor de
0.05 ng/mL [µg/L]” en lugar de su valor numérico.
Las concentraciones del PSA pueden ser menores en pacientes que
reciban terapia hormonal y que puedan no reflejar de una manera
adecuada la presencia o recurrencia de la enfermedad.9
Los ensayos inmunométricos de una etapa tipo “sandwich,” son
susceptibles de presentar un efecto prozona, en el que un exceso de
antígeno impide la unión simultánea de los anticuerpos de captura y
de detección a una molécula individual de analito.14 El método TPSA
no muestra efecto prozona hasta por lo menos 15000 ng/mL [µg/L].
Las muestras de pacientes pueden contener anticuerpos heterofílicos
que podrían reccionar en un inmunoensayo dando resultados
falsamente altos o bajos. Este ensayo ha sido diseñado para
minimizar la interferencia por anticuerpos heterofílicos.15
El sistema de informes del instrumento proporciona mensajes de
errores que advierten al operador sobre fallos específicos de
funcionamiento. Cualquier informe que contenga mensajes de error
debe ser retenido para revisión. Referirse al manual de su sistema
Dimension®.
Dade Behring Inc.
EC REP
United Kingdom
Total
242
962
7.73
1204
778
160
938
184
82
266
PPV%
DRE+ unicamente
PSA>4.0 unicamente
PSA >4.0 o DRE+
PSA>4.0 y DRE+
PSA>4.0 y DRE-
48.0
39.0
37.8
60.6
34.6
Intervalo de confianza del 95%
41.7 – 54.0
35.9 – 42.1
34.8 – 40.7
50.9 – 80.0
29.2 – 40.0
Las concentraciones de PSA en suero, a pesar de su valor, no se
deben interpretar como una evidencia definitiva de la presencia o
ausencia de un cáncer de próstata. Se requiere una biopsia de la
próstata para el diagnóstico del cáncer.
Valores esperados en el control de pacientes con cáncer de
próstata – La tabla siguiente muestra la distribución de los valores
TPSA determinados en 393 individuos sanos y en 1213 individuos
que fueron remitidos a un urólogo para determinar la presencia de un
cáncer de próstata.
Distribución de los valores del PSA
Número
Porcentaje (%)
de
0-4
4.1-10 10.1-30 30.1- 60 >60
Sujetos (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL)
Sujetos Sanos
Varones 50-59 yrs
160
Varones 60-69 yrs
130
Varones 70+ yrs
103
Enfermedades prostáticas
BPH
373
Prostatitis
89
Neoplasma prostático 264
intraepitelial (PIN)
Sospecha de cáncer
63
Cáncer de próstata
424
92.0
89.0
81
8.0
9.0
19
0.0
2.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
30.9
28.6
25.0
56.8
58.7
59.0
11.8
12.7
16.0
0.5
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
30.1
11.8
52.9
54.0
17.0
27.6
0.0
3.3
0.0
3.3
1st fold
Cada laboratorio debe establecer sus propios valores esperados para
PSA obtenidos en el sistema Dimension®.
Cuando se cambian ensayos de PSA en el transcurso de la
monitorización de un paciente, se deben realizar análisis
secuenciales adicionales para confirmar los valores de base.
Características Específicas de Funcionamientoh
Reproducibilidadi,j
Material
Media
ng/mL [µg/L]
Desviación Estándar (% CV)
Intra-serie
Total
"Pool" de plasmas
0.79
0.02 (2.0)
0.03 (4.6)
"Pool" de sueros1
3.64
0.08 (2.2)
0.14 (3.8)
"Pool" de sueros 2
76.42
1.04 (1.4)
2.30 (3.0)
Liquichek™ 1
0.45
0.02 (5.0)
0.03 (5.8)
Liquichek™ 2
2.40
0.04 (1.5)
0.07 (3.1)
Liquichek™ 3
17.77
0.24 (1.3)
0.50 (2.8)
Liquichek™ Immunoassay Plus Control es una marca registrada de Bio-Rad
Laboratories, Irvine, CA 92618.
h. Todos los ensayos para definir las características específicas de
funcionamiento, fueron procesados después que se efectuaron las
comprobaciones normales y recomendadas de control de calidad del equipo.
(Referirse al manual de su sistema Dimension®.)
i. El estudio de reproducibilidad se hizo de acuerdo a la NCCLS Approved
Guideline for Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry
Devices (EP5-A, Feb.1999).
j. Las muestras fueron analizadas a cada nivel por duplicado durante 20 días.
Las desviaciones estándar intra-serie y total fueron calculadas por el método
de análisis de la variancia.
Sensibilidad Analítica
La sensibilidad del método PSA es 0.05 ng/mL [µg/L], y representa la
concentración más baja del PSA que puede ser distinguida de cero.
Esta sensibilidad se define como la concentración a dos desviaciones
estándar por encima del Calibrador 1 (0 ng/mL [µg/L]) (n= 20).
Especificidad Analítica
Consulte la sección de sustancias de interferencia conocida para
obtener más detalles. La prueba de TPSA reconoce el PSA libre y el
PSA-ACT siguiendo una base equimolar.
Recuperación
Se han realizado múltiples diluciones con agua de suero y plasma con
valores de PSA entre 1.54 y 22.40 ng/mL [µg/L].
La concentración de las muestras de TPSA se ha medido,
calculándose el porcentaje de recuperación. La recuperación
apareció en un intervalo entre 96.0 y 103 % con una recuperación
media del 101%.
Clave de los Símbolos: Ver hoja adjunta.
Bibliografía: Ver hoja adjunta.
Dimension® y Flex® son marcas registradas de Dade Behring Inc., en
la Oficina de Patentes y Marcas Registradas de los EEUU, en Alemania
y muchos otros países.
Un asterisco (*) una seccione revisada.
0843
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2nd fold
12" @ 100%
60 µL
150 µL
37.0 °C ± 0.1°C
5 minutos
577 y 700 nm
Cinética Bicromática
ng/mL [µg/L]
Método
0.05 - 100.0 ng/mL [µg/L]
Calibrador de T/F PSA Cat No. RC452g
0.0, 4.0, 20.0, 50.0, 108.0 ng/mL [µg/L]
Coeficientes asignados:
116
299
10.07
415
269
97
366
30
19
49
El Poder Predictivo (PPV) se estimó como la probabilidad de tener
una biopsia positiva dando un resultado positivo para DRE, PSA y
PSA con DRE. Los resultados son los siguientes:
40 µL
30 µL
50 µL
37.0 °C
9 minutos
*Calibración
El procedimiento general para la calibración se describe en el manual
de su sistema Dimension®.
Para la calibración del método de TPSA deben considerarse los
siguientes datos:
Intervalo de ensayo
Material de referencia:
Niveles de calibración
recomendados:
Esquema de calibración
replicados:
Frecuencia de calibración:
126
663
6.68
789
509
63
572
154
63
217
2003-06 D PN 755451.001-ES
Cubilete de reacción
• Volumen de muestra:
• Anticuerpos-CrO2:
• Ab-β-galactosidasa:
• Temperatura:
• Periodo de incubación:
Cubeta de reacción
• Volumen transferido:
• Volumen de reactivo (CPRG):
• Temperatura:
• Periodo de incubación:
• Longitud de onda:
• Tipo de medición:
• Unidades:
DRE +
DRE Media PSA (ng/mL)
Total
PSA > 4.0, DRE PSA > 4.0, DRE +
Total
PSA ≤ 4.0, DRE PSA ≤ 4.0, DRE +
Total
®
TPSA
Cartucho de reagente Flex® Antigénio Específico
Total da Próstata
CUIDADO: A legislação federal dos EUA restringe a venda e
distribuição deste dispositivo por um médico ou por sua
indicação, ou a um laboratório clínico; deve também ser utilizado
por um médico ou sob indicação deste.
Advertência: A concentração de TPSA numa dada amostra
determinada com ensaios de diferentes fabricantes pode variar de
acordo com as diferenças entre os métodos de ensaio e a
especificidade do reagente. O resultados reportados pelo
laboratório ao médico devem incluir a identificação do ensaio de
PSA utilizado. Os valores obtidos com métodos de doseamento
diferentes não podem ser utilizados alternadamente. Se, no
decurso da monitorização de um doente, o ensaio utilizado para a
determinação dos níveis de PSA for alterado, deverão ser
efectuados testes sequenciais adicionais. Antes de mudar os
ensaios, o laboratório DEVE confirmar os valores basais dos
doentes a monitorizar sequencialmente.
Fim a que se destina: O método TPSA para o sistema de química
clínica Dimension® com o módulo de imunoensaio heterogéneo é
um teste para diagnóstico in vitro destinado à medição quantitativa
do antigénio específico total da próstata (PSA) em soro e plasma
humanos:
1. como meio auxiliar de detecção de cancro da próstata quando
utilizado em conjunto com o exame toque rectal (ETR) em
homens com idade igual ou superior a 50 anos. é necessária
uma biopsia da próstata para diagnóstico de cancro,
2. como auxiliar na gestão (monitorização) de doentes com
cancro da próstata.
Resumo: O antigénio específico da próstata (PSA – prostate
specific antigen) é uma protease serina com um peso aproximado
de 30.000 Daltons produzida pelas células epiteliais da próstata.1,2
O nível de PSA no soro e outros tecidos é normalmente muito
baixo. Em afecções malignas da próstata (adenocarcinoma da
próstata) e em afecções não malignas como a hipertrofia benigna
da próstata (benign prostate hypertrophy - BPH) e a prostatite, o
nível sérico de PSA pode tornar-se elevado.3
No soro, o PSA existe principalmente sob três formas: sob a forma
de um compelxo com α 1-antiquimiotripsina (ACT) ou α 2macroglobulina e sob a forma livre.4,5 A proteína PSA associada
com a α 2-macroglobulina encontra-se encapsulada e não está
disponível para medição pelos actuais sistemas de imunoensaio. O
ensaio Dimension® TPSA mede os componentes livre e ligado à
ACT do PSA sérico.
A especificidade do PSA para o tecido da próstata torna-o num
marcador importante para a detecção precoce e gestão de doenças
da próstata.
O cancro da próstata é o tipo mais comum de cancro encontrado
nos homens nos Estados Unidos e a segunda maior causa de
mortalidade masculina devida a cancro, contribuindo para mais de
30,000 mortes em 1999.6 Antes da utilização do PSA para a
detecção precoce do cancro da próstata, o método tradicional de
exame toque rectal (ETR) detectava um número
consideravelmente inferior de tumores.3,6 O método mais sensível
para a detecção precoce de cancro da próstata recorre ao ETR e ao
PSA. A American Cancer Society e a American Urological
Association (AUA) emitiram uma recomendação no sentido de a
detecção precoce do cancro da próstata ser oferecida a homens
assintomáticos com idade igual ou superior a 50 anos com uma
expectativa de vida estimada superior a 10 anos. Um ETR anormal
e/ou um PSA elevado sugerem a presença de cancro da próstata,
embora seja necessária uma biopsia de próstata para o
diagnóstico final. 6
O ensaio do PSA é também aceite como um teste auxiliar de
gestão do cancro da próstata.7,8
Os níveis séricos de PSA são muito úteis quando são obtidos e
monitorizados valores sequenciais ao longo do tempo. Após a
remoção completa da próstata (prostatectomia radical), os níveis
de PSA diminuem para um nível muito baixo ou indetectável. Uma
subida do nível sérico de PSA em doentes prostatectomizados
indica a presença de tecido prostático residual, recorrência ou
metástase da doença.9 Os níveis séricos de PSA durante o
tratamento com radiação deverão diminuir e manter-se num nível
basal enquanto o doente se encontra em remissão.10
Princípios do procedimento: O método TPSA é um imunoensaio
enzimático de um passo, baseado no princípio da “sandwich”. A
amostra é incubada com partículas de dióxido de crómio e
reagente de conjugado de ß-galactosidase; cada um revestido com
anticorpos monoclonais que reconhecem diferentes locais de
ligação no PSA. Forma-se uma “sandwich” com a partícula de
crómio/PSAa/conjugado durante o período de incubação. As
condições de incubação são optimizadas para produzir
imunoreacções equivalentes com o PSA e com PSA-ACT. O
conjugado não ligado é removido por separação e lavagem
magnéticas. A ß-galactosidase ligada à “sandwich” é combinada
com o substrato cromogénico de ß-d-galactopiranósido vermelho
de clorofenol (CPRG). A hidrólise do CPRG liberta um cromóforo,
o vermelho de clorofenol (CPR). A alteração de cor medida a
577 nm devida à formação de CPR é directamente proporcional à
concentração de PSA presente na amostra do doente.
PSAa
+
CrO2-Ab
————————>
+
+
CrO2-Ab
+
+
lavagem
CrO2-Ab
———————>
+
+
CrO2-Ab
(transferido para a cuvete)
CPRG
(näo absorvente ——————————> CPR (absorve a 577 nm)
a 577 nm)
a. O termo PSA utilizado aqui inclui o PSA livre e complexos PSA-ACT.
Reagentes
Poçosb Forma
Ingrediente
Concentraçãoc
Fonte
1
Líquido PSA Ab-ß-galactosidased 0.09 mg/mL Rato, monoclonal
2
Líquido Diluente de cromo
4.8 mg/mL
3
Tablete Anticorpo-CrO2d
1.8 mg/mL
Rato, monoclonal
4,5,6 Tabletse CPRG
10.3 mg/mL
7
Líquido Diluente CPRG
42 mg/mL
b. Os poços são numerados consecutivamente a partir da extremidade
larga do cartucho.
c. Valor nominal no cartucho hidratado.
d. O título do anticorpo e a actividade do conjugado podem variar de lote
para lote.
e. Os comprimidos contêm excipientes, tampões e estabilizadores.
Precauções: As cuvetes utilizadas contêm líquidos biológicos
humanos; manipular com o cuidado adequado para evitar o
contacto com a pele ou a ingestão.
Para utilização em diagnóstico in vitro
Preparação do reagente: A agitação e a diluição são efectuadas
automaticamente pelo sistema Dimension®.
Instruções de armazenamento: Armazenar entre 2 e 8 °C.
Validade: Consultar a embalagem para obter a data de validade
de cada um dos cartuchos de reagentes não abertos. Os poços
dos cartuchos selados ou não hidratados no instrumento
permanecem estáveis durante 30 dias. Depois de os poços 1, 2,
3 e 7 terem sido penetrados pelo instrumento, permanecerão
estáveis durante 15 dias. Depois de os poços 4, 5 e 6 terem sido
penetrados pelo instrumento, permanecerão estáveis durante
5 dias.
Colheita de amostras: O soro e o plasma com heparina de lítio
podem ser recolhidos por procedimentos normais.11
As amostras de soro e plasma deverão ser separadas das células
num prazo de 4 horas após a punção venosa. As amostras
devem ser mantidas a 4 °C e analisadas no espaço de 8 horas.
Para armazenamento durante um período de tempo superior, as
amostras podem ser congeladas a –20 °C ou a uma temperatura
inferior. As amostras permanecem estáveis durante pelo menos
quatro meses, se armazenadas a –80 °C.12
As amostras devem estar livres de partículas. Para evitar o
aparecimento de fibrina nas amostras de soro, o coágulo deverá
estar completamente formado, antes da centrifugação. O tempo
de coagulação pode aumentar devido a terapêutica trombolítica
ou anticoagulante.
Um nível erroneamente elevado de PSA pode ser observado caso
a amostra de soro de um doente seja recolhida após o exame
toque rectal (ETR), biopsia por punção ou ressecção
transuretral.13
Cada laboratório deverá determinar a aceitabilidade dos tubos de
colheita de sangue e dos produtos de separação do soro que
utiliza. Podem existir variações nestes produtos entre fabricantes
e, por vezes, entre lotes do mesmo fabricante.
Substâncias interferentes conhecidas
As substâncias seguintes não interferem com o método TPSA
quando se encontram presentes no soro nas concentrações
indicadas. As imprecisões (desvios) sistémicas devidas a estas
substâncias são inferiores a 10% de um nível de PSA de
4.5 ng/mL.
Compound
Concentration
Acetaminofeno
20 mg/dL [1322 µmol/L]f
Albumina
6.8 g/dL [68 g/L]
Amicacina
Aminoglutetimida
6 ng/mL [26 nmol/L]
Ampicilina
Ácido ascórbico
3 mg/dL [170.3 µmol/L]
Bilirrubina
Cafeína
Carbamazepina
Cloramfenicol
Clordiazepóxido
Clorpromazina
Cimetidina
Colesterol
500 mg/dL [12.9 mmol/L]
Creatinina
Ciclofosfamida
Dextrano 75
2500 mg/dL [25 g/L]
Diazepam
Dietilstilbestrol
0.02 mg/dL [700 nmol/L]
Digoxina
5 ng/mL [6.4 nmol/L]
Doxorubicina-HCl
Eritromicina
Fosfato de estramustina
Etanol
Etosuximida
Finasterida
0.2 mg/dL [5.4 µmol/L]
Flutamida
Furosemida
Gentamicina
Acetato de goserelina
0.01 mg/dL [79 nmol/L]
Hemoglobina
1000 mg/dL [0.62 mmol/L] (monomer)
Heparina
8000 U/L [8000 U/L]
Calicerína plasmática humana 100 µg/mL [1 µmol/L]
Ibuprofeno
Immunoglobulina G
6 g/dL [60 g/L]
Cetoconazole
Acetato de leuprolida
Lidocaína
Lipémia
3000 mg/dL [33.9 mmol/L] (triglyceride)
Lítio
3.5 mg/dL [5.04 mmol/L]
Acetato dfe megestrol
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
1st fold
2nd fold
12" @ 100%
Portuguese
REF RF451
[7 mmol/L]
[123 µmol/L]
[25,000 U/L]
[442 µmol/L]
[646 µmol/L]
[396 µmol/L]
[458 µmol/L]
[12 µmol/L]
[1000 µg/L]
[40 g/L]
[120 g/L]
[571 IU/mL]
[3.62 mmol/L]
[1388 µmol/L]
[179 µmol/L]
[1.2 mmol/L]
[3.467 mmol/L]
Valores esperados na detecção do cancro da próstata
A tabela seguinte resume os resultados de um estudo retrospectivo
utilizando amostras de 1204 homens com idade igual ou superior a
50 anos, que foram indicados a um urologista para determinação da
presença de cancro da próstata. Estas amostras foram recolhidas em
cinco locais de estudo clínico nos EUA. Todos estes indivíduos já
tinham sido submetidos a uma biopsia. As amostras foram testadas
para PSA utilizando o método Dimension® TPSA. Os resultados de
PSA e os resultados correspondentes do ETR e biopsia são
apresentados abaixo. O estudo demonstra que o ensaio TPSA quando
utilizado em conjunto com o ETR foi mais eficaz na detecção de
cancro da próstata que o ETR individualmente.
Distribuição dos resultados:
Resultado da biopsia
Benigno
Maligno
f. Sistema Internacional de Unidades (Unidades S.I.) entre parêntesis.
Procedimento
ETR +
126
ETR 663
PSA médio (ng/mL) 6.68
Total
789
PSA > 4.0, ETR 509
PSA > 4.0, ETR +
63
Total
572
PSA ≤ 4.0, ETR 154
PSA ≤ 4.0, ETR +
63
Total
217
Materiais necessários
Cartucho de reagente Flex® TPSA, N° de Catálogo RF451
Cuvetes de reacção, N° de Catálogo RXV1A
Solução de lavagem química, N° de Catálogo RD701
Solução de limpeza da sonda da amostra, N° de Catálogo RD703
Passos do teste
A recolha da amostra, dispensação do reagente, agitação,
processamento e impressão dos resultados são realizados
automaticamente pelo sistema Dimension® com o módulo de
imunoensaio heterogéneo. Para obter pormenores sobre este
processamento, consultar o manual do sistema Dimension®.
Condições de teste
40 µL
30 µL
50 µL
37.0° C
9 minutos
60 µL
150 µL
37.0 ± 0.1° C
5 minutos
577 e 700 nm
Taxa bicromática
ng/mL[µg/L]
*Calibração
O procedimento geral de calibração encontra-se descrito no manual
do sistema Dimension®. Na calibração do método TPSA, deverão ser
tomadas em consideração as seguintes informações:
Intervalo do ensaio
Material de referência
Níveis de calibração
Esquema de calibração,
replicados
Frequência da calibração:
Coeficientes Atribuídos:
0.05 – 100.0 ng/ml [µg/l]
Calibrador T/F PSA N° de Cat. RC452g
0.0, 4.0, 20.0, 50.0, 108.0 ng/ml[µg/l]
5, 2, 3, 2, 3 (níveis por ordem, baixo para elevado)
Cada lote novo de cartucho de reagente.
Cada 90 dias para qualquer lote.
C0: -1000.0, C1: 3000.0, C2: -2.0, C3: 200.0, C4: 0.5
g. O calibrador T/F PSA contém 6 níveis. Para calibrar exclusivamente o
TPSA, utilizar os níveis: 1, 2, 4, 5, 6. Nåo utilizar o frasco com rótulo 3.
Controlo da Qualidade
Pelo menos uma vez em cada dia de utilização, analisar dois níveis de
um material de controlo da qualidade com concentrações de PSA
conhecidas. Os resultados obtidos situam-se dentro dos limites
aceitáveis definidos pelo laboratório. Para mais pormenores,
consultar o manual do sistema Dimension®.
Pode verificar-se uma avaria no sistema caso se observem os
seguintes valores na verificação com cinco ensaios de precisão:
Concentração de PSA
Desvio Padrão
4.0 ng/mL [µg/L]
> 0.22 ng/mL [µg/L]
50.0 ng/mL [µg/L]
> 2.63 ng/mL [µg/L]
*Resultados: O instrumento calcula e imprime automaticamente a
concentração de PSA total em ng/ml [µg/l], utilizando o esquema de
cálculo ilustrado no manual do sistema Dimension®.
Para efeitos de diagnóstico e tratamento, os resultados deste teste
devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico
do doente, o estado clínico e outras indicações.
Limitações do procedimento:
Resultados:
Diluição manual:
Auto-diluição:
Resultados:
> 100 ng/ml[µg/l]
Para obter resultados que se encontrem dentro do
intervalo do ensaio, efectuar a diluição apropriada com
Água Purificada. Introduzir o factor de diluição. Voltar a
efectuar o ensaio. A leitura do resultado é corrigida por
diluição.
Consultar o manual do sistema Dimension®.
O volume de auto-diluição recomendado é de 2 µl.
< 0.05 ng/ml[µg/l] deve ser registado como “inferior a
0.05 ng/ml[µg/l]”.
Os níveis de PSA podem ser inferiores em doentes submetidos a
terapêutica hormonal e poderão não reflectir adequadamente a
presença de tecido residual ou doença recorrente.9
Os ensaios imunométricos em “sandwich” com um passo são
susceptíveis de um efeito prozona em dose elevada, onde um excesso
de antigénio evita simultaneamente a ligação dos anticorpos de
captura e detecção a uma única molécula de analito.14 O método
TPSA não apresenta qualquer efeito prozona até aos
15000 ng/ml[µg/l].
As amostras de doentes podem conter anticorpos heterofílicos que
podem reagir nos imunoensaios de modo a produzir resultados
falsamente elevados ou reduzidos. Este ensaio foi concebido para
minimizar a interferência dos anticorpos heterofílicos.15
O sistema de emissão de relatórios do instrumento contém
mensagens de erro para prevenir o operador de avarias específicas.
Qualquer relatório que contenha tais mensagens de erro deve ser
retido para seguimento. Consultar o manual do sistema Dimension®.
Dade Behring Inc.
EC REP
United Kingdom
242
962
7.73
1204
778
160
938
184
82
266
Método
PPV%
ETR+ apenas
PSA>4.0 apenas
PSA >4.0 ou ETR+
PSA>4.0 e ETR+
PSA>4.0 e ETR-
48.0
39.0
37.8
60.6
34.6
Intervalo de confiança de 95%
41.7 – 54.0
35.9 – 42.1
34.8 – 40.7
50.9 – 80.0
29.2 – 40.0
As concentrações séricas de PSA, independentemente do valor, não
deverão ser interpretadas como uma prova definitiva da presença ou
ausência de cancro da próstata. É necessária a biopsia da próstata
para diagnóstico de cancro.
Valores esperados na gestão de doentes com cancro da próstata –
A distribuição dos valores determinados em 393 indivíduos saudáveis
e em 1213 doentes indicados a um urologista para determinação da
presença de cancro da próstata é apresentada na tabela abaixo:
Distribuição dos valores de PSA, Percentagem (%)
Cuvete de reacção
• Volume Transferido
• Volume de reagente CPRG
• Temperatura
• Período de reacção
• Comprimento de onda
• Tipo de leitura
• Unidades
Total
O Poder de Previsão (PPV) foi calculado com base na probabilidade
de obter uma biopsia positiva face a um resultado positivo para o
ETR, o PSA e para o PSA com ETR. Os resultados são os seguintes:
Cuvete de reacção
• Volume da amostra
• Anticorpo- CrO2
• Anticorpo-ß-galactosidase
• Temperatura
• Período de reacção
116
299
10.07
415
269
97
366
30
19
49
Número
de
0-4
4.1-10 10.1-30 30.1- 60 >60
Indivíduos (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) (ng/mL)
Indivíduos saudáveis
(Homens)
com 50-59 anos de idade
com 60-69 anos de idade
com 70+ anos de idade
Doenças da próstata
HPB
Prostatite
Prostatite Intraepitelial
Neoplasma (PIN)
Suspeita de cancer
Cancro da próstata
160
130
103
92.0
89.0
81
8.0
9.0
19
0.0
2.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
373
89
30.9
28.6
56.8
58.7
11.8
12.7
0.5
0.0
0.0
0.0
264
63
424
25.0
30.1
11.8
59.0
52.9
54.0
16.0
17.0
27.6
0.0
0.0
3.3
0.0
0.0
3.3
1st fold
Cada laboratório deverá estabelecer os seus valores esperados para o
PSA, conforme executado no sistema Dimension®.
No caso de se mudarem os ensaios de PSA no decurso da
monitorização de um doente, deverão ser levados a cabo ensaios
sequenciais adicionais para confirmar os valores basais.
Características específicas de desempenho h
Reprodutibilidade i,j
Material
Média
ng/mL
Intra-ensaio
Total
Desvio Padrão (%CV) Desvio Padrão (%CV)
Plasma pool
0.79
0.02 (2.0)
0.03 (4.6)
Serum pool 1
3.64
0.08 (2.2)
0.14 (3.8)
Serum pool 2
76.42
1.04 (1.4)
2.30 (3.0)
Liquichek™ 1
0.45
0.02 (5.0)
0.03 (5.8)
Liquichek™ 2
2.40
0.04 (1.5)
0.07 (3.1)
Liquichek™ 3
17.77
0.24 (1.3)
0.50 (2.8)
Liquichek™ Immunoassay Plus Control é uma marca comercial registada da BioRad Laboratories, CA 92618.
h. Todos os testes de características de desempenho foram efectuados após a
realização das verificações normalmente recomendadas do controlo de
qualidade do equipamento (consultar o manual do sistema Dimension®).
i. Os testes de reprodutibilidade foram efectuados de acordo com a Directiva
Aprovada da NCCLS “Evaluation of Precision Performance of Clinical
Chemistry Devices” (Avaliação do Desempenho de Precisão de Dispositivos
de Química Clínica) (EP5-A, Fev.1999).
j. As amostras de cada nível foram analisadas em duplicado, duas vezes por
dia, durante 20 dias. Os desvios padrão intra-ensaio e total foram calculados
através do método da análise de variância.
Sensibilidade analítica
A sensibilidade do método TPSA é de 0.05 ng/ml [µg/l], valor que
representa a menor concentração de PSA que pode ser distinguida do
zero. Esta sensibilidade é definida como a concentração em dois
desvios padrão acima do nível 1 (0 ng/ml [µg/l]) do Calibrador
(n=20).
Especificidade analítica
Consultar a secção sobre substâncias interferentes para obter
pormenores.
O ensaio TPSA reconhece o PSA livre e a combinação PSA-ACT numa
base equimolar.
Recuperação
Foram executadas múltiplas diluições de amostras de soro e de
plasma em água, com valores de PSA de 1.54 a 22.40 ng/ml.
As concentrações das amostras de TPSA foram medidas e a
percentagem de recuperação foi calculada. A recuperação variou
de 96.0 a 103% com uma recuperação média de 101%.
Chave dos símbolos: Consulte o painel adjacente.
Bibliografia: Consulte o painel adjacente.
Dimension® e Flex® são marcas registadas da Dade Behring Inc., no
Gabinete de Patentes e Marcas Registadas dos E.U., na Alemanha e em
muitos outros países.
* As secções revistas são anotadas com um asterisco.
0843
6.0" @ 100 %
PN 755451.001 Rev D
Issued 2003-06
2nd fold
12" @ 100%
300 mg/dL
2 mg/dL
25 U/mL
10 mg/dL
15 mg/dL
10 mg/dL
10 mg/dL
0.4 mg/dL
1000 ng/mL
4 g/dL
12 g/dL
571 IU/mL
50 mg/dL
25 mg/dL
500 mg/dL
20 mg/dL
50 mg/dL
2003-06 D PN 755451.001-PT
Metotrexato
Nicotina
Penicilina G
Pentobarbital
Fenobarbital
Fenitoína
Primidona
Propoxifeno
Fosfatase ácida prostática
Proteína (low)
Proteína (high)
Factor reumatóide
Ácido Salicilico
Teofilina
Ureia
Ácido Úrico
Ácido Valpróico

0843 IVD - Medcorp Produtos Hospitalares Ltda

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