Practical notes

Prins Leopold Instituut voor Tropische Geneeskunde
Institut de Médecine Tropicale Prince Léopold
Prince Leopold Institute of Tropical Medicine
Instituto de Medicina Tropical Principe Leopoldo
Nationalestraat, 155
B – 2000 Antwerpen
Stichting van Openbaar Nut 0410.057.701
POSTGRADUATE IN TROPICAL MEDICINE AND INTERNATIONAL HEALTH
MODULE 2
CLINICAL & BIOMEDICAL SCIENCES OF TROPICAL DISEASES
Practical notes
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VITESSE DE SEDIMENTATION
DES GLOBULES ROUGES (VS)
PHILIPPE GILLET
FEVRIER 2005
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Vitesse de sédimentation. ver pg fr 02 2005
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PRINCIPE :
La détermination de la vitesse de sédimentation des globules rouges repose sur le principe
que dans du sang rendu incoagulable, les globules rouges sédimentent spontanément avec
une certaine vitesse. Cette vitesse est liée à l'équilibre protéique du plasma. Normalement,
elle est lente. Dans un grand nombre de maladie (syndrome inflammatoire), elle est
augmentée, en raison de l’augmentation des protéines dans le plasma. La hauteur de la
colonne de plasma au dessus de la couche de globules rouges mesurée en mm représente la
vitesse de sédimentation.
MATERIEL :
Matériel pour prélèvement de sang veineux à la seringue et à l’aiguille
+ tube à hémolyse, citrate trisodique à 3,8 % (p/v), balance de précision, pipette de 1 ml,
ballon à pipeter, tube de Westergren (en verre : longueur : 30 à cm, diamètre interne 25 mm,
calibrée de 0 à 200, contenance ± 1 ml ou à usage unique), appareil de Westergren,
minuterie, hypochlorite de sodium 0,25%, gants.
REACTIFS :
Préparer des tubes contenant :
Soit 3,8 g de citrate trisodique anhydre (C6H5Na3O7)
Soit 4,33 g de citrate trisodique di-hydrate (C6H5Na3O7.2H2O)
Soit quantité équivalente de citrate trisodique penta-hydrate (C6H5Na3O7.7H2O)
Le contenu de ce tube est à diluer dans 100 ml d'eau distillée. Etiqueter la solution et inscrire
la date de préparation.
Conservation :
En poudre :
En solution :
En solution :
illimité.
6 semaines au FRIGO (4°C à 8°C). A changer chaque mois.
1 semaine à température ambiante. A changer chaque semaine.
PRELEVEMENT :
Prélèvement de sang veineux méthode à la seringue et à l'aiguille. Si l'échantillon, prélevé sur
citrate, est conservé à température de chambre, le test doit être réalisé dans les 2 heures qui
suivent le prélèvement. Si le test doit être reporté, le sang peut-être collecté sur EDTA et
conservé entre 4 et 8°C. Dans ce cas, le test peut être réalisé (dilution du sang avec le citrate
trisodique et mesure de la VS) dans les 6 heures qui suivent le prélèvement.
METHODE :
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Le citrate trisodique à 3.8 % n'est pas stérile et le prélèvement du citrate à l'aiguille n'est pas
effectué de manière stérile. Il est donc absolument exclu de prélever le citrate dans la
seringue, puis d'utiliser la même seringue ou pire encore la même seringue et la même aiguille
pour prélever le sang. La seule méthode sans risque pour le patient est la suivante :
1. A l’aide d’une pipette de 1 ml et d’un ballon à pipeter, placer dans un tube en plastique à
usage unique 0,4 ml de citrate trisodique à 3,8 % (le citrate trisodique se conserve un mois
au frigo ou 1 semaine à température ambiante. Remplacer toute solution de citrate
contenant "des petits poissons"). Inscrire le numéro du patient sur le tube.
2. Prélever 2 ml de sang veineux (seringue graduée de 2 ml).
3. Enlever l'aiguille (jeter la dans le conteneur à aiguilles) et ajouter 1,6 ml de sang au tube
contenant 0,4 ml de citrate trisodique. Mélanger le tube par inversion. Les étapes 2 et 3
doivent être rapides pour éviter la coagulation du sang. Le test doit être réalisé dans les 2
heures.
4. Aspirer le sang citraté dans un tube de Westergren (propre et sec) jusqu'à la graduation 0
(utiliser un ballon à pipeter). !! NE JAMAIS PIPETER A LA BOUCHE !!
5. Fixer le tube au support, en s'assurant que le tube et le support sont ABSOLUMENT
verticaux et qu'il n'y a pas de bulle d'air dans le tube.
6. Régler la minuterie sur 60 minutes.
7. Noter la hauteur de la couche de plasma en mm après 1 heure. (Si la démarcation entre le
plasma et la colonne de globules rouges n’est pas nette, prendre la mesure à l’endroit ou la
couleur de la couche de globules redevient d’une densité normale. Ceci se rencontre
principalement dans des anémies sévères).
8. Directement après usage, les tubes de WESTERGREN sont rincés à l'eau filtrée, puis mis à
tremper une nuit dans une solution d'hypochlorite. Elles sont ensuite rincées à l'eau filtrée et
mises à sécher. (Ne pas utiliser de savon, d'alcool ou d'acide pour nettoyer une pipette
de WESTERGREN). Les pipettes doivent être complètement propres et sèches avant
réutilisation.
REPONSES TYPES :
VS :
___ mm / 1 heure
VALEURS DE REFERENCES :
Hommes :
1 à 10 mm par heure (Europe) 1 à 25 mm par heure pour l'Afrique.
Femmes :
3 à 14 mm par heure (Europe) 3 à 25 mm par heure pour l'Afrique.
INTERPRETATION DES RESULTATS :
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Ces valeurs normales sont basées sur des données venant d'Europe. La V.S. est très
souvent légèrement élevée chez des Africains, sans signification pathologique (anémie plus
fréquente, chaleur et exposition plus fréquente aux maladies qu'en Europe provoquant une
hypergammaglobulinémie).
Les valeurs de V.S. jusqu’à 25 mm par heure sont
considérées comme normales pour l'Afrique. On observe aussi une augmentation de la
VS chez des personnes âgées (en Europe : jusqu’à 30 mm pour les hommes et jusqu’à 42
mm pour les femmes de plus de 85 ans).
La signification clinique du test peut être donnée par la formule suivante :
Fibrinogène (IgG, IgM)
VS = -----------------------------Hématocrite
Les facteurs qui accélèrent la V.S. figurent au numérateur, tandis que ceux qui exercent l'effet
inverse figurent au dénominateur. Ceux qui jouent un rôle secondaire sont placés entre
parenthèse.
Facteurs influençant la V.S. :
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Augmentation des protéines plasmatiques (immunoglobulines, fibrinogène,
protéine réactive C, etc.).
Anémie (hémoglobine inférieure à 10 g par 100 ml) et déshydratation.
Taille et forme des hématies : les hématies falciformes sédimentent plus
lentement que les normales.
Mauvaises conditions techniques (lavage incorrect des tubes, dilution incorrecte
du sang, position non verticale des tubes, …).
Grossesse (accélération pour des grossesses dépassant 3 mois et jusque 1 mois
après l'accouchement) et usage de contraceptifs oraux.
Température extérieure (augmentation de la V.S. dès que la température est
supérieure à 23°C).
Une augmentation de la VS (réalisée dans les règles de l'art) est donc une indication
aspécifique d'un trouble physiologique.
Exemples : Anémie, grossesse, infections
(rhumatisme articulaire aigu, pneumonie, tuberculose, trypanosomiase, leishmaniose, ...),
cancer, leucémie.
Une V.S. normale exclut la présence de beaucoup de maladies. Certaines maladies ne
provoquent cependant pas d'augmentation de la V.S. (exemples : malaria aiguë, fièvre
typhoïde, brucellose, maladie virales, C.I.D., maladies mentales, ...).
Une lecture de la vitesse de sédimentation après 2 heures est peu utile.
CONTROLE DE QUALITE
En raison du délai maximal entre le prélèvement et la réalisation du test (2 heures à
température ambiante sur citrate, 6 heures au frigo sur EDTA avant dilution avec du citrate), la
manière la plus sûre d'effectuer un contrôle de qualité, est de suivre exactement la procédure.
Comme contrôle de qualité, il est cependant possible lors de chaque nouvelle préparation de
citrate trisodique de réaliser quelques tests en double (avec l’ancien et le nouveau réactif).
Il est également possible d’effectuer une VS sur une personne non malade (soi-même par
exemple) pour vérifier que le résultat entre dans les valeurs de références, ou de comparer les
résultats sur une même personne (soi-même) dans différents laboratoires (le même jour ou la
même semaine)
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SOURCES D'ERREURS :
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SOP (Standard Operating Procedure) inexistante ou non adaptée aux conditions réelles de
réalisation du test.
Erreurs administratives dans l’enregistrement du patient.
Position lors du prélèvement (patient debout, assis, allongé,…). La position debout diminue le
volume plasmatique. Ce qui entraîne une différence de 3 à 7 % entre la position assise et
debout…
Usage prolongé (> à 1 minute) du garrot lors du prélèvement veineux. Augmentation des
protéines totales et d’autres éléments par hémoconcentration.
Mesure de la vitesse de sédimentation sur un patient déshydraté.
Contamination du sang par le désinfectant utilisé sur la peau [hémolyse ou coagulation].
Prélèvement du sang au niveau d’un bras ou coule une perfusion [hémodilution].
Mauvaise dilution du sang ou erreur dans la préparation du citrate trisodique (ration sang/anticoagulant non respecté) [coagulation ou hémodilution]. Le même phénomène peut se
produire en utilisant des systèmes de prélèvement sous vide périmé, par perte du vide.
Anticoagulant contaminé [augmentation artificielle des protéines].
Usage d’un anticoagulant inapproprié du type héparine (qui modifie la membrane des globules
rouges) avant dilution dans le citrate.
Mélange du sang et de l'anticoagulant insuffisant [même la formation d'un tout petit caillot de
fibrine va invalider le test].
Agitation trop violente du sang, produisant une hémolyse mécanique.
Non homogénéisation de l’échantillon avant de remplir le tube à V.S.
Non respect du temps entre le prélèvement et la réalisation du test.
Verrerie sale ou humide [hémolyse].
Bulles d'air dans la pipette.
Réalisation du test en plein soleil.
Réalisation du test sur du sang sortant du frigo.
Pipette non verticale (une inclinaison de 3 % augmente la V.S. de l’ordre de 30 %).
Réalisation du test à côté d'une centrifugeuse (les vibrations interférent en augmentant la
vitesse de sédimentation).
Non respect du temps avant lecture.
Erreur dans la mesure de la hauteur.
Erreur administrative dans le rendu des résultats.
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DOCUMENTATION :
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