le contrôle microbiologique ultra sensible en temps réel

La cytométrie en phase solide (ChemScan RDI): :
:
le contrôle microbiologique ultra sensible
en temps réel
Application au contrôle de l’environnement
en milieu pharmaceutique
Le polym’air®: un nouveau support
pour le contrôle de l’environnement
-Support hydrosoluble (compatible Chemscan)
-Non toxique
-Milieu non nutritif
! pas de multiplication cellulaire , autorisant une analyse différée
! pas de risque de contamination des surfaces en matières nutritives
-Milieu préservant la viabilité
-Déclinable sous divers formats
Application au contrôle de l’air
Possibilité
de stockage
Exposition du
Polym’Air®
Prélèvement du
Polym’Air®
(Bioimpacteur ou “Settle plate”)
Transfert et
dissolution dans
un diluant stérile
(10 min à Température ambiante)
Protocole et résultat
en moins de 3 h
Analyse au ChemScanRDI
18/06/97
Marquage des
mircoorganismes
Filtration de
l’échantillon
Application au contrôle de l’air: un protocole unique de marquage
Bacteries, spores de bactéries levures, moisissures détectées
1: contre colorant
: CSE/CSM
++ +
+
2: activation : 2H in A16 at 30°C
+
3: Labelling :45mn in B16 at 30°C
Correlation Chemscan/boite de Petri
M.O
Chemscan
Boite de Petri
Chemscan/boite
(%)
C.albicans
160+/-29
123+/-10
130
B.Subtilis (spore)
136+/-10
140+/-12
97
S.aureus
174+/-14
172+/-12
101
E.coli
150+/-9
144+/-10
104
P.aeruginosa
157+/-14
137+/-5
115
M.luteus
271+/-41
198+/-7
137
A.niger
207+/-19
153+/-10
136
Contrôle de l’air : validation/QP2
Diagramme de validation (proposition) :
Doc: 200-D0414-01
Collecte de l’air
1M3 on TSA
++ ++
2M3on polym’air
incubation TCS
7days at 30-35°C
+
solubilisation du polym’air
With 40ml scan diluent
20ml
Filtration CE 47mm
20ml
Filtration CB04/FiFU
Rinçage
25ml diluent
Rinçage
25ml diluent
incubation TCS
7days at 30-35°C
marquageChemscan
protocole Combo.
Comptage (cfu)
Analyse Chemscan
counts
resultats
Contrôle de l’air : étude comparative
Comparaison Chemscan / boite de Petri
classe D site A
300
n = 31
y = 0.65xn - 4.74
R2 = 0.79
250
BP (TCS)
200
150
100
50
0
0
50
100
150
200
-50
ChemScan (confirmés.)
250
300
350
Analyse d’échantillons d’air naturellement contaminés,
par Sédimentation
Site B
" Géloses TSA et boites Polym’Air exposées pendant 30 minutes en zone
non contrôlée
! Géloses TSA incubées pendant 5 jours à 30oC
! Boites bio-polymère solubilisées puis analysées sur ChemScanRDI
Dénombrement
Polym’Air sur
ChemScanRDI
(UV/boîte)
Dénombrement sur
TSA
(UFC/boîte)
Zone 1
10, 22, 16
12, 19, 23
Zone 2
8, 5
4, 5
Zone 3
52, 37
13, 8
18/06/97
Analyse d’échantillons d’air naturellement contaminés
par Impaction
Site B
" Géloses TSA et boites Polym’Air exposés pendant 10 minutes (100l/min)
en zones contrôlées
! Géloses TSA incubées pendant 5 jours à 30oC
! Polym’Air solubilisés puis analysés sur ChemScanRDI
18/06/97
Dénombrement
Polym-Air sur
ChemScan RDI
(UV/m3)
Dénombrement
Boites TSA (UFC/m3)
Classe A
0/0
0/0
Classe B
0/0
0/0
Classe C
0/2
0/1
Classe D
5 (3 bactéries, 2
Levures)
7
Maîtrise en temps réel de la décontamination
1200
Polym'Air & ChemScan
1000
Boî te de Petri
800
600
400
200
0
Décontamination
18/06/97