Etude du rôle d`une protéine WAP, la protéine HE4, dans l

Sujet de Master 2 proposé pour l’année 2011-2012
Titre : Etude du rôle d’une protéine WAP, la protéine HE4, dans l’homéostasie
pulmonaire
Encadrant :
Co-encadrante :
Thierry MOREAU, Professeur
Marie-Louise ZANI, Maître de Conférences
Laboratoire d’accueil : INSERM Unité 618 Equipe 1 Protéases et pathologies pulmonaires
- Faculté de Médecine - TOURS
Résumé
Dans de nombreuses pathologies pulmonaires à caractère inflammatoire, l’activité
enzymatique des protéases à sérine, libérées massivement par les neutrophiles, est
étroitement contrôlée par plusieurs inhibiteurs de protéase dont les principaux sont le SLPI
(secretory leukocyte protease inhibitor) et la trappine-2. Ces 2 inhibiteurs appartiennent à la
famille des protéines WAP, caractérisées par la présence d’un (ou plusieurs) domaine à 4
ponts disulfure, le domaine WAP initialement découvert dans une protéine du petit lait, la
Whey Acidic Protein. Dans la région du chromosome 20 humain où sont localisés les gènes
codant le SLPI et la trappine-2, on trouve 12 autres gènes apparentés codant des protéines
WAP dont le gène WFDC2 spécifiant la protéine HE4 (2 domaines WAP). Cette protéine
HE4, dont on ne connaît pas la fonction biologique, est fortement exprimée dans les
muqueuses orales et nasales ainsi que dans le poumon. La présence dans le promoteur du
gène WFDC2 de sites de liaisons du facteur de transcription NF-κB et une modification de
l’expression de HE4 dans la mucoviscidose suggère un rôle de cette protéine dans
l’homéostasie pulmonaire.
Dans le but d’élucider le rôle biologique de cette protéine dans le poumon, nous nous
proposons d’exprimer la protéine HE-4 sous forme recombinante pour étudier ses propriétés
anti-protéasiques et ses autres activités biologiques potentielles (activité mitogènique,
apoptotique, immunomodulatrice...). Ces travaux permettront ultérieurement d’évaluer la
capacité de la protéine HE4 à constituer un marqueur biologique de certaines pathologies
pulmonaires.
Objectifs
Les différentes étapes du stage consisteront à :
1/ cloner différentes constructions comportant le gène WFDC2 pour produire la protéine
HE4 en système bactérien et/ou levure, 2/ purifier et caractériser la protéine recombinante,
3/ évaluer les propriétés anti-protéasiques de HE4 et étudier les effets pro- ou antiprolifératifs, pro- ou anti-inflammatoires de HE4 sur des cellules épithéliales pulmonaires.
Techniques utilisées
Clonage, expression de protéines recombinantes, purification et caractérisation de protéines,
enzymologie, culture cellulaire
Coordonnées
Thierry MOREAU,
Tél : 02 47 36 61 77 Email : [email protected]
Marie-Louise ZANI, Tél : 02 47 36 61 49 Email : [email protected]
Inserm U618, Faculté de Médecine 10 Bd Tonnellé 37032 TOURS Cedex