Hépatite B chronique et le Laboratoire

Le titrage de l’AgHBs:
un témoin du statut du patient
et de la réponse au traitement
Denis Ouzan
Institut Arnault Tzanck,
Saint-Laurent-du-Var
Objectifs pédagogiques
Connaitre les problèmes pratiques posés par
la prescription des tests quantitatifs de l’antigène HBs
Connaitre l’apport de ce test à la définition
du porteur du virus de l’hépatite B
Connaitre la valeur prédictive de l’évolution du taux
de l’antigène HBs dans la réponse au traitement,
la durée de ce traitement et la perte de l’antigène HBs
Liens d’intérêt





BMS
Gilead
Janssen
MSD
Roche
Les particules virales
Particules de Dane
Sphérules et tubules
Enveloppe contenant les
protéines de surface : Ag HBs
Capside :
Ag HBc
Génome : ADN partiellement
double brin
1 000 à 100 000 fois
plus nombreuses
2 tests quantitatifs dans l’hépatite B chronique :
Titre de l’AgHBs
Enveloppe
portant
l’Ag HBs
Reflet de l’activité du cccDNA
Charge virale
Génome
Reflet de la réplication virale
Détection de l’Antigène HBs

Tests qualitatifs disponibles







Architect – Abbott
Elecsys – Roche
ADVIA Centaur – Bayer
Hepanostika – Biomerieux
Monolisa – Biorad
Diasorin – Murex
Tests quantitatif disponibles
 Architect –Abbott
 Elecsys II – Roche
 Diasorin – Murex
Coût : AG HBS PAR EIA » = B55 (14,85 euros)
Degushi et al., J Virol Meth 2004, Brotherton et al, AACCAM 2006
Tests quantitatifs de l’AgHBs
 3 tests quantitatifs commercialisés :
 Abbott « Architect HBsAg Qualitative 2 »
 Roche « Elecsys HBsAg II Quant »
 DiaSorin « Liaison XL Murex HBsAg Quant »
 Principe : immunoenzymatique
 Résultats: UI/mL
AgHBs
+
Echantillon
+
Réactif
Conjugué
Signal
Activation
Quantification de l’AgHBs : des limites
 Seuils et limites de linéarité des techniques :
 Abbott :
0,05 UI/mL à 250 UI/mL (log10 : 2,40)
 Roche :
0,05 UI/mL à 52 UI/mL (log10 : 2,11)
 DiaSorin : 0,03 UI/mL à 250 UI/mL (log10 : 2,40)
 Variabilité des titres :
611 échantillons
43–1950. Multicenter Evaluation of the Elecsys Hepatitis B Surface Antigen Quantitative Assay. B. J. Zacher et al.
Recours à une
dilution devenue
depuis peu
automatique
Utilisation en pratique clinique
 Test utilisé en complément de la charge virale
 Dans l’hépatite B chronique :
Histoire naturelle
Suivi des traitements :


interféron
analogues nucléos(t)idiques
Titrage de l’AgHBs et histoire naturelle
Immuno-tolérance
Clairance
Portage inactif
Ag HBs
IgM
Ag HBe
Ac Anti-HBe
anti
HBc
DNA HBV < 2000 UI/mL
ALAT N
Contamination
Immuno-tolérance
Clairance
Mutant pré-C
Ag HBs
IgM
anti
HBc
Ag HBe
Ac Anti-HBe
DNA HBV variable
ALAT > N
Titrage de l’AgHBs et histoire naturelle
Immuno-tolérance
Clairance
Portage inactif
Ag HBs
Ag HBe
Ac Anti-HBe
DNA HBV < 2000 UI/mL
ALAT N
Contamination
Immuno-tolérance
Clairance
Mutant pré-C
Ag HBs
IgM
anti
HBc
Ag HBe
Ac Anti-HBe
DNA HBV variable
ALAT > N
Nguyen T et al; Jaroszewicz J et al, J Hepatol 2010
Le titrage de l’AgHBs permet de distinguer les porteurs
inactifs du VHB chez des malades de genotype D
Prédiction du
Portage inactif
Taux de l’AgHBs
Taux de HBV-DNA
<1000 UI/mL
<2000 IUI/mL
Population
209
Sensibilité
91%
Spécificité
95%
VPP
88%
VPN
97%
Brunetto M et al. Gastroenterology, 2010;139(2):483-90).
Le titrage de l’AgHBs permet de distinguer
les porteurs inactifs du VHB
Portage inactif : Titre AgHBs < 1000 UI/mL
et ADN du VHB < 2000 UI/mL
Le titrage de l’AgHBs permet de prédire la perte de l’AgHBs
80 %
Incidence de la perte spontanée de l’AgHBs
AgHBs < 100 UI/ml
60
AgHBs 100-999 UI/ml
0
20
40
AgHBs > 1000 UI/ml
1
3
5
7
9
11
13
15 ans
Tseng et al. Gastroenterology 2011;141:1240-48
Décroissance de l’AgHBs sous traitement
Delta AgHBs (log UI/ml)
AgHBe (+)
AgHBe (-)
0
-1
-2
0
12
24
36
Semaines
ETV (n=70)
48
0
12
24
36
Semaines
Peg-IFN (n=130)
Reijnders et al. J Hepatol 2011;54,449-54
48
Intérêt de la décroissance du titre de l’AgHBs sous PEG-IFN
pour prédire la seroconversion HBe 6 mois après le traitement
*AgHBe séroconversion
6mois post traitement
Patients AgHBe positif
Interféron pégylé alfa-2a : 48 semaines
58%
54%
42%
35%
0%
< 1500
1500-20.000
AgHBs à S12
> 20.000
0%
< 1500
1500-20.000 > 20.000 UI/ml
AgHBs à S24
Liaw et al .Hepatology 2011;54:91-100
Soonneveld et al .Hepatology 2013; 58: 872 -80
Prédiction précoce de la non réponse chez les malades AgHBe(-)
102 patients AgHBeDiminution
Non (53%)
Oui (47%)
AgHBs
Diminution
< 2 log (20%)
> 2 log (33%)
< 2 log (20%)
24%
25%
> 2 log (27%)
ADN VHB
Chance de RVS *
0%
⃰ ADN VHB < 10.000 copies/mL et ALAT normales
6 mois post-traitement
39%
Rijckborst et al. Hepatology 2010;52 ; 454--61
La décroissance du titre de l’AgHBs sous Peg-IFN
chez les malades AgHBe negatifs
120 patients AgHBe- traités par PEG-IFNα-2a pendant 48 sem
Décroissance du taux d’AgHBs ≥10 %
J0 à S24 S24 à 48
Proportion
de patients
Perte de l’AgHBs
à 5 ans (%)
Continue
oui
oui
51%
23%
Tardive
non
oui
16%
11%
Précoce
oui
non
5%
17%
Pas de déclin
non
non
28%
0%
Brunetto MR., AASLD 2009, Abstract 452
Hépatite B AgHBe négatif :
PEG-IFNα-2a, 96 mieux que 48 semaines ?
Résultats 12 mois
après l’arrêt du PEG-IFNα-2a
48 semaines
96 semaines
p = 0,03
29
Malades (%)
30
20
p = 0,06
12
10
10
6
0
6/51 15/52
ADN-VHB
< 2 000 UI/ml
0
0/51
0
3/52
AgHBs
clairance
0/51
5/52
AgHBs
< 10 UI/ml
Lampertico et al. Gut. 2012; 62(2): 290-8.
Titrage de l’AgHBs (UI/ml)
Evolution du titre de l’AgHBs (UI/ml) pendant le traitement
par PEG IFN chez 4 malades VHB+VHD
7 mois
1 an
2 ans
3 ans
4 ans
5 ans
OUZAN D et al. J Hepatol .2013;58 :1258–59.
Temps de perte de l’AgHBs sous analogues
Patients traités par ETV ou TDF ayant obtenu une réponse virologique (VR)
Décroissance moyenne
de l’ AgHBs ( log10 IU/mL)
1
ALAT basses
ALAT basses
0
-1
ALAT élevées
= activité immunitaire
-2
Baseline
projection
Temps jusqu’à perte de
l’AgHBs (années)
VR
VR+1
VR+2
AgHBe-
AgHBe+
AgHBe+
ALAT élevées
38.9
36.4
19.5
Zoutendijk et al. JID 2011;204(3):415-8
Probabilité de rechute après arrêt des analogues
selon le titre de l’Ag HBs en fin de traitement
et la charge virale à S12
Probabilité de rechute virologique
1
0,8
HBsAg >1000 IU/ml à la fin du traitement
0,6
HBsAg 100 -1000 IU/ml à la fin du traitement
0,4
0,2
HBsAg ≤ 100 IU/ml à la fin du traitement
0
0
6
12
18
24
Un taux d’HBsAg ≤ 100 IU/ml à l’arret des analogues est predictif de réponse soutenue
Liang Y. AP&T 2011: 34:344
IFN 48 semaines chez les malades AgHBe négatifs : réponse à 5 ans
25%
23%
% de patients à 5 ans
20%
17%
15%
62%
12%
10%
7%
5%
0%
ADN VHB
< 2000UI/ml
ADN VHB
< 400 cp/mL
Perte
AgHBs
Séroconversion HBs
Marcellin P et al Hepatol Int .2013 ;7:88-97
Add-on of peg interferon to a stable
nucleoside regimen led to loss of HBs Ag
in chronic hepatitis HBe Ag negative
patients
Denis Ouzan (1), Guillaume Pénaranda (2), Hélène Joly (1),
Hacène Khiri (2), Philippe Halfon (2).
(1) Liver unit, Institut Arnault-Tzanck, Saint-Laurent du Var; (2) Alphabio
Laboratory, Marseille, FRANCE
•10 patients, AgHBe- ,tous traités par analogues depuis 3 à 8 ans, ADN
du VHB indétectable depuis au moins 3 ans
•Rajout du PEG-IFNα-2a 180 µg/sem pendant 96 semaines
Ouzan D et al. J of Clin Virol . 2013.58:713–17
Evolution du titre de l’AgHBs (UI/ml)
pendant l’ajout du PEG IFN et 6 à 18 mois plus tard
Metavir
Durée du TT par analogues
avant IFN
J0
S48
S96
S120
A2F2
ADV (6 ans)
50
0
0
0
A2F3
LAM (8 ans )
123
0
0
0
A3F3
ADV (7 ans)
248
0
0
0
A1F1
ADV (6 ans)
789
0
0
0
A3F3
ADV+ETV (8 ans)
110
87
20
0
A2F3
ETV (3 ans)
7900
120
0
0
A2F4
ETV+ADV (6 ans)
530
380
120
130
A1F2
ADV+ETV (7 ans )
974
40
115
115
A1F1
LAM+TFV (3 ans)
1320
345
120
100
A2F4
LAM+ADV (8 ans)
1754
1380
1100
1000
Evolution du titre de l’AgHBs chez les 4 patients
ayant perdu l’AgHBs entre 24 et 48 semaines
900
UI/ml
Analogue s + PEG-IFN
800
700
600
500
400
300
200
100
0
Baseline
S48
S 120
 Perte de l’AgHBs chez 4 patients : Séroconversion HBs chez 2 patients
Evolution du taux de l’AgHBs chez les 6 patients restants
qui ont reçu (sauf un) 96 semaines de PegIFN
Nucleosi(ti)de
analogues + PEG-IFN
Stop PegIFN
Ouzan D. et al. J of Clin Virol . 2013; 58: 713 -17
IFNα chez les malades contrôlés par analogues
12 malades VHB+ (Ag HBe - : 9/12)
ADN VHB indétectable chez tous les malades traités par analogues
Titre de l’AgHBs (UI/mL)
100 000
10 000
1 000
Apparition
Anti-HBs
100
10
Apparition
Anti-HBs
1
- 4,17 log
0,1
- 2,90 log
0,01
J0
S4
S8
S12
S16
S20
S24
S28
S32
S36
S40
S44
S48
FU S4
→ 2/12 malades ont eu une perte de l’AgHBs
Kittner J M. et al. J of Clin Virol .2012 ; 54: 93-5.
Interféron pégylé chez les malades
traités par analogues
Etude rétrospective de 9 malades AgHBe- avec ADN du VHB indétectable
depuis au moins 6 mois, traités par interféron pégylé
Diminution médiane du taux d’AgHBs
chez 5 malades AgHBetraités plus de 6 mois
HBsAg levels (%)
60
40
20
0
-20
-40
-60
-80
-100
0%
-30 %
-50 %
0
1
2
3
Mois
4
5
6
HBsAg levels(UI/ml)
Evolution du taux d’AgHBs
chez 9 malades AgHBe-
1400
1000
600
200
0
3
6
9
12
Mois
Lampertico P, EASL 2012, Abs. 523
Évaluer l’impact de PegIFN chez des malades AgHBecontrolés par analogues depuis au moins 1 an
30 centres
Evaluer la perte
AgHBs
Pegasys 180 µg
48 semaines
Analogues 48
semaines
Analogues 96 semaines
Analogues
Randomisation
≥ 1 an
*ADN VHB
indétectable
Analogues 144 semaines
Conclusions
L’Ag HBs est connu depuis plus de 40 ans, mais la
possibilité de le quantifier est récente
Il faut bien libeller cette prescription: dosage quantitatif
de l’ AgHBs
C’est un outil supplémentaire du suivi de l’hépatite B
en association avec la charge virale
Conclusions
Ce test quantitatif permet de mieux caractériser le statut
du porteur inactif du virus
Il permet de prédire la réponse au traitement par IFN,
sa durée optimale et la perte éventuelle de l’antigène HBs.
Il contribue à l’évaluation de nouvelles stratégies de
traitements utilisant une combinaison analogue/interféron
Points Forts
1) La quantification de l’Ag HBs est un nouveau test de suivi de l’hépatite B
complémentaire de la charge virale.
2) Ce test mesure le taux d’enveloppes qui entourent le virus et celui plus
important de la fraction libre
3) Il permet de mieux caractériser le statut du porteur inactif du virus
4) Il permet de prédire la réponse au traitement par interféron, sa durée
optimale et la perte éventuelle de l’antigène HBs.
5) Il contribue à l’évaluation de nouvelles stratégies de traitements
utilisant une combinaison analogues /interféron