Autophagie et apoptose examen Fichier
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Hind Guenou Socle Biologie Cellulaire Sujet d'examen Partie II: Stress et réponse cellulaire Master "Biologie Santé" - M1S1 Autophagie et apoptose : En 2010, Rubinsztein DC. et ses collaborateurs ont publié une étude portant sur le lien entre l’apoptose et l’autophagie autour de Beclin 1, un acteur majeur de l’autophagie. Dans cet article, les auteurs ont évalué l’implication de la famille Bcl2 dans l’autophagie par surexpression de protéines de fusion telles que Beclin 1 étiquetée Flag ou du LC3 étiquetée GFP. Figure 1 Partie 1 : Des cellules HeLa sont co-transfectées distinctement avec les vecteurs suivants : - Vecteur Bcl-xL +Vecteur vide (xL/vector) - Vecteur Bcl-xL+ Vecteur Beclin 1 étiquetée Flag (xL /Beclin1) - Vecteur Bcl-xL+ Vecteur Beclin 1 étiquetée Flag +: Vecteur Bad (xL /Beclin1/Bad) - Vecteur Bcl-xL+ Vecteur Beclin 1 étiquetée Flag +: Vecteur Bad (xL /Beclin1/Bax) Après 20h de culture post-transfection, les cellules sont lysées, des immunoprécipitations avec un anti-Flag et des western-Blots sont réalisées avec des anticorps anti-Bcl-xl, anti-Flag, anti-Bad et antiBax (Figure1). Q1. Donnez les évènements cellulaires d’une macro-autophagie Q2. En quoi Beclin 1 et LC3 sont des acteurs moléculaires importants dans le processus d’autophagie? Q3. Pourquoi les auteurs étudient le niveau d’expression de la protéine Bcl-xl après immunoprécipitation dans figure 1? Q4. Analysez l’immunoblot de la figure 1. Partie 2 : les cellules HeLa transfectées avec les vecteurs suivants, Vecteur LC3 –GFP ou Vecteur LC3 GFP Vecteur Bax sont traitées soit avec un inhibiteur de toutes les caspases (z-VAD) soit avec du DMSO (le véhiculant du ZVad). A l’issue de ces traitements les chercheurs ont quantifié la distribution de LC3-GFP cytoplasmiques dans les cellules (Figure2). Q5 : Quelle information supplémentaire vous apporte cette expèrience ? -1-