Trousse de réactifs (liquides) Cholestérol

Trousse de réactifs (liquides)
Cholestérol
Utilisation prévue
Pour la détermination quantitative du cholestérol total sérique.
Historique de la méthode
Une méthode de dosage du cholestérol développée à la fin des années 1800 par
Lieberman1 et Burchard2 est encore utilisée de nos jours, malgré la nature
corrosive des réactifs et sa vulnérabilité à de nombreuses substances
interférentes.
La recherche sur une procédure enzymatique été initiée par Flegg3 et Richmond4
au début des années 1970. Allain5 et Roeschlau6 ont été les premiers à utiliser la
cholestérol estérase et la cholestérol oxydase en un seul réactif pour déterminer
le cholestérol total sérique.
Le système de coloration de Trinder7, composé de peroxydase/phénol/4aminoantipyrine, est utilisé avec succès depuis in certain temps. Il a été
démontré que cette méthode, à l’aide d’étalons appropriés, produit des résultats
d’une excellente précision par rapport à la méthodologie de référence.
Principe
C. estérase
Esters de cholestérol -----------------------¾ Cholestérol + acides gras
C. oxydase
Cholestérol + O2 -------------------------¾ Cholestérol-3-one + H2O2
Peroxydase
2 H2O2 + 4-AAP + Phénol ------------------¾ Quinoneimine + 4 H2O
(colorant rouge)
L’intensité de la couleur rouge produite, mesurée à 500 nm, est directement
proportionnelle au cholestérol total présent dans l’échantillon.
Réactifs
Prélèvement et stockage des échantillons
Il est recommandé d’utiliser du sérum n’ayant pas subi d’hémolyse. Le cholestérol
sérique est jugé stable pendant sept jours à température ambiante (18-25 °C) et six
mois si congelé et protégé adéquatement contre l’évaporation8,9.
Interférences
Plusieurs médicaments et substances ont un effet sur le taux de cholestérol. Voir
Young, et al10.
Matériels fournis
Réactif pour cholestérol
Matériels nécessaires mais non fournis
1.
2.
3.
4.
5.
Dispositifs de pipetage précis
Minuterie
Tubes à essais et portoirs
Spectrophotomètre permettant de faire des lectures à 500 nm
Bloc chauffant (37 °C)
Procédure (automatisée)
Reportez-vous aux instructions propres aux applications de l’appareil.
Procédure (manuelle)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Marquez les tubes à essais : « Blanc », « Étalon », « Contrôle », « Patient », etc.
Pipetez 1,0 ml de réactif dans chaque tube et préchauffez à 37 °C pendant au
moins cinq minutes.
Ajoutez 0,01 ml (10 µl) d’échantillon dans chaque tube correspondant. Mélangez
et remettez les tubes à 37 °C.
Incubez tous les tubes à 37 °C pendant cinq minutes.
Réglez le zéro du spectrophotomètre à 500 nm avec un blanc.
Lisez et notez les absorbances de tous les tubes à essais.
4-Aminoantipyrine à 0,25 mM, Cholestérol estérase > 150 u/L, Cholestérol
oxydase > 150 u/L, Peroxydase > 1500 u/L, Phénol > 15 mM, Tampon phosphate
à pH 6,8, stabilisants et agents de conservation non réactifs.
Remarques sur la procédure
Préparation du réactif
2.
Le réactif est prêt à l’emploi.
Stockage du réactif
1.
2.
Stocker le réactif entre 2 et 8 °C.
S’il est conservé entre 2 et 8 °C, le réactif est stable jusqu’à sa date de
péremption.
Détérioration du réactif
Ne pas utiliser si :
1. le réactif est trouble.
2. le réactif n’est pas conforme aux paramètres de performance indiqués.
Précautions
1.
2.
3.
Ce réactif est prévu pour le diagnostic in vitro uniquement.
Ne pas utiliser par voie interne chez l’homme ou l'animal. Les précautions
habituelles de manipulation des réactifs de laboratoire doivent être
observées.
Des informations supplémentaires au sujet du stockage et de la
manipulation de ce produit sont disponibles dans sa fiche de données de
sécurité.
1.
Si le spectrophotomètre utilisé nécessite un volume final de plus de 1,0 ml pour
une mesure fiable, utilisez 0,025 ml (25 µl) d’échantillon pour 3,0 ml de réactif.
Effectuez le test selon les instructions ci-dessus.
Les échantillons de sérum hautement lipémiques nécessitent l’utilisation d’un
« blanc d’échantillon ». Ajoutez 0,01 ml (10 µl) de l’échantillon à 1,0 ml de
solution saline, mélangez, puis mesurez l’absorbance par rapport à de l’eau.
Soustrayez cette valeur de l’absorbance du patient pour obtenir la mesure
corrigée.
Limites
Les échantillons dont le résultat est supérieur à 700 mg/dl doivent être dilués 1:1 avec
de la solution saline et mesurés à nouveau. Le résultat final doit alors être multiplié par
deux.
Étalonnage
Des solutions étalons aqueuses ou un calibreur sérique approprié peuvent être utilisés
pour étalonner la procédure. La procédure d’étalonnage doit être effectuée selon les
instructions du fabricant de l’appareil. Si les résultats des contrôles sont en dehors de
la plage attendue, la procédure doit être calibrée à nouveau.
Phone: 734-487-8300 • Toll Free: 800-445-9853 • Fax: 734-483-1592 • www.pointescientific.com
Trousse de réactifs (liquides)
Cholestérol
Calcul
Abs. = Absorbance
Abs. (Patient) x Concentration étalon = Cholestérol (mg/dl)
Abs. (étalon)
(mg/dl)
Par exemple : Abs. (Patient) = 0,40 ; Abs. (étalon) = 0,32 ; Concentration de
l’étalon = 200 mg/dl
Fabriqué par Pointe Scientific, Inc.
5449 Research Drive, Canton,
MI 48188, États-Unis
0,40 x 200 = 250 mg/dl
0,32
Contrôle de qualité
Des échantillons de sérum de contrôle présentant des quantités connues
normales et élevées doivent être mesurés régulièrement pour évaluer la validité
de la réaction. Ces contrôles doivent être testés aux moins une fois pour chaque
période de travail au cours de laquelle des tests du cholestérol sont effectués.
Nous recommandons à chaque laboratoire d’établir sa propre fréquence de
mesure des contrôles.
Valeurs attendues11
Plage recommandée :
Niveau de cholestérol souhaité :
Niveau limite de cholestérol :
Niveau élevé de cholestérol :
< 200 mg/dl
200-239 mg/dl
> 240 mg/dl
Performances
1.
2.
3.
Linéarité : 700 mg/dl
Comparaison : une comparaison entre cette méthode et un réactif
semblable en poudre a donné une équation de régression de y = 1,02 x +
0,8 et un coefficient de corrélation de 0,999.
Précision :
À l'intérieur de d’une série
Moyenne É.T. % C.V.
157
1,1
0,7
224
1,7
0,8
4.
Spécificité : La cholestérol oxydase n’est pas entièrement spécifique pour le
cholestérol. D’autres analogues du cholestérol (dihydrocholestérol, 7déhydrocholestérol, 20-hydroxycholestérol, etc.) sont également oxydés.
Toutefois, les concentrations de ces analogues dans le sérum sont
normalement négligeables.
References
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
D’une série à l’autre
Moyenne É.T. % C.V.
155
1,3
0,8
227
2,4
1,1
Lieberman, C., Ber. 18:1803 (1885).
Burchard, H., Chem. Fentr. 61:25 (1890).
Flegg, H.M., Ann. Clin. Biochem. 10:79 (1973).
Richmond, W., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 29:Suppl. 26, abstr. 3:25 (1972).
Allain, C.C., et al, Clin. Chem. 20:470 (1974).
Roeschlau, P., et al, Z. Klin. Chem. Klin. Biochem 12:226 (1974).
Trinder, P., Ann. Clin. Biochem. 6:24 (1969).
Perlstein, M.T., et al, J. Microchem. 22:403 (1977).
Witte, D.L., et al, Clin. Chem. 20:1282 (1974).
Young, D.S. et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
National Institute of Health Publication No. 88-2926 “Detection, Evaluation,
and Treatment of High Cholesterol in Adults”, November (1987).
Rév. 11/11 P803-C7510-01-FR
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