Nouveaux Développements du couplage CCM- SM

Nouveaux Développements du couplage CCMSM-ELSD : retour d’expérience; commentaires.
Mr François Bretin, Chimie Médicinale Oncologie,
Sanofi-aventis
Sanofi
aventis R & D Vitry-sur-Seine
Vitry sur Seine
Mr Francis Maquin, Analytical Sciences Paris,
S
Sanofi-aventis
fi
ti R & D Vit
Vitry-sur-Seine
S i
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience;
p
; commentaires
La configuration que nous retenons est CCM-CAMAG-split-ELSD/SM :
2
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
Optimisation
p
solvant et débit
MeOH/H2O/HCOOH (95/5/0.5%) à 0.4 ml/mn
Choix du piston (piston ovale)
Plus adapté aux produits proches
Rétention de la silice
M i t
Maintenance
plus
l fréquente
fé
t
3
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
Piston rond
La silice reste sur la plaque (désorption)
Maintenance moins fréquente
Mais moins adapté aux produits très proches
4
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
Problèmes majeurs
j
(utilisateurs)
(
)
Passage de 4 LC/MS à 3 LC/MS + CCM/MS
O il complémentaire
Outil
lé
i de
d la
l LC/MS
C/MS (avantages)
(
)
Rapidité: durée d’analyse de 1.5 mn
Visualisation instantanée de la masse pendant l’acquisition
Récupération de l’analyse sur l’intranet
5
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
6
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
X
OH
HO B
OTf
+
A
catalyseur au Pd
X
Cs2CO3/Dioxane/H2O
C
B
Suivi de réaction par CCM et LC/MS
7
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
3: DAD: TIC
2.5e+008
(16)
82%
421.00
421.00
2.43
100
%
(8)
8%
1.69
(18)
6%
2.81
(17)
4%
2.54
0
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
1.75
2.00
2.25
2.50
2.75
3.00
3.25
3.50
1:MSES+
1.8e+007
Combine (694:724-(640:655+773:788))
366.20
100
Time
4.00
3.75
42226
422.26
254.22
322.19
%
0
101.03 110.14 154.24
100.00
150.00
253.19
210.27
255.34
196.15 211.37
310.34
323.35
367.35
423.44
421.60
425.32
369.29
619.64
m/z
200.00
250.00
300.00
350.00
8
400.00
450.00
500.00
550.00
600.00
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
3: DAD: TIC
2.5e+008
(16)
82%
421.00
421.00
2.43
100
%
(8)
8%
1.69
(17)
4%
2.54
(18)
6%
2.81
0
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
1.75
2.00
9
2.25
2.50
2.75
3.00
3.25
3.50
3.75
Time
4.00
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
ELSD-Sedex-65
5.0e+005
(1);100%;0.30
100
%
0
-0.10
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
0.60
0.70
0.80
0.90
1.00
1.10
1.20
1.30
Combine (15:21)
44420
444.20
100
Time
1.50
1.40
1:MSES+
69e+007
6.9e+007
%
44 21
445.21
91.01
446.19
127.23
294.32
332.30
0
m/z
100.00
150.00
200.00
250.00
10
300.00
350.00
400.00
450.00
Nouveaux Développements du couplage CCM-SMELSD : retour d’expérience
p
Technique complémentaire à la LC/MS
Transposition plus rapide pour la purification
Pas de problème d’inversion de pics
S
Sensibilité
ibilité très
t è intéressante
i té
t car moins
i de
d dilution
dil ti
11
Couplage CCMCCM-SM ou CCMCCM-SMSM-ELSD (DAD)
Francis MAQUIN
O t b 2010
Octobre
Couplage CCMCCM-SM ou CCM
CCM--SM
SM--ELSD (DAD)
l’absence de
hypothèses :
signal
SM-électrospray
d’un
spot
donne
plusieurs
☺ la pression LC est élevée (sup à 40bars ) bouchage du piston :
nettoyage ultrasons/inversion éluant pour éliminer le dépôt de silice sur
piston (voir manuel instruction Camag).
Après cette intervention,
intervention la pression LC doit revenir dans une plage du
type 4-15 bars.
CCM-SM
la pression LC est normale : la configuration CCM
SM ne permet pas
d’estimer le rendement d’extraction du spot CCM ; la concentration du
spot CCM est insuffisante ; le spectromètre de masse est la cause du
p
g des p
q
((domaine
problème ; mauvais p
paramétrage
paramètres d’acquisition
de masse ; polarité positif/négatif) ; structures associées au spot ne
s’ionisant pas sous SM-électrospray (hydrocarbures ; aliphatiques ;
)
structures volatiles..).
13
Couplage CCMCCM-SM ou CCM
CCM--SM
SM--ELSD (DAD)
Afin d’éviter de longues heures à tenter d’identifier l’absence de résultats
SM, il faut envisager une configuration du type CCM-SM-ELSD.
(d’après
(d
après nos essais,
essais le signal UV est trop peu sensible/représentatif des
structures isolées par CCM).
L’ELSD
S (détecteur
(
à diffusion
ff
de lumière, www.sedere.com / Sedere
S
Sedex 85 LT) est idéal pour le couplage CCM-SM : sensibilité optimale
pour débit 0,
p
0,1 à 0,6 ml/minutes
/
; compatible
p
tous solvents ; réponse
p
assurée pour aliphatiques ; phtalates ; lipides ; terpenes ; volatils….
14
Couplage CCMCCM-SM ou CCM
CCM--SM
SM--ELSD (DAD)
Comme démontré par Mr F. Bretin, nous suivons en simultanée
les profils d’évaporation SM, ELSD :
x
x
l’absence de profil ELSD signifie la non désorption du spot CCM via
l’interface CCM.
La présence de profil ELSD en l’absence de signal SM s’explique par :
la non ionisation de la structure, un défaut de fonctionnement du
spectromètre de masse… (L’intensité du profil ELSD nous donne une
indication sur la concentration associée au spot CCM).
15
Evolution & Développement possibles pour l’interface
CCM--SM Camag
CCM
C
Francis MAQUIN
Octobre 2011
16
Evolution & Développement possibles pour l’interface CCMCCM-SM
Camag
✔Piston rond/ovale : mise en place de tests après fabrication pour
limiter des problèmes du type “décollement de la silice” autour du spot
selectionné : à discuter avec Chromacin (P.B Savary) et Camag
(Support & Service,
Service Mr.
Mr U.
U Bloesch)
Bloesch).
✔Remplacement optionel de la vanne rheodyne manuelle de l’interface
Camag par une vanne rheodyne automatique OEM (Original
Equipment Manufacturer) (= rheodyne MXP 7900-000 sans son
boîtier) les contacts closures servant à l’automatisation
l automatisation de l’ensemble
l ensemble
CCM-SM. Avec cette vanne rheodyne OEM, il serait toujours possible
de travailler en mode manuel via un montage électrique basic associant
un interupteur par exemple.
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Evolution & Développement possibles pour l’interface CCMCCM-SM
Camag
✔ Etude détaillée de l’éluant entrant dans l’interface CCM-SM Camag :
methanol/eau/acetonitrile/isopropanol ; pourcentage du melange ; debit
de l’éluant ; ajout ou non d’acide formique,TFA ; influence du
pourcentage d’eau
d eau sur la découpe du spot via le piston Camag
(= Camag plunger).
A notre connaissance, aucune publication/note d’application n’est
disponible sur ce sujet : dommage …
✔Pompe LC optionnelle (pompe binaire,tertiaire ou quaternaire)
spécifiquement adaptée aux conditions expérimentales de l’interface
CCM-SM Camag(débit inferieur à 0,6 ml/minute)
✔ Optimisation de visualisation spot CCM : micro lampe, camera
18
Evolution & Développement possibles pour l’interface CCMCCM-SM
Camag
✔ Automatisation du déplacement de la plaque CCM (avec
visualisation des spots intéressante via micro-camera et autres..)
lé
t i d
d
OEM : complexité
l ité d
complémentaire
de lla vanne Rh
Rheodyne
de ce
système, prix, faisabilité, fiabilité …
19
Remerciements :
Club de chromatographie CCM :
Mme Louise Vicard ; Mr Pierre Bernard-Savary
y
(chromacim-Camag France).
MMs Claude Kugel & Bertrand Monégier,
Monégier Sciences Analytiques Paris,
Paris
Sanofi-aventis R & D, Vitry-sur-Seine.
MMs Vincent Leroy, Laurent Schio, Chimie Médicinale Oncologie,
Sanofi-aventis R & D, Vitry-sur-Seine.
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