BIO-FLASH ® BIO-FLASH® CMV IgM

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BIO-FLASH CMV IgM
3000-8566
50 tests
BIO-FLASH CMV IgM est un immunoessai chimiluminescent en deux étapes, entièrement automatisé,
destiné à la détermination qualitative d’anticorps IgM anti-cytomégalovirus dans le sérum ou le plasma
humain au moyen de l’instrument BIO-FLASH.
Sommaire
Le cytomégalovirus humain (CMV) appartient à la famille des herpès virus, comprenant également les herpès virus
simplex type 1 et 2, le virus de la varicelle-zona et le virus Epstein Barr. L’une des caractéristiques communes à
tous ces virus, c’est qu’ils peuvent causer des infections latentes.1 Le CMV est un agent extrêmement répandu qui
infecte normalement les personnes de diverses aires géographiques et économiques. Une grande partie de la
population est infectée par le virus à un moment de sa vie ; jusqu’à 81 % aux États-Unis pour les plus de 35 ans
ont été exposés au virus. Une caractéristique du CMV est que, après la primo-infection, le virus peut persister
longtemps sous forme latente et réapparaître à un moment donné. L’infection, la réinfection ou la réactivation du
CMV chez les adultes normaux et les enfants sont généralement asymptomatiques. Cependant, les infections chez
des patients immunodéprimés, cancéreux ou résultant d’une infection intra-utérine ou périnatale peuvent dériver en
des cas de maladies cliniquement graves.1-8 Les transfusions de sang et la greffe d’organes sont une cause
importante d’infection par CMV chez des patients immunodéprimés.9 On peut prévenir la transmission du CMV aux
récepteurs d’organes en sélectionnant des donneurs séronégatifs aux anticorps anti-CMV. La réactivation, lors de
thérapies immunosuppressives, de virus latents endogènes est une autre cause importante de pathologie chez les
patients immunodéprimés.10 La détection d’une augmentation significative des anticorps IgG spécifiques du CMV
dans des sérums appareillés et la détection d’anticorps IgA et IgM spécifiques du CMV apportent une information
pour le diagnostic sérologique d’infection par CMV. Les tests sérologiques pour la détection d’anticorps anti-CMV
sont importants dans la détermination de l’existence d’une infection préalable, dans le diagnostic d’une infection
active ou récente et dans l’analyse du sang destiné aux transfusions de nouveau-nés et de récepteurs
immunodéficitaires.11
Principe
Lorsque les microparticules paramagnétiques de BIO-FLASH CMV IgM sont mélangées et incubées avec l’échantillon,
si des anticorps spécifiques anti-CMV sont présents dans celui-ci, ces anticorps se lient aux antigènes de CMV
recouvrant les microparticules. Après une séparation magnétique et un lavage afin d’éliminer l’échantillon résiduel, on
ajoute un traceur consistant en un anticorps monoclonal anti-IgM humaine marqué à l’isoluminol qui se lie aux anticorps
IgM anti-CMV capturés par les microparticules. Après une seconde incubation, une séparation magnétique et un autre
lavage, les réactifs activant la réaction chimiluminescente sont ajoutés. Le luminomètre du BIO-FLASH mesure la
lumière émise exprimée en unités relatives de lumière (URL) qui sont directement proportionnelles à la concentration
d’IgM anti-CMV de l’échantillon.
Le BIO-FLASH utilise une méthode de réduction de données avec un ajustement à une courbe logistique de 4
paramètres (4PLC) afin de générer une courbe maîtresse d’étalonnage (CME). Cette courbe est fournie prédéfinie,
dépend du lot et est enregistrée dans l’instrument dans le code-barres de la cartouche. Grâce à la mesure des
calibrateurs (fournis dans un kit à part), la CME prédéfinie se transforme en une nouvelle courbe d’étalonnage de
travail (CET) spécifique à l’instrument. Les concentrations des calibrateurs sont enregistrées dans les codes-barres
des tubes des calibrateurs.
Schéma de la réaction :
Activateurs
(Triggers)
Particule magnétique
Échantillon
Traceur
Émission de lumière
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8566 R04 06.2015 fre
0843
BIO-FLASH ®
Composants
Cartouche de réactifs
Le kit BIO-FLASH CMV IgM contient une cartouche de réactifs pour 50 déterminations (REF 3000-8566).
Remarque : la conception de la cartouche est protégée par un brevet (US D565,741 / Conception CE 000762992-0001)
Composition de la cartouche de réactifs :
La cartouche comprend 4 fioles contenant :
A.
1
fiole
cylindrique
de
suspension
de
microparticules recouvertes d’un antigène de
CMV dans un tampon glycine. Contient < 0,1%
d’azide de sodium ;
B.
1 fiole de tampon d’essai. Contient < 0,1%
d’azide de sodium ;
C.
1 fiole opaque d’un traceur consistant en un
anticorps monoclonal murin anti-IgM humaine
marqué à l’isoluminol. Contient < 0,1 % d’azide
de sodium ;
D.
1 fiole vide.
Préparation
Voir la figure ci-dessous.
Cartouche : les microparticules sédimentent pendant leur transport et leur stockage, par conséquent, il convient de
les mélanger afin de les remettre en suspension.
•
Lors de la première utilisation de la cartouche, retournez-la doucement 30 fois en veillant à éviter la
formation de mousse (les bulles d’air peuvent altérer la lecture des capteurs de liquide de l’instrument).
•
Vérifiez que les microparticules soient complètement remises en suspension. Si ce n’est pas le cas, continuez
à retourner la cartouche jusqu’à la remise en suspension complète.
•
NE PAS UTILISER LA CARTOUCHE si les microparticules ne sont pas remises en suspension ou en cas de
rupture de la bande qui scelle les réactifs.
•
Une fois les microparticules remises en suspension, placez la cartouche sur une surface solide et retirez avec
prudence la languette rouge de sécurité pour le transport.
•
Tout en maintenant la cartouche sur la surface solide, appuyez sur les deux languettes situées de part et
d’autre du bouchon perforateur (partie grise) et appuyez sur la partie supérieure de la cartouche jusqu’à
atteindre la position de blocage. Une fois la cartouche en position de blocage, les languettes doivent rester
invisibles. Ne retournez pas la cartouche ouverte.
•
Laissez reposer la cartouche pendant 5 minutes avant de l’insérer dans l’instrument.
•
Une fois la cartouche insérée, l’instrument mélange son contenu de façon automatique à des intervalles réguliers.
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Précautions
Les réactifs BIO-FLASH sont destinés à un usage diagnostique IN VITRO.
Utilisation réservée aux professionnels.
L’azide de sodium peut réagir avec les canalisations et les tuyaux d’écoulement en plomb ou en cuivre, provoquant
la formation d’azides métalliques fortement explosifs. Lors de l’élimination des restes de réactifs, laissez couler
l’eau abondamment.
ATTENTION : MATIÈRE PRÉSENTANT UN RISQUE BIOLOGIQUE.
Jetez toutes les matières utilisées dans des récipients destinés aux biocontaminants.
Veuillez ne pas réutiliser ou réintroduire des réactifs dans les cartouches ou fioles.
Classe de danger
Non classifié.
Mentions de danger
Aucune.
Conseils de prudence
P280 : Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/ du
visage.
P305+351+338 : EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : rincer avec précaution à l’eau pendant plusieurs
minutes. Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent être facilement enlevées.
Continuer à rincer.
Prélèvement et conservation des échantillons
Utilisez du sérum frais (des tubes contenant du gel séparateur de sérum peuvent aussi être utilisés) ou du plasma
(EDTA, Li-héparine, Li-héparine en tube contenant du gel séparateur, Na-héparine et Na-citrate). D’autres
anticoagulants doivent être vérifiés avant utilisation. Les anticoagulants liquides, tels que le Na-citrate, exercent un
effet de dilution et peuvent réduire la concentration d’échantillons des patients. Les échantillons ne doivent pas être
inactivés par la chaleur. Les particules en suspension doivent être retirées par centrifugation. Les directives
CLSI H18-A3 et H21-A5 offrent des informations supplémentaires sur la manipulation, le transport, le traitement et
la conservation des échantillons.
Sérum
Les échantillons de sérum peuvent être stockés à une température comprise entre 2 et 8°C pendant 8 jours. Pour
une période de temps plus longue, ils doivent être congelés à une température égale ou inférieure à -20°C. Les
échantillons ne peuvent pas être congelés/décongelés plus de 3 fois. Il convient de bien mélanger après
décongélation. Assurez-vous de l’absence de bulles d’air dans les échantillons et, dans le cas contraire, retirez-les
totalement avant de procéder à l’analyse.
Plasma
Les échantillons de plasma peuvent être stockés à une température comprise entre 2 et 8°C pendant 8 jours. Pour
une période de temps plus longue, ils doivent être congelés à une température égale ou inférieure à -20°C.
Décongelez le plasma à 37°C. Ne décongelez les échantillons qu’une seule fois. Bien mélanger après
décongélation. Assurez-vous de l’absence de bulles d’air dans les échantillons et, dans le cas contraire, retirez-les
totalement avant de procéder à l’analyse.
Volume d’échantillon
Le volume d’échantillon nécessaire pour réaliser un seul test avec BIO-FLASH CMV IgM varie en fonction du type
de récipient utilisé. Un essai nécessite au moins 15 µL plus le volume mort, qui correspond à 200 µL si la coupelle
à échantillon recommandée est utilisée (REF 3000-8209).
Autres matériels
Les matériels suivants ne sont pas fournis avec la cartouche de réactifs et doivent être achetés séparément.
REF 3000-8638
BIO-FLASH CMV IgM Calibrators (Calibrateurs)
REF 3000-8639
BIO-FLASH CMV IgM Controls (Contrôles)
Pour de plus amples informations, veuillez lire attentivement les instructions correspondantes.
N’utilisez pas d’autres calibrateurs. Les informations requises par l’instrument BIO-FLASH pour étalonner l’essai
BIO-FLASH CMV IgM sont enregistrées dans les codes-barres des fioles.
L’utilisation de contrôles d’autres fabricants peut provoquer des résultats inattendus.
Assurez-vous que l’instrument BIO-FLASH possède une quantité suffisante des consommables suivants, avant le
traitement des échantillons, calibrateurs ou contrôles :
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REF 3000-8206
BIO-FLASH Cuvettes (Cuvettes)
Remarque : la conception des cuvettes est protégée par un brevet (US D560,816/Conception CE 000762984-0001)
REF 3000-8204
BIO-FLASH Triggers (Activateurs)
REF 3000-8205
BIO-FLASH System Rinse (Solution du système)
REF 3000-8207
BIO-FLASH Sample Diluent (Diluant des échantillons)
Instrument / réalisation de l’essai
Vous trouverez les instructions complètes pour réaliser l’essai dans le manuel d’utilisation du BIO-FLASH.
Étalonnage
Le code-barres de la cartouche contient une courbe maîtresse d’étalonnage (CME) valable pour le lot de réactifs.
Néanmoins, tous les réactifs requièrent une courbe d’étalonnage de travail (CET), qui est spécifique à chaque lot et
valable jusqu’à la date de péremption de celui-ci. Une nouvelle CET doit être obtenue lorsque les résultats des contrôles
sont en dehors des limites de l’intervalle d’acceptabilité ou lorsque des ajustements de l’instrument ont été réalisés.
Veuillez lire attentivement le manuel d’utilisation du BIO-FLASH afin de configurer une CET.
Contrôle de qualité
Afin de réaliser un programme complet de contrôle de la qualité, deux niveaux de contrôle sont recommandés.
Les contrôles BIO-FLASH CMV IgM négatif et positif ont été conçus pour ce programme. Il est recommandé que
chaque laboratoire établisse sa propre moyenne et l'écart standard, ainsi qu’un programme de contrôle de qualité
pour surveiller les tests de laboratoire. Les contrôles doivent être analysés au moins une fois toutes les 24 heures
par jour d’utilisation. Si les contrôles sont hors limites, il peut être nécessaire de réétalonner l’instrument. Vous
trouverez de plus amples informations dans le manuel d’utilisation de l’instrument. Afin d’identifier et de résoudre
des situations de contrôle de qualité anormales, consultez Westgard et al.12
Conservation et stabilité
Les réactifs n’ayant pas été ouverts restent stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette de la
cartouche à condition qu’ils soient stockés à une température comprise entre 2 et 8°C en position verticale.
Après ouverture, la stabilité de la cartouche chargée dans l’instrument BIO-FLASH ou stockée à une température
comprise entre 2 et 8°C est de 14 semaines.
Interprétation des résultats
La quantité d’analyte dans chaque échantillon est déterminée à partir de la lumière émise (URL), par interpolation
sur la courbe d’étalonnage de travail mémorisée. Les résultats de BIO-FLASH CMV IgM sont exprimés en S/CO
(signal de l’échantillon/valeur seuil). Ceci est un test qualitatif, la valeur numérique du résultat n'a qu'une valeur
indicative de la quantité d'anticorps. La détermination des IgM anti-CMV avec BIO-FLASH CMV IgM aide au
diagnostic d'une infection récente.
•
•
•
Les échantillons avec un résultat < 0,90 S/CO sont considérés comme non réactifs (négatifs).
Les échantillons avec un résultat ≥ 0,90 et < 1,10 S/CO sont considérés comme non interprétables (douteux).
Les échantillons considérés comme non interprétables doivent être à nouveau analysés. Si un résultat non
interprétable est obtenu lors de la seconde analyse, il doit être enregistré comme tel et il convient soit de
réaliser un autre essai en utilisant une méthode alternative, soit d’obtenir et d’analyser un second échantillon.
Les échantillons avec un résultat ≥ 1,10 S/CO sont considérés comme réactifs (positifs).
Comme dans tous les immunoessais sensibles, il est possible que des résultats positifs non reproductibles se
produisent. Un résultat négatif n'exclut pas la possibilité d'une infection par CMV. Une possible séroconversion doit
être confirmée par la détermination quantitative des IgG spécifiques, par exemple avec BIO-FLASH CMV IgG
REF 3000-8563 en analysant des échantillons appariés pris à un intervalle de 2 à 4 semaines.
Limitations
Le résultat d’un seul échantillon s’avère insuffisant pour diagnostiquer une primo-infection par CMV. Par
conséquent, outre les résultats du BIO-FLASH CMV IgM, il convient de tenir compte d’autres données, telles que,
par exemple, la symptomatologie, l’histoire clinique, les résultats d’autres tests et toutes autres informations
importantes.
Les anticorps hétérophiles dans le sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines du réactif, interférant
13
avec les immunoessais in vitro. Les données obtenues peuvent indiquer que la présence d'anticorps hétérophiles
dans l'échantillon peut conduire à des résultats faussement positifs.
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Résultats attendus
L’infection par CMV peut survenir à tout âge, y compris à l’étape fœtale. Près de 50% des jeunes adultes d’Europe
centrale sont infectés par le CMV. Environ 70-80% de la population plus âgée est séropositive. Après la naissance, le
l'indice de manifestation de l’infection par CMV est inférieur à 1% chez les personnes immunocompétentes.14
Dans une étude américaine, la prévalence de l'infection à CMV était de 58,9% chez les personnes à l’âge de 6 ans
ou plus. La séroprévalence du CMV s'accroît avec l'âge, passant de 36,3% chez les personnes de 6 à 11 ans à
90,8% chez celles âgées de 80 ans ou plus.
Caractéristiques fonctionnelles
REMARQUE : les données suivantes sont représentatives ; les résultats obtenus dans des expériences isolées
peuvent varier par rapport à ces données.
Comparaison de méthodes
BIO-FLASH CMV IgM a été évalué dans les études comparatives avec d’autres essais commercialisés.
Évaluations
Une évaluation interne et une évaluation externe ont été effectuées au Servei de Microbiologia (service de
microbiologie) de l'Hospital de la Santa Creu i Sant Pau de Barcelone (Espagne). Dans l'étude interne, 154
échantillons provenant de différentes sources, y compris les sérums positifs et négatifs pour les anticorps IgM antiCMV, ont été testés avec BIO-FLASH CMV IgM comparativement à une méthode EIA CMV IgM commercialisée.
Dans l'étude externe, 311 échantillons provenant de différentes sources, y compris les sérums positifs et négatifs
pour les anticorps IgM anti-CMV, ont été analysés avec BIO-FLASH CMV IgM comparativement à une méthode
commercialisée ELFA CMV IgM. Les résultats sont présentés globalement. Les calculs n’ont pas tenu compte des
résultats non interprétables (IND)
Méthode de référence
BIO-FLASH
IND NÉG POS Total
CMV IgM
IND
0
5
0
5
NÉG
3
338
8
349
POS
0
16
95
111
Total
3
359 103 465
Les résultats initiaux de sensibilité et de spécificité relatives, ainsi que de concordance globale, suivants ont été obtenus :
N
457
Sensibilité relative
Valeur
IC de 95%
92,2% 85,3% à 96,6%
Spécificité relative
Valeur
IC de 95%
95,5% 92,8% à 97,4%
Concordance globale
Valeur
IC de 95%
94,7% 92,3% à 96,6%
Les échantillons discordants ont été analysés avec des méthodes ELFA CMV IgM et EIA CMV IgM
commercialisées. Quatre des échantillons ont été résolus en faveur du BIO-FLASH CMV IgM. Après l’essai
supplémentaire, les résultats finaux de sensibilité, de spécificité et de concordance globale suivants ont été
obtenus :
N
456
Sensibilité finale
Valeur
IC de 95%
94,2% 87,9% à 97,9%
Spécificité finale
Valeur
IC de 95%
96,9% 94,5% à 98,4%
Concordance globale finale
Valeur
IC de 95%
96,3%
94,1% à 97,8%
Précision
Conformément aux directives CLSI EP05-A, la précision intra-essai et totale (pour chaque essai et jour après jour)
a été évaluée lors de multiples essais. Le tableau ci-dessous affiche le résumé des résultats :
Contrôle négatif
Contrôle positif
Proche de la valeur seuil
Moyenne (S/CO)
0,25
2,65
0,77
Intra-essai
0,016 SD
4,4% CV
6,5% CV
Totale
0,023 SD
4,9% CV
10,2% CV
Interférences
Conformément aux directives CLSI EP7-A, des études ont démontré que les substances suivantes potentiellement
interférentes n’altèrent pas les résultats du BIO-FLASH CMV IgM :
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Substance potentiellement interférente
Hémoglobine
Bilirubine indirecte
Bilirubine directe
Triglycérides
Facteur rhumatoïde
Concentration
500 mg/dL
18 mg/dL
18 mg/dL
1300 mg/dL
543 UI/mL
% Interférence
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
Réactivité croisée
L’analyse de 109 échantillons potentiellement susceptibles de produire une réaction croisée avec l’essai
BIO-FLASH CMV IgM et la comparaison des résultats obtenus avec des tests commercialisés de CMV IgM ont
mis en évidence la concordance suivante :
Réaction croisée potentielle
Anti-HIV (anticorps contre le virus de l’immunodéficience humaine)
HAMA (anticorps humain antimurin)
SLE (Lupus érythémateux systémique)
ANA (anticorps antinucléaires)
Anti-EBV (anticorps contre le virus Epstein-Barr)
Anti-PV B19 (anticorps contre le parvovirus B19)
Anti-HSV 1 (anticorps contre le virus herpès simplex de type 1)
Anti-VZV (anticorps contre le virus varicelle-zona)
Paraprotéines IgG et IgM
Concentration élevée d’IgG et d’IgM
Anticorps hétérophiles
RF (Facteur rhumatoïde)
Femme enceinte (multipare comprise)
Concordance
5/5
5/5
8/10
5/5
4/5
7/7
5/5
5/5
5/6
8/10
9/13
9/10
22/23
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