35_36 Geste leuco

Fiche
geste
techniques de leucoconcentration
chez le chien et le chat
D
PRINCIPE
La leucoconcentration consiste à obtenir
de façon simple, c’est-à-dire par centrifugation, un prélèvement enrichi en leucocytes à
partir de sang périphérique récolté sur anticoagulant (E.D.T.A., le plus souvent).
● Il convient alors d’étaler et de colorer ce
prélèvement pour procéder à son examen
direct, comme dans le cadre d’un frottis sanguin. Il peut aussi être utilisé pour réaliser des
infections expérimentales, par exemple, pour
une mise en culture sur lignées cellulaires.
●
Unité de médecine interne
et laboratoire d’hématologie clinique
Département des Animaux de Compagnie
E.N.V.L.
1, avenue Bourgelat
69280 Marcy l’Étoile
Objectif pédagogique
L’examen d’un leucoconcentré
présente une efficacité diagnostique
bien supérieure à celui d’un frottis
sanguin traditionnel.
Cette fiche décrit des techniques
simples à réaliser par le praticien.
ans le cadre du diagnostic des maladies
vectorielles, la recherche des inclusions
leucocytaires (ou plaquettaires) caractéristiques de l’affection s’avère souvent fastidieuse lors de l’examen du frottis sanguin*.
● Elle est d’autant plus difficile, et parfois infructueuse, que les cellules parasitées sont
en nombre limité, notamment dans les phases chroniques de maladies, et que les lignées cellulaires concernées sont peu représentées. Ainsi, dans une étude portant sur
50 chiens en phase aiguë d’ehrlichiose
monocytaire, l’examen de 1 000 champs en
immersion (soit, pour un œil averti, une
heure de lecture), n’a permis de mettre en
évidence qu’une à trois morulas par frottis
sanguin … [Mylonakis M.E. et al., 2003].
● Pour pallier la faible sensibilité d’un tel examen, estimée en moyenne autour de 4 p.
cent, des techniques de leucoconcentration
ont été proposées.
● Ces techniques simples, qui peuvent être
réalisées par le praticien, permettent d’augmenter nettement la sensibilité de l’examen
direct : selon les études, des valeurs comprises entre 20 et 66 p. cent de frottis positifs
sont en effet atteintes.
● Ces techniques peuvent être également
employées pour le diagnostic de la piroplasmose [Hugnet C. et al., 2000].
Thomas Normand
Luc Chabanne
Définir et réaliser
un leucoconcentré.
Geste
1
Aspect d’un tube à microhématocrite après centrifugation.
Visualisation du "buffy coat" (flèche) (photo Laboratoire
d’hématologie clinique, E.N.V.L.).
❚ Facile à réaliser.
❚ Praticien généraliste.
Figure 1 Vue schématique
d’un leucoconcentré
NOTE
* Cf. D. Ledieu, "Le frottis sanguin.
Comment le réaliser et le lire chez
le chien et le chat", Le Nouveau
Praticien Vétérinaire, 2004;16:19-20.
Essentiel
COMMENT RÉALISER
UN LEUCOCONCENTRÉ ?
● Différentes méthodes, plus ou moins élaborées, ont été décrites pour réaliser un leucoconcentré.
● La méthode la plus simple et la plus rapide
consiste à étaler le "buffy coat" (la couche
leuco-plaquettaire) après avoir centrifugé
un tube à hématocrite contenant du sang
périphérique, lui-même récolté sur un anticoagulant. Le "buffy coat" est la zone blanche d’aspect velouté qui constitue la couche
intermédiaire entre le surnageant (le plasma)
et le culot (les hématies) (photo 1, figure 1).
Pour cela, scier à l’aide d’une petite lime pour
ampoules ou d’une pointe de diamant le
tube à microhématocrite entre le culot d’hématies et le "buffy coat", puis étaler le prélèvement sur une lame de verre dégraissée,
comme pour un frottis sanguin classique.
● Pour obtenir un prélèvement de meilleure
qualité, réaliser plutôt deux centrifugations
successives selon la méthode développée
par Cabassu et Haroutunian (figure 2) :
❚ La leucoconcentration
consiste à obtenir
par centrifugation
un prélèvement sanguin
enrichi en leucocytes.
❚ L’utilisation
d’un leucoconcentré permet
d’augmenter la sensibilité
de l’examen direct du frottis.
❚ Pour obtenir
un prélèvement de meilleure
qualité, réaliser deux
centrifugations successives.
CANINE - FÉLINE
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LE NOUVEAU PRATICIEN VÉTÉRINAIRE
AOÛT / SEPTEMBRE 2005 - 303