Activités expérimentales

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Chapitre 4. Activités expérimentales
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Analyse de pigments végétaux.
La couleur verte des feuilles d'arbre est due à la chlorophylle. On s'intéresse aux pigments des feuilles d'arbre
dont la couleur passe du vert au rouge en automne (en passant par le jaune).
Doc : deux colorants alimentaires végétaux.
Le principal pigment contenu dans la tomate est le lycopène. Du fait de sa grande disponibilité, le lycopène est
beaucoup utilisé comme colorant alimentaire (sous le code européen E160d). Il s'agit d'un pigment liposoluble
rouge de la famille des carotènes.
Le principal pigment contenu la carotte est le bêta-carotène. Il est lui aussi utilisé comme colorant alimentaire
(mais sous le code européen E160a). Le β-carotène est un pigment orange, là encore de la famille des carotènes.
eau
éthanol
cyclohexane
dichlorométhane
Miscible à l’eau
oui
oui
non
non
Solubilité du lycopène
très faible
grande
grande
grande
Solubilité du β-carotène
très faible
faible
grande
grande
Solubilité de la chlorophylle
très faible
oui
oui
oui
Risques
non
Proposer puis réaliser une ou plusieurs expériences permettant de répondre aux questions suivantes :
Une feuille d'arbre verte contient-elle une ou plusieurs chlorophylles ?
Une feuille d'arbre verte contient-elle déjà des pigments rouge-orangé ?
Une feuille d'arbre devenue jaune contient-elle encore de la chlorophylle ?
Une feuille d'arbre devenue rouge contient-elle encore de la chlorophylle ?
Une feuille d'arbre devenue jaune contient-elle du β-carotène ou du lycopène ou un autre pigment rougeorangé ?
Une feuille d'arbre devenue rouge contient-elle du β-carotène ou du lycopène ou un autre pigment rougeorangé ?
CCM : le jeu des 5 erreurs.
Chapitre 4. Activités expérimentales
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1 S
Analyse de pigments végétaux.
Éléments de correction.
Extraire les pigments des feuilles d'arbre en utilisant un mortier et un pilon et quelques mL de cyclohexane à
chaque fois (3 binômes s'occupent de feuilles vertes, 3 binômes s'occupent de feuilles jaunes et 3 binômes
s'occupent de feuilles rouges).
La moitié des binômes extrait le β-carotène contenu dans 20 mL de jus de carottes en utilisant 10 mL de
cyclohexane. L'autre moitié des binômes extrait le lycopène contenu dans 20 mL de jus de tomate dilué (salé
pour éviter les émulsions) en utilisant 10 mL de cyclohexane.
Réaliser la chromatographie (jeu des 5 erreurs de CCM corrigé à la fin) des différents pigments en utilisant un
éluant contenant 25 % (en volume) d'acétone et 75 % (en volume) d'éthers de pétrole et en déposant dans
l'ordre :
- un extrait de feuilles vertes pour être analysé (et qui sert de référence pour la chlorophylle) ;
- un extrait de feuilles jaunes ou rouges pour être analysé ;
- un extrait de carottes qui sert de référence pour le β-carotène ;
- un extrait de tomates qui sert de référence pour le lycopène.
Les différents carotènes ne sont pas séparés lors de cette CCM : il n'est pas possible ici de distinguer le lycopène
du β-carotène.
Après analyse des chromatogrammes, on constate que :
- les feuilles d'arbre contiennent différentes chlorophylles ;
- les feuilles d'arbre encore verte contiennent déjà un pigment rouge-orangé ;
- les feuilles d'arbre devenues jaune ou rouge contiennent encore des chlorophylles (mais moins présentes) ;
- le pigment rouge-orangé de ces feuilles d'arbre semble être un carotène (mais on ne peut pas trancher entre le
lycopène et le β-carotène).
L'éthanol permet de mieux nettoyer le mortier et le pilon.
CCM : le jeu des 5 erreurs :
- cuve à CCM n°I : la plaque à CCM est trop au bord ;
- cuve à CCM n°I : un des dépôts sur la plaque à CCM est trop au bord ;
- cuve à CCM n°II : la ligne des dépôts n'est pas horizontale (les dépôts ne sont pas à la même hauteur) ;
- cuve à CCM n°II : la cuve à CCM n'est pas fermée ;
- cuve à CCM n°III : la ligne des dépôts est sous le niveau de l'éluant (les dépôts plongent dans l'éluant).
Chapitre 4. Activités expérimentales
Analyse de pigments végétaux.
Liste du matériel.
Au bureau :
□ jus de tomates dilué et très salé (pour éviter les émulsions) - je m'en charge
□ jus de carottes pas trop dilué - je m'en charge
□ 6 feuilles rouges d'arbre - je m'en charge
□ 6 feuilles jaunes du même arbre - je m'en charge
□ 6 feuilles vertes du même arbre - je m'en charge
□ cyclohexane
□ sel de cuisine - r.a.s.
□ spatule
□ éthanol
□ 250 mL d'éluant : 25% (en volume) d'acétone et 75% (en volume) d'éthers de pétrole
□ 4 béchers
□ au moins 18 plaques à CCM
□ au moins 18 tubes capillaires ou pipettes Pasteur
Pour chaque binôme :
□ petite ampoule à décanter avec support
□ mortier et pilon
□ 2 béchers
□ pot à yaourt
□ cuve à CCM (pot à confiture avec bouchon)
□ pissette d'eau distillée
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