Réactif isoenzyme CK-MB - Thermo Fisher Scientific

Réactif isoenzyme CK-MB
RÉSUMÉ DU PRODUIT
Stabilité :
7 jours entre 2 °C et 8 °C
Plage de mesure
: Jusqu’à 1 000 U/l
Type d’échantillon
: Sérum
Méthode
:
Cinétique
Préparation du réactif : Ajouter le volume indiqué de tampon.
Symboles sur l’étiquetage du produit
Représentant agréé
Limite de température
Pour usage diagnostique in vitro
Date de péremption
Code/numéro du lot
Référence catalogue
MISE EN GARDE. Consulter le
mode d’emploi.
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Fabricant
Réactif A
Réactif B
Risque pour la santé
UTILISATION PRÉVUE
Ce réactif est destiné à la détermination quantitative in vitro de la CK-MB (CK-2) dans le
sérum humain.
IMPORTANCE CLINIQUE
La créatine kinase (ATP: créatine N-phosphotransférase, EC2.7.3.2) est une enzyme dimérique
composée de deux types de sous-unités monomériques, le type M (musculaire) et le type B
(cérébrale). Les sous-unités s’associent pour former trois isoenzymes distinctes de CK, la
CK-BB (CK-1), la CK-MB (CK-2) et la CK-MM (CK-3). La CK-MM est la forme prédominante
de CK dans le muscle squelettique. La CK-BB se trouve dans le cerveau et dans le muscle
lisse. La CK-MB se trouve en concentration élevée dans le myocarde (entre 14 % et 42 %)
et dans une moindre mesure dans le muscle squelettique. En l’absence de pathologie, la
plupart de l’activité de la CK dans le sérum est due à l’isoforme CK-MM.
Une lésion du myocarde, telle qu’elle survient dans l’infarctus aigu du myocarde (IAM),
entraîne une augmentation des concentrations circulantes de l’isoforme CK-MB.
Généralement, les concentrations de CK-MB s’élèvent entre 4 et 6 heures après l’apparition
de la douleur thoracique, culminent entre 12 et 24 heures et reviennent au niveau initial dans
les 48 heures. En cas de suspicion d’IAM, il est généralement recommandé de déterminer
la CK-MB à l’admission puis 6 heures, 12 heures et 24 heures plus tard.
Symbole de risque : Risque pour la santé
Mention : danger
1,2
MÉTHODOLOGIE
Plusieurs méthodes sont disponibles pour séparer et quantifier la CK-MB par électrophorèse
et par immunoinhibition. Les méthodes par immunoinhibition ont l’avantage d’être facilement
automatisées.
La méthode CK-MB de Thermo Scientific utilise l’immunoinhibition. Le réactif contient un
mélange d’anticorps monoclonaux dirigés contre le monomère CK-M, et par conséquent, il
inhibe complètement l’activité de la CK-MM et la moitié de l’activité de la CK-MB. L’activité
de la sous-unité monomérique B non inhibée de la CK-MB est mesurée et représente la
moitié de l’activité de la CK-MB. La méthode suppose que l’activité de l’isoenzyme CK-BB
est quasiment nulle dans le sérum.
Dans cette méthode, le sérum est ajouté à un réactif CK-NAC modifié qui contient l’anticorps
anti-M. Pendant l’incubation initiale, les réactions suivantes se produisent :
1. CK-MM + anticorps ————> CK-MM inhibée
CK-MB + anticorps ————> CK-MB inhibée à 50 %
2. CK-B inactivée ————> NAC ————> CK-B activée
L’activité de la CK-B est déterminée en utilisant la séquence de réactions suivante :
CK-B
3. Créatine phosphate + Mg-ADP ————>
Créatine + ATP
HK
4. ATP + Glucose ————> Glucose-6-phosphate + ATP
G6PDH
5. G6P + NADPH+ ——————>
6-GP + NADPH
L’adénylate kinase (myokinase) est inhibée par l’AMP et le P1P5-diAP.
AK
6. 2ADP + NADPH+ ————
// ———> AMP + ATP
Abréviations
ADP =
ATP =
HK =
G-6-P =
NADP+
=
G-6-PDH =
6-PG =
NADPH =
AMP =
AK =
P1P5-diAP = adénosine-5’-diphosphate
adénosine-5’-triphosphate
hexokinase
glucose-6-phosphate
nicotinamide adénine dinucléotide phosphate
glucose-6-phosphate déshydrogénase
6-phosphogluconate
NADP réduit
adénosine-5’-monophosphate
adénylate kinase
P1P5-di(adénosine-5’-)pentaphosphate
COMPOSITION DU RÉACTIF
Principes actifs
Concentration
Mélange d’anticorps monoclonal anti-CK humaine en quantité suffisante pour inhiber
jusqu’à 2 000 U/l de CK-M à 37 °C
Acétate d’imidazole
100 mmol/l
AMP5 mmol/l
NADP2 mmol/l
P1P5-diAP10 mmol/l
EDTA2 mmol/l
Acétate de Mg
10 mmol/l
ADP2 mmol/l
D-glucose20 mmol/l
NAC20 mmol/l
Créatine phosphate
30 mmol/l
Hexokinase (levure)
> 3 000 U/l
G-6PDH (Leuconostoc)
> 2 000 U/l
Contient également des produits de remplissage non réactifs et des stabilisants.
pH 7,00 ± 0,2 à 20 °C
Phrases de risque
H360 Susceptible de nuire à la fertilité ou au fœtus
Conseils de prudence – Prévention
Se procurer les instructions spécifiques avant utilisation
Ne pas manipuler avant d’avoir lu et compris toutes les précautions de sécurité
Utiliser l’équipement de protection individuel requis
Conseils de prudence – Intervention
En cas d’exposition ou d’un malaise : consulter un médecin
Conseils de prudence – Stockage
Garder sous clef
Conseils de prudence – Élimination
Éliminer le contenu/récipient dans une usine approuvée de traitement des déchets
Dangers non classés par ailleurs
Non applicable
Toxicité inconnue
0,448 % du mélange contient un ou plusieurs composants de toxicité inconnue
Autres informations
Aucune information disponible
Pour un complément d’information, se reporter à la Fiche de données de sécurité du produit.
L’emballage de ce produit contient du caoutchouc sec naturel. Faire preuve de prudence lors de
la manipulation des sertissages et des flacons en verre cassés, car les bords coupants peuvent
blesser l’utilisateur.
PRÉPARATION DU RÉACTIF
Reconstituer le réactif A avec le volume de tampon, réactif B, indiqué sur l’étiquette du flacon.
Mélanger doucement jusqu’à dissolution.
STABILITÉ ET CONSERVATION
Avant utilisation :
Le réactif conservé réfrigéré entre 2 °C et 8 °C est stable jusqu’à la date de péremption indiquée
sur le flacon et sur l’étiquette de la boîte du coffret.
Réactif reconstitué :
Le réactif conservé fermé entre 2 °C et 8 °C est stable pendant au moins 7 jours.
Indications de détérioration du réactif :
•
Turbidité
•
Absorbance > 0,7 à 340 nm (1 cm) et/ou
•
Impossibilité d’obtenir des valeurs de contrôle dans la plage attribuée.
PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS3,4
Prélèvement : En cas de suspicion d’AIM, il est recommandé de prélever du sang pour déterminer
la CK-MB à l’admission, puis ensuite après 6 heures, 12 heures et 24 heures. Le nombre minimum
absolu d’échantillons est de 2, obtenus 12 heures et 24 heures après l’apparition des symptômes.
Sérum : utiliser du sérum non hémolysé.
Plasma : non recommandé. L’héparine, l’EDTA, le fluorure et le citrate inhibent l’activité de la CK.
Conservation : La CK est stable pendant 1 jour à 4 °C. La stabilité peut cependant varier légèrement
pour un sérum donné en fonction de la répartition des isoenzymes et du statut acido-basique du
patient. Pour une durée plus longue, conserver congelé à -20 °C.
ÉQUIPEMENT SUPPLÉMENTAIRE REQUIS MAIS NON FOURNI
•
Au besoin, pipettes pour distribuer avec exactitude les volumes mesurés.
•
Analyseur de chimie clinique capable de maintenir une température constante (37 °C) et de
mesurer l’absorbance à 340 nm.
•
Consommables spécifiques de l’analyseur, p. ex. godets à réaction.
•
Matériel de contrôle normal et anormal.
PROCÉDURE DE DOSAGE
Les paramètres d’analyseur suivants sont recommandés. Des applications d’instruments individuels
sont disponibles sur demande auprès du groupe de support technique.
Paramètres de l’analyseur
Température
Longueur d’onde
Type de dosage
Sens
Rapport échantillon:réactif
p. ex. Vol. échantillon
Vol. réactif
Délai/Durée d’attente
Durée de lecture
Blanc réactif
(340 nm, trajectoire lumineuse 1 cm)
30 °C/37 °C
340 nm (334 à 365 nm)
Vitesse/Cinétique
Augmentation
1:20
10 µl
200 µl
300 secondes
300 secondes
Bas
0,0 UA
Haut
0,7 UA
Linéarité
Sensibilité
(340 nm, trajectoire lumineuse 1 cm)
Jusqu’à 1 000 U/l
0,15 DmA/min par U/l
CALCULS
2.
3.
Les résultats sont calculés, en général automatiquement par l’instrument, de la manière
suivante :
Activité en U/l = Abs/min x facteur
VT x 1 000
Facteur = ——————— x 2
6,3 x VE x L
où : VT
=
VE =
6,3 =
L
=
2
=
Volume total de réaction en ml
Volume d’échantillon en ml
Coefficient d’absorption millimolaire du NADH à 340 nm
(voir remarque 4).
Longueur de trajectoire de la cuvette en cm
La multiplication de la valeur de CK-B par 2 donne
une estimation de l’activité de la CK-MB.
Pourcentage de CK-MB :
CK-MB U/l
% d’activité CK-MB = ———————
x 100
CK totale U/l
Exemple :
CK totale
=
350 U/l
CK-MB =
53 U/l
53 U/l x 100
% d’activité CK-MB = ————
350 U/l
% d’activité CK-MB = 15 %
REMARQUES
1. Les volumes de réactif et d’échantillon peuvent être modifiés proportionnellement pour
répondre aux exigences des différents spectrophotomètres.
2. La CK totale doit être déterminée d’abord en utilisant le réactif Thermo Scientific IFCC
de dosage de la CK à un seul flacon ou le réactif IFCC de dosage de la CK à 2 flacons.
Si le changement d’absorbance est supérieur à 0,55/min, recommencer le dosage en
diluant le sérum. Cependant, la proportion du volume de sérum est essentielle dans
le système de réaction CK. Des changements apportés à la proportion du volume,
comme cela se produit en cas de dilution préalable de l’échantillon, n’entraîne pas une
modification stœchiométrique de la vitesse de réaction. Si une dilution est nécessaire,
il est recommandé d’utiliser une solution à 150 mmol/l de NaCl. À la dilution de 1:2, on
peut anticiper une augmentation apparente de la CK d’au maximum 10 %5,6. Sinon, il est
possible d’utiliser un groupe de sérum exempt de CK pour effectuer la dilution. Du sérum
exempt de CK peut être obtenu en chauffant le sérum à 56 °C pendant deux heures.
3. La validité des résultats dépend de l’exactitude de l’étalonnage des instruments, de la
chronologie et du contrôle de la température.
4. Coefficient d’absorption millimolaire du NADH à 334 nm = 6,18 et à 365 nm = 3,40.
5. Conversion d’unité U/l x 16,67 x 10-3 = µkat/l
ÉTALONNAGE
Non requis. La vitesse de la réaction est convertie en U d’activité/l à l’aide d’un facteur de
calcul. Se reporter à la section Calculs de cette notice.
CONTRÔLE QUALITÉ
Pour assurer un contrôle qualité adéquat, un contrôle normal et un contrôle anormal disposant
de valeurs dosées doivent être exécutés comme des échantillons inconnus :
•
•
•
Au moins une fois par jour ou comme établi par le laboratoire.
Quand un nouveau flacon de réactif est utilisé.
Après une intervention de maintenance préventive ou le remplacement d’un composant
critique.
Les résultats de contrôle se situant hors de la limite supérieure ou inférieure des plages
établies indiquent que le dosage est peut-être hors limites.
Dans de telles situations, les actions correctrices suivantes sont recommandées :
•
Répéter les mêmes contrôles.
•
Si les résultats du contrôle répété sont hors limites, préparer du sérum de contrôle
frais et répéter le test.
•
Si les résultats réalisés sur du produit de contrôle frais sont toujours hors limites,
répéter le test avec du réactif frais.
•
Si les résultats sont toujours hors limites, contacter les services techniques ou le
distributeur local.
LIMITES
1. Des études visant à déterminer le niveau d’interférence de l’hémoglobine, de la bilirubine
et de l’hyperlipidémie ont été menées sur un analyseur de chimie clinique automatique.
Les résultats suivants ont été obtenus :
Hémoglobine : éviter les échantillons hémolysés pour minimiser les interférences de
l’adénylate kinase et d’autres intermédiaires de la réaction comme l’ATP et la G-6-P.7
Bilirubine : aucune interférence de la bilirubine observée jusqu’à 340 µmol/l (20 mg/dl).
Hyperlipidémie : aucune interférence de l’hyperlipidémie, mesurée sous forme de
triglycérides, observée jusqu’à 2,4 mmol/l (210 mg/dl).
Fisher Diagnostics
Une division de Fisher Scientific Company, LLC
Une société de Thermo Fisher Scientific.
Middletown, VA 22645-1905 États-Unis
Téléphone :800-528-0494
540-869-3200
Fax :540-869-8132
WMDE
Bergerweg 18
6085 AT Horn
Pays-Bas
JL840889-fr (R0)
4.
La CK-BB, si elle est présente dans le sérum, constitue un facteur potentiel d’interférence
dans ce système de dosage. Les études ont montré que la CK-BB est présente seulement
rarement dans le sérum.8
On a également trouvé que des isoenzymes atypiques de la CK peuvent interférer avec ce
système de dosage. Une forme complexée de CK-BB et d’immunoglobuline G (macro-CK
de type 1) est retrouvée plus fréquemment chez les femmes âgées. La présence de CK
atypique ne réduit pas la valeur du système de dosage car le schéma d’enzyme présente un
équilibre au cours du temps. En cas de suspicion d’IAM, les valeurs de CK-MB augmentent
et reviennent aux concentrations normales en 48 heures.6
Young DS a publié une liste exhaustive de médicaments et de substances susceptibles
d’interférer avec ce dosage.9
VALEURS ATTENDUES10,11
CK totale À 37 °C
Hommes
À 30 °C
Hommes
CK-MB
À 37 °C
À 30 °C
< 200 U/l
< 130 U/l
Femmes
Femmes
< 180 U/l
< 113 U/l
< 25 U/l
< 16 U/l
% CK-MBUne proportion de CK-MB comprise entre 6 % et 25 % est pertinente avec l’infarctus
aigu du myocarde (voir Limite 3).
Les valeurs indiquées sont représentatives de la plage attendue avec cette méthode et sont
uniquement destinées à servir de guide. Il est recommandé que chaque laboratoire vérifie cette
plage ou détermine une plage de référence pour la population dont il a la charge.
DONNÉES DE PERFORMANCE
Les données de performance suivantes ont été obtenues en utilisant le réactif de dosage de la
CK-MB sur un analyseur de chimie clinique automatique.
IMPRÉCISION
L’imprécision a été évaluée en utilisant deux niveaux de contrôle disponibles dans le commerce
et en suivant la procédure NCCLS EP5-T12.
Intra-série :
NIVEAU INIVEAU II
Nombre de points de données 80 80
Moyenne (U/l) 37 156
ET (U/l) 1,7 2,5
CV (%) 4,6 1,6
Inter-jour :
NIVEAU INIVEAU II
Nombre de points de données 80 80
Moyenne (U/l) 37 156
ET (U/l) 1,3 3,3
CV (%) 3,4 2,1
COMPARAISON DE MÉTHODES
Des études de comparaison ont été menées en utilisant comme référence une autre méthode
disponible dans le commerce. Des échantillons de sérum ont été dosés en parallèle et les résultats
ont été comparés par régression des moindres carrés. Les statistiques suivantes ont été obtenues :
Nombre de paires d’échantillons
66
Plage des résultats d’échantillons 4 à 227 U/l
Moyenne des résultats de la méthode de référence45 U/l
Moyenne des résultats CK-MB
44 U/l
Pente0,96
Ordonnée à l’origine
1,5 U/l
Coefficient de corrélation
0,999
PLAGE DE MESURE
Lorsqu’il est exécuté comme recommandé, le dosage est linéaire jusqu’à 1 000 U/l.
SPÉCIFICITÉ
Des études d’inhibition réalisées indiquent que le réactif de dosage de l’isoenzyme CK-MB a
inhibé de manière efficace plus de 99 % de toute l’activité CK-MM dans un échantillon à 2 000 U/l
de CK-MM.
SENSIBILITÉ ANALYTIQUE
Lorsque ce dosage est exécuté comme recommandé, sa sensibilité est de 0,15 DmA/min par U/l.
RÉFÉRENCES
1. Bremmer FW. Cardiac disease and hypertension in “Clinical chemistry theory, analysis and
correlation.” Kaplan L and Pesce A (Ed) CV Mosby company, 1987.
2. Chapman JF, Woodard LL and Silverman LM. Creatine kinase isoenzymes in Clinical Chemistry
theory, analysis and correlation.” Kaplan L and Pesce A (Ed) CV Mosby company, 1987.
3. Bremer WF. Cardiac Disease and Hypertension in Clinical Chemistry theory, analysis and
correlation.” Kaplan L and Pesce A (Ed) CV Mosby company, 1987;28:500-501.
4. Hørder M., Elser R.C., Gerhardt W., et al. Journal of the IFCC 1989; 1:130-8.
5. Strömme JH et al. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1976; 36:711-23.
6. Stein W. CK-MB methods and clinical significance. Proceedings of the CK-MB symposium,
Philadelphia, 1981; 61-74.
7. Burtis CA, Ashwood ER, “Tietz textbook of Clinical Chemistry” deuxième édition, 1994; 805.
8. Mattenheimer H. CK-MB methods and clinical significance. Proceedings of the CK-MB
symposium, Philadelphia, 1981; 51-59.
9. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests. Troisième édition, 1990; 3: 120-22.
10. Bais R, et al. Pathology 1988; 20:367-72.
11. Henderson AR et at. Clin Chem. 1992; 38/7:1365-1370.
12. National Committee for Clinical Laboratory Standards. User evaluation of Precision Performance
of Clinical Chemistry Devices. NCCLS; 1984, NCCLS Publication EP5-T.
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