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Techniques et procédures de laboratoires
Biochemical Techniques
Dosage de la créatinine plasmatique et urinaire
Antoine Pierson (BiolTrop)
Etapes pré-analytiques
S'effectue à partir d'un prélèvement d'urine ou de sang veineux avec ou sans anticoagulant
prélevé sur tube sec ou sur tube hépariné.
Le principal intérêt du dosage urinaire est le calcul de la clairance de la créatinine qui nécessite :
Le dosage de la créatinine dans les urines recueillies sur 24 heures.
Le dosage de la créatinine sérique ou plasmatique sur un échantillon prélevé
durant ces 24 heures.
Méthode d'analyse
Principe
La créatinine forme un complexe photomètrable avec le picrate alcalin. Un dosage cinétique
permet de s'affranchir des interférences dues, notamment, à la bilirubine.
Matériel
Spectrophotomètre
Tubes à hémolyse
Pipette 1 ml et 100 µl
Mode opératoire
1. Il est conseillé de réaliser ce dosage en commençant par le blanc puis en
traitant les tubes les uns après les autres (dosage cinétique).
2. Utiliser un étalon de 100 µmol / l (conversion en mg/l)
Sérum
Sérum ou étalon
Urine
100 µl
10 µl
Eau distillée
90 µl
1 ml
Blanc
100 µl
Urine diluée au 1/10
Réactif
Etalon
1 ml
1 ml
1 ml
3. Mélanger les tubes
4. Déclencher le chronomètre pour chaque tube au moment d'ajouter le
réactif :
5. Photomètrer à 490 nm à t = 20 secondes, puis à t = 80 secondes. Le zéro
est fait sur le blanc ;
Version 1.0 : 1 novembre 2008
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6. Calcul de la concentration, C étant la concentration de l'étalon :
Sérum : [(différence absorbance patient) / (différence absorbance
étalon)] x C
Urine : [(différence absorbance patient) / (différence absorbance
étalon)] x C x 100.
7. Les mesures sont linéaires de 0 à 1000 µmol/l.
Préparation des réactifs
Solution de coloration
Dissoudre 1 gramme d'acide picrique dans 500 ml d'eau distillée.
Réactif alcalin
1. Utiliser masque et gants (très irritant pour la peau et les yeux)
2. dissoudre dans 500 ml d'eau distillée :
8 grammes de soude
9.5 grammes de phosphate de sodium
Ces deux réactifs se conservent à température ambiante pendant 6 mois
Réactif final
Est obtenu en mélangeant à partie égale la solution d'acide picrique et celle de soude.
Remarques importantes :
Il est à noter que la méthode à l'orthotoluidine utilise des réactifs toxiques et carcinogènes.
De plus cette méthode est relativement chère.
Certains kits à la glucose oxydase (bioMérieux, Sigma, Biotrol...) sont moins chers, plus précis
et à péremption longue. Lorsque l'on a accès à ces distributeurs, l'utilisation de ces kits est
conseillée.
Valeurs normales
Sérum :
Homme : 7 à 13 mg / l
Femme : 6 à 11 mg / l
Valeurs plus basses chez les enfants.
Urines :
Homme : 1200 à 2000 mg / 24 h
Femme : 900 à 1800 mg / 24 h
Valeurs plus basses chez l'enfant.
Conversion en unités internationales : 1 mg / l = 8,8 µmol / l
Version 1.0 : 1 novembre 2008
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