Réactif de dosage des protéines totales Méthode du biuret

Réactif de dosage des protéines totales
Méthode du biuret
Symboles sur l’étiquetage du produit
RÉSUMÉ DU PRODUIT
Stabilité
:
Plage linéaire
:
Type d’échantillon
:
Méthode
:
Préparation du réactif :
Jusqu’à la péremption entre 2 °C et 25 °C
Jusqu’à 150 g/l (15 g/dl)
Sérum ou plasma
Point final
Fourni prêt à l’emploi.
Représentant agréé
Pour usage diagnostique in vitro
Code/numéro du lot
Limite de température
Date de péremption
Référence catalogue
MISE EN GARDE. Consulter le
mode d’emploi.
Consulter le mode d’emploi
Fabricant
Corrosion
UTILISATION PRÉVUE
Ce réactif est destiné à la détermination quantitative in vitro des protéines
totales dans le sérum ou le plasma humain sur des systèmes manuels et des
analyseurs de chimie clinique automatiques.
IMPORTANCE CLINIQUE1
Les protéines totales sont utiles pour surveiller les changements bruts de
concentrations de protéines provoqués par diverses maladies. Le dosage est
généralement réalisé en parallèle avec d’autres tests comme le dosage de
l’albumine sérique, les tests de la fonction hépatique ou l’électrophorèse des
protéines. On calcule souvent le rapport albumine/globuline pour obtenir des
informations supplémentaires.
Une augmentation de la concentration est observée dans la déshydratation,
le myélome multiple et les maladies hépatiques chroniques, alors qu’une
diminution de la concentration est observée dans la maladie rénale et
l’insuffisance hépatique terminale.
MÉTHODOLOGIE
Les méthodes conçues pour déterminer les protéines totales comprennent
la mesure de la gravité spécifique, l’indice de réfraction, l’absorbance de la
lumière dans la région de l’ultraviolet et la réaction des protéines au réactif de
Folin et Ciocalteau.
Historiquement, les protéines totales ont d’abord été déterminées par la
méthode de Kjeldahl, qui reste encore une méthode de référence. La réaction
du biuret est utilisée depuis la fin du 19e siècle et il s’agit de la méthode de
choix dans les laboratoires cliniques en raison de sa simplicité, de sa rapidité
et de sa fiabilité. De nombreuses modifications de la méthode du biuret ont
été proposées, le réactif utilisé dans cette procédure se base sur les travaux
de Goodwin et al.2 et ceux de Flack et Woollen.3
Les liaisons peptidiques de la protéine réagissent avec des ions de cuivre II
dans une solution alcaline pour former un complexe bleu-violet (c’est la réaction
désignée par le terme de biuret), chaque ion cuivre se complexant avec 5 ou
6 liaisons peptidiques4. Du tartrate est ajouté comme stabilisant alors que
de l’iodure sert à empêcher l’auto-réduction du complexe cuivre alcalin. La
coloration qui apparaît est proportionnelle à la concentration de protéines et est
mesurée entre 520 et 560 nm. Pour les analyseurs bichromatiques, la longueur
d’onde de référence doit être réglée entre 600 et 700 nm.
COMPOSITION DU RÉACTIF
Principes actifs
Sulfate de cuivre II
Tartrate de sodium et de potassium
Iodure de potassium
Hydroxyde de sodium
pH 13,5 ± 0,1 à 20 °C
Concentration
12 mmol/l
32 mmol/l
30 mmol/l
600 mmol/l
Symbole de risque : Corrosion
Mention : danger
Phrases de risque
H314 Provoque des brûlures de la peau et des lésions oculaires graves
Conseils de prudence – Prévention
Ne pas respirer les poussières/fumées/gaz/brouillards/vapeurs/aérosols
Se laver abondamment le visage, les mains et les zones cutanées exposées
après manipulation
Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement
de protection des yeux/du visage
Conseils de prudence – Intervention
Appeler immédiatement un CENTRE ANTIPOISON ou un médecin.
Traitement spécifique (voir les instructions supplémentaires de premiers secours
sur cette étiquette)
Yeux
EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : rincer avec précaution à l’eau pendant
plusieurs minutes. Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si
elles peuvent être facilement enlevées. Continuer à rincer
Appeler immédiatement un CENTRE ANTIPOISON ou un médecin.
Peau
EN CAS DE CONTACT AVEC LA PEAU (ou les cheveux) : enlever immédiatement
tous les vêtements contaminés. Rincer la peau à l’eau/se doucher
Laver les vêtements contaminés avant réutilisation
Inhalation
EN CAS D’INHALATION : transporter la victime à l’extérieur et la maintenir au repos
dans une position où elle peut confortablement respirer
Appeler immédiatement un CENTRE ANTIPOISON ou un médecin.
Ingestion
EN CAS D’INGESTION : rincer la bouche. NE PAS faire vomir
Conseils de prudence – Stockage
Garder sous clef
Conseils de prudence – Élimination
Éliminer le contenu/récipient dans une usine approuvée de traitement des déchets
Pour un complément d’information, se reporter à la Fiche de données de sécurité
du produit.
PRÉPARATION DU RÉACTIF
Le réactif est fourni prêt à l’emploi.
STABILITÉ ET CONSERVATION
Le réactif conservé entre 2 °C et 25 °C est stable jusqu’à la date de péremption
indiquée sur le flacon et sur l’étiquette de la boîte du coffret.
Indications de détérioration du réactif :
• Turbidité
• Présence d’un précipité
• Absorbance du réactif > 0,200 à 540 nm et/ou
• Impossibilité d’obtenir des valeurs de contrôle dans la plage attribuée.
PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS2
Sérum : utiliser du sérum non hémolysé.
Plasma : utiliser de l’héparine.
Conservation : les échantillons pour dosage des protéines totales peuvent être
conservés pendant au moins 7 jours à température ambiante (18 °C à 25 °C) et
pendant au moins 1 mois à 4 °C.
ÉQUIPEMENT SUPPLÉMENTAIRE REQUIS MAIS NON FOURNI
• Analyseur de chimie clinique capable de maintenir une température constante
(37 °C) et de mesurer l’absorbance à 540 nm (520 à 560 nm).
• Consommables spécifiques de l’analyseur, p. ex. godets à réaction.
• Contrôles dosés normaux et anormaux.
• Étalon ou standard adapté de dosage des protéines totales en solution aqueuse.
Procédure de test
Les paramètres d’analyseur suivants sont recommandés. Des applications
d’instruments individuels sont disponibles sur demande auprès du groupe de
support technique.
Paramètres de l’analyseur
Température
37 °C
Longueur d’onde primaire
540 nm (520 à 560 nm)
Type de dosage
Point final
Sens
Augmentation
Rapport échantillon:réactif 1:50
p. ex. Vol. échantillon
5 µl
Vol. réactif 250 µl
Durée d’incubation
600 secondes
Limites du blanc réactif
Basse 0,0 UA
(540 nm, trajectoire
lumineuse 1 cm)
Haute
0,2 UA
Linéarité
150 g/l (15 g/dl)
Sensibilité analytique
5,5 ∆mA par g/l
(540 nm, trajectoire
lumineuse 1 cm)
(0,055 ∆A par g/dl)
CALCULS
Les résultats sont calculés, en général automatiquement par l’instrument, de
la manière suivante :
Absorbance de l’inconnu
Protéines totales = ———————————— x Valeur de l’étalon
Absorbance de l’étalon
Exemple :
Absorbance de l’étalon
=
Absorbance de l’inconnu =
Valeur de l’étalon =
0,396
Protéines totales = ———— x
0,319
0,319
0,396
58 g/l (5,8 g/dl)
58 = 72 g/l
2. Young DS5 a publié une liste exhaustive de médicaments et de substances
susceptibles d’interférer avec ce dosage.
VALEURS ATTENDUES
60 à 83 g/l (6,0 à 8,3 g/dl)4
Les valeurs citées ne sont fournies qu’à titre indicatif. Il est recommandé que
chaque laboratoire vérifie cette plage ou détermine une plage de référence pour la
population dont il a la charge.6
DONNÉES DE PERFORMANCE
Les données suivantes ont été obtenues en utilisant le réactif de dosage des protéines
totales sur un analyseur de chimie clinique automatique bien entretenu. Les utilisateurs
doivent établir les performances du produit sur l’analyseur spécifique qu’ils utilisent.
0,396
Protéines totales = ———— x 5,8 = 7,2 g/dl
0,319
IMPRÉCISION
L’imprécision a été évaluée sur une période de 20 jours en utilisant deux niveaux de
contrôles disponibles dans le commerce et en suivant la procédure NCCLS EP5-T.7
REMARQUES
1. Les volumes de réactif et d’échantillon peuvent être modifiés
proportionnellement pour répondre aux exigences des différents
spectrophotomètres.
2. Facteur de conversion en unité du S.I. : g/l x 0,1 = g/dl.
Intra-série :
Nombre de points de données
Moyenne (g/l)
Moyenne (g/dl) ET (g/l)
ET (g/dl)
CV (%)
NIVEAU INIVEAU II
80
80
58
49
5,8 4,9
0,8
0,6
0,08
0,06
1,4
1,3
Total :
Nombre de points de données
Moyenne (g/l)
Moyenne (g/dl) ET (g/l)
ET (g/dl)
CV (%)
NIVEAU INIVEAU II
80
80
58
49
5,8 4,9
1,9
1,6
0,19
0,16
3,2
3,2
Étalonnage
Un étalonnage est requis. Il est recommandé d’utiliser un standard en solution
aqueuse ou un étalon à base de sérum, avec une valeur attribuée traçable
par rapport à un étalon primaire (par ex. NIST ou IRMM). Pour la fréquence de
l’étalonnage sur les instruments automatiques, se reporter aux spécifications
des fabricants d’instrument.
Toutefois, la stabilité des étalonnages est tributaire des performances optimales de
l’instrument et de l’utilisation de réactifs qui ont été conservés comme recommandé
dans la section Stabilité et conservation de cette notice. Un ré-étalonnage est
recommandé à chaque fois que l’un des événements suivants survient :
• Le numéro de lot de réactif change.
• Une intervention de maintenance préventive est réalisée ou un composant
critique est remplacé.
• Les valeurs du contrôle se sont décalées ou sont hors limites et un nouveau
flacon de contrôle ne corrige pas le problème.
Contrôle qualité
Pour assurer un contrôle qualité adéquat, des contrôles normaux et anormaux
disposant de valeurs dosées doivent être exécutés comme des échantillons
inconnus :
• Au moins une fois par jour ou comme établi par le laboratoire.
• Quand un nouveau flacon de réactif est utilisé.
• Après une intervention de maintenance préventive ou le remplacement
d’un composant critique.
• Avec chaque étalonnage.
Les résultats de contrôle hors des limites supérieure ou inférieure des plages
établies indiquent que le dosage est peut-être hors limites. Dans de telles
situations, les actions correctrices suivantes sont recommandées :
• Répéter les mêmes contrôles.
• Si les résultats du contrôle répété sont hors limites, préparer du sérum de
contrôle frais et répéter le test.
• Si les résultats sont toujours hors limites, ré-étalonner avec un étalon frais,
puis répéter le test.
• Si les résultats sont toujours hors limites, réaliser un étalonnage avec du
réactif frais, puis répéter le test.
• Si les résultats sont toujours hors limites, contacter les services techniques
ou le distributeur local.
LIMITES
1. Des études visant à déterminer le niveau d’interférence de l’hémoglobine,
de la bilirubine et de l’hyperlipidémie ont été menées sur un analyseur de
chimie clinique automatique bien entretenu. Les résultats suivants ont
été obtenus :
Hémoglobine : aucune interférence de l’hémoglobine observée jusqu’à
265 mg/dl.
Bilirubine libre : aucune interférence de la bilirubine observée jusqu’à
211 µmol/l (12,3 mg/dl).
Bilirubine conjuguée : aucune interférence de la bilirubine observée jusqu’à
211 µmol/l (12,3 mg/dl).
Hyperlipidémie : en mesure bichromatique, aucune interférence de
l’hyperlipidémie mesurée à une absorbance de 630 nm observée jusqu’à
1,046 UA.
Fisher Diagnostics
Une division de Fisher Scientific Company, LLC
Une société de Thermo Fisher Scientific.
Middletown, VA 22645-1905 États-Unis
Téléphone :800-528-0494
540-869-3200
Fax :540-869-8132
WMDE
Bergerweg 18
6085 AT Horn
Pays-Bas
JL840890-fr (R0)
COMPARAISON DE MÉTHODES
Des études de comparaison ont été menées en utilisant comme référence un
réactif de dosage des protéines totales similaire disponible dans le commerce.
Des échantillons de sérum et de plasma (hépariné) ont été dosés en parallèle et
les résultats ont été comparés par régression des moindres carrés. Les statistiques
suivantes ont été obtenues :
Nombre de paires d’échantillons
60
Plage des résultats d’échantillons 21 à 92 g/l (2,1 à 9,2 g/dl)
Moyenne des résultats de la
méthode de référence
71,8 g/l (7,18 g/dl)
Moyenne des résultats du
réactif Protéines totales
71,5 g/l (7,15 g/dl)
Pente0,955
Ordonnée à l’origine
2,9 g/l (0,29 g/dl)
Coefficient de corrélation
0,9844
LINÉARITÉ
Lorsqu’il est exécuté comme recommandé, le dosage est linéaire entre 0 et
150 g/l (0 à 15 mg/dl).
SENSIBILITÉ ANALYTIQUE
Lorsque ce dosage est exécuté comme recommandé, sa sensibilité est de
5,5 ∆mA par g/l (0,055 ∆A par g/dl).
RÉFÉRENCES
1. Tietz N.W, (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B Saunders 1986; p579.
2. Goodwin J.F., et al, Automation in Anal. Chem, Technicon Syumpolsia 1965,
p.315-320.
3. Flack C.P. and Woollen J.W., Clin. Chem., 30, 559 (1984).
4. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnosis (4th Ed.) Burtis,
Ashwood & Bruns (Eds), Elsevier Saunders, 2005; 2293.
5. Young DS, Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. Troisième édition.
1990: 3:292-301.
6. Wachtel M et al, Creation and Verification of Reference Intervals. Laboratory
Medicine 1995; 26:593-7.
7. National Committee for Clinical Laboratory Standards. User evaluation of
Precision Performance of Clinical Laboratory Devices. NCCLS; 1984, NCCLS
Publication EP5-T.
© 2012 Thermo Fisher Scientific Inc. Tous droits réservés. Hitachi est une marque déposée
de Roche Diagnostics, Indianapolis, IN 46250, États-Unis. ILab 600 est une marque déposée
d’Instrumentation Laboratory Company, Lexington, MA 02421, États-Unis. Toutes les marques
déposées appartiennent à Thermo Fisher Scientific Inc. et à ses filiales.
Informations de commande de renouvellement
Réf. catalogue
TR34026/1700-500
Configuration
2 x 250 ml