L`analyse bactériologique du lait en bref: stratégie, procédure et

L’analyse bactériologique
du lait en bref:
stratégie, procédure et interprétation
Paul Baillargeon DMV, MSc
Pré-symposium 2004 sur la mammite
20 octobre 2004
L’analyse bactériologique en santé
du pis
‰ Un instrument de surveillance
‰ Un instrument pour assister la prise de décisions
9 Stratégies de prévention et de traitement des IMM
9 Stratégies de traitement des mammites cliniques
9 Stratégie de biosécurité pour les additions au troupeau
9 Programme de réforme
9 Etc…
‰ Un instrument de la recherche devenu un instrument de régie
Plan de discussion
‰ Notions de bactériologie en santé du pis.
‰ Objectifs de l’échantillonnage bactériologique
‰ Méthodologie
‰ Le rapport de laboratoire
‰ Exemples et discussions de résultats obtenus
‰ Conclusion
Classification des bactéries en
santé du pis.
‰ Selon leur apparence
morphologique
9 Coques ou bâtonnets
9 Gram:G+ ou G-
‰ Selon leur impact sur la santé
du pis
9 Majeurs
9 Mineurs
‰ Selon leur comportement
épidémiologique
9 Contagieux
9 Environnementaux
Classification des bactéries
Comportement épidémiologique
Réservoir
Propagation
Caractéristique de
l’infection
Signes cliniques
Contagieux
Environnementaux
Les quartiers infectés
Un point de
l’environnement
Pendant la traite
En dehors de la période
de traite
Chronique
Courte durée
Subcliniques pour la
plupart (>80%)
Cliniques (>80%),
Aigues, souvent
sévères
Classification des bactéries
Comportement épidémiologique
Contagieux
Organismes
Environnementaux
Staphylococcus aureus
Streptococcus agalactiae
Mycoplasma bovis
G+: Streptoccus (uberis,
dysgalactiae)
G-: coliformes
(E.coli, Klebsiella, etc..)
Autres agents pathogènes
Nature
Organismes
Nombreux
Problèmes limités (troupeaux, individus)
Levures
A. pyogenes
Staph spp (SCN),
C. bovis, etc..
Objectifs de la culture
bactériologique
‰ Infections individuelles
9 Déterminer le groupe
bactériologique de l’infection
9 Établir un pronostic pour
l’infection
9 Établir un programme de
traitement approprié
‰ Infections dans le troupeau
9 Établir le portrait du troupeau
9 Proposer un programme de
contrôle approprié
Procédure d’échantillonnage
‰ Le laboratoire identifie ce qu’il trouve dans l’échantillon !
‰ L’objectif est d’identifier l’organisme logé dans le quartier
9 Le prélèvement doit être stérile
9 Identifier correctement
9 L’échantillon doit être refroidi rapidement
9 Ensemencé dans les 48 heures ou congelé
Procédure d’échantillonnage
Désinfection
I
III
II
IV
Procédure d’échantillonnage
Prélèvement
‰ Le tube de collection
‰ Manipulation
I
III
II
IV
Qui échantillonner?
‰ Les mammites cliniques
9 Dès l’apparition des signes cliniques
9 Établir stratégie de traitement et pronostic
9 Portrait clinique du troupeau
‰ Au vêlage
9 Composite des quartiers positif CMT
9 Établir la ségrégation pour la traite / traiter les quartiers positifs
‰ Les vaches pendant la lactation avec CCS en hausse
‰ Le troupeau complet périodiquement.
Quel test demander?
‰ Culture standard
9 Protocole établi par le National Mastitis
Council (NMC)
‰ La sensibilité aux antibiotiques
‰ La PCR
9 Test précis
9 Ne teste que certaines bactéries
9 Coût plus élevé
L’ensemencement de routine
‰ Gélose au sang de mouton (10 ųL)
9 Incubation 24 hres avec l’échantillon
pour enrichissement (E)
‰ Réensemencement de E si négatif
après 24 hres.
Analyse de la culture
‰ Forme et apparence des colonies
‰ Repiquage et réensemencement de
certaines colonies (cult. Mixtes)
‰ Type d’hémolyse
‰ Tests simples
Quel test demander?
‰ Culture standard
9 Protocole établi par le National Mastitis
Council
‰ La sensibilité aux antibiotiques
‰ La PCR
9 Test précis
9 Ne teste que certaines bactéries
9 Coût plus élevé
La sensibilité aux antibiotiques
‰ Méthode Kirby-Bauer
‰ Disque contient AB qui
diffuse dans gélose
‰ Mesure zone d’inhibition
‰ Commentaire:
9 Méthodologie critique
9 Interprétation difficile
Quel test demander?
‰ Culture standard
9 Protocole établi par le National Mastitis
Council
‰ La sensibilité aux antibiotiques
‰ La PCR
9 Test précis
9 Ne teste que certaines bactéries
9 Coût plus élevé
Le rapport d’analyse
bactériologique
‰ Codification du contenu
9 Identification de la bactérie ou du groupe d’agents pathogènes
auquel appartient l’isolat
9 Numération (semi-quantitative) de l’isolat
9 Méthode d’isolement (avec ou sans E)
‰ Interprétation des résultats est la responsabilité du clinicien
9 En fonction des signes cliniques observés.
9 En fonction de la stratégie visée
Le rapport d’analyse
bactériologique
Strept. uberis
+++
Le rapport d’analyse
bactériologique
Le rapport d’analyse
bactériologique
L’analyse bactériologique
Instrument de régie
‰ Au vêlage :
9 Conférence du Dr. Jean-Yves Perreault
‰ Échantillonnage de cas cliniques
9 Résultats d’analyse
Culture des mammites cliniques
Été 2004
‰ Objectif: caractériser le profil bactériologique des mammites
cliniques survenant en été et en début de lactation
‰ Méthodologie
9 Cas cliniques référés aux vétérinaires ou prélevés par producteurs
9 survenus de juillet à septembre
9 Moins de 120 jours en lactation (JEL)
9 Soumis aux laboratoires de Biovet et de la FMV
‰ Compilation et interprétation des résultats
Résultats de l’échantillonnage
Ont participé au projet:
‰ 18 cliniques vétérinaires
‰ 195 troupeaux laitiers
‰ 372 échantillons analysés
9 280 mammites cliniques
9 63 contrôles au vêlage
9 29 comptage cellulaires élevés
Interprétation du rapport de
résultats
‰ Contagieux > environnemental
‰ Pathogène majeur > pathogène mineur
‰ Isolement primaire > isolement par enrichissement
‰ Nb CFU (++++ > +++ > ++ > + )
‰ Exemples:
9 S.aureus +++ > S. uberis ++
9 S. uberis + >
Staph. sp ++++
9 S.sp ++++ >
E.coli +++(e)
Classification des isolats
Contagieux
Environnement
Autres
S.Aureus
Coryne. sp
St. Uberis
St.dysgalactiae
St. bovis
Entérocoques
+
Levures
Staph sp. (SCN)
Arcano. Pyogenes
Pasteurella
Pseudomonas
Negatif
E. Coli
Klebsiella sp.
Enterobacter
40
30
20
Nb isolats
Nombre d’isolements pour chaque
genre bactérien (280 cas)
60
50
10
0
tif
ga
Ne
o
py
r
A. cte
a
t.b
En
li
co
E. ella
si
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Kl
vis es
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S.
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vu
Le sp
h
ap
St
p
r.s
Co us
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au
S.
CLASSIFICATION BACTÉRIENNE POUR MC (280 échantillons)
50%
45%
40%
35%
30%
25%
20%
15%
10%
5%
0%
Contagieux
Environnementaux
Autres
RÉPARTITION DES ENVIRONNEMENTAUX POUR MC (133 échant)
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
G+
G-
SUSCEPTIBILITÉ AUX ANTIBIOTIQUES INTRAMAMMAIRES (280 échant)
50%
Coliformes
Levures
A.Pyogenes
Pasteurella
Pseudomonas
Negatif,
45%
40%
S.Aureus
Strep.env.
35%
30%
Staph sp
Coryn. Sp
S. bovis
25%
20%
15%
10%
5%
0%
Susceptibles
NonSusceptibles
Guerison
spontanée
probable
Conclusions du projet (1)
‰ Les bactéries d’origine environnementale dominent le tableau
clinique
9 47% (environnementaux)vs 22%(contagieux)
9 La recherche démontrent que >50% de ces mammites sont des infections
acquises en période de tarissement (Bradley et al, JDS, 2000)
Conclusions du projet (2)
‰ Un bon nombre des infections responsables des mammites
cliniques (± 45%) ne sont pas susceptibles aux
antibiotiques intra-mammaires
9 L’usage ciblé des antibiotiques pourrait améliorer les résultats
9 La prévention des infections environnementales est la stratégie à
prioriser
NB: Scellant interne (Orbeseal) est un moyen efficace de diminuer ces
infections.
Conclusions du projet (3)
‰ Les G- dominent le groupe des environnementaux
9 66%G- (30 % de toutes les mammites) vs 34%G+
9 Les antibiotiques IMM ne sont pas utiles en prévention ou en traitement
9 La vaccination contre les infections à E. coli est justifiée pour un grand
nombre de troupeaux.
9 Leur identification précoce permettrait de ne pas utiliser d’AB
intramammaires pour leur traitement.
Dépistage bactériologique
Alternatives ?
‰ U. Minnesota : le système Biplate ou
TriPlate
9 H. Dairyman, Y.Schulte, juin 2004
‰ Le système PetriFilm
9 Milieux de culture sélectifs
9 Validation pour isolement de S. aureus
(Silva, B. et al, NMC 2004, 52-59)
Conclusion
‰ L’analyse bactériologique est nécessaire
9 Compréhension des problèmes rencontrés
9 Définition de stratégies de traitement adaptées
9 Définition de stratégies de prévention et de contrôle adaptées
‰ La procédure d’échantillonnage est une étape critique
‰ L’interprétation des résultats est un défi
9 Pour le médecin vétérinaire
9 Pour le producteur
Période de question