sujet 2011- 6

SUJET de STAGE DE MASTER 2
(Janvier à juin 2012)
Evaluation de la maturité des spermatozoïdes
de l’huître perlière Pinctada margaritifera
La maîtrise de la reproduction de l’huître perlière Pinctada margaritifera nécessite des
techniques particulières de conservation de son patrimoine génétique. Des protocoles de
cryopréservation des gamètes utilisés chez d’autres espèces de Mollusques ont été adaptés à
P. margaritifera. Avant la cryoconservation, il est important d’évaluer la qualité des
spermatozoïdes que l’on souhaite congeler. Différents critères ont été retenus pour
sélectionner les individus de qualité : motilité, métabolisme, pouvoir fécondant. Cependant, à
l’issue de la cryoconservation du sperme, la motilité et le pouvoir fécondant des
spermatozoïdes survivants sont réduits et variables d'un mâle à l'autre. De ce fait, les taux de
fécondation obtenus restent faibles (1, 2).
Des études préalables ont montré que la motilité des spermatozoïdes n’est pas activée dans
l’eau de mer (3) ainsi qu’une large variabilité inter-individuelle concernant leur métabolisme
(4) et suggèrent qu’au sein d’un même échantillon, le taux de maturité des spermatozoïdes
varie. Il semble donc approprié d’évaluer ce taux de maturité des spermatozoïdes selon le
mode de prélèvement des échantillons (scarification de la gonade, émission naturelle au
gonopore). Il a également été montré qu’une protéine proche de la parvalbumine, isolée chez
la carpe, apparaît lors des derniers stades de la spermatogenèse (5). La parvalbumine est une
protéine qui se lie au Ca++ et qui pourrait être impliquée dans le mécanisme Ca++-dépendant
observé lors de l’activation de la motilité des spermatozoïdes (6, 7, 8). L’objectif de cette
étude sera dans un premier temps de mettre au point la technique d’immunodétection sur les
spermatozoïdes de Pinctada margaritifera puis d’évaluer le taux de maturité des cellules
selon le mode de prélèvement du sperme. Les techniques mises en œuvre seront la
microscopie optique à fond clair, à fond noir et en fluorescence ainsi que la détection
protéique par immunoélectrophorèse.
Références
• [1] Rapport final de la convention N°40408, service de la perliculture – Ifremer
• [2] Hui B., Vonau V., Moriceau J., Tetumu R., Vanaa V., Demoy-Schneider M., Suquet
M., Le Moullac G. Hatchery-scale trials using cryopreserved spermatozoa of black-lip
pearl oyster (Pinctada margaritifera). Aquatic Living Resources, 2011; 24 (In press)
• [3] Demoy-Schneider M., Levêque A., Schmitt N., Cosson J..and Le Pennec M.
Evaluation of sperm quality in Black-lip pearl oyster Pinctada margaritifera
11th International Symposium on Spermatology, Okinawa, 24-29 June 2010.
• [4] Levêque A., Atger R., Demoy-Schneider M., Cosson J. and Le Pennec M.
Characteristics of Black-lip pearl oyster Pinctada margaritifera sperm motility
11th International Symposium on Spermatology, Okinawa, 24-29 June 2010.
• [5] Dietrich M. Nynca J., Bilinska B., Kuba J., Kotula-Balak M. karol H. and Ciereszko
A. identification of parvalbumin-like protein as a major protein of common carp
(Cyprinus carpio L) spermatozoa which appears during final stage of spermatogenesis.
Comp. Biochem. Physiol. Part B Biochem. Mol. Biol. 2010a; 157(2): 220-227.
• [6] Alavi S.M.H. and Cosson J. Sperm motility in fishes : (II) Effects of ions and
osmotic pressure : A review. Cell Biol. Intern. 2006; 30: 1-14.
• Ping L, Hulak M. and Linhart O. Sperm proteins in teleostean and chondrostean
(sturgeaon) fishes. Fish Physiol. Biochem. 2009; 35: 567-581
• [7] Dietrich MA, Nynca J, Westfalewicz B, Karol H, Ciereszko A. Identification of
calcium-binding proteins in fish seminal plasma. Fish Physiol Biochem. 2010b; online
DOI: 10.1007/s10695-010-9445-0.