ProS - 0020002800 HemosIL™ ProS

HemosIL™
ProS - 0020002800
ENGLISH - Insert revision 11/2009
Intended use
Protein S is a vitamin K-dependent cofactor for the anticoagulant and the profibrinolytic
effects of activated Protein C.1 Two forms of Protein S are present in plasma: free
Protein S (40%), and Protein S linked to the complement C4b-binding protein (C4BP)
(60%). Only free Protein S has functional cofactor activity.2
Protein S deficiency may be hereditary or acquired. Acquired deficiency may be
observed during pregnancy, oral anticoagulant therapy, oral contraceptive use, in liver
disease, in newborn infants as well as in other clinical conditions.3,4,5 Deficiency of
Protein S has been associated with a high risk of developing venous thromboembolism
especially in young people.6,7
The ProS™ assay determines the functional activity of free Protein S by measuring the
degree of prolongation of a prothrombin time in the presence of the tissue factor,
phospholipids, calcium ions and activated Protein C. The Protein S activity is
proportional to the prolongation of the clotting time of a Protein S deficient plasma to
which diluted sample has been added.
- ACL Futura® and ACL Advance Systems: 12 hours at 2-8°C, 7 days at -20°C
in the original vial or 1 hour at 15°C on-board. No stirring is required.
- ACL TOP ® Family: 1 hour at 15°C on-board. No stirring is required.
Protein S deficient plasma - Stability after reconstitution: 4 hours at 15-25°C in the original
vial or 7 days at -20°C.
Protein S control plasma - Stability after reconstitution: 4 hours at 15-25°C in the original
vial or 7 days at -20°C.
Notes:
- Frozen reagent and plasmas should be thawed at 37°C and gently mixed before use.
Before freezing they can be aliquoted using plastic tubes and stoppers. Do not refreeze.
- For optimal stability remove reagents from the system and store them at 2-8°C in the
original vial.
- The storage conditions of the reagents used to prepare the calibration curve should
be the same as the reagents in use to test samples/controls (non-frozen or thawed).
- On the ACL TOP Family it is recommended to calibrate with every session and to
batch sample runs.
Composition
Instrument/test procedures
Automated coagulation functional assay for the quantitative determination of free Protein S in
human citrated plasma on IL Coagulation Systems.
Summary and principle
The ProS kit consists of:
R Protein S reagent (P/N 0020002810): 3 x 3 mL vials of a lyophilized preparation
containing recombinant rabbit tissue factor, synthetic phospholipids, calcium ions,
activated Protein C, polybrene, buffer, stabilizers and preservatives.
D Protein S deficient plasma (P/N 0020002820): 6 x 1 mL vials of a lyophilized
human plasma which has been artificially depleted of Protein S.
P Protein S control plasma (P/N 0020002830): 2 x 1 mL vials of a lyophilized
human plasma containing a low level of Protein S.
PRECAUTIONS AND WARNINGS:
The material in this product was tested by FDA approved test methods and found
nonreactive for Hepatitis B Surface Antigen (HBsAg), Anti-HCV and HIV antibodies.
Handle as if potentially infectious.8
Avoid contact with skin and eyes (S 24/25). Do not empty into drains (S 29).
Wear suitable protective clothing (S 36).
This product is For in vitro Diagnostic Use.
Preparation
Protein S reagent: Dissolve the contents of each vial with 3 mL of CLSI (formerly
NCCLS) CLRW Type water or equivalent.9 Replace the stopper and swirl gently. Make
sure of the complete reconstitution of the product. Keep the reagent at 15-25°C for 30
minutes and invert to mix before use. Do not shake.
Protein S deficient plasma: Dissolve the contents of each vial with 1 mL of CLSI
CLRW Type water or equivalent.9 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of
the complete reconstitution of the product. Keep the plasma at 15-25°C for 30 minutes
and invert to mix before use. Do not shake.
Protein S control plasma: Dissolve the contents of each vial with 1 mL of CLSI CLRW
Type water or equivalent.9 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the
complete reconstitution of the product. Keep the plasma at 15-25°C for 30 minutes and
invert to mix before use. Do not shake.
Reagent storage and stability
Unopened reagents are stable until the expiration date shown on the vial when stored
at 2-8°C.
Protein S reagent - Stability after reconstitution:
- ACL® 100-7000 Systems: 2 days at 2-8°C, 15 days at -20°C in the original vial or
2 days at 15°C on-board. No stirring is required.
- ACL 8000/9000/10000 Systems: 2 days at 2-8°C, 15 days at -20°C in the original vial
or 4 hours at 15°C on-board. No stirring is required.
Refer to the appropriate IL instrument’s Operator’s Manual and/or Application Manual for the
complete assay procedure instructions.
Specimen collection and preparation
Nine parts of freshly drawn venous blood are collected into one part trisodium citrate. Refer
to CLSI Document H21-A5 for further instructions on specimen collection, handling and
storage.10
Additional reagents and control plasmas
The following are not supplied with the kit and must be purchased separately.
Americas and Pacific Rim
Europe
Cat. No.
Cat. No.
Calibration plasma
0020003700
0020003700
Normal Control
0020003120
0020003110
Low Abnormal Control
0020003220
0020003210
High Abnormal Control
0020003320
0020003310
Factor diluent
0009757600
0009757600
Quality control
Normal and abnormal controls are recommended for a complete quality control program.11
Normal Control, Low Abnormal Control, High Abnormal Control and the Protein S control
plasma in this kit are designed for this program. Each laboratory should establish its own
mean and standard deviation and should establish a quality control program to monitor
laboratory testing. Controls should be analyzed at least once every 8 hour shift in accordance
to good laboratory practice. Refer to Westgard et al for identification and resolution of out-ofcontrol situtations.12
Traceability of calibrators and control materials
The reported values were determined over multiple runs on IL Coagulation Systems using a
specific lot of reagent and against a Calibration Plasma House Standard which is traceable to
the current International Protein S Standard, identified in the acceptance range table.
Results
Limitations/interfering substances
ProS results on the ACL Family and ACL Futura/ACL Advance Systems are not affected by
heparin (UF heparin or LMW heparin) up to 2 U/mL, bilirubin up to 15 mg/dL, hemoglobin up
to 200 mg/dL and triglycerides up to 1000 mg/dL.
ProS results on the ACL TOP Family are not affected by heparin (UF) up to 1.6 U/mL,
heparin (LMW) up to 1.8 U/mL, bilirubin up to 15 mg/dL, hemoglobin up to 200 mg/dL
and triglycerides up to 1000 mg/dL.
Hemolyzed and turbid samples should not be assayed. ProS assay results may be
affected (decrease in PS activity) by the presence of both activated Factor VII (F VIIa) 13
and Factor V Leiden mutation (APC-R), above all in patients homozygous for this
genetic defect. 14 To avoid a possible influence of APC-R on the actual Protein S
values, patient samples with results outside the normal range should be manually
diluted 1:2 with Protein S deficient plasma and reassayed. The printed results must be
multiplied by 2 to correct for the dilution.
Expected values
A normal range study was performed using the ProS kit on IL Coagulation Systems.
System
N
% PS Activity
ACL Family
78
63 - 135
ACL Futura/ACL Advance
80
67 - 132
ACL TOP Family
49
76 - 135
Note: Age and hormonal status may affect the normal range for females.15
Ranges were calculated as recommended by CLSI document C28-A. 16 These results
were obtained using a specific lot of reagent. Due to many variables which may affect
results, each laboratory should establish its own normal range.
Performance characteristics
Precision:
Within run and between run precision was assessed over multiple runs.
ACL Family
Mean (% PS)
CV% (Within run)
CV% (Total)
Normal Control
91.1
3.2
7.0
Protein S Control
52.5
8.2
10.2
ACL Futura/ACL Advance Mean (% PS)
CV% (Within run)
CV% (Total)
Normal Control
90.5
3.9
5.1
Protein S Control
49.1
6.6
7.6
ACL TOP Family
Mean (% PS)
CV% (Within run)
CV% (Total)
Normal Control
95.6
3.1
5.6
Protein S Control
30.3
3.1
11.2
Correlation:
System
ACL Family
ACL Futura/ACL Advance
ACL TOP Family
slope
1.01
1.02
1.061
intercept
-5.883
-4.890
-4.832
r
Reference method
0.982 IL Clotting Protein S on ACL
0.984 IL Clotting Protein S on ACL
0.985
IL ProS on ACL Futura/
ACL Advance
The precision and correlation results were obtained using specific lots of reagents and
controls.
Linearity:
System
IL Coagulation System
10 - 150 (% PS activity)
ProS results may be reported in seconds and activity (%). Refer to the instrument’s
Operator’s manual for additional information.
ProS - 0020002800
DEUTSCH - Packungsbeilage Version 11/2009
Verwendung
Zur automatisierten Bestimmung des funktionellen Protein S in menschlichem Plasma auf IL
Analysensystemen.
Testprinzip
Protein S ist ein Vitamin K-abhängiger Kofaktor für die antikoagulatorischen und
profibrinolytischen Effekte von aktiviertem Protein C.1 Es liegt im Plasma in zwei
Formen vor: zu 40% als Freies Protein S und zu 60 % in gebundener Form an C4bBindeprotein (Komplementfaktor). Die beiden Formen stehen in einem dynamischen
Gleichgewicht. Nur das freie Protein S ist biologisch aktiv.2
Ein Protein S Mangel kann sowohl angeboren als auch erworben sein. Erworbene
Mangelzustände können während der Schwangerschaft, unter oraler
Antikoagulantientherapie, bei Einnahme oraler Kontrazeptiva, bei Lebererkrankungen,
bei Neugeborenen und bei anderen klinischen Zuständen auftreten.3,4,5
Protein S-Mangel ist als Risikofaktor bekannt, der die Bildung von venösen
Thrombosen besonders bei jungen Patienten begünstigt.6,7
Beim ProS wird die funktionelle Aktivität des Freien Protein S, als Kofaktor des
aktivierten Protein C, über die Verlängerung der Prothrombinzeit in Anwesenheit von
Gewebefaktor, Phospholipiden, Kalziumionen und aktiviertem Protein C bestimmt.
Dadurch liegen alle übrigen Gerinnungsfaktoren im Überschuss vor und die
Gerinnungszeit Bestimmung ist von der Menge an Protein S im Patientenplasma abhängig.
Inhalt
Die ProS Packung enthält:
R Protein S reagent (Best.-Nr. 0020002810): 3 Flaschen x 3 mL lyophilisiertes
Material mit rekombinantem Kaninchen-Gewebefaktor, synthetischen
Phospholipiden, Kalziumionen, aktiviertem Protein C, Polybren, Puffer,
Stabilisatoren und Konservierungsmitteln.
D Protein S deficient plasma (Best.-Nr. 0020002820): 6 Flaschen x 1 mL
lyophilisiertes Humanplasma, hergestellt durch spezifische Immunabsorption.
P Protein S control plasma (Best.-Nr. 0020002830): 2 Flaschen x 1 mL
lyophilisiertes Humanplasma mit einem niedrigen Protein S Gehalt.
VORSICHTSMAßNAHMEN UND WARNHINWEISE:
Das verwendete Material wurde mit FDA anerkannten Testmethoden auf HIVAntikörper, Hepatitis-B-Antigen und HCV-Antigen geprüft. Bitte beachten Sie die
Bestimmungen zum Umgang mit potentiell infektiösen Materialien.8
Berührung mit den Augen und der Haut vermeiden (S 24/25). Nicht in die Kanalisation
gelangen lassen (S 29). Bei der Arbeit geeignete Schutzkleidung tragen (S 36).
Dieses Reagenz ist ausschließlich für die in vitro Diagnostik bestimmt.
Herstellung
lösen.9
Protein S reagent: Inhalt der Flasche mit 3 mL Aqua dest.
Dann die Flasche
verschließen und durch leichtes Schwenken das Lyophilisat lösen. Nach vollständiger
Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und unter
vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Nicht schütteln.
Protein S deficient plasma: Inhalt der Flasche mit 1 mL Aqua dest. lösen.9 Dann die
Flasche verschließen und durch leichtes Schwenken das Lyophilisat lösen. Nach
vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und
unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Nicht schütteln.
Protein S control plasma: Inhalt der Flasche mit 1 mL Aqua dest. lösen.9 Dann die
Flasche verschließen und durch leichtes Schwenken das Lyophilisat lösen. Nach
vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und
unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Nicht schütteln.
Lagerung und Haltbarkeit
Die ungeöffneten Reagenzien sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar.
Protein S reagent
Haltbarkeit nach Rekonstitution in ACL Systemen (100-7000):
- bei 2-8°C in der Originalflasche: 2 Tage
- bei -20°C in der Originalflasche: 15 Tage
- bei 15°C im Gerät: 2 Tage
Muss nicht gerührt werden.
Haltbarkeit nach Rekonstitution in ACL 8000/9000/10000 Systemen:
- bei 2-8°C in der Originalflasche: 2 Tage
- bei -20°C in der Originalflasche: 15 Tage
- bei 15°C im Gerät: 4 Stunden
Muss nicht gerührt werden.
Haltbarkeit nach Rekonstitution in ACL Futura und ACL Advance Systemen:
- bei 2-8°C in der Originalflasche: 12 Stunden
- bei -20°C in der Originalflasche: 7 Tage
- bei 15°C im Gerät: 1 Stunde
Muss nicht gerührt werden.
- bei 15°C in Systemen der ACL TOP® Familie: 1 Stunde im Gerät. Kein Rühren
notwendig.
Protein S deficient plasma - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
- bei 15-25°C in der Originalflasche: 4 Stunden
- bei -20°C: 7 Tage
Protein S control plasma - Haltbarkeit nach Rekonstitution:
- bei 15-25°C in der Originalflasche: 4 Stunden
- bei -20°C: 7 Tage
Hinweis:
- Tiefgefrorenes Reagenz und Plasma sollte bei 37°C aufgetaut und vor dem Gebrauch
vorsichtig geschwenkt werden. Das Produkt kann nach der Rekonstitution in
Plastikgefäßen mit Deckel aliquotiert eingefroren werden. Alle Komponenten des
Protein S Kits dürfen nur einmal eingefroren werden.
- Für eine optimale Haltbarkeit sollten die Reagenzien nach dem Gebrauch aus dem
Gerät entnommen und im Kühlschrank bei 2-8°C in der Originalflasche aufbewahrt
werden.
- Die Lagerungsbedingungen der Reagenzien, mit denen die Kalibrationskurve erstellt
wurde, sollten für die Durchführung von Patienten/Kontrollen gleich sein (entweder
nicht gefroren oder aufgetaut).
- Auf Systemen der ACL TOP Familie wird empfohlen mit jedem Probenlauf zu
kalibrieren und die Proben in einem Arbeitsgang abzuarbeiten.
Ergebnisse
Bestimmungsansatz
Referenzbereiche
Die ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem GeräteBedienerhandbuch und dem Applikationshandbuch zu entnehmen.
Mit dem ProS Kit wurde auf IL Analysensystemen eine Studie zur Bestimmung des
Normalbereichs durchgeführt.
System
N
% PS Aktivität
ACL Familie
78
63 - 135
ACL Futura/ACL Advance
80
67 - 132
ACL TOP Familie
49
76 - 135
Hinweis: Der Normalbereich für Frauen kann vom Alter und hormonellen Status
beeinflusst werden.15
Die Bereiche wurden entsprechend dem CLSI Dokument C28-A berechnet.16
Die Ergebnisse sind mit einer spezifischen Reagenziencharge ermittelt worden.
Aufgrund verschiedener Variablen, die die Testergebnisse beeinflussen können, wird
empfohlen, dass jedes Labor seinen eigenen Normalbereich für das ProS ermittelt.
Präzision
Die Präzision im Lauf und zwischen Läufen wurde bei mehreren Läufen bestimmt.
Probenmaterial - Antikoaguliertes Plasma
9 Teile frisches venöses Blut und 1 Teil Trinatriumcitratlösung werden sorgfältig in
einem silikonisierten Glasröhrchen gemischt.
Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des Deutschen Instituts
für Normung - DIN 58 905 - oder dem CLSI Dokument H21-A5 zu entnehmen.10
Zusätzliche Reagenzien und Kontrollplasmen
Die folgenden Reagenzien sind nicht in der IL ProS Packung enthalten und müssen
zusätzlich bestellt werden:
Amerikan. und Pazifischer Raum
Europa
Art. Nr.
Art. Nr.
Kalibrationsplasma
0020003700
0020003700
Normal-Kontroll-Plasma
0020003120
0020003110
Low Abnormal-Kontroll-Plasma
0020003220
0020003210
High Abnormal-Kontroll-Plasma
0020003320
0020003310
Faktor Diluent
0009757600
0009757600
Qualitätskontrolle
Es ist gängige Laborpraxis, die Qualität der Analyse mit Kontrollmaterialien im
normalen sowie im pathologischen Bereich zu überprüfen.11 Es wird empfohlen, als
Kontrollmaterial IL Normal-Kontroll-Plasma, Low Abnormal-Kontroll-Plasma und High
Abnormal-Kontroll-Plasma sowie das Protein S Kontrollplasma zu verwenden. Die
Bereiche sind der jeweiligen Packungsbeilage zu entnehmen. Jedes Labor sollte jedoch
für das Qualitätskontroll-Programm seinen eigenen Mittelwert ± 2 Standardabweichung
(s) ermitteln. Spätestens nach jeweils 8 Stunden sollte eine Qualitätskontrolle
durchgeführt werden. Algorithmen zur Beurteilung der Qualitätskontrollergebnisse siehe
z.B. Westgard et al.12 Siehe auch “Richtlinien der Bundesärztekammer zur
Qualitätssicherung quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen“ vom
24.8.2001.
Standardisierung des Kalibrators und der Kontrollmaterialien
Die angegebenen Referenzwerte wurden bei mehreren Läufen an IL Analysensystemen
mit spezifischen Reagenzienchargen und gegen ein Haus-Standard-Kalibrationsplasma
ermittelt. Dieses ist abgeglichen auf den aktuellen Internationalen Standard für Protein S
(siehe abschnitt Referenzbereiche).
ProS - 0020002800
Die Ergebnisse der Patientenplasmen werden automatisch in folgenden Einheiten
angegeben:
- Sekunden
- Aktivität in % ProS
Weitere Informationen sind dem Bedienerhandbuch zu entnehmen.
Einschränkungen
ProS Ergebnisse auf ACL und ACL Futura/Advance Analysensystemen werden durch
Konzentrationen an Heparin (unfraktionierte oder niedermolekulare Heparine) bis zu
2 U/mL, Bilirubin bis zu 15 mg/dL, Hämoglobin bis zu 200 mg/dL und Triglyceride bis
1000 mg/dL nicht beeinflusst.
ProS Ergebnisse auf Systemen der ACL TOP Familie werden durch Konzentrationen an
Heparin (unfraktioniert) bis zu 1.6 U/mL, LMW-Heparin bis zu 1.8 U/mL, Bilirubin bis zu
15 mg/dL, Hämoglobin bis zu 200 mg/dL und Triglyceride bis zu 1000 mg/dL nicht
beeinflusst.
Hämolytische und trübe (z.B. ikterische/lipämische) Proben sollten nicht analysiert werden.
Die Bestimmung von ProS kann durch die Anwesenheit von aktiviertem Faktor VII
(F VIIa)13 und Faktor V Leiden Mutation (APC-R)14 beeinflusst werden (scheinbare
Verringerung der PS Aktivität), vor allem bei Patienten mit homozygoter Ausprägung
dieser Genmutation.
Um einen möglichen Einfluß, sowohl von APC-Resistance als auch F VIIa auf die
tatsächliche ProS Aktivität der gemessenen Proben auszuschließen, sollten die Proben,
deren Werte außerhalb des Normalbereichs liegen, manuell 1:2 mit Protein SMangelplasma verdünnt und nochmals gemessen werden. Anschließend müssen die
erhaltenen Ergebnisse, entsprechend der eingesetzten Verdünnung, mit 2 multipliziert
werden.
ACL Familie
Mittelwert (% PS)
VK % (im Lauf)
VK % (Tag zu Tag)
Normal-Kontroll-Plasma
Protein S Kontrollplasma
91,1
52,5
3,2
8,2
7,0
10,2
ACL Futura/ACL Advance
Mittelwert (% PS)
VK % (im Lauf)
VK % (Tag zu Tag)
Normal-Kontroll-Plasma
Protein S Kontrollplasma
90,5
49,1
3,9
6,6
5,1
7,6
Mittelwert (% PS)
VK % (im Lauf)
VK % (Tag zu Tag)
ACL TOP Familie
Normal-Kontroll-Plasma
95,6
Protein S Kontrollplasma
30,3
Korrelation:
System
Steigung Ordinatenabschnitt
ACL Familie
1,01
-5,883
ACL Futura
1,02
-4,890
ACL Advance
ACL TOP Familie 1,061
-4,832
3,1
3,1
5,6
11,2
r
Vergleichsmethode
0,982 IL Clotting Protein S am ACL
0,984 IL Clotting Protein S am ACL
0,985
IL Clotting Protein S am
ACL Futura/ACL Advance
Die Ergebnisse sind mit spezifischen Reagenzien- und Kontrollchargen ermittelt
worden.
Linearität:
System
IL Gerinnungssysteme
10 - 150 (% Aktivität PS)
ESPAÑOL - Revisión Prospecto 11/2009
Aplicación
Técnica coagulativa automatizada funcional para la determinación cuantitativa de la actividad
de la Proteína S libre en plasma humano citratado en los Sistemas de Coagulación IL.
Principio
La Proteína S es un cofactor vitamino-K dependiente que interviene en los procesos
anticoagulantes y profibrinolíticos de la Proteína C activada.1 La Proteína S se
presenta en el plasma en dos formas: Proteína S Libre (40%) y Proteína S ligada al
complemento C4-Binding Protein (C4BP) (60%). Sólo la Proteína S Libre tiene una
actividad funcional como cofactor.2
Las deficiencias en Proteína S pueden ser de origen hereditario o adquiridas. Las
deficiencias adquiridas se pueden observar durante el embarazo, terapia
anticoagulante oral, contraceptivos orales, enfermedades hepáticas, en neonatos, así
como en diversas condiciones clínicas.3,4,5 Deficiencias en Proteína S se han asociado
a un alto riesgo de desarrollar trombo embolismo venoso, especialmente en gente
joven. 6,7
El kit ProS™ determina la actividad funcional de la Proteína S libre, midiendo el grado
de prolongación del Tiempo de Protrombina (TP) en presencia de factor tisular,
fosfolípidos, iones calcio y Proteína C activada. La actividad de la Proteína S es
proporcional a la prolongación del tiempo de coagulación del plasma deficiente en
Proteína S al cual se le ha añadido muestra de paciente diluida.
Composición
El kit ProS consta de:
R Protein S reagent (Núm. Cat. 0020002810): 3 x 3 mL viales de una preparación
liofilizada que contiene factor tisular recombinante de conejo, fosfolípidos
sintéticos, iones calcio, proteína C activada, polibrene, tampón, estabilizantes,
y conservantes.
D Protein S deficient plasma (Núm. Cat. 0020002820): 6 x 1 mL viales de plasma
humano liofilizado del que se le ha eliminado artificialmente la Proteína S.
P Protein S control plasma (Núm. Cat. 0020002830): 2 x 1 mL viales de plasma
humano liofilizado que contiene una concentración baja de Proteina S.
MEDIDAS DE PRECAUCIÓN Y ADVERTENCIAS
El material usado en este producto ha sido verificado por métodos aprobados por la
FDA y encontrado no reactivo al Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg),
Anti-HCV y anticuerpos HIV. Manejar con precaución como si fuese potencialmente
infeccioso.8
Evítese el contacto con los ojos y la piel (S 24/25). No tirar los residuos por el desagüe
(S 29). Úsese indumentaria protectora adecuada (S 36).
Este producto es para diagnóstico in vitro.
Preparación
Protein S reagent: Disolver el contenido de cada vial con 3 mL de agua mL de agua
tipo CLRW o equivalente según CLSI (antes NCCLS).9 Cerrar el vial y homogeneizar
suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo
entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.
No agitar
Protein S deficient plasma: Disolver el contenido de cada vial con 1 mL de agua tipo
CLRW o equivalente según CLSI.9 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente.
Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y
25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.
No agitar.
Protein S control plasma: Disolver el contenido de cada vial con 1 mL de agua tipo
CLRW o equivalente según CLSI.9 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente.
Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y
25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.
No agitar.
Conservación y estabilidad de los reactivos
Los viales que no hayan sido abiertos y se hayan conservado a 2-8°C son estables
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Protein S reagent - Estabilidad después de su reconstitución:
- Sistemas ACL (100-7000): 2 días a 2-8°C, 15 días a -20°C en el vial original ó 2 días
a 15°C en máquina. No requiere agitación.
- Sistemas ACL 8000/9000/10000: 2 días a 2-8°C, 15 días a -20°C en el vial original ó
4 horas a 15°C en máquina. No requiere agitación.
- Sistemas ACL Futura y ACL Advance: 12 horas a 2-8°C, 7 días a -20°C en el
vial original ó 1 hora a 15°C en máquina. No requiere agitación.
- Familia ACL TOP: 1 hora a 15 ºC en máquina. No requiere agitación.
Protein S deficient plasma - Estabilidad después de la reconstitución: 4 horas a
15-25°C en el vial original ó 7 días a -20°C.
Protein S control plasma - Estabilidad después de la reconstitución: 4 horas a
15-25°C en el vial original ó 7 días a -20°C.
Notas:
- Los plasmas y los reactivos congelados se deberán descongelar a 37°C.
Homogeneizar suavemente antes de su uso. Antes de congelar los productos
deberán ser repartidos en partes alícuotas usando tubos de plástico con tapón. No
recongelar.
- Para obtener una estabilidad óptima de los reactivos, sugerimos que una vez
acabado el trabajo retire los reactivos del analizador y los conserve a 2-8°C en su vial
original.
- Las condiciones de almacenamiento de los reactivos (sin congelar/descongelados)
deben ser las mismas tanto para realizar la curva de calibración como para realizar
las analíticas de las muestras/controles.
- En los analizadores de la Familia ACL TOP se recomienda calibrar en cada sesión y
a continuación procesar las muestras.
Método de ensayo
Seguir las instrucciones de la técnica de acuerdo al Manual de Operador y/o al Manual
de Aplicaciones de los instrumentos IL.
Recolección y preparación de las muestras
Recoger nueve partes de sangre recién extraída por punción venosa sobre una parte
de anticoagulante citrato trisódico. Para la recolección, manipulación y conservación de
la muestra seguir las recomendaciones del Documento H21-A5 de la NCCLS.10
Reactivos y plasmas de control adicionales
Los siguientes productos no se suministran con el kit y deberán pedirse por separado.
América y Área del Pacífico
Europa
Núm. Cat.
Núm. Cat.
Plasma de Calibración
0020003700
0020003700
Control Normal
0020003120
0020003110
Control Anormal Bajo
0020003220
0020003210
Control Anormal Alto
0020003320
0020003310
Diluyente de factores
0009757600
0009757600
Control de Calidad
Para realizar un programa completo de Control de Calidad, se recomienda el uso de
controles normal y patológico.11 Los controles de IL adecuados para este programa
son el Control Normal, el Control Anormal Bajo, el Control Anormal Alto y el Plasma
Control Proteína S incluido en el kit. Cada laboratorio debe establecer su propia media
y desviación estándar y debe realizar un programa de Control de Calidad para
monitorizar sus resultados. Los controles deben ser analizados una vez por cada turno
de 8 horas, de acuerdo con la Normativa de Buenas Prácticas de Laboratorio.
Consúltese el Manual del Operador para obtener más información. Consúltese la
publicación de Westgard y col. para la identificación y resolución de situaciones
anormales del Control de Calidad.12
Trazabilidad de los calibradores y controles
Los valores indicados en la ficha técnica fueron obtenidos a través de múltiples
determinaciones en los sistemas de coagulación de IL usando un lote específico de
reactivo y un Estándar Interno de Plasma Calibrador. Dicho Estándar está valorado
respecto al actual Estándar Internacional de Proteína S el cual está indicado en la tabla
de valores limites aceptados.
Los resultados de ProS se expresan en segundos y actividad (%). Referirse al Manual del
Operador para mas información.
Limitaciones/interferencias
Los resultados de ProS en los sistemas de la Familia ACL y de la Familia ACL Futura/ACL
Advance no se ven afectados por concentraciones de Heparina (heparina estándar
y de bajo peso molecular) hasta 2 UI/mL, bilirrubina hasta 15 mg/dL, hemoglobina hasta
200 mg/dL y triglicéridos hasta 1000 mg/dL.
Los resultados de la ProS en la Familia ACL TOP no son alterados por concentraciones
de heparina no fraccionada de hasta 1.6 UI/ML, de heparina de Bajo Peso Molecular de
hasta 1.8 UI/mL, niveles de bilirrubina de hasta 15 mg/dL, niveles de hemoglobina de
hasta 200 mg/dL y niveles de triglicéridos de hasta 1000 mg/dL.
Plasmas hemolizados o turbios no deberían ser analizados.
Los resultados de ProS pueden verse afectados (disminuyendo la actividad PS) tanto
por la presencia en la muestra del Factor VII activado (Factor VIIa)13 como por la
mutación del Factor V (Factor V Leiden/APC-R)14, sobre todo en pacientes
homozigóticos para esta mutación genética.
Para evitar una posible influencia de la APC-R en los valores de la actividad ProS, las
muestras que informen resultados fuera del rango normal deben diluirse manualmente
1:2 con el plasma deficiente en Proteína S y reanalizarse. Los resultados obtenidos
deben multiplicarse por el factor de dilución 2.
Valores esperados
Se ha realizado un estudio del rango de normalidad utilizando el kit ProS en los
sistemas de coagulación de IL.
Sistema
N
PS (Actividad %)
Familia ACL
78
63 - 135
ACL Futura/ACL Advance
80
67 - 132
Familia ACL TOP
49
76 - 135
*Nota: la edad y estado hormonal pueden afectar el rango normal en mujeres. 15
Los rangos fueron calculados siguiendo las recomendaciones del documento C28-A de
la CLSI.16 Estos resultados se obtuvieron utilizando un lote específico de reactivo.
Debido a las variables que pueden afectar los resultados, cada laboratorio debe
establecer su propio rango de normalidad de ProS.
Características técnicas
Precisión:
La precisión intra-serie e inter-serie se ha determinado después de realizar múltiples
series de análisis.
Familia ACL
Media (% PS) CV% (intra-serie)
CV% (Total)
Control Normal
91,1
3,2
7,0
Control Proteína S
52,5
8,2
10,2
ACL Futura/ACL Advance Media (% PS) CV% (intra-serie)
CV% (Total)
Control Normal
90,5
3,9
5,1
Control Proteína S
49,1
6,6
7,6
Familia ACL TOP
Media (% PS) CV% (intra-serie)
CV% (Total)
Control Normal
95,6
3,1
5,6
Control Proteína S
30,3
3,1
11,2
Correlación:
Sistema
Pendiente Intersección
r
Método de referencia
Familia ACL
1,01
-5,883
0,982 Proteína S IL Coagulativa en ACL
ACL Futura
1,02
-4,890
0,984 Proteína S IL Coagulativa en ACL
ACL Advance
Familia ACL TOP 1,061
-4,832
0,985
Proteína S IL Coagulativa en
ACL Futura/ACL Advance
La precisión y los datos de correlación se han obtenido usando lotes específicos de
reactivos y de controles.
Linealidad:
Sistema
Sistemas Coagulación IL
10 - 150 (% Actividad PS)
Resultados
Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia
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for Bovine Protein S, J. Biol. Chem. 1980; 255: 5521-5524.
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Derived Activator of Protein C, Thromb. Res. 1988; 49: 214-251.
3. Mannucci PM, Valsecchi C, Krachmalnicoff A, Faioni EM, Tripodi A. Familial
Dysfunction of Protein S, Thromb. Haemost. 1989; 62: 763-766.
4. D’Angelo A, Viganò D’Angelo S, Esmon CT, Comp PC. Acquired Deficiencies of
Protein S. Protein S Activity during Oral Anticoagulation, Liver Disease and
Disseminated Intravascular Coagulation, J. Clin. Inves. 1988; 81: 1445-1454.
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Deficiency of Protein S, N. Engl. J. Med. 1984; 311: 1522-1528.
6. Maccaferri M, Legnani C, Preda L, Palareti G. Protein S Activity in Patients with
Heredofamilial protein S Deficiency and in patients with Juvenile venous
Thrombosis, Thromb. Res. 1991; 64: 647-658.
7. Faioni EM, Valsecchi C, Palla A, Taioli E, Razzari C, Mannucci PM. Free Protein S
Deficiency Is a Risk Factor for Venous Thrombosis. Thromb. Haemost. 1997; 78:
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8. Richmond JY, McKinney RW eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories, U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service,
4th Edition, 1999.
9. Clinical and Laboratory Standards Institute/CLSI. Preparation and testing of reagent
Water in the Clinical Laboratory, Third Edition, CLSI/NCCLS Document C3-A4; Vol. 26
No. 22.
10. Clinical and Laboratory Standards Institute/CLSI. Collection, Transport and Processing
of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation and Molecular Hemostasis
Assays; Approved Guideline - Fifth Edition, CLSI/NCCLS Document H21-A5; Vol. 28 No. 5.
11. Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation of Quality Control Specimens for
Coagulation, Am. J. Clin. Pathol. 1970; 53: 924-927.
12. Westgard JO, Barry PL. Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and
Productivity of Analytical Processes, AACC Press 1986.
13. Preda L, Tripodi A, Valsecchi C, Lombardi A, Finotto E, Mannucci PM.
A Prothrombin Time-Based Functional Assay of Protein S,
Thromb. Res. 1990; 60: 19-32.
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Activated Protein C in Nine Thrombophilic Families: Interference in a Protein S
Functional Assay, Thromb. Haemostas. 1993; 70: 1067-1071.
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Cut-off Values of Protein S: Reevaluation of the Thrombotic Risk Associated with
Protein S Deficiency, Thromb. Haemost. 1999; 82: 1093-1096.
16. Clinical and Laboratory Standards Institute/CLSI. How to define and Determine
Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Third Edition, CLSI/NCCLS Document
C28-A3; Vol. 28 No. 30.
ACCEPTANCE RANGE
ACL Family and ACL Futura/ACL Advance
ACL TOP Family
%
%
P
WHO STD
ACL, ACL Futura and ACL TOP are trademarks of Instrumentation Laboratory.
©2002 Instrumentation Laboratory
Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados
ACCEPTANCE RANGE
WHO STD
In vitro diagnostic medical
device
In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in vitro
Dispositif mèdical de
diagnostic in vitro
Per uso diagnostico in
vitro
Dispositivo médico para
utilização em diagnóstico
in vitro
Acceptance range / Referenzbereich / Rango esperado / Valeur usuelles / Intervallo di accettabilità / Intervalo de aceitação
WHO Standard Code / WHO Standard Code / Código del Estándar OMS / Code standard OMS / Codice OMS / Código Padrão WHO
Batch code
Chargen-Bezeichnung
Identificación número
de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Use by
Verwendbar bis
Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima del
Data límite de
utilização
Temperature limitation
Festgelegte
Temperatur
Temperatura de
Almacenamiento
Températures limites
de conservation
Limiti di temperatura
Límite de temperatura
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Consult instructions for use
Beilage beachten
Consultar la metódica
Lire le mode d’emploi
Vedere istruzioni per l’uso
Consultar as instruções de
utilização
Control
Kontrollen
Control
Contrôle
Controllo
Controlo
Biological risks
Biologisches Risiko
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
Manufacturer
Hergestellt von
Fabricado por
Fabricant
Prodotto da
Fabricado por
Authorised representative
Bevollmächtigter
Representante autorizado
Mandataire
Rappresentanza autorizzata
Representante autorizado
303049 R9 11/2009
HemosIL™
ProS - 0020002800
FRANÇAIS - Révision Notice 11/2009
Utilisation
Dosage automatisé de la Protéine S fonctionnelle par méthode chronométrique. Ce dosage
permet une détermination quantitative de la Protéine S libre dans les plasmas humains
citratés sur les appareils de coagulation IL.
Principe
La Protéine S, protéine vitamine K dépendante, est le cofacteur de la Protéine C activée qui
possède un effet anticoagulant et profibrinolytique.1 Deux formes sont présentes dans le
plasma : la Protéine S libre (40 %), et la Protéine S liée à la C4b-binding Protein (60 %).
Seule la Protéine S libre est biologiquement active.2 Les déficits en Protéine S peuvent être
héréditaires ou acquis. Les déficits acquis peuvent être observés pendant la grossesse, les
traitements anticoagulants oraux, l’utilisation de contraceptifs oraux, au cours les maladies
hépatiques chez l’enfant nouveau-né ainsi que dans d’autres conditions cliniques.3,4,5 Les
déficits en Protéine S sont associés à un risque élevé de développement d’épisodes
thromboemboliques veineux, particulièrement chez le sujet jeune.6,7
Le dosage ProS™ détermine l’activité fonctionnelle de la Protéine S libre en mesurant le
degré d’allongement d’un Temps de Quick (TQ) en présence de facteur tissulaire, de
phospholipides, de calcium et de Protéine C activée. L’activité en Protéine S est
proportionnelle à l’allongement du temps de coagulation d’un plasma déficient en
Protéine S auquel le spécimen dilué a été ajouté.
Composition
La trousse ProS contient:
R Protein S reagent (Réf. 0020002810): 3 flacons de 3 ml d’une préparation
lyophilisée contenant du facteur tissulaire recombinant de lapin, des
phospholipides synthétiques, du calcium, de la protéine C activée, du polybrène,
du tampon, des stabilisants et conservateurs.
D Protein S deficient plasma (Réf. 0020002820): 6 flacons de 1 ml de plasma
humain lyophilisé, artificiellement déplété en Protéine S.
P Protein S control plasma (Réf. 0020002830): 2 flacons de 1 ml de plasma
humain lyophilisé contenant un faible taux de Protéine S.
PRÉCAUTIONS D’EMPLOI ET MISES EN GARDE:
Ces réactifs contiennent des produits d’origine humaine. Ils ont été trouvés négatifs
pour les anticorps anti VIH 1/2, anti VHC et l’antigène de surface de l’hépatite B
(AgHBs), en utilisant des trousses de dépistage de 3ème génération. Cependant,
aucune technique ne permettant d’assurer l’absence totale du virus HIV ou de l’hépatite
B ou de tout autre agent infectieux, ces réactifs sont à manipuler avec les précautions
d’usage.8
Éviter le contact avec la peau et les yeux (S 24/25). Ne pas jeter les résidus à l’égout
(S 29). Porter un vêtement de protection approprié (S 36).
Ces produits sont à usage diagnostic in vitro.
Notes:
- Les réactifs et plasmas congelés pourront être décongelés à 37°C et mélangés
doucement avant utilisation. Avant congélation, ils peuvent être aliquotés en utilisant
des tubes en plastique et des bouchons. Ne pas recongeler.
- Pour une stabilité optimale, conserver les réactifs à 2-8°C dans les flacons d’origine
entre chaque utilisation.
- Les conditions de conservation des réactifs utilisés pour générer la courbe d’étalonnage
doivent être identiques à celles des réactifs servant à réaliser les analyses des
échantillons de patients et les contrôles (aucune congélation / décongélation).
- Sur les analyseurs ACL TOP, nous vous recommandons d’analyser les échantillons
par série et de calibrer à chaque série.
Procédures de test/instrument
Se référer au mode d’emploi de l’instrument IL approprié et/ou au manuel d’application pour
avoir des informations complètes sur les procédures de dosage.
Recueil des spécimens et préparation
9 parts de sang fraîchement prélevé sont collectées avec 1 part de citrate trisodique.
Se référer au document CLSI H21-A5 ou au document GEHT (STV, numéro spécial, 1-40,
1998) pour plus d’informations sur le prélèvement des échantillons, leur manipulation et leur
stockage.10
Réactifs auxiliaires et plasmas de contrôle
Non fournis avec la trousse, ils doivent faire l’objet d’une commande séparée.
Amérique et Pacifique
Europe
Réf.
Réf.
Plasma de calibrage
0020003700
0020003700
Contrôle normal
0020003120
0020003110
Contrôle anormal bas
0020003220
0020003210
Contrôle anormal haut
0020003320
0020003310
Diluant facteur
0009757600
0009757600
Contrôle de qualité
Les contrôles normaux et anormaux sont recommandés pour un programme de contrôle de
qualité complet.11 Les plasmas de Contrôle normal, Contrôle anormal bas, Contrôle anormal
haut et de Contrôle Protéine S de la trousse sont spécifiques à ce programme. Chaque
laboratoire doit établir sa propre moyenne et déviation standard et son programme de
contrôle de qualité pour vérifier l'état de fonctionnement du système analytique. Les contrôles
doivent être passés au minimum toutes les 8 heures en concordance avec une bonne
pratique de laboratoire. Se référer au mode d’emploi de l’instrument pour des informations
complémentaires. Se reporter à Westgard et al pour l’identification et la résolution des
contrôles hors limites.12
Préparation
Détermination des valeurs des calibrateurs et contrôles
Protein S reagent: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 3 ml d’eau
déminéralisée de type CLRW selon les normes CLSI (anciennement NCCLS) ou
équivalent.9 Replacer le capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète
reconstitution du produit. Conserver le réactif à 15-25°C pendant 30 minutes et
mélanger par inversion avant utilisation. Ne pas agiter violemment.
Protein S deficient plasma: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 1 ml d’eau
déminéralisée de ttype CLRW selon les normes CLSI ou équivalent.9 Replacer le
capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète reconstitution du produit.
Conserver le réactif à 15-25°C pendant 30 minutes et mélanger par inversion avant
utilisation. Ne pas agiter violemment.
Protein S control plasma: Dissoudre le contenu de chaque flacon avec 1 ml d’eau
déminéralisée de type CLRW selon les normes CLSI ou équivalent.9 Replacer le
capuchon et agiter doucement. Assurez-vous de la complète reconstitution du produit.
Conserver le réactif à 15-25°C pendant 30 minutes et mélanger par inversion avant
utilisation. Ne pas agiter violemment.
Les valeurs reportées dans les notices sont déterminées à partir d’essais multiples réalisés
sur les systèmes de coagulation IL, en utilisant des lots spécifiques de réactif IL, et ce, par
rapport à un Standard interne (Etalon Secondaire). Ce dernier est étalonné en regard du
standard international Protéine S actuel, et validé à l’aide de la table de valeurs limites
usuelles correspondantes.
Résultats
Les résultats de ProS sont reportés en secondes, en activité (%). Se référer au mode
d’emploi de l’instrument pour des informations complémentaires.
Conservation et stabilité des réactifs
Limites de la méthode et substances interférant avec celle-ci
Les résultats de ProS sur les analyseurs ACL & ACL Futura / ACL Advance ne sont pas
affectés par l’héparine (Héparine Non Fractionnée ou Héparine de Bas Poids Moléculaire)
jusqu’à 2 U/ml, par la bilirubine jusqu’à 15 mg/dl (150 mg/l), par l’hémoglobine jusqu’à 200
mg/dl et les triglycérides jusqu’à 1000 mg/dl (10 g/l).
Les résultats de ProS sur les analyseurs ACL TOP ne sont pas affectés par l’héparine
Non Fractionnée jusqu’à 1,6 U/ml ou les héparines de Bas Poids Moléculaire jusqu’à 1,8
U/ml, par la bilirubine jusqu’à 15 mg/dl (150 mg/l), par l’hémoglobine jusqu’à 200 mg/dl
et les triglycérides jusqu’à 1000 mg/dl (10 g/l).
Les échantillons par trop hémolysés ou lipémiques ne doivent pas être dosés.
Les résultats de ProS (diminution de l’activité PS) peuvent être affectés par la présence
du facteur VIIa13 (F VIIa) et par la mutation du facteur V Leiden (RPCA), chez tous les
patients homozygotes.14
Dans le but d’éviter une éventuelle influence due à la présence d’une RPCA sur
l’activité en ProS, les spécimens avec un taux en ProS en dehors des valeurs normales
pourront être dilués manuellement au 1/2 avec le plasma déficient en Protéine S et
redosés.
Les résultats ainsi obtenus doivent être multipliés par le facteur de dilution.
Valeurs attendues
Les valeurs normales de cette étude ont été obtenues en utilisant la trousse ProS sur
les appareils de coagulation IL.
Appareils
N
% d’activité en PS
ACL
78
63 - 135
ACL Futura/ACL Advance
80
67 - 132
ACL TOP Familie
49
76 - 135
* Note : l’âge et le statut hormonal peuvent affecter les valeurs normales chez la femme.15
Les normales ont été calculées comme il est recommandé par le document C28-A selon
les normes CLSI.16 Ces résultats sont obtenus en utilisant un lot spécifique de réactif.
Du fait qu’un grand nombre de variables peuvent affecter les résultats, nous
recommandons à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs normales pour la
ProS.
Caractéristiques et performances
Précision
La précision intra-séries et inter-séries a été évaluée au cours d’essais multiples.
ACL
Moyenne (% PS) CV% (Intra-séries) CV% (Inter-séries)
Contrôle Normal
91,1
3,2
7,0
Contrôle protéine S
52,5
8,2
10,2
ACL Futura/ACL Advance Moyenne (% PS) CV% (Intra-séries) CV% (Inter-séries)
Contrôle Normal
90,5
3,9
5,1
Contrôle protéine S
49,1
6,6
7,6
ACL TOP
Moyenne (% PS) CV% (Intra-séries) CV% (Inter-séries)
Contrôle Normal
95,6
3,1
5,6
Contrôle protéine S
30,3
3,1
11,2
Corrélation:
Appareils
pente ordonnée à l’origine
r
Méthode de référence
ACL
1,01
-5,883
0,982 IL Test Protéine S sur l’ACL
ACL Futura
1,02
-4,890
0,984 IL Test Protéine S sur l’ACL
ACL Advance
ACL TOP
1,061
-4,832
0,985
IL Test Protéine S sur
l’ACL Futura/ACL Advance
La précision et la corrélation des résultats ont été obtenus en utilisant des lots
spécifiques de réactifs et de contrôles.
Linéarité :
Appareils
Analyseurs de coagulation IL
10 - 150 (% PS activité)
Conservés à 2-8°C, les réactifs sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur
le flacon.
Protein S reagent - La stabilité du réactif reconstitué est de:
Appareils ACL® (100-7000): 2 jours à 2-8°C, 15 jours à -20°C dans le flacon d’origine
ou 2 jours à 15°C sur l’analyseur. Aucune agitation mécanique n’est nécessaire.
Appareils ACL 8000/9000/10000: 2 jours à 2-8°C, 15 jours à -20°C dans le flacon
d’origine ou 4 heures à 15°C sur l’analyseur. Aucune agitation mécanique n’est nécessaire.
Appareils ACL Futura® et ACL Advance: 12 heures à 2-8°C, 7 jours à -20°C dans le
flacon d’origine ou 1 heure à 15°C sur l’analyseur. Aucune agitation mécanique n’est
nécessaire.
ACL TOP® : 1 heure à 15°C sur l’analyseur. Aucune agitation mécanique n’est nécessaire.
Protein S deficient plasma - La stabilité du réactif reconstitué est de 4 heures à
15-25°C dans le flacon d’origine ou 7 jours à -20°C.
Protein S control plasma - La stabilité du réactif reconstitué est de 4 heures à 1525°C dans le flacon d’origine ou 7 jours à -20°C.
ProS - 0020002800
ITALIANO - Revisione dell’inserto 11/2009
Utilizzo
Test coagulativo funzionale per la determinazione quantitativa della Proteina S libera nel
plasma umano sui sistemi di coagulazione IL.
Principio del metodo
La Proteina S, una proteina vitamina K dipendente, è il cofattore necessario all’azione
anticoagulante e profibrinolitica della Proteina C attivata.1 La Proteina S è presente nel
plasma in due diverse forme: Proteina S libera (40%) e Proteina S legata al C4bBP
(Complement C4b - Binding Protein) (60%). Solo la Proteina S libera è funzionalmente
attiva.2
La carenza di Proteina S può essere ereditaria o acquisita. Carenze acquisite possono
essere riscontrate durante la gravidanza, la terapia anticoagulante orale, l’uso di
contraccettivi, nelle epatopatie, nei neonati o in altre condizioni cliniche.3,4,5 La carenza
di Proteina S è generalmente associata ad un alto rischio di eventi tromboembolici
venosi, specialmente in soggetti giovani. 6,7
Il kit ProS™ determina l’attività funzionale della Proteina S libera eseguendo un tempo
di protrombina (PT) modificato in presenza di fattore tissutale, fosfolipidi, ioni calcio e
Proteina C attivata.
L’attività della Proteina S è proporzionale all’allungamento del tempo di coagulazione
del Plasma carente di Proteina S a cui è stato addizionato il plasma diluito del
campione in esame.
Composizione
Il kit ProS è composto da:
R Protein S reagent (Nr. Cat. 0020002810): 3 flaconi da 3 mL di una preparazione
liofilizzata contenente fattore tissutale ricombinante di coniglio, fosfolipidi sintetici,
ioni calcio, Proteina C attivata, polibrene, tampone, stabilizzanti e conservanti.
D Protein S deficient plasma (Nr. Cat. 0020002820): 6 flaconi da 1 mL di plasma
umano liofilizzato depletato artificialmente di Proteina S.
P Protein S control plasma (Nr. Cat. 0020002830): 2 flaconi da 1 mL di plasma
umano liofilizzato con livelli ridotti di Proteina S.
ATTENZIONE : POSSIBILE RISCHIO DI INFEZIONE
Questo prodotto contiene materiale di cui è stata verificata all’origine, con metodi
raccomandati dalla FDA, l’assenza dell’antigene di superficie dell’epatite B (HBsAg) e
degli anticorpi anti HCV e anti HIV. Trattare come potenzialmente infetto.8
Evitare il contatto con gli occhi e con la pelle (S 24/25). Non gettare i residui nelle
fognature (S 29). Usare indumenti protettivi adatti (S 36).
Per l’impiego diagnostico in vitro.
Preparazione
Protein S reagent: Sciogliere il contenuto del flacone con 3 mL di acqua di Tipo CLRW
secondo il documento CLSI (ex NCCLS) o equivalente.9 Chiudere con il tappo e miscelare
delicatamente fino alla completa ricostituzione del materiale. Mantenere il reagente a
15-25°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente prima dell’uso. Non agitare.
Protein S deficient plasma: Sciogliere il contenuto di ciascun flacone con 1 mL di acqua di
Tipo CLRW secondo il documento CLSI o equivalente.9 Chiudere con il tappo e miscelare
delicatamente fino alla completa ricostituzione del materiale. Mantenere il reagente a 1525°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente prima dell’uso. Non agitare.
Protein S control plasma: Sciogliere il contenuto del flacone con 1 mL di acqua di Tipo
CLRW secondo il documento CLSI o equivalente.9 Chiudere con il tappo e miscelare
delicatamente fino alla completa ricostituzione del materiale. Mantenere il reagente a 1525°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente prima dell’uso. Non agitare.
Protein S deficient plasma - Stabilità dopo la ricostituzione: 4 ore a 15-25°C nel flacone
originale o 7 giorni a -20°C.
Protein S control plasma - Stabilità dopo la ricostituzione: 4 ore a 15-25°C nel flacone
originale o 7 giorni a -20°C.
Nota:
- I reagenti e i plasmi congelati devono essere scongelati a 37°C e miscelati
delicatamente prima dell’uso. I componenti del kit possono essere divisi in aliquote e
congelati usando provette di plastica provviste di tappo. Non ricongelare.
- Al termine dei cicli lavorativi si consiglia di conservare il reagente a 2-8°C nel flacone
originale per una migliore stabilità.
- La condizione di conservazione dei reagenti utilizzati per la calibrazione dello strumento
(non congelati o scongelati) dovrebbe essere la stessa dei reagenti utilizzati
nell’analisi dei campioni e dei controlli.
- Su sistemi ACL TOP è necessario eseguire la calibrazione ad ogni sessione analitica
ed ad ogni gruppo di campioni.
Metodo
Per le metodiche e le procedure di lavoro consultare il Manuale dell’Operatore e/o il
Manuale Applicativo.
Preparazione dei campioni
Aggiungere a nove parti di sangue venoso fresco una parte di trisodio citrato. Per
informazioni aggiuntive sulla preparazione, il trattamento e la conservazione dei
campioni fare riferimento al documento CLSI H21-A5.10
Reagenti ausiliari e plasmi di controllo
I seguenti reattivi non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati separatamente.
Nr. Cat.
Plasma calibrante
0020003700
Controllo normale
0020003110
Controllo patologico (livello basso)
0020003210
Controllo patologico (livello alto)
0020003310
Diluente fattori
0009757600
Controllo di qualità
Per un completo programma di controllo di qualità, IL raccomanda l’uso di plasmi normali e
patologici.11 Il Controllo normale e i Plasmi di controllo patologico (livello basso) e (livello
alto) e il Plasma di controllo proteina S sono indicati per questo programma. Ogni laboratorio
dovrà stabilire i propri valori medi e le deviazioni standard per ogni controllo e stabilire le
procedure di analisi. I controlli dovranno essere analizzati almeno una volta ogni 8 ore in
accordo con le esigenze del laboratorio. Consultare il Manuale dell’Operatore dello
strumento per ulteriori informazioni. Per l’identificazione e la risoluzione di situazioni
particolari, fare riferimento all’articolo di Westgard et al.12
Calibratori e materiali di controllo
I valori indicati sono stati assegnati eseguendo repliche successive sui sistemi di
coagulazione IL con l’impiego di un lotto specifico di reagente verso uno Standard Interno
(Aziendale) di Plasma calibrante che è riconducibile all’attuale Standard Internazionale di
Proteina S, identificabile nella tabella degli intervalli di accettabilità.
Risultati
I valori di ProS dei campioni possono essere riportati in secondi e attività (%). Riferirsi al
Manuale dell’Operatore per ulteriori informazioni.
Limitazioni/sostanze interferenti
I risultati del test ProS su ACL Classici e su sistemi ACL Futura/ACL Advance non sono
influenzati in presenza di livelli di eparina (eparina non frazionata e a basso peso molecolare)
fino a 2 U/mL, bilirubina fino a 15 mg/dL, emoglobina fino a 200 mg/dL e trigliceridi fino a
1000 mg/dL.I risultati del test ProS su sistemi ACL TOP non sono non sono influenzati in
presenza di livelli di eparina (UF) fino a 1,6 U/mL, eparina (LMW) fino a 1,8 U/mL, bilirubina
fino a 15 mg/dL, emoglobina fino a 200 mg/dL, trigliceridi fino a 1000 mg/dL.
Nel caso di campioni emolizzati o torbidi si consiglia di ripetere il prelievo.
I risultati del test ProS possono essere influenzati (riduzione dei valori di attività PS) in
presenza sia di Fattore VII attivato (FVIIa)13 che della mutazione del Fattore V Leiden
(APC-R)14, soprattutto in pazienti omozigoti per tale difetto genetico.
Allo scopo di evitare la possibile influenza della APC-R sulla attività ProS, i plasmi dei
pazienti con risultati fuori dall’intervallo di normalità dovrebbero essere diluiti 1:2 con
plasma carente di proteina S e rianalizzati. I risultati ottenuti devono essere moltiplicati
per il relativo fattore di diluizione.
Valori attesi
Utilizzando il kit ProS è stato determinato il seguente intervallo di riferimento sui sistemi
di coagulazione IL.
Sistema
N
Attività % PS
ACL 100-10000
78
63 - 135
ACL Futura/ACL Advance
80
67 - 132
ACL TOP
49
76 - 135
* Nota: L’età e lo stato ormonale possono modificare l’intervallo di normalità.15
Gli intervalli di riferimento sono stati calcolati seguendo le raccomandazioni del
documento C28-A del CLSI.16 Tali risultati sono stati ottenuti utilizzando un lotto
specifico di reagente. A causa delle numerose variabili che possono influenzare i
risultati, ogni laboratorio dovrebbe stabilire il proprio range di normalità.
Prestazioni
Precisione
La precisione nella serie e tra
ACL 100-10000
Controllo normale
Controllo proteina S
ACL Futura/ACL Advance
Controllo normale
Controllo proteina S
ACL TOP
Controllo normale
Controllo proteina S
Correlazione:
Sistema
pendenza
ACL 100-10000
1,01
ACL Futura
1,02
ACL Advance
ACL TOP
1,061
serie è stata verificata eseguendo numerose repliche.
Media (% PS)
CV% (nella serie)
CV% (Totale)
91,1
3,2
7,0
52,5
8,2
10,2
Media (% PS)
CV% (nella serie)
CV% (Totale)
90,5
3,9
5,1
49,1
6,6
7,6
Media (% PS)
CV% (nella serie)
CV% (Totale)
95,6
3,1
5,6
30,3
3,1
11,2
intercetta
-5,883
-4,890
r
Metodo di riferimento
0,982 Proteina S coagulativa IL su ACL
0,984 Proteina S coagulativa IL su ACL
-4,832
0,985
Proteina S coagulativa IL su
ACL Futura/ACL Advance
I risultati dei test di precisione e di correlazione sono stati ottenuti usando uno specifico
lotto di reagenti e controlli.
Linearità:
Sistema
Sistemi di coagulazione IL
10 - 150 (Attività % PS)
Conservazione e stabilità dei reagenti
I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta.
Protein S reagent - Stabilità dopo la ricostituzione:
Strumenti ACL 100-7000: 2 giorni a 2-8°C, 15 giorni a -20°C nel flacone originale o
2 giorni a 15°C sullo strumento. Non è richiesto l’agitatore per la miscelazione.
Strumenti ACL 8000/9000/10000: 2 giorni a 2-8°C, 15 giorni a -20°C nel flacone
originale o 4 ore a 15°C sullo strumento. Non è richiesto l’agitatore per la miscelazione.
Strumenti ACL Futura e ACL Advance: 12 ore a 2-8°C, 7 giorni a -20°C nel flacone
originale o 1 ora a 15°C sullo strumento. Non è richiesto l’agitatore per la miscelazione.
Sistemi ACL TOP: 1 ora a 15°C sullo strumento. Non è richiesto l’agitatore per la
miscelazione.
ProS - 0020002800
PORTUGUÊS - Revisão do folheto 11/2009
Aplicação
Técnica de coagulação funcional automatizada para a determinação quantitativa da Proteína
S livre em plasma humano citratado nos Sistemas de Coagulação da IL.
Princípio
A Proteína S é uma glicoproteína vitamina K-dependente, que actua como cofactor da
Proteína C Activada, aumentando os seus efeitos anti-coagulantes e profibrinolíticos.1
A Proteína S está presente no plasma sob duas formas: Proteína S livre (40%) e
Proteína S ligada à proteína transportadora da fracção C4b do complemento (60%).
As duas formas estão em equilíbrio dinâmico e apenas a Proteína S livre tem
actividade biológica.2
Os défices de Proteína S podem ser congénitos ou adquiridos. Estes últimos podem
ser observados: durante a gravidez, em terapia anti-coagulante oral (TAO), uso de
anti-contraceptivos orais, hepatopatías, recém nascidos, assim como em outras
situações clínicas.3,4,5
Os défices de Proteína S estão associados a um risco maior de tromboembolismo
venoso, especialmente em pessoas jovens.6,7
O ensaio ProS™ determina a actividade funcional da Proteína S livre medindo o grau
de prolongamento do Tempo de Protrombina (TP) na presença de factor tecidular,
fosfolípidos, iões de cálcio e Proteína C activada. A actividade da Proteína S é
proporcional ao prolongamento do tempo de coagulação do Plasma Deficiente em
Proteína S ao qual se incluiu a amostra de paciente diluída.
Composição
O kit de ProS é composto por:
R Protein S reagent (Núm. Cat. 0020002810): recipientes 3 x 3 mL de uma
preparação liofilizada que contém factor tecidular recombinante de coelho,
fosfolípidos sintéticos, iões de cálcio, Proteína C activada, polibrene, tampão,
estabilizadores e conservantes.
D Protein S deficient plasma (Núm. Cat. 0020002820): recipientes 6 x 1 mL de
plasma humano liofilizado, do qual se eliminou artificialmente a Proteína S.
P Protein S control plasma (Núm. Cat. 0020002830): recipientes 2 x 1 mL de
plasma humano liofilizado que contém uma concentração baixa de Proteína S
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS:
O material utilizado neste produto foi analisado com testes aprovados pela FDA e
verificou-se a ausência de reacção ao Antigénio de Superfície da Hepatite B (HBsAg),
aos anticorpos anti-HCV e anti-HIV 1/2. No entanto, deve-se manipular com precaução,
como potencialmente infeccioso.8
Evitar o contacto com a pele e os olhos (S 24/25). Não deitar os resíduos no esgoto
(S 29). Usar equipamento de protecção adequado (S 36).
Este reagente destina-se a utilização em diagnóstico in vitro .
Preparação
Protein S reagent: Dissolver o conteúdo de cada recipiente com 3 mL de água tipo
CLRW da CLSI (anteriormente NCCLS) ou equivalente.9 Fechar o recipiente e
homogeneizar suavemente. Verificar se o produto fica completamente dissolvido.
Conservar o reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o
recipiente, antes de utilizar. Não agitar.
Protein S deficient plasma: Dissolver o conteúdo de cada recipiente com 1 mL de
água tipo CLRW da CLSI ou equivalente.9 Fechar o recipiente e homogeneizar
suavemente. Verificar se o produto fica completamente dissolvido. Conservar o
reagente entre 15 e 25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes
de utilizar. Não agitar.
Protein S control plasma: Dissolver o conteúdo de cada recipiente com 1 mL de água
tipo CLRW da CLSI ou equivalente.9 Fechar o recipiente e homogeneizar suavemente.
Verificar se o produto fica completamente dissolvido. Conservar o reagente entre 15 e
25°C durante 30 minutos. Misturar invertendo o recipiente, antes de utilizar. Não agitar.
Notas:
- Os plasmas e os reagentes congelados deverão ser descongelados a 37°C.
Homogeneizar suavemente antes de utilizar. Antes de congelados, os produtos
deverão ser repartidos em alíquotas, usando tubos de plástico com tampa.
Não recongelar.
- Para optimizar a estabilidade, devem retirar-se os reagentes dos equipamentos e
devem conservar-se a 2-8°C nos recipientes originais bem tapados.
- As condições de armazenamento dos reagentes utilizados na preparação da curva de
calibração devem ser as mesmas que, para os reagentes utilizados na análise de
amostras/controlos (não congelados ou descongelados).
- Na Família ACL TOP recomenda-se a calibração em cada sessão de trabalho e
indicação do lote utilizado na sessão de análise.
Limitações/interferências
Seguir as instruções da técnica de acordo com o Manual do Operador e/ou com o
Manual de Aplicações dos Instrumentos IL.
Concentrações de heparina (heparina não fraccionada ou heparina de baixo peso molecular)
até 2 U/mL, de bilirrubina até 15 mg/dL, de hemoglobina até 200 mg/dL e de triglicéridos até
1000 mg/dL não alteram os resultados ProS na Família ACL e ACL Futura/ACL Advance
Systems. Os resultados ProS na Família ACL TOP não são afectados pela heparina não
fraccionada (UF) até 1.6 U/mL, heparina (BPM) até
1.8 U/mL, bilirrubina até 15 mg/dL, hemoglobina até 200 mg/dLe triglicéridos até
1000 mg/dL. Não utilizar amostras hemolisadas e turvas.
Os resultados de ProS podem ser afectados (diminuindo a actividade da PS) tanto pela
presença do Factor VII activado na amostra (Factor VIIa)13, como pela mutação do Factor V
(Factor V Leiden/APC-R)14, sobretudo em pacientes homozigóticos para esta mutação
genética.
Para evitar uma possível influência da APC-R nos valores da actividade da ProS obtidos, as
amostras com resultados fora do limite normal devem ser diluídas manualmente de 1:2 com
Plasma deficiente em Proteína S e devem ser novamente analisadas. Os resultados
impressos devem ser multiplicados por 2 para corrigir a diluição.
Recolha e preparação de amostras
Valores esperados
Adicionar nove partes de sangue extraído recentemente por punção venosa a uma
parte de citrato trissódico. Para efectuar a recolha, o manuseamento e a conservação
da amostra devem seguir-se as recomendações referidas no documento H21-A5 da CLSI.10
Efectuou-se um estudo do intervalo de normalidade utilizando o kit da ProS nos Sistemas de
Coagulação da IL.
Sistema
N
Actividade (%) PS
Familia ACL
78
63 - 135
ACL Futura/ACL Advance
80
67 - 132
Familia ACL TOP
49
76 - 135
* Nota: A idade e a situação hormonal podem afectar o intervalo normal para o sexo
feminino.15
Os limites foram calculados de acordo com as recomendações referidas no documento
C28-A da CLSI.16 Os resultados foram obtidos utilizando o mesmo lote de reagente.
Devido às diversas variáveis que podem afectar os resultados, cada laboratório deve
estabelecer o seu próprio intervalo de normalidade.
Método de ensaio
Reagentes adicionais e plasmas de controlo
Este kit não inclui os produtos abaixo mencionados, pelo que deverão ser pedidos em
separado:
Américas e Pacífico
Europa
Núm. Cat.
Núm. Cat.
Plasma de Calibração
0020003700
0020003700
Controlo Normal
0020003120
0020003110
Controlo Anormal Baixo
0020003220
0020003210
Controlo Anormal Alto
0020003320
0020003310
Diluente de factores
0009757600
0009757600
Controlo de Qualidade
Para realizar um programa completo de Controlo de Qualidade, recomenda-se a
utilização dos controlos normais e anormais.11 Os controlos adequados para este
programa são o Controlo Normal, o Controlo Anormal Baixo, o Controlo Anormal Alto e
o Plasma Controlo de Proteína S. Cada laboratório deve estabelecer a sua própria
média e desvio padrão e deve efectuar um programa de controlo de qualidade para
monitorizar os seus resultados. Os controlos devem ser analisados uma vez em cada
turno de 8 horas, de acordo com a norma vigente no Laboratório. Ver Manual do
Operador para mais informações. Consultar a publicação de Westgard e col. para
identificar e solucionar situações anormais do Controlo de Qualidade.12
Determinação dos valores dos calibradores e materiais de controlo
Os valores referidos foram determinados através de diversas análises efectuadas nos
Sistemas de Coagulação da IL, utilizando um lote específico de reagente IL e
comparando com um Padrão interno da IL de acordo com os Padrões Internacionais de
Proteína S actualmente utilizados, identificados na tabela do intervalo de aceitação.
Resultados
Os resultados de ProS são expressos em segundos e Actividade (%).Consultar o
Manual do Utilizador para mais informações.
Características Técnicas
Precisão
A precisão intra-série e inter-série foi realizada em diferentes séries.
Familia ACL
Média (% PS)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
Controlo Normal
91,1
3,2
7,0
Controlo Proteína S
52,5
8,2
10,2
ACL Futura/ACL Advance
Média (% PS)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
Controlo Normal
90,5
3,9
5,1
Controlo Proteína S
49,1
6,6
7,6
Familia ACL TOP
Média (% PS)
CV% (Intra-série)
CV% (Total)
Controlo Normal
95,6
3,1
5,6
Controlo Proteína S
30,3
3,1
11,2
Correlação:
Sistema
pendente intersecção
r
Método Comparativo
Familia ACL
1,01
-5,883
0,982 IL Proteína S de coagulação em ACL
ACL Futura
1,02
-4,890
0,984 IL Proteína S de coagulação em ACL
ACL Advance
Familia ACL TOP 1,061
-4,832
0,985
IL Proteína S de coagulação em
ACL Futura/ACL Advance
A precisão e os dados de correlação foram obtidos utilizando lotes específicos de
reagentes e de controlos.
Linearidade:
Sistema
Sistemas de Coagulação IL
10 - 150 (Actividade % PS)
Conservação e estabilidade dos reagentes
Os recipientes que não tenham sido abertos e tenham sido conservados entre 2-8°C,
são estáveis até à data de validade indicada no rótulo.
Protein S reagent - Estabilidade após reconstituição:
- Sistemas ACL (100-7000): 2 dias a 2-8°C, 15 dias a -20°C no recipiente original ou
2 dias a 15°C no aparelho. Não é necessário agitar.
- Sistemas ACL 8000/9000/10000: 2 dias a 2-8°C, 15 dias a -20°C no recipiente
original ou 4 horas a 15°C no aparelho. Não é necessário agitar.
- Sistemas ACL Futura e ACL Advance: 12 horas a 2-8°C, 7 dias a -20°C no
recipiente original ou 1 hora a 15°C no aparelho. Não é necessário agitar.
- Família ACL TOP®: 1 hora a 15ºC no aparelho. Não é necessária agitação.
Protein S deficient plasma - Estabilidade após reconstituição: 4 horas a 15-25°C no
recipiente original ou 7 dias a -20°C.
Protein S control plasma - Estabilidade após reconstituição: 4 horas a 15-25°C no
recipiente original ou 7 dias a -20°C.
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
303049 R9 11/2009
ProS
Printed Insert Sheet:
Revision:
Issued:
C.O.:
0020002800
303049
R9
November 2009
412182
LANGUAGES
ENGLISH
DEUTSCH
ESPAÑOL
FRANÇAIS
ITALIANO
PORTUGÛES
TECHNICAL SPEC'S
PAPER:
SIZE:
PRINT:
PRINT COLOR:
White paper, 50-60 g/m2 weight.
11 x 24" (280 x 609 mm.).
Front/Back.
Front - Top band Green Pantone 382, all remaining type in black.
Back - All type in black.
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
303049 R9 11/2009