La PCR ? Qu`est ce que c`est ? Pourquoi utiliser ce test ? Quels sont

La PCR ? Qu’est ce que c’est ?
Quels sont les germes recherchés ?
Quels prélèvements réaliser ?
La PCR (Polymerase Chain Reaction) est une méthode
de détection et de quantification de fragments de
matériel génétique (ADN ou ARN) propres à un agent
pathogène donné. On appelle ces fragments des
« cibles ».
Il s’agit d’une méthode très sensible (c'est-à-dire
qu’elle peut détecter un agent pathogène présent en
faible quantité dans le prélèvement), spécifique
(puisque basée sur l’identité génétique du pathogène) et
rapide.
Deux options vous sont proposées :
Le test PCR peut être réalisé sur :
Pourquoi utiliser ce test ?
Le Test Pathoproof détecte rapidement un
nombre important de germes
Habituellement, les germes pathogènes responsables de
mammites sont recherchés par culture bactérienne. Ces
analyses ne ciblent que les bactéries, parfois les levures,
qui cultivent facilement et nécessitent de 48 à 72h pour
pouvoir identifier le(s) germe(s) présents dans
l’échantillon.
La PCR quant à elle, recherche de 12 à 16 cibles
simultanément (Voir détail) : les bactéries les plus
fréquemment isolées lors des mammites mais aussi des
mycoplasmes, des levures ou des algues
pathogènes.
Par ailleurs, l’analyse peut être faite en quelques heures
et permet de détecter des agents pathogènes de
culture difficile ou non cultivables.
PATHOPROOF Mastitis Complete 12 :
Recherche et quantification de 12 cibles – Les
bactéries les plus fréquemment rencontrées lors
de mammites + le gène de résistance aux bétalactamines (Pénicillines).
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Staphylococcus aureus
Staphylococcus à coagulase négative
Streptococcus agalactiae
Streptococcus dysgalactiae
Streptococcus uberis
Escherichia coli
Corynebacterium bovis
Enterococcus faecalis et faecium
Klebsiella pneumoniae et oxytoca
Serratia marcescens
Arcanobacterium pyogenes et
Peptostreptococcus indolicus
Gène de résistance aux bétalactamines des staphylocoques
PATHOPROOF Mastitis Complete 16 :
Recherche et quantification de 16 cibles – Les
bactéries ci-dessus + le gène de résistance aux
béta-lactamines + les germes suivants :
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Mycoplasma bovis
Mycoplasma spp.
Levures
Lait de Tank (30 ml) : Cette analyse permet d’obtenir
une image à l’instant T de la flore du lait et de détecter
les agents pathogènes présents.
Il est intéressant dans ce cas de répéter les analyses à
intervalle régulier afin de suivre l’évolution de la situation
sanitaire de l’élevage et de mettre en place les mesures
préventives adéquates.
Lait de mammite ou lait de quartier (30 ml) :
Le prélèvement de lait doit être réalisé dans de bonnes
conditions afin de ne pas contaminer le prélèvement par
des germes issus de l’environnement (Voir encadré
« Comment réaliser les prélèvements »).
Il est par ailleurs reconnu que 2 quartiers d’un même
animal peuvent être infectés par des germes différents. Il
est donc utile de réaliser plusieurs prélèvements, si
plusieurs quartiers sont atteints, ou bien de prélever
plusieurs animaux du troupeau.
Comment les acheminer ou les
conserver ?
Les prélèvements doivent être adressés au Laboratoire
rapidement et sous régime du froid (T°C < 4°C), si
possible dans les 24h. S’ils ne peuvent être acheminés
dans ce délai, ils peuvent être conservés congelés et
transmis groupés (Voir adresse au dos).
Quel est le coût ?
Le coût (en € HT) par analyse varie selon le nombre
d’échantillons reçu :
Prototheca spp (algue pathogène)
Ces agents pathogènes sont détectés et quantifiés
permettant de déterminer si un agent pathogène
en particulier est dominant dans le prélèvement
aux seuils de prévalence 90 ou 99 %.
Pathoproof complete 12
Pathoproof complete 16
1à4
47.90
49.90
A partir de 5
31.90
34.90
Ce coût reste inférieur au prix d’une analyse
bactériologique classique avec identification de
germes et antibiogramme.
Comment réaliser les prélèvements ?
1. Mettre des gants non poudrés ou bien se
nettoyer et désinfecter les mains correctement.
2. Laver les trayons avec de l’eau propre et essuyer
avec une serviette en papier jetable propre.
3. Appliquer une solution de pré-trempage sur
le trayon, laisser agir 30 secondes puis essuyer
avec une serviette en papier propre.
4. Nettoyer et désinfecter avec une lingette
désinfectante à l’alcool et laisser sécher.
5. Ecarter les premiers jets (10 à 15 ml).
6. Nettoyer et désinfecter avec une lingette
désinfectante à l’alcool et laisser sécher.
7. Prélever au minimum 30 ml de lait dans un
flacon stérile et refermer correctement le
bouchon.
8. Identifier le flacon : N° de bovin, date de
prélèvement, et quartier si besoin.
9. Transmettre les prélèvements le plus
rapidement possible sous régime du froid (<4°C)
ou bien les congeler si le délai doit dépasser 24h.
Où adresser vos prélèvements ?
Laboratoire départemental d’Analyses
Vétérinaires et Alimentaires de l’Aube
Chemin des Champs de la Loge
BP 216
10006 TROYES CEDEX
Tél : 03.25.42.52.00
Fax : 03.25.42.52.15
Mail : [email protected]
Site : www.cg-aube.fr, rubrique « Qualité de
vie », « Laboratoire départemental ».
CONTACT :
Olivier GIBOUT – Responsable Technique
DIAGNOSTIC DES MAMMITES :
Enfin une méthode rapide pour
détecter les agents pathogènes
dans votre exploitation : la PCR
Les mammites sont un problème récurrent dans
les élevages bovins.
Face au nombre important de germes pouvant
être impliqués et parfois non identifiables par
les techniques classiques de diagnostic, la PCR
représente une alternative de choix.