IMMUNOQUICK ELIFA HSV IgG

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IMMUNOQUICK ELIFA HSV IgG
NOTICE D’UTILISATION
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG
Ref: 5525 / 0526_K20
INSTRUCTION FOR USE
ALL. DIAG
10, rue Ettoré Bugatti – BP 28006
67038 STRASBOURG Cedex 2 - FRANCE
Tél. : +33 3 88 78 80 88 - Fax : +33 3 88 78 76 78
www.alldiag.com – [email protected]
Liste des Symboles
Attention, voir notice d’utilisation
Tests par coffret
Fabricant
Pour diagnostic in vitro
uniquement
Péremption
Usage unique
Conserver entre 2-8°C
No. de lot
8°C
2°C
REF
Code produit
Index of Symbols
Attention, see instructions for use
Tests per kit
Manufacturer
For in vitro
diagnostic use only
Use by
Do not re-use
Store between 2-8℃
Lot Number
8°C
2°C
Directive 98/79/CE
REF
Catalog #
Version 1 – Mise à jour le 08/03/2010 ; Updated 2010/03/08
Fabricant /
Manufacturer
Fabricant / Manufacturer : BioSynex
12, RUE ETTORE BUGATTI – BP38016
67038 STRASBOURG CEDEX 2
www.biosynex.com – [email protected]m
Distribué par / Distributed by: ALL. DIAG
10, rue Ettoré Bugatti – BP 28006
67038 STRASBOURG Cedex 2 - FRANCE
Tél. : 03 88 78 80 88 - Fax : 03 88 78 76 78
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IMMUNOQUICK ELIFA HSV IgG
Test rapide de détection des IgG spécifiques de types dirigés contre les virus HSV 1 (Herpes simplex virus 1)
et HSV2 (Herpes simplex virus 2) dans le sérum.
Réf. N°: 5525 / 0526_K20
Pour usage in vitro uniquement
1- OBJECTIF
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG est un test d’immunofiltration qualitatif destiné à la détection des anticorps IgG spécifiques de type
dirigés contre les virus HSV 1 (Herpes simplex virus 1) et HSV2 (Herpes simplex virus 2) dans le sérum humain.
2- INTRODUCTION
Les infections par les virus herpes simplex virus (HSV) sont largement répandues et représentent encore un problème médical croissant. Les
infections par les virus HSV peuvent entrainer des complications sérieuses mettant en jeu le pronostic vital avec des séquelles à long terme
chez le nouveau-né et l’immunodéprimé. De plus, de nombreux patients non immunodéprimés souffrent d’infections à herpes virus avec
manifestations oro-faciales principalement dues à HSV de type 1 ou ano-génitales principalement dues à HSV de type 2. Bien que l’herpes
génital soit généralement induit par le HSV de type 2, les infections génitales à HSV de type 1 sont en progression. Un diagnostic spécifique
de type permet d’adapter le traitement car les deux sérotypes ont des pronostics différents et nécessitent une prise en charge différente. A ce
jour, la glycoprotéine gG est le seul antigène reconnu comme permettant un sérodiagnostic spécifique de type.
Les deux types de virus herpes, HSV1 et HSV2 entrainent des infections latentes avec différents niveaux d’expression clinique. Lorsque le
patient présente des lésions, le diagnostic se fait habituellement par détection directe par mise en évidence d’acides nucléiques ou d’antigènes
spécifiques. En l’absence de symptômes, les tests sérologiques permettent d’identifier les porteurs de l’un ou des deux types du virus HSV.
Après la primo-infection, le virus persiste sous forme latente au niveau des ganglions locaux et est réactivé fréquemment. De nombreuses
réactivations à HSV2 sont asymptomatiques et non reconnues cliniquement. La plupart des infections à HSV sont transmises sans lésions.
Des infections généralisées sévères sont particulièrement présentes chez les nouveau-nés et les immunodéprimés. Les études
épidémiologiques ont montré une présence épidémique du virus HSV2 avec une augmentation de la prévalence. La sérologie spécifique de
type peut être envisagée dans certaines situations à risque. L’identification des patients infectés par le virus HSV2 peut être utile pour réduire
le risque de transmission à l’intérieur de ces groupes.
3- PRINCIPE
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG est un test d’immunofiltration qui utilise les antigènes recombinants gG1 et gG2 spécifiques
respectivement de HSV1 et HSV2 fixés sur une membrane de nitrocellulose au niveau des zones T1 et T2 respectivement pour détecter la
présence d’anticorps de type IgG dirigés contre ces marqueurs spécifiques de type de l’infection à HSV. Le test est constitué d’une
membrane insérée dans un moule plastique contenant une substance absorbante. La membrane est visible à travers une fenêtre de lecture
située sur la face du moule plastique.
La protéine A est fixée sur la membrane au niveau de la zone C.
Lorsque l’échantillon dilué dans le tampon de dilution passe à travers la membrane, les anticorps anti gG1 et anti gG2 se lient avec les
antigènes gG1 et gG2 au niveau des bandes T1 et T2 respectivement. Cette étape est suivie de l’addition d’un conjugué anti IgG marqué à la
phosphatase alcaline puis d’un lavage à l’aide d’une solution de lavage. La révélation se fait ensuite grâce à l’addition d’un substrat
chromogène. L’apparition de deux ou trois bandes mauves indique la présence d’anticorps anti HSV1 et/ou anti HSV2. En cas de résultat
négatif, seule la bande C de contrôle est visible. La solution d’arrêt est ajoutée pour éviter tout bruit de fond pouvant apparaître dans le
temps.
4- MATERIEL FOURNI
Chaque trousse contient les composants nécessaires à la réalisation de 20 tests.
SORB 20 cassettes : Les protéines recombinantes gG1 et gG2 sont immobilisées sur la membrane sous la forme d’une bande au niveau
des zones T1 et T2 respectivement. De la protéine A est déposée sous forme de bande au niveau de la zone contrôle C.
Note : La bande T1 est de couleur jaune et la bande C de couleur rose.
DIL
1 Flacon contenant 12 ml de Tampon de dilution, Réactif 1.
CONJ
1 flacon contenant 12 ml de conjugué anti IgG couplé à la phosphatase alcaline Réactif 2.
WASH
1 flacon contenant 12 ml de solution de lavage, Réactif 3.
SUBS
1 flacon contenant 12 ml de substrat chromogène, Réactif 4
STOP
1 flacon contenant 12 ml de solution d’arrêt, Réactif 5
•
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IFU 1 notice d’utilisation
2
Version 1
5- MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Tube de recueil du sang
Tube à hémolyse
Centrifugeuse
Vortex
Chronomètre
Pipettes de précision
6- LIMITES DU TEST
1.
2.
3.
4.
5.
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG est destiné au dépistage des anticorps anti HSV1 et anti HSV2 dans le sérum. Ce test est réservé
au diagnostic in vitro. La quantification du taux d’anticorps et le suivi de cinétique n’est pas réalisable avec IMMUNOQUICK® ELIFA
HSV IgG.
Un résultat négatif n’exclut pas une infection récente. En cas de suspicion d’infection récente chez un patient négatif, un second test est
recommandé à partir d’un nouvel échantillon de sérum prélevé à 2 à 4 semaines d’intervalle. D’autres méthodes diagnostiques peuvent
aussi être utilisées : culture, détection d’antigènes ou biologie moléculaire. Par ailleurs, la recherche d’IgM spécifiques du virus HSV
peut être utile en cas d’infection récente car ils peuvent être détectés avant l’apparition des IgG.
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG indique uniquement la présence ou l’absence d’anticorps anti gG1 et anti gG2 dans le sérum et ne
doit pas être utilisé comme seul critère de diagnostic de l’infection par les virus HSV.
Comme pour tout test de diagnostic in vitro, le résultat doit être interprété par le clinicien à la vue de toutes les autres informations
cliniques et biologiques disponibles.
Les résultats obtenus chez des patients immunodéprimés doivent être interprétés avec précaution.
7- CONSERVATION ET STABILITE
-
La trousse doit être conservée à température réfrigérée (2-8°C)
La cassette réactive est stable jusqu’à la date de péremption indiquée sur le sachet.
La cassette doit être conservée dans son sachet jusqu’à utilisation.
Les flacons doivent être immédiatement replacés à 2-8°C après chaque utilisation
NE PAS CONGELER.
8- PRECAUTIONS
-
-
Pour diagnostic in vitro uniquement. Ne pas utiliser après la date de péremption.
Ne pas manger, boire ou fumer lors de la manipulation des échantillons et du test.
Les échantillons de sérum doivent être considérés comme potentiellement infectieux. Lors de la réalisation du test, prendre les
précautions nécessaires à la manipulation de produits infectieux. Traiter ensuite les différents éléments du test et les échantillons
selon la procédure réservée aux déchets potentiellement infectieux.
Se munir d’une blouse, de gants et de protection oculaire lors de la réalisation du test.
L’humidité et la température peuvent affecter le résultat du test.
9- RECUEIL ET CONSERVATION DE L’ECHANTILLON
-
-
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG doit être utilisé sur sérum uniquement.
Ne pas utiliser de sérums hémolysés ou contaminés. Les échantillons turbides doivent être centrifugés avant la réalisation du test.
Le test doit être réalisé immédiatement après recueil et centrifugation de l’échantillon ; sinon, conserver l’échantillon 48 heures à
2-8°C au maximum. Pour une conservation prolongée, le sérum doit être congelé à –20°C. En effet, des réactions non spécifiques
ont été notées lors de conservation supérieure à 48 heures à 2-8°C.
Les échantillons congelés doivent être ramenés à température ambiante avant la réalisation du test et mélangés de façon homogène.
Les échantillons ne doivent pas subir des congélations/décongélations répétées.
En cas d’envoi des échantillons, se conformer à la réglementation relative à l’envoi de produits d’origine humaine.
Pour les préparations lyophilisées, bien suivre les instructions relatives à la reconstitution de l’échantillon et attendre que la
préparation soit revenue à température ambiante avant de réaliser le test.
10- PROCEDURE DE CONTROLE DE QUALITE
1.
Contrôle de la procédure
Un contrôle de procédure interne est intégré au test (bande contrôle). Cela permet de contrôler que le volume de sérum est suffisant et que la
procédure a été suivie correctement.
2.
Contrôle qualité
Des contrôles positifs et négatifs sont disponibles séparément. Ils sont destinés à vérifier les performances du test. Il est recommandé de les
utiliser dans les cas suivants :
•
Lors de l’ouverture d’un nouveau lot.
•
Lors de l’ouverture du premier coffret d’un nouvel envoi
•
Lors de l’utilisation par un nouvel opérateur
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Version 1
11- PROCEDURE
1. Ramener les différents composants du test pendant 30 minutes à température ambiante.
2. Retirer la cassette du sachet aluminium et l’utiliser le plus rapidement possible.
3. Déposer 5 µL de sérum au fond d’un tube à hémolyse et y ajouter 0,5 ml de tampon de dilution DIL. Homogénéiser en aspirant et
refoulant le liquide avec la pipette.
4. Verser directement ou à l’aide d’une pipette la totalité de l’échantillon dilué dans la fenêtre de la cassette. Attendre l’absorption totale du
liquide (4 min.).
5. Mélanger efficacement le réactif Conjugué par agitations légères avant de réaliser le test. A l’aide d’une pipette de laboratoire, prélever
0,5 ml de conjugué CONJ et verser la totalité dans la fenêtre de la cassette. Attendre l’absorption totale du liquide (4 min.).
6. A l’aide d’une pipette de laboratoire, prélever 0,5 ml de solution de lavage WASH et verser la totalité dans la fenêtre de la cassette.
Attendre l’absorption totale du liquide (4 min.).
7. A l’aide d’une pipette de laboratoire, prélever 0,5 ml de solution de substrat SUBS et verser la totalité dans la fenêtre de la cassette.
Attendre 5 minutes exactement.
8. A l’aide d’une pipette de laboratoire, prélever 0,5 ml de solution d’arrêt STOP et verser la totalité dans la fenêtre de la cassette.
9. Lire le résultat immédiatement après absorption totale du liquide. Ne pas lire au-delà de 5 minutes.
Notes :
1.
2.
Attendre l’absorption totale entre chaque étape
Prendre soin de ne pas mettre l’embout de pipette en contact avec la membrane. Utiliser un nouvel embout de pipette pour
chaque étape afin de ne pas contaminer les Réactifs 1, 2, 3, 4 et 5.
12- LECTURE DU RESULTAT
POSITIF :
IgG anti gG1 positif : Présence d’une bande T1 mauve et d’une bande contrôle C mauve. Présence d’anticorps
anti gG1 en faveur d’une infection à HSV1.
IgG anti gG2 positif : Présence d’une bande T2 mauve et d’une bande contrôle C mauve. Présence d’anticorps
anti gG2 en faveur d’une infection à HSV2.
IgG anti gG1 et anti gG2 positifs : Présence de bandes T1 et T2 mauves et d’une bande contrôle C mauve.
Présence d’anticorps anti gG1 et anti gG2 en faveur d’une infection mixte à HSV1 et HSV2.
NOTE : La présence de bandes Test même de très faible intensité doit être considérée comme
un résultat positif
NEGATIF :
Absence de bande mauveT1 et T2 et présence d’une bande contrôle C mauve.
Les anticorps anti gG1 et gG2 ne sont pas présents en faveur d’absence d’infection herpétique.
NON SIGNIFICATIF :
Absence de bande contrôle C mauve.
Un volume d’échantillon insuffisant ou une mauvaise
réalisation du test sont les deux causes les plus
fréquentes de résultat non significatif. Répéter le test
avec une nouvelle cassette.
Apparition d’un bruit de fond mauve intense
Un bruit de fond mauve intense peut apparaître sur la membrane sur certains sérums. Dans ce cas, ne pas tenir
compte du résultat.
13- VALEURS ATTENDUES
Une étude en France a montré une séroprévalence de 64.8% pour HSV1 (65.9% chez l’homme et 64.2% chez la femme) et de 15.6% pour
HSV2 (12.9% chez l’homme et 17% chez la femme).
Sur un panel de 98 donneurs de sang de Strasbourg, le taux de positivité en IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG est de 66.3% pour HSV1 et
13.3% pour HSV2.
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Version 1
14- PERFORMANCES
1.
Etude sur un panel de sérums provenant de patients principalement ambulatoires et de donneurs de sang.
Des sérums de donneurs ont été testés comparativement à une méthode Immunoblot de référence. Les résultats sont détaillés ci-dessous.
Immunoblot de référence
HSV1
IMMUNOQUICK® ELIFA
HSV IgG
Specificité 98%
Positif
Négatif
Positif
87
1
Négatif
3
46
Sensibilité 97%
Immunoblot de référence
HSV2
IMMUNOQUICK ELIFA
HSV IgG
Specificité 95%
2.
Positif
Négatif
Positif
37
5
Négatif
2
93
Sensibilité 95%
Etude Inter et intra essais
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG a été évalué en tripliqué sur deux lots différents sur un panel d’échantillons négatifs, faiblement
positifs et fortement positifs. Les résultats obtenus ont montré une reproductibilité inter lot et intra essais de 100%.
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Version 1
15- BIBLIOGRAPHIE
1. Roizman, B. 1991. Herpesviridae: a brief introduction, In: Fundamental Virology, 2nd Ed.; Fields, BN, D.M. Knipe Eds. Raven Press Ltd.
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11. Ashley, R.L. et al. 1988. Comparison of western blot (Immunoblot) and glycoprotein G-2 immunodot enzyme assay for detecting
antibodies to herpes simplex types 1 and 2 in human sera. J. Clin. Microbiol. 26:662-667.
12. Engvall, E., K. Jonsson, and P. Perlman. 1971. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, (ELISA) Quantitative Assay of Immunoglobulin
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Services, Public Health Service. pp. 9-12.
21. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1990. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by
Venipuncture Approved Standard. NCCLS Publication H18-A.
22. http://www.cap.org/html/ftpdirectory/checklistftp.html. 1998. Laboratory General– CAP (College of American Pathology) Checklist
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23. NCCLS. 1997. National Committee for Clinical Laboratory Standard. Preparation and testing of Reagent Water in the Clinical
Laboratory. NCCLS Publication C3-A3.
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to Infant. JAMA. 289:203-209.
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Version 1
16- PROTOCOLE
1. Déposer 5 µL de sérum au fond d’un tube et y
ajouter 0,5 ml de tampon de dilution DIL.
Homogénéiser en aspirant et refoulant le liquide
avec la pipette
2. Verser directement ou à l’aide d’une pipette la
totalité de l’échantillon dilué dans la fenêtre de la
cassette. Attendre l’absorption totale du liquide
(environ 4 min).
3. Mélanger le réactif Conjugué. Prélever 0,5 ml de
conjugué CONJ et verser la totalité dans la fenêtre
de la cassette. Attendre l’absorption totale du liquide
(environ 4 min)
4. Prélever 0,5 ml de solution de lavage WASH et
verser la totalité dans la fenêtre de la cassette. Attendre
l’absorption totale du liquide (environ 4 min)
5. Prélever 0,5 ml de solution de substrat SUBS et
verser la totalité dans la fenêtre de la cassette.
Attendre 5 minutes.
6. Prélever 0,5 ml de solution d’arrêt STOP et verser
la totalité dans la fenêtre de la cassette. Lire le
résultat immédiatement après l’absorption.
Ne pas lire au-delà de 5 minutes.
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Version 1
IMMUNOQUICK ELIFA HSV IgG
Rapid test for detection of type specific IgG directed against HSV1 (Herpes Simplex Virus 1) and HSV2 (Herpes Simplex Virus 2) in serum
Ref. N°: 5525 / 0526_K20
For in vitro diagnostic use only
1- INTENDED USE
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG is an immunofiltration test for the qualitative detection of type specific IgG antibodies directed
against HSV1 (Herpes Simplex Virus 1) and HSV2 (Herpes Simplex Virus 2) in human serum.
2- INTRODUCTION
Herpes simplex virus (HSV) infections are widely spread and form a still increasing medical problem. Infections with HSV may cause
serious, life-threatening complications with long-term sequelae in newborns and immunocompromised patients. In addition, many noncompromised normal individuals suffer from herpes virus infections presenting either as oral/facial infection - mostly caused by HSV type 1
- or as genital/anal infection, mostly associated with HSV type 2 . Although genital herpes is generally induced by type-2, genital herpes
caused by type-1 infections is increasing. Type-specific diagnosis ensures proper treatment, as both serotypes differ in prognosis and
counselling. To date glycoprotein gG is the only acknowledged antigen for reliable type-specific serodiagnosis.
The two serotypes of herpes simplex virus (HSV), types 1 (HSV1) and 2 (HSV2), both give rise to latent infections with varying degrees of
clinical expression. When herpes lesions are present, diagnostic is usually based on direct detection of specific antigens or nucleic acids. In
the absence of symptoms, serological testing provides a possibility of identifying persons infected with either or both of the viruses.
After primary infection, the virus establishes latent infections in the local ganglia and is reactivated frequently. Many of the HSV2
reactivations are asymptomatic and clinically not recognized. Most HSV infections are transmitted in the absence of lesions. Severe,
generalized infections are seen particularly in neonates and immunocompromised patients. Epidemiological studies indicate that in
developed countries there is an ongoing HSV-2 epidemic with a significant rise in HSV-2 prevalence. HSV type-specific antibody testing
may be considered in a number of at-risk situations. Thus, identification of HSV-2-infected individuals may be important to reduce the risk
of transmission in these groups.
3- PRINCIPLE
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG is an immunofiltration assay which uses human recombinant gG1 and gG2 as specific markers of
HSV1 and HSV2 infections respectively. The test comprises of a membrane solid phase, which is held in a plastic envelope containing
wicking material. The membrane is visible to the user through a test window on the front of the device.
Recombinant gG1 is immobilized on the membrane as test band at the level of T1 zone and recombinant gG2 is immobilized at the level of
T2 zone. Protein A has been bound to the membrane as a control band at the level of the C zone.
When a pre-diluted serum sample is allowed to pass through the membrane any anti gG1 and anti gG2 antibodies bind respectively to the
gG1 and gG2 antigens at the level of the T1 and T2 zones respectively. This step is followed by addition of anti human IgG antibodies
conjugated to Alkaline Phosphatase and washing with washing buffer. Upon addition of the chromogenic substrate reagent, appearance of
two or three purple bands is indicative of presence of anti gG1 and/or anti gG2 antibodies. In case of negative results, only Control band
appears. Stop solution is added to avoid any appearance of background.
4- PROVIDED MATERIAL
Each IMMUNOQUICK® ELIFA HSV1/2 IgG kit contains enough components to run 20 tests:
SORB
DIL
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV1/2 IgG test devices: gG1 recombinant protein has been immobilized on the membrane at the
level of test band T1. gG2 recombinant protein has been immobilized on the membrane at the level of test band T2. Protein A
has been bound to the membrane at the level of the C control zone.
Note : T1 band is yellow and C band is pink. Colors disappear after performing the test
One vial containing 12 ml sample diluent buffer, Reagent 1.
CONJ
One vial containing 12 ml of anti IgG conjugate coupled to Alkaline Phosphatase, Reagent 2.
WASH
One vial containing 12 ml of washing buffer, Reagent 3.
SUBS
One vial containing 12 ml of chromogenic substrate, Reagent 4.
STOP
One vial containing 12 ml stop solution, Reagent 5.
•
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1 instruction for use
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Version 1
5- MATERIAL NEEDED BUT NOT PROVIDED
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Blood collection tube
Plastic tube
Centrifuge
Vortex
Timer
Laboratory pipette
6- TEST LIMITS
1.
2.
3.
4.
5.
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG is intended for screening of anti HSV1 and anti HSV2 type specific antibodies in serum. The test
is for in vitro diagnostic use only. IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG doesn’t allow quantitative detection or the monitoring of
antibodies level in known patients.
A negative result does not rule out a recent infection. In case of suspicion of recent infection in a negative patient, it is recommended to
test a new sample of serum collected 2 to 4 weeks after the first one. Other diagnostic methods such as virus culture, antigen detection
or molecular biology might be used. Moreover, detection of specific anti HSV IgM may be useful in acute infection when IgG have not
already appeared.
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG indicates only the presence of anti gG1 and anti gG2 antibodies in serum and cannot be used as
single criteria for the diagnostic herpes infection.
As for all in vitro diagnostic tests, the result should be interpreted by the physician based on all other available clinical and biological
data.
Results from immunosuppressed patients should be considered with caution.
7- STORAGE AND STABILITY
-
The kit has to be stored refrigerated (2-8°C)
The device is stable until the expiry date indicated on the pouch
The device should be kept in the pouch
Vials have to be stored at 2-8°C immediately after each use
NOT TO FREEZE
8- PRECAUTIONS
-
-
For diagnostic in vitro use only. Do not use after the expiry date.
Do not eat, drink or smoke during the handling of the samples and the test.
Do not mouth pipette.
The samples of blood and serum must be regarded as potentially infectious. When performing the test, necessary precautions for
handling of infectious products should be taken. The various elements of the test and the samples should be handled according to
the procedure reserved for potentially infectious waste.
Wear labcoat, gloves and ocular protection when performing the test.
Clean your hands after performing the test.
9- COLLECTION AND STORAGE OF SAMPLES
-
-
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG should be used on serum only.
Do not use haemolysed or contaminated samples. Turbid samples should be centrifuged before use.
It is recommended to perform the test immediately after collection and centrifugation of the sample. Otherwise, the serum can be
stored at 2-8°C for 48 hours maximum. For longer storage, serum has to be frozen at –20°C. Indeed, non specific reactions were
identified when serum samples are stored more than 48 hours at 2-8°C.
Frozen samples have to be brought to room temperature before performing the test and thoroughly mixed. Samples should not
undergo multiple freeze/thaw cycles.
In case of sample shipment, proceed according to regulation for shipment of products of human origin.
For lyophilized preparation, it is recommended to carefully abide to corresponding reconstitution procedure and wait until the
reconstituted serum is back to room temperature before running the test.
10- COMPLEMENTARY QUALITY CONTROL PROCEDURE
1.
Procedural control
An internal control procedure is incorporated in the test (control band). This allows confirmation that serum volume is sufficient and that the
procedure has been correctly performed.
2.
Quality control
Positive and negative controls are available separately. They are intended to check product performances. It is recommended to test them in
following circumstances:
When opening new lot
When opening first kit of new shipment
When used by a new operator
AllDiag
9
Version 1
11- PROCEDURE
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Bring all needed components to room temperature during 30 minutes before running the test.
Take the device out of the aluminum pouch and use it as quickly as possible.
Drop 5 µl of serum in the bottom of a plastic tube and add 0.5 ml of dilution buffer DIL. Thoroughly mix by pipetting back and
forwards.
Use a laboratory pipette or directly drop the diluted sample from the tube into the device window. Allow the diluted sample to drain into
the device window (4 min.).
Thoroughly mix the Conjugate reagent by gentle agitation before testing. Pipette 0.5 ml of conjugate CONJ and drop it fully into the
device window. Allow the developing reagent to drain into the device window (4 min.).
Pipette 0.5 ml of washing buffer WASH and drop it fully into the device window. Allow the washing buffer to drain into the device
window (4 min.).
Pipette 0.5 ml of Chromogenic substrate SUBS and drop it fully into the device window. Allow the substrate to drain into the device
window and wait for 5 minutes exactly.
Pipette 0.5 ml of stop solution STOP and drop it fully into the device window.
Read the result after stop solution has fully drained into the device. Not to read after 5 minutes.
Notes:
1.
2.
Wait for complete absorption between each step
Make sure not to touch the membrane with the pipette tip. Use new tips for every stage not to contaminate reagents 1,
2, 3, 4 and 5.
12- INTERPRETATION OF THE RESULT
POSITIVE:
Anti HSV1 positive : Presence of purple T1 band and purple C control band. Presence of IgG anti gG1 antibodies in
favour of HSV1 infection.
Anti HSV2 positive : Presence of purple T2 band and purple C control band. Presence of IgG anti gG2 antibodies in
favour of HSV2 infection.
Anti HSV1 and anti HSV2 positive : Presence of purple T1 and T2 band and purple C control band. Presence of
IgG anti gG1 antibodies and IgG anti gG2 antibodies in favour of mixed HSV1 and HSV2 infection.
NOTE : Presence of Test lines, even very fain, is indicative of positive result.
NEGATIVE:
Absence of purple T1 and T2 band and presence of purple C control band. Anti HSV antibodies are not present
which is in favour of absence of HSV infection.
INVALID:
Absence of purple C control band.
Insufficient sample volume or a wrong procedure are the
two most frequent causes of invalid results.
The test has to be run again with a new device.
Presence of dark purple background
A strong purple background may appear on the membrane with some sera. In this case the test is invalid.
13- EXPECTED VALUES
In a french study, mean seroprevalence rates were 64.8% for HSV1 (65.9% in men and 64.2% in women) and 15.6% for HSV2 (12.9% in
men and 17% in women).
On a panel of 98 blood donors from Strasbourg, the rate of positivity with IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG is 66.3 % for HSV1 and
13.3% for HSV2.
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14- PERFORMANCES
1.
Study of a panel from blood donors
Sera from blood donors were tested comparatively to a reference Immunoblot method. Results are summarized hereunder :
Reference immunoblot
HSV1
Immunoquick ELIFA
HSV IgG
Specificity 98%
Positive
Negative
Positive
87
1
Negative
3
46
Sensitivity 97%
Reference immunoblot
HSV2
Immunoquick ELIFA
HSV IgG
Specificity 95%
2.
Positive
Negative
Positive
37
5
Negative
2
93
Sensitivity 95%
Inter and intra assay study
IMMUNOQUICK® ELIFA HSV IgG was evaluated in triplicate on two different lots with a panel of negative, low positive and high positive
sera. Results show inter lot and intra lot reproducibility of 100%.
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Version 1
15- BIBLIOGRAPHY
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to Infant. JAMA. 289:203-209.
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16- PROTOCOL
1. Drop 5 µl of serum in the bottom of a plastic
tube and add 0.5 ml of dilution buffer DIL.
Thoroughly mix by pipetting back and forwards
2. Use a laboratory pipette or directly pour the
diluted sample from the tube into the device
window. Allow the diluted sample to drain throough
the device window (Approximately 4 min).
3. Thoroughly mix the Conjugate reagent by
shaking gently. Pipette 0.5 ml of conjugate
CONJ into the device window. Allow the
developing reagent to drain through the device
window (Approximately 4 min).
4. Pipette 0.5 ml of washing buffer WASH into
the device window. Allow the washing buffer to
drain through the device window (Approximately
4 min).
6. Pipette 0.5 ml of stop solution STOP into the
device window. Read the result after stop
solution has fully drained into the device. Not to
read after 5 minutes.
5. Pipette 0.5 ml of Chromgenic substrate
SUBS into the device window. Wait for 5
minutes
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