Proj stage M2BDC 2015-16 Randriamampita

Sciences de la Vie et de la Santé Master Recherche Paris Descartes – Paris Diderot « Biologie Cellulaire Physiologie Pathologie » BCPP Spécialité : Biologie et Développement Cellulaires Fiche de Projet de Stage M2, Année 2015-­‐2016
Unité INSERM ou CNRS ou Université : U1016 UMR8104 Université Paris Descartes Intitulé Equipe (comme identifiée par l’AERES): Dynamique des interactions lymphocytaires ED d’appartenance : Bio SPC Immuno Responsable de l’Equipe : Donnadieu/Randriamampita Contacts Adresse : Institut Cochin, 22 rue Méchain, 75014 Paris Email : [email protected] Tel : 01-­‐40-­‐51-­‐65-­‐60 Responsable du Stage Clotilde Randriamampita Titre du projet : Rôle de l’AMPc dans la polarisation et la mobilité des lymphocytes T Résumé du Projet de Stage (en 300 mots maximum, 1 à 5 mots clés en gras) Sous l’effet de différents facteurs tels que des chimiokines, les lymphocytes sont capables de se déformer (polarisation) et de se déplacer. Ces processus sont fondamentaux tant pour leur entrée dans les ganglions lymphatiques que leur déplacements au sein de ces structures. Nous avons obtenu récemment des résultats qui montrent que l’AMPc serait impliqué dans ces phénomènes. Le but de ce projet est de clarifier le mécanisme d’action de ce messager et les cascades de signalisation mises en jeu dans la polarisation et la mobilité des cellules T. Outre des techniques classiques de biochimie ou d'immunofluorescence, nous utiliserons des approches d’imagerie cellulaire dynamique utilisant des biosenseurs. Le projet s'articulera autour de deux grands axes: 1) Grâce à des biosenseurs, nous suivrons en temps réel différents événements de signalisation (tels que l'AMPc ou l'activation de la protéine kinase A, la principale cible de l'AMPc) après stimulation des lymphocytes T avec des chimiokines. Ces événements seront mesurés au niveau cellulaire et nous tenterons de les corréler avec la polarisation et/ou le déplacement des cellules. Une analyse plus fine sera effectuée en regardant ce qu’il se passe au niveau sub-­‐cellulaire. Il est en effet probable qu’étant donné l’asymétrie de la cellule dans le contexte de polarisation et de mobilité, les événements de signalisation seront compartimentés; les approches d’imagerie cellulaire devraient donc être très informatives. 2) Pardes approches de biochimie et pharmacologie, nous chercherons quels sont les cibles de l'AMPc et/ou de la PKA responsables de la déformation et la mobilité des lymphocytes T. La distribution de ces acteurs potentiels sera ensuite analysée par immunofluorescence. Sont-­‐ils répartis de façon homogène? S'accumulent-­‐ils à un pôle de la cellule? L’ensemble de ce projet devrait donc permettre d’approfondir nos connaissances sur les processus de motilité et de polarisation des cellules T. Publications de l’équipe, relatives au stage proposé Randriamampita, C. and Lellouch A. C. Imaging early signalling events in T lymphocytes with fluorescent biosensors Biotechnology Journal 2014; 9: 203-­‐12 Megrelis L. and Delon J. Rapid and robust analysis of cellular and molecular polarization induced by chemokine signaling. J Vis Exp (94) (2014) Rougerie,P., Largeteau, Q., Megrelis, L., Carrette, F., Lejeune, T., Toffali, L., Rossi, B., Zeghouf, M., Cherfils, J., Constantin, G., Laudanna, C., Bismuth, G., Mangeney, M., Delon, J. Fam65b is a new transcriptional target of FOXO1 that regulates RhoA signaling for T lymphocyte migration. 2013; J Immunol 190(2):748-­‐
755. Sciences de la Vie et de la Santé Master Recherche Paris Descartes – Paris Diderot « Biologie Cellulaire Physiologie Pathologie » BCPP Spécialité : Biologie et Développement Cellulaires Fiche de Projet de Stage M2, Année 2015-­‐2016
Hauck, F., Randriamampita, C., Martin, E., Gerart, S., Lambert, N., Lim, A., Soulier, J., Maciorowski, Z., Touzot, F., Moshous, D., Quartier-­‐dit-­‐Maire, P., Heritier, S., Blanche, S., Fraitag, S., Brousse, N., Veillette, A., Hivroz, C., Fischer, A., Latour, S. and Picard, C. Primary T-­‐Cell Immunodeficiency with Immunodysregulation Caused by Autosomal Recessive LCK Deficiency. J Allergy Clin Immunol 2012; 130(5):1144-­‐1152.e11. Salmon, H., K. Franciszkiewicz, D. Damotte, M.C. Dieu-­‐Nosjean, P. Validire, A. Trautmann, F. Mami-­‐Chouaib, and E.Donnadieu. Matrix architecture defines the preferential localization and migration of T cells into the stroma of human lung tumors. J Clin Invest. 2012; 122:899-­‐910. Chapon, M., Randriamampita, C., Maubec, E., Badoual, C., Fouquet, S., Wang, S. F., Marinho, E., Farhi, D., Garcette, M., Jacobelli, S., Rouquette, A., Carlotti, A., Girod, A., Prevost-­‐Blondel, A., Trautmann, A., Avril, M. F., Bercovici, N. Progressive Upregulation of PD-­‐1 in Primary and Metastatic Melanomas Associated with Blunted TCR Signaling in Infiltrating T Lymphocytes J Invest Dermatol 2011; 131(6):1300-­‐7 Conche, C., Boulla, G., Trautmann, A., Randriamampita, C. T cell adhesion primes antigen receptor-­‐induced calcium responses through a transient rise in adenosine 3',5'-­‐cyclic monophosphate Immunity 2009; 30(1):33-­‐43