BIO-FLASH ® BIO-FLASH® Toxo IgM

BIO-FLASH ®
®
LIRE LES CHANGEMENTS SURLIGNÉS
BIO-FLASH Toxo IgM
3000-8554
50 tests
BIO-FLASH Toxo IgM est un immunoessai chimiluminescent en deux étapes, entièrement automatisé,
destiné à la détermination qualitative d’anticorps IgM anti-Toxoplasma gondii dans le sérum ou le plasma
humain au moyen de l’instrument BIO-FLASH.
Sommaire
La toxoplasmose est une maladie infectieuse due au protozoaire Toxoplasma gondii qui affecte tant l’homme que
les animaux.1 En général, la toxoplasmose acquise est asymptomatique et bénigne.2 Néanmoins, cette infection
revêt une importance capitale chez la femme enceinte, car le parasite peut passer dans la circulation du fœtus par
le placenta et provoquer la toxoplasmose congénitale. Plusieurs études ont démontré que le risque et la sévérité
de la toxoplasmose congénitale sont plus élevés lorsqu’elle survient au cours des trois premiers mois de
grossesse.3-6 Les conséquences de la toxoplasmose congénitale vont de l’avortement spontané et de la naissance
prématurée à des symptômes neurologiques et généralisés, provoquant souvent des complications oculaires. Les
nouveau-nés atteints de toxoplasmose congénitale peuvent aussi rester asymptomatiques pendant plusieurs
semaines après la naissance. De multiples études ont indiqué que la présence d’une certaine concentration d’IgG
maternelle anti-Toxoplasma avant la grossesse protège le fœtus contre l’infection par le parasite. Les tests
sérologiques peuvent aussi être utilisés afin d’identifier les grossesses à risque ; les femmes séronégatives au
moment du diagnostic de grossesse peuvent être contrôlées pendant la grossesse. L’analyse des isotypes des
anticorps spécifiques anti-Toxoplasma gondii peut permettre de déterminer le moment auquel l’infection a été
contractée.7,8 De cette façon, il est possible de détecter une infection récente, de prendre les mesures
prophylactiques nécessaires et de prescrire le traitement adéquat. La détection de l’IgM spécifique permet le suivi
de la femme enceinte, car les infections par Toxoplasma ne sont généralement pas cliniquement détectées. Le
suivi sérologique doit permettre la détection précoce d’une séroconversion et, en fonction de la sévérité de
l’infection congénitale du fœtus, la prise immédiate des mesures nécessaires.
La toxoplasmose peut être mortelle chez les patients immunodéprimés (SIDA, transplantation d’organes). Chez les
patients atteints du SIDA, la toxoplasmose aiguë survient généralement comme conséquence de la réactivation
d’une infection latente préexistante, bien qu’il existe aussi des diagnostics de primo-infections.9
Principe
Lorsque les microparticules paramagnétiques de BIO-FLASH Toxo IgM sont mélangées et incubées avec l’échantillon,
si des anticorps spécifiques anti-Toxoplasma sont présents dans celui-ci, ces anticorps se lient aux antigènes de
Toxoplasma recouvrant les microparticules. Après une séparation magnétique et un lavage afin d’éliminer l’échantillon
résiduel, on ajoute un traceur consistant en un anticorps monoclonal anti-IgM humaine marqué à l’isoluminol qui se lie
aux anticorps IgM anti-Toxoplasma capturés par les microparticules. Après une seconde incubation, une séparation
magnétique et un autre lavage, les réactifs activant la réaction chimiluminescente sont ajoutés. Le luminomètre du
BIO-FLASH mesure la lumière émise exprimée en unités relatives de lumière (URL) qui sont directement
proportionnelles à la concentration d’IgM anti-Toxoplasma de l’échantillon.
Le BIO-FLASH utilise une méthode de réduction de données avec un ajustement à une courbe logistique de 4
paramètres (4PLC) afin de générer une courbe maîtresse d’étalonnage (CME). Cette courbe est fournie prédéfinie,
dépend du lot et est enregistrée dans l’instrument dans le code-barres de la cartouche. Grâce à la mesure des
calibrateurs (fournis dans un kit à part), la CME prédéfinie se transforme en une nouvelle courbe d’étalonnage de
travail (CET) spécifique à l’instrument. Les concentrations des calibrateurs sont enregistrées dans les codes-barres
des tubes des calibrateurs.
Schéma de la réaction :
Activateurs
(Triggers)
Particule magnétique
Échantillon
Traceur
Émission de lumière
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8554 R03 06.2015 fre
0843
BIO-FLASH ®
Composants
Cartouche de réactifs
Le kit BIO-FLASH Toxo IgM contient une cartouche de réactifs pour 50 déterminations (REF 3000-8554).
Remarque : la conception de la cartouche est protégée par un brevet (US D565,741 / Conception CE 000762992-0001)
Composition de la cartouche de réactifs :
La cartouche comprend 4 fioles contenant :
A.
1
fiole
cylindrique
de
suspension
de
microparticules recouvertes d’un antigène de
Toxoplasma dans un tampon phosphate. Contient
< 0,1% d’azide de sodium.
B.
1 fiole de tampon d’essai. Contient < 0,1%
d’azide de sodium.
C.
1 fiole opaque d’un traceur consistant en un
anticorps monoclonal murin anti-IgM humaine
marqué à l’isoluminol. Contient < 0,1% d’azide de
sodium.
D.
1 fiole vide.
Préparation
Voir la figure ci-dessous.
Cartouche : les microparticules sédimentent pendant leur transport et leur stockage, par conséquent, il convient de
les mélanger afin de les remettre en suspension.
•
Lors de la première utilisation de la cartouche, retournez-la doucement 30 fois en veillant à éviter la
formation de mousse (les bulles d’air peuvent altérer la lecture des capteurs de liquide de l’instrument).
•
Vérifiez que les microparticules soient complètement remises en suspension. Si ce n’est pas le cas, continuez
à retourner la cartouche jusqu’à la remise en suspension complète.
•
NE PAS UTILISER LA CARTOUCHE si les microparticules ne sont pas remises en suspension ou en cas de
rupture de la bande qui scelle les réactifs.
•
Une fois les microparticules remises en suspension, placez la cartouche sur une surface solide et retirez avec
prudence la languette rouge de sécurité pour le transport.
•
Tout en maintenant la cartouche sur la surface solide, appuyez sur les deux languettes situées de part et
d’autre du bouchon perforateur (partie grise) et appuyez sur la partie supérieure de la cartouche jusqu’à
atteindre la position de blocage. Une fois la cartouche en position de blocage, les languettes doivent rester
invisibles. Ne retournez pas la cartouche ouverte.
•
Laissez reposer la cartouche pendant 5 minutes avant de l’insérer dans l’instrument.
•
Une fois la cartouche insérée, l’instrument mélange son contenu de façon automatique à des intervalles réguliers.
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8554 R03 06.2015 fre
0843
BIO-FLASH ®
Précautions
Les réactifs BIO-FLASH sont destinés à un usage diagnostique IN VITRO.
Utilisation réservée aux professionnels.
L’azide de sodium peut réagir avec les canalisations et les tuyaux d’écoulement en plomb ou en cuivre, provoquant
la formation d’azides métalliques fortement explosifs. Lors de l’élimination des restes de réactifs, laissez couler
l’eau abondamment.
ATTENTION : MATIÈRE PRÉSENTANT UN RISQUE BIOLOGIQUE.
Jetez toutes les matières utilisées dans des récipients destinés aux biocontaminants.
Veuillez ne pas réutiliser ou réintroduire des réactifs dans les cartouches ou fioles.
Classe de danger
Non classifié.
Mentions de danger
Aucune.
Conseils de prudence
P280 : Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/ du
visage.
P305+351+338 : EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX : rincer avec précaution à l’eau pendant plusieurs
minutes. Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent être facilement enlevées.
Continuer à rincer.
Prélèvement et conservation des échantillons
Utilisez du sérum frais (des tubes contenant du gel séparateur de sérum peuvent aussi être utilisés) ou du plasma
(EDTA, Li-héparine, Li-héparine en tube contenant du gel séparateur, Na-héparine et Na-citrate). D’autres
anticoagulants doivent être vérifiés avant utilisation. Les anticoagulants liquides, tels que le Na-citrate, exercent un
effet de dilution et peuvent réduire la concentration d’échantillons des patients. Les échantillons ne doivent pas être
inactivés par la chaleur. Les particules en suspension doivent être retirées par centrifugation. Les directives
CLSI H18-A3 et H21-A5 offrent des informations supplémentaires sur la manipulation, le transport, le traitement et
la conservation des échantillons.
Sérum
Les échantillons de sérum peuvent être stockés à une température comprise entre 2 et 8°C pendant 8 jours. Pour
une période de temps plus longue, ils doivent être congelés à une température égale ou inférieure à -20°C. Les
échantillons ne peuvent pas être congelés/décongelés plus de 3 fois. Il convient de bien mélanger après
décongélation. Assurez-vous de l’absence de bulles d’air dans les échantillons et, dans le cas contraire, retirez-les
totalement avant de procéder à l’analyse.
Plasma
Les échantillons de plasma peuvent être stockés à une température comprise entre 2 et 8°C pendant 8 jours. Pour
une période de temps plus longue, ils doivent être congelés à une température égale ou inférieure à -20°C.
Décongelez le plasma à 37°C. Ne décongelez les échantillons qu’une seule fois. Bien mélanger après
décongélation. Assurez-vous de l’absence de bulles d’air dans les échantillons et, dans le cas contraire, retirez-les
totalement avant de procéder à l’analyse.
Volume d’échantillon
Le volume d’échantillon nécessaire pour réaliser un seul test avec BIO-FLASH Toxo IgM varie en fonction du type
de récipient utilisé. Un essai nécessite au moins 15 µL plus le volume mort, qui correspond à 200 µL si la coupelle
à échantillon recommandée est utilisée (REF 3000-8209).
Autres matériels
Les matériels suivants ne sont pas fournis avec la cartouche de réactifs et doivent être achetés séparément.
REF 3000-8555
BIO-FLASH Toxo IgM Calibrators (Calibrateurs)
REF 3000-8556
BIO-FLASH Toxo IgM Controls (Contrôles)
Pour de plus amples informations, veuillez lire attentivement les instructions correspondantes.
N’utilisez pas d’autres calibrateurs. Les informations requises par l’instrument BIO-FLASH pour étalonner l’essai
BIO-FLASH Toxo IgM sont enregistrées dans les codes-barres des fioles.
L’utilisation de contrôles d’autres fabricants peut provoquer des résultats inattendus.
Assurez-vous que l’instrument BIO-FLASH possède une quantité suffisante des consommables suivants, avant le
traitement des échantillons, calibrateurs ou contrôles :
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8554 R03 06.2015 fre
0843
BIO-FLASH ®
REF 3000-8206
BIO-FLASH Cuvettes (Cuvettes)
Remarque : La conception des cuvettes est protégée par un brevet (US D560,816 / Conception CE 000762984-0001)
REF 3000-8204
BIO-FLASH Triggers (Activateurs)
REF 3000-8205
BIO-FLASH System Rinse (Solution du système)
REF 3000-8207
BIO-FLASH Sample Diluent (Diluant des échantillons)
Instrument / réalisation de l’essai
Vous trouverez les instructions complètes pour réaliser l’essai dans le manuel d’utilisation du BIO-FLASH.
Étalonnage
Le code-barres de la cartouche contient une courbe maîtresse d’étalonnage (CME) valable pour le lot de réactifs.
Néanmoins, tous les réactifs requièrent une courbe d’étalonnage de travail (CET), qui est spécifique à chaque lot et
valable jusqu’à la date de péremption de celui-ci. Une nouvelle CET doit être obtenue lorsque les résultats des contrôles
sont en dehors des limites de l’intervalle d’acceptabilité ou lorsque des ajustements de l’instrument ont été réalisés.
Veuillez lire attentivement le manuel d’utilisation du BIO-FLASH afin de configurer une CET.
Contrôle de qualité
Afin de réaliser un programme complet de contrôle de la qualité, deux niveaux de contrôle sont recommandés.
Les contrôles BIO-FLASH Toxo IgM négatif et positif ont été conçus pour ce programme. Il est recommandé que
chaque laboratoire établisse sa propre moyenne et l'écart standard, ainsi qu’un programme de contrôle de qualité
pour surveiller les tests de laboratoire. Les contrôles doivent être analysés au moins une fois toutes les 24 heures
par jour d’utilisation. Si les contrôles sont hors limites, il peut être nécessaire de réétalonner l’instrument. Vous
trouverez de plus amples informations dans le manuel d’utilisation de l’instrument. Afin d’identifier et de résoudre
des situations de contrôle de qualité anormales, consultez Westgard et al.10
Conservation et stabilité
Les réactifs n’ayant pas été ouverts restent stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette de la
cartouche à condition qu’ils soient stockés à une température comprise entre 2 et 8°C en position verticale.
Après ouverture, la stabilité de la cartouche chargée dans l’instrument BIO-FLASH ou stockée à une température
comprise entre 2 et 8°C est de 8 semaines.
Interprétation des résultats
La quantité d’analyte dans chaque échantillon est déterminée à partir de la lumière émise (URL), par interpolation
sur la courbe d’étalonnage de travail mémorisée. Les résultats de BIO-FLASH Toxo IgM sont exprimés en S/CO
(signal de l’échantillon/valeur seuil). Ceci est un test qualitatif, la valeur numérique du résultat n'a qu'une valeur
indicative de la quantité d'anticorps. La détermination des IgM anti-Toxoplasma avec BIO-FLASH Toxo IgM aide
au diagnostic d'une infection récente.
•
•
•
Les échantillons avec un résultat < 0,80 S/CO sont considérés comme non réactifs (négatifs).
Les échantillons avec un résultat ≥ 0,80 et < 1,00 S/CO sont considérés comme non interprétables (douteux).
Les échantillons considérés comme non interprétables doivent être à nouveau analysés. Si un résultat non
interprétable est obtenu lors de la seconde analyse, il doit être enregistré comme tel et il convient soit de
réaliser un autre essai en utilisant une méthode alternative, soit d’obtenir et d’analyser un second échantillon.
Les échantillons avec un résultat ≥ 1,00 S/CO sont considérés comme réactifs (positifs).
Comme dans tous les immunoessais sensibles, il est possible que des résultats positifs non reproductibles se
produisent. Un résultat négatif n'exclut pas la possibilité d'une infection toxoplasmique. Une possible
séroconversion doit être confirmée par la détermination quantitative des IgG spécifiques, par exemple avec
BIO-FLASH Toxo IgG REF 3000-8551 en analysant des échantillons appariés pris à 2 ou 3 semaines d'intervalle.
Limitations
Le résultat d’un seul échantillon s’avère insuffisant pour diagnostiquer une primo-infection par Toxoplasma. Par
conséquent, outre les résultats du BIO-FLASH Toxo IgM, il convient de tenir compte d’autres données, telles que,
par exemple, la symptomatologie, l’histoire clinique, les résultats d’autres tests et toutes autres informations
importantes.
Les anticorps hétérophiles dans le sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines du réactif, interférant
11
avec les immunoessais in vitro. Les données obtenues peuvent indiquer que la présence d'anticorps hétérophiles
dans l'échantillon peut conduire à des résultats faussement positifs.
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8554 R03 06.2015 fre
0843
BIO-FLASH ®
Résultats attendus
Près d’un tiers de la population mondiale possède des anticorps anti-Toxoplasma, bien que des différences
notables soient observées quant à leur prévalence entre les pays, voire dans chacun d’eux. En Angleterre et au
pays de Galles, la prévalence augmente avec l’âge de 0,5% - 1,0% par an jusqu’à atteindre environ 30% chez les
sujets de 40 ans. Néanmoins, en France, 80% - 90% de la population présentent une sérologie positive pour les
anticorps à cet âge-là.12
Une étude multicentrique menée sur plus de 16 000 échantillons de sérum de femmes enceintes à Barcelone
(Espagne) a montré que 28,6% présentaient des anticorps anti-Toxoplasma. Des anticorps spécifiques IgM ont été
détectés chez 2,2% des femmes présentant des anticorps anti-Toxoplasma.13
Une étude menée en Norvège entre 1992 et 1994 sur 35 940 femmes enceintes a montré que 10,9% présentaient
une sérologie positive pour les anticorps anti-Toxoplasma avant le début de la grossesse. La survenue d’une
primo-infection pendant la grossesse a été mise en évidence chez 0,17% des femmes non préalablement
infectées.14
Caractéristiques fonctionnelles
REMARQUE : Les données suivantes sont représentatives ; les résultats obtenus dans des expériences isolées
peuvent varier par rapport à ces données.
Comparaison de méthodes
BIO-FLASH Toxo IgM a été évalué dans les études comparatives avec d’autres essais commercialisés.
Évaluations
Une évaluation interne et une évaluation externe ont été effectuées au Servei de Microbiologia (service de
microbiologie) de l'Hospital de la Santa Creu i Sant Pau de Barcelone (Espagne). Dans l'étude interne, 154
échantillons provenant de différentes sources, y compris les sérums positifs et négatifs pour les anticorps IgM
toxoplasmiques, ont été testés avec BIO-FLASH Toxo IgM comparativement à une méthode EIA Toxo IgM
commercialisée. Dans l'étude externe, 426 échantillons provenant de différentes sources, y compris les sérums
positifs et négatifs pour les anticorps IgM anti-Toxoplasma, ont été analysés avec BIO-FLASH Toxo IgM
comparativement à une méthode commercialisée MEIA Toxo IgM. Les résultats sont présentés globalement. Les
calculs n’ont pas tenu compte des résultats non interprétables (IND)
Méthode de référence
BIO-FLASH
IND NÉG POS Total
Toxo IgM
IND
0
18
5
23
NÉG
1
415
12
428
POS
2
33
94
129
Total
3
466 111 580
Les résultats initiaux de sensibilité et de spécificité relatives, ainsi que de concordance globale, suivants ont été obtenus :
N
554
Sensitibilité relative
Valeur
IC de 95%
88,7% 81,1% à 94,0%
Spécificité relative
Valeur
IC de 95%
92,6% 89,8% à 94,9%
Concordance globale
Valeur
IC de 95%
91,9% 89,3% à 94,0%
Les échantillons discordants ont été analysés par une méthode ELFA Toxo IgM commercialisée. Trois d'entre eux
ont été résolus en faveur du BIO-FLASH Toxo IgM. Après l’essai supplémentaire, les résultats finaux de
sensibilité, de spécificité et de concordance globale suivants ont été obtenus :
N
555
Sensibilité finale
Valeur
IC de 95%
89,6% 82,2% à 94,7%
Spécificité finale
Valeur
IC de 95%
92,9% 90,1% à 95,1%
Concordance globale finale
Valeur
IC de 95%
92,3%
89,7% à 94,3%
Un total de 92 échantillons de l'évaluation externe provenait de femmes enceintes. Les chiffres de la sensibilité et
la spécificité sont demeurés semblables à ceux de la population générale.
Panel CDC
Le panel de sérums humains Toxoplasma 1998 de la CDC comprenant 32 échantillons de sérum positifs et
65 échantillons de sérum négatifs a été analysé à l’aide de l’essai BIO-FLASH Toxo IgM avec un résultat de
sensibilité de 96,9% et de spécificité de 93,8%.
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8554 R03 06.2015 fre
0843
BIO-FLASH ®
Précision
Conformément aux directives CLSI EP05-A, la précision intra-essai et totale (pour chaque essai et jour après jour)
a été évaluée lors de multiples essais. Le tableau ci-dessous affiche le résumé des résultats :
Contrôle négatif
Contrôle positif
Proche de la valeur seuil
Moyenne (S/CO)
0,23
2,53
0,82
Intra-essai
0,031 SD
4,9% CV
4,4% CV
Totale
0,032 SD
7,8% CV
6,6% CV
Interférences
Conformément aux directives CLSI EP7-A, des études ont démontré que les substances suivantes potentiellement
interférentes n’altèrent pas les résultats du BIO-FLASH Toxo IgM :
Substance potentiellement interférente
Hémoglobine
Bilirubine indirecte
Bilirubine directe
Triglycérides
Facteur rhumatoïde
Concentration
500 mg/dL
18 mg/dL
18 mg/dL
1300 mg/dL
800 UI/mL
% Interférence
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
Réactivité croisée
L’analyse de 202 échantillons potentiellement susceptibles de produire une réaction croisée avec l’essai
BIO-FLASH Toxo IgM et la comparaison des résultats obtenus avec des tests commercialisés de Toxo IgM ont
mis en évidence la concordance suivante :
Réaction croisée potentielle
IgM contre la rubéole
Anti-CMV IgM (anticorps contre le cytomégalovirus)
Anti-HIV (anticorps contre le virus de l’immunodéficience humaine)
HAMA (anticorps humain antimurin)
SLE (Lupus érythémateux systémique)
ANA (anticorps antinucléaires)
Anti-EBV (anticorps contre le virus Epstein-Barr)
Anti-PV B19 (anticorps contre le parvovirus B19)
Anti-HSV 1 (anticorps contre le virus herpès simplex de type 1)
Anti-VZV (anticorps contre le virus varicelle-zona)
Paraprotéines IgG et IgM
Concentration élevée d’IgG et d’IgM
Anticorps hétérophiles
RF (Facteur rhumatoïde)
Femme enceinte (multipare comprise)
Concordance
5/5
5/5
9/9
3/3
8/10
11/11
4/4
10/10
4/5
4/4
6/6
6/6
2/4
10/10
96/110
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8554 R03 06.2015 fre
0843