ACTICLOT® dPT - Sekisui Diagnostics

M
Sekisui Diagnostics, LLC
500 West Avenue, Stamford, CT 06902
Tel. (203) 602-7777 • Fax (203) 602-2221
Email: [email protected]
www.sekisuidiagnostics.com
UTILISATION
Le coffret ACTICLOT® dPT™ est utilisé pour l’identification du Lupus Anticoagulant dans le plasma humain. Le
test peut être réalisé sur tous les instruments de coagulation automatiques ou semi automatiques. Il est destiné
à usage diagnostic in vitro essentiellement et ne peut en aucun cas être utilisé à usage interne chez l’homme
ou l’animal.
INTERET DU TEST
ACTICLOT® dPT™
REF 824
Temps de Prothrombine dilué
pour la détermination de
l’Anticoagulant Lupique (LA)
 C i
l
8C
2C
(CPT Code No. 85705)
Les anticorps Lupus Anticoagulant (LA) sont des auto-anticorps phospholipides dépendants associés à un
déséquilibre du système immunitaire tel que le syndrome des Antiphospholipides (APS). 1,2 L’APS primaire est
un état pathologique caractérisé par la survenue de thromboses inexpliquées, des avortements spontanés
récurrents, des thrombopénies, et/ou des troubles neurologiques. Un APS secondaire apparaît quand des
Lupus Anticoagulants sont présents associés à d’autres pathologies auto-immunes telles que le Lupus
Erythémateux Systémique (SLE), initialement décrit par Conley et Hartmann3.
Les anticorps LA sont directement dirigés contre des complexes hétérogènes de phospholipides anioniques
(ex. cardiolipine, phosphatidylinositol, phosphatidylethanolamine et phosphatidylserine)4 et des protéines fixées
aux phospholipides5 dans le plasma. Le composant protéique majeure des auto-antigènes comprend la β2GPI,
la prothrombine ou l’annexine V. Les anticorps antiphospholipides sont caractérisés par leur capacité à allonger
le temps de coagulation dans les tests in vitro comme le TCA spécifique lupus, le temps de céphaline Kaolin, le
DRVVT (dilute Russell’s viper venom test) et le temps de prothrombine dilué (dPT).6-8 Du fait de la nature très
hétérogène des anticorps phospholipides dépendants, il est largement reconnu qu’un seul test de coagulation
pour le LA ne permet pas la mise en évidence de tous les auto-anticorps LA. En 1995, les Sous Comités
Scientifiques (SCC) sur les anticorps antiphospholipides de l’ISTH recommandaient d’effectuer au moins deux
tests de diagnostic LA sur tous les plasmas suspectés de contenir des anticorps en association avec le test sur
un mélange malade-témoin pour confirmer la présence d’un auto-anticorps ou d’un déficit en facteur.9 En
parallèle, l’ISTH/SCC préconisait de valider le diagnostique des LA par la confirmation de la nature
phospholipide dépendante des auto-anticorps. Cette recherche peut être effectuée à partir de tests de
confirmation réalisés en présence de phospholipides en excès. La présence de LA est “confirmée” par le
raccourcissement du temps de coagulation du plasma en présence d’un excès de phospholipides et
comparativement au temps de coagulation obtenu à partir d’un test de screening LA effectué en présence de
faibles concentrations de phospholipides.
Des études cliniques ont montré que le test de prothrombine dilué est un test de coagulation utilisable pour le
diagnostic du LA et peut mettre en évidence les LA qui ne sont pas détectés par les autres tests tel que le
l’APTT sensible au Lupus et le dRVVT.10-12 Introduire un test de prothrombine dilué pour la recherche de LA
augmente la sensibilité du diagnostic des LA dans les échantillons des patients.8,13 L’ACTICLOT dPT est un
test de temps de prothrombine dilué parfaitement adapté à la détection et à la confirmation de la présence
d’auto-anticorps phospholipides dépendants LA. Le test de screening utilise un réactif activateur qui contient du
Facteur Tissulaire recombinant relipidé et du calcium. L’utilisation de Facteur Tissulaire recombinant augmente
les performances du test.12 Le test de confirmation est réalisé à partir d’un seul réactif contenant des
phospholipides, il est utilisé pour confirmer la nature phospholipide dépendante des anticorps LA présents dans
le plasma et trouvés positifs dans le test de screening.
PRINCIPE DE LA METHODE
L’ ACTICLOT dPT est un test de coagulation qui permet la mise en évidence d’anticorps LA dans le plasma des
patients. La coagulation est initiée par l’activation de la voie extrinsèque de la coagulation via le Facteur
Tissulaire en présence de calcium. Le Facteur Tissulaire se fixe sur le facteur VIIa et induit l’activation du
Facteur IX et du facteur X. Le Facteur X active la prothrombine, en thrombine laquelle va initier la formation du
caillot par clivage du Fibrinogène en fibrine. L’activation via le Facteur Tissulaire contourne la voie intrinsèque
et s’affranchit de toute interférence de déficit en Facteur XII.
EC
REP
Sekisui Diagnostics GmbH
Kaplaneigasse 35, D-64319 Pfungstadt, Germany
Tel. + 49 6157 / 99 08 99  Fax + 49 6157 / 99 08 08
Dans le test de screening, le plasma du patient est mélangé avec le tampon contenu dans l’ACTICLOT LA
Buffer™ et l’activateur ACTICLOT dPT™. Le temps de coagulation est déterminé par des méthodes
automatiques ou semi-automatiques. Le résultat est positif si le temps de coagulation est allongé par rapport à
un temps de coagulation réalisé sur un plasma témoin. Dans le test de confirmation, le plasma du patient est
mélangé avec le réactif ACTICLOT LA Phospholipids™ et l’activateur ACTICLOT dPT. Le résultat est positif si
un raccourcissement significatif du temps de coagulation est mis en évidence par rapport au temps de
coagulation obtenu dans le test de screening.
1
824CEF_C©SD20150504
Un plasma est considéré comme contenant des anticorps LA si un résultat positif est rendu à la fois dans le test
de screening et de confirmation (voir l’algorithme décisionnel pour le diagnostique du LA en page 11). Les tests
de screening et de confirmation peuvent être réalisés simultanément, ceci permettra un rendu plus rapide des
résultats, ou séparément. Pour cela faire en premier le test de screening pour la mise en évidence des LA puis
le test de confirmation pour confirmer la nature phospholipide-dépendante des anticorps.
PREPARATION DES REACTIFS ET STOCKAGE
Tous les réactifs sont sous forme lyophilisée. Les réactifs sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur
l’étiquette avant ouverture quand ils sont stockés à 2-8°C. Reconstituer les réactifs selon les instructions
suivantes :
1. LA Buffer™ (R1):
Reconstituer le flacon avec 3 ml d’eau déionisée filtrée ou distillée.
Bien mélanger le réactif et laisser stabiliser à température ambiante
pendant au moins 15 minutes afin de s’assurer d’une complète
dissolution.
2. LA Phospholipids™ (R2):
Reconstituer le flacon avec 2 ml d’eau déionisée filtrée ou distillée.
Bien mélanger le réactif et laisser stabiliser à température ambiante
pendant au moins 15 minutes afin de s’assurer d’une complète
dissolution.
3. dPT™ Activator™ (R3):
Reconstituer le flacon avec 2 ml d’eau déionisée filtrée ou distillée.
Bien mélanger le réactif et laisser stabiliser à température ambiante
pendant au moins 15 minutes afin de s’assurer d’une complète
dissolution. NE PAS VORTEXER ! MAINTENIR LE REACTIF A
TEMPERATURE AMBIANTE ! NE PAS METTRE LE REACTIF A
2°-8°C ! NE PAS CONGELER !
REAGENTS
R1
LA Buffer™: 3 flacons de tampon LA, 40 tests par flacon, constitué d’un mélange de sel et de
composants inactifs.
R2
LA Phospholipids™: 3 flacons de phospholipides LA, 40 tests par flacon, contenant un mélange
approprié de phospholipides, des conservateurs et des additifs.
R3
dPT Activator™: 6 flacons d’Activateur dPT, 40 tests par flacon, contenant un mélange approprié de
recombinant facteur tissulaire, du calcium, des conservateurs et des additifs.
PRECAUTIONS
Les réactifs contiennent de faibles quantités d’azide de sodium. L'azide de sodium (NaN3) peut générer des
composants explosifs au contact des canalisations en plomb ou en cuivre. Pour éviter ce risque, effectuer des
lavages intensifs.
Le réactif est à usage in vitro essentiellement. Il ne doit pas être utilisé en interne chez l’homme ou chez
l’animal. Ne pas utiliser le coffret après la date d’expiration indiquée sur l’étiquette. Utiliser uniquement les
réactifs d’un même lot de coffrets. Ne pas mélanger les réactifs de différents lots de coffrets pour réaliser un
dosage. Ne pas fumer, manger ou boire dans la pièce où le coffret est utilisé. Ne pas pipeter les réactifs avec la
bouche, utiliser des propipettes destinées à cette usage. Se vêtir d’une blouse et de gants pendant la
réalisation du dosage et se laver les mains abondamment après avoir manipulé les réactifs.
AVERTISSEMENT
LA Buffer
-
-
H412, P273
LA
Phospholipids
-
-
H412, P273
CONT
dPT Activator
Danger
Mentions de
danger:
H315
H335
H350
H373
H412
Les conseils
de prudence:
CdCl2
Provoque une irritation cutanée. H319 Provoque une sévère irritation des yeux.
Peut irriter les voies respiratoires. H340 Peut induire des anomalies génétiques.
Peut provoquer le cancer.
H360 Peut nuire à la fertilité ou au fœtus.
Risque présumé d'effets graves pour les organs.
Nocif pour les organismes aquatiques, entraîne des effets néfastes à long terme.
Ne pas manipuler avant d’avoir lu et compris toutes les précautions de sécurité.
Ne pas respirer les poussières/fumées/gaz/brouillards/vapeurs/ aérosols.
Lavez-vous les mains soigneusement après manipulation.
Éviter le rejet dans l’environnement.
Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de
protection des yeux/ du visage.
P305+P351+P338 En cas de contact avec les yeux: rincer avec précaution à l’eau pendant
plusieurs minutes. Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles
peuvent être facilement enlevées. Continuer à rincer.
P332 + P313 En cas d’irritation cutanée: Consulter un médecin.
P308 + P313 En cas d’exposition prouvée ou suspectée: Consulter un médecin.
2
R1
R2
R3

10 jours
10 jours
8 Heures

2°-8°C
18°-25°C
2°-8°C
18°-25°C
18°-25°C
Les réactifs reconstitués R1 et R2 peuvent être récupérés de l’instrument dans un intervalle de 10 jours. Le
réactif R3 reconstitués peut être récupéré de l’instrument dans un intervalle de 8 heures. (Voir le tableau cidessus pour les conditions de température.)
H315, H319, H335, H340, H350, H360, H373
P202, P260, P264, P280, P305+P351+P338,
P332+P313, P308+P313
P202
P260
P264
P273
P280
Les stabilités des réactifs reconstitués sont les suivantes
PRELEVEMENT ET PREPARATION DE L’ECHANTILLON
Un plasma citraté pauvre en plaquettes peut être utilisé pour réaliser le dosage. Voir "Prélèvement, transport et
préparation des échantillons pour la réalisation de tests de coagulation; Approved Guidelines-Fifth Edition",
CLSI Document H21-A5, Vol. 28, No. 5, 2008.14 La préparation du plasma doit être effectuée de la façon
suivante:
1. Utiliser une seringue ou des tubes sous vide siliconés. 9 volumes de sang sont collectés dans 1 volume de
solution anticoagulante citrate de sodium 0.109M (3.2%).
2. Centrifuger l’échantillon de sang au minimum à 5,000 x g pendant 10 minutes pour obtenir un plasma
pauvre en plaquettes. Le plasma doit avoir moins de 104 plaquettes/µL. Les plaquettes peuvent aussi être
éliminées en filtrant le plasma sous 0.22 µm.
3. Le plasma doit être conservé à 2°-8°C et testé dans les 4 heures. Alternativement le plasma peut être
conservé à -70°C pendant 6 mois.

4 heures
6 mois

2°-8°C
-70°C
4. Le plasma congelé doit être décongelé rapidement à 37°C. Le plasma ainsi décongelé doit être conservé
à 2-8°C et testé dans les 4 heures.
3
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Notes:
1. Si le taux d’hématocrite de base de l’échantillon sanguin est supérieur à 55%, les résultats obtenus à partir
du test peuvent être inexacts et un ajustement du rapport anticoagulant-échantillon sanguin doit être pris
en compte.
2. Ne pas tester des échantillons ictériques ou hyperlipémiques sur des instruments à lecture optique, les
temps de coagulation dans ce cas peuvent être faux. Une méthode semi-automatique ou manuelle est
conseillée dans ce cas.
3. Ne pas effectuer le test ACTICLOT dPT sur des échantillons hémolysés.
MODE OPERATOIRE
2. Pipeter 100 µL de plasma à tester (ex. plasma du patient, PPN, LA positif contrôle ou LA négatif contrôle)
dans la cuvette de coagulation. Incuber 2 minutes à 37°C.
3. Ajouter 50 µL de réactifs phospholipides ACTICLOT LA Phospholipids préchauffés dans la cuvette
contenant le plasma à tester.
4. Ajouter 50 µL de réactif activateur ACTICLOT dPT Activator dans la cuvette contenant le plasma à tester.
Démarrer immédiatement le chronomètre et noter le temps de coagulation.
Adaptation sur automates
Le test de confirmation ACTICLOT dPT peut être effectué sur la plupart des automates automatiques de
coagulation. Les adaptations sont disponibles sur demande. La procédure générale est décrite ci-dessous.
1. Transférer suffisamment de réactif phospholipides ACTICLOT LA Phospholipids et de réactif activateur
ACTICLOT dPT Activator dans les cuvettes réactifs de l’instrument.
Matériel fourni– Voir réactifs
Matériel nécessaire mais non fournis :
LAtrol™ Normal Control Plasma (Sekisui Diagnostics REF 816N)
LAtrol™ Abnormal Control plasma (Sekisui Diagnostics REF 816A)
Pool de plasma normal (PPN)
Pipettes variables (0-200 µL, 200-1000 µL, 1000-5000 µL)
Filtre de 0.22 µm, eau distillée ou déionisée
Instrument automatique ou semi-automatique pour tests de coagulation.
2. Pipeter 100 µL de plasma à tester (ex. plasma du patient, PPN, LA positif contrôle or LA négatif contrôle)
dans la cuvette de coagulation.
3. Ajouter 50 µL de réactif phospholipides ACTICLOT LA Phospholipids dans la cuvette contenant le plasma
à tester. Incuber 2 minutes à 37°C.
4. Ajouter 50 µL de réactif activateur ACTICLOT dPT Activator préincubé à 37°C dans la cuvette contenant
le plasma à tester. Noter le temps de coagulation.
ACTICLOT dPT : Test de screening
ZONE NORMALE DE REFERENCE
Procédure semi-automatique pour ST4
Les performances du coffret ACTICLOT dPT requièrent que chaque laboratoire établisse sa propre zone
normale de référence pour les tests de screening et de confirmation. Un minimum de 20 donneurs sains
comprenant des hommes et des femmes adultes (18-55 ans), devra être utilisé pour établir la zone normale de
référence (voir VALEURS ATTENDUES). Après avoir établie la zone normale de référence, la préparation des
plasmas normaux doit être réalisée de la même manière que celle des plasmas à tester. Si les plasmas à tester
sont congelés, la zone normale de référence doit être établie à partir de plasmas normaux congelés. Il n’est
pas recommandé de tester un mélange de plasma frais et de plasma congelé pour établir la zone normale de
référence ou pour les tests de routine. La zone normale de référence doit être réalisée à chaque changement
de lot de réactifs, d’instruments ou au moins une fois par an. La zone normale de référence doit être définie sur
une période de plusieurs jours afin de s’affranchir de la variabilité du dosage à différent jour.
1. Transférer une quantité suffisante d’activateur ACTICLOT dPT Activator et de tampon ACTICLOT LA
Buffer dans les cupules pour réactifs placées à 37°C sur le ST4.
2. Prélever 100 µL de plasma échantillon (ex. plasma patient, PPNNP, LA positif control ou LA négatif
control) dans la cuvette de coagulation. Incuber pendant 2 minutes à 37°C.
3. Ajouter 50 µL of tampon ACTICLOT LA Buffer préalablement chauffé dans la cuvette contenant le plasma
à tester.
4. Ajouter 50 µL d’activateur ACTICLOT dPT Activator préalablement chauffé dans la cuvette contenant le
plasma à tester. Déclencher immédiatement le chronomètre et noter le temps de coagulation.
Détermination du temps de coagulation moyen du test de screening et de la zone normale de référence
dans le protocole dPT de sreening.
Adaptation sur automates
Le test de screening ACTICLOT dPT peut être réalisé sur la plupart des instruments automatiques de
coagulation. Les différentes adaptations sont disponibles sur demande. La procédure générale est décrite cidessous.
1. Transférer le tampon ACTICLOT LA Buffer et l’activateur ACTICLOT dPT Activator dans les cuvettes
réactifs de l’instrument.
2. Pipeter 100 µL de plasma à tester (ex. patient plasma, PPN, LA positif contrôle or LA négatif contrôle)
dans une cuvette de coagulation.
3. Ajouter 50 µL de tampon ACTICLOT LA Buffer dans la cuvette contenant le plasma à tester. Incuber
pendant 2 minutes à 37°C.
4. Ajouter 50 µL d’activateur ACTICLOT dPT Activator préincubé à 37°C dans la cuvette contenant le plasma
à tester. Noter le temps de coagulation.
Protocole de confirmation de l’ACTICLOT dPT
Adaptation sur ST4
1. Transférer suffisamment d’activateur ACTICLOT dPT Activator et de phospholipides ACTICLOT LA
Phospholipids dans les cuvettes réactifs à 37°C du ST4.
4
Tester 20 plasmas normaux en utilisant le test de screening et déterminer le temps moyen de coagulation (en
secondes). La moyenne du temps de coagulation du screening + 2 ET constitue la valeur limite de la zone
normale de référence. Un plasma est considéré positif en LA si le temps de coagulation du screening est
supérieur à la valeur limite de la zone normale de référence.
Détermination du temps de coagulation moyen du test de confirmation dans le protocole dPT de
confirmation.
Tester 20 plasmas normaux en utilisant le protocole de confirmation et déterminer le temps moyen de
coagulation (en secondes). Déterminer la valeur moyenne du temps de coagulation du test de confirmation (en
secondes) sur les mêmes plasmas normaux utilisés dans le protocole de screening.
NOTE: La recherche de LA positif requiert l’utilisation pour chaque plasma du protocole de screening et du
protocole de confirmation. La moyenne des temps de coagulation déterminée dans le protocole de screening et
dans le protocole de confirmation est utilisée pour les calculs dans la détermination de la présence de LA dans
les échantillons à doser. Il existe deux méthodes de calcul pour la détermination de LA dans les échantillons
des patients définies comme suit : calcul du rapport par Temps de coagulation du Test de screening/Temps de
coagulation du Test de confirmation (S/C) et calcul du ratio normalisé. Une méthode alternative pour calculer
les résultats des tests LA a été décrite.15
5
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Détermination de la zone normale de référence en utilisant la méthode du rapport S/C
Essais de mélange
Le rapport S/C est calculé pour chacun des 20 plasmas normaux utilisés en divisant le temps de coagulation du
test de screening par le temps de coagulation du test de confirmation:
La présence de pathologies telles que : déficit en Facteur (ex Facteur II, V ou X), présence d’un inhibiteur des
Facteurs (ex inhibiteur du Facteur VIII), ou plasma de patient traité par anticoagulants oraux (ex Coumadine)
doit être suspectée pour tout plasma présentant un temps de coagulation allongé dans le test de screening et
un rapport S/C ou un rapport normalisé dans la zone normale de référence. Dans ce cas, il est conseillé de
réaliser les tests à partir d’un mélange de plasma préparé de la façon suivante : Mélanger un volume de
plasma à tester et un volume de pool de plasmas normaux. Un test de screening et de confirmation est ensuite
effectué sur le mélange ainsi préparé.
Rapport S/C = Temps de coagulation du test dPT Screening (sec) ÷ temps de coagulation du test dPT
Confirmation (sec)
Déterminer la moyenne des rapports S/C R (± 2 ET) obtenus pour les 20 plasmas normaux. La moyenne des
rapports des normaux S/C + 2 ET est utilisée comme valeur limite supérieure de la zone normale de référence
dans le diagnostique des LA.
Détermination de la zone normale de référence en utilisant la méthode du rapport normalisé
Diviser le temps de coagulation du test de screening obtenu pour chaque plasma normal par le temps moyen
de coagulation du test de screening de la zone normale de (voir ci-dessous). Puis, diviser le temps de
coagulation du test de confirmation de chaque plasma normal par le temps moyen de coagulation du test de
confirmation de la zone normale de référence (voir ci-dessous). Le rapport normalisé est déterminé en divisant
le rapport normalisé obtenu à partir des tests de screening par le rapport normalisé obtenu à partir des tests de
confirmation :
Rapport
Normalisé=
Temps de coagulation du Test de screening du plasma (sec) ÷ La Moyenne des temps de
coagulation du Test de screening des plasmas normaux (sec)
Temps de coagulation du Test de confiramtion du plasma (sec) ÷ La Moyenne des temps de
coagulation du Test de confiramtion des plasmas normaux (sec)
Déterminer la moyenne du rapport normalisé (± 2 ET) des 20 échantillons normaux. La moyenne du rapport
normalisé + 2 ET est utilisée comme valeur limite supérieure de la zone normale de référence dans la
diagnostic de LA.
INTERPRETATION DES RESULTATS
Un algorithme décisionnel pour tester les plasmas des patients est décrit à la fin de la notice du coffret comme
aide dans l’interprétation des résultats.
A. Les plasmas des patients sont testés en utilisant le test de screening. Vérifier que le temps de coagulation
n’est pas hors des limites de la zone normale de référence préalablement établie.
1. Si le temps de coagulation du test de screening dPT effectué sur le mélange est supérieur à la valeur
haute de la zone normale de référence, (moyenne + 2ET) du laboratoire, le plasma est alors considéré
comme positif en LA. Si le temps de coagulation du test de screening dPT effectué sur le mélange est
dans la zone normale de référence, (moyenne + 2ET) du laboratoire, la présence d’un déficit en facteur
doit être suspecté. La recherche du déficit en Facteur doit être réalisée à partir de tests appropriés pour
ces dosages si nécessaire. (Voir Algorithme décisionnel).
2. Si le rapport S/C ou le rapport normalisé du mélange est supérieur à la valeur haute de la zone de
référence du laboratoire (moyenne + 2 ET), le plasma est alors considéré comme positif en LA. Si le
rapport S/C ou le rapport normalisé du mélange est dans la zone de référence du laboratoire (moyenne +
2 ET), d’autres anomalies doivent être suspectées (ex. traitements anticoagulants oraux comme
Coumadine, inhibiteur de facteur).
VALEURS ATTENDUES
La zone normale de référence, les temps de coagulation, le rapport S/C obtenus dans les tests de
screening et de confirmation réalisés à partir du coffret ACTICLOT dPT sur les différents instruments de
coagulation utilisés sont résumés dans le tableau 1 et sont donnés à titre d’exemple. Les échantillons de
plasma congelés issus de différents donneurs proviennent soit de fabricants spécialisés, soit sont
préparés directement par le laboratoire évaluateur en conformité avec le document H21-A4 du NCCLS.14
Les donneurs inclus sont des hommes et des femmes d’âge adulte présentant un TP et un APTT normal.
Les données géographiques de ces différents donneurs n’ont pas été transmises.
TABLE 1. Zone normale de référence obtenue sur différents automates de coagulation sur le
coffret ACTICLOT dPT a
1. Si le plasma a un temps de coagulation du test de screening (sec) dans la zone de référence (moyenne +
2 ET), la recherche de LA pour ce plasma est alors négative.
2. Si le plasma a un temps de coagulation du test de screening (sec) hors des limites de la zone de référence
(moyenne + 2 ET), la recherche de LA pour ce plasma est alors suspectée positive.
Un plasma positif dans le test de screening doit être testé dans le test de confirmation afin de confirmer la
présence de LA dans l’échantillon à doser. Un test de LA positif dans le test ACTICLOT dPT de screening ne
doit être considéré comme positif que s’il a été confirmé dans le test ACTICLOT dPT de Confirmation.
B. Chaque plasma testé positif dans le test de screening est testé dans le test de confirmation. Déterminer le
rapport S/C ou le rapport normalisé du plasma à tester.
1. Si le rapport S/C ou le rapport normalisé du plasma à tester est plus grand que la valeur limite de la zone
normale de référence préalablement établie (moyenne + 2 SD), le plasma est confirmé positif pour la
recherche du LA.
a
Instrument de
coagulation
ACL® 300+
(n=25)
BCT®
(n=32)
CA7000
(n=20)
MLA® 900C
(n=93)
ST4
(n=25)
STA
Compact®
(n=25)
Temps de coagulation du
test de screening, sec
(moyenne ± 2 ET)
34.4 + 4.5
51.2 + 7.8
38.8 + 8.8
26.7 + 4.8
38.4 + 4.2
36.6 + 5.9
Temps de coagulation du
test de confirmation, sec
(moyenne ± 2 ET
29.2 + 4.8
50.5 + 11.0
35.8 + 4.0
26.2 + 5.2
34.9 + 8.5
35.7 + 3.1
Rapport S/C
(moyenne ± 2 ET)
1.18 + 0.12
1.02 + 0.12
1.08 + 0.26
1.02 + 0.16
1.11 + 0.19
1.03 + 0.09
Résultats fournis par Sekisui Diagnostics16
2. Si le rapport S/C ou le rapport du plasma à tester est dans la zone normale de référence préalablement
établie, le plasma est considéré négatif dans la recherche du LA. Les essais de mélange doivent être
réalisés sur ce plasma.
6
7
824CEF_C©SD20150504
CONTROLE DE QUALITE
Des plasmas contrôles normal et anormal doivent être passés dans chaque série de tests réalisés, lors de tout
changement d’équipe, ou suivant les recommandations du laboratoire. Ces contrôles doivent être réalisés à
partir d’échantillons pauvres en plaquettes (moins de 104 plaquettes/µL). Des plasmas contrôles normal et
anormal sont disponibles chez Sekisui Diagnostics (REF 816N et REF 816A). Les valeurs obtenues pour ces
plasmas contrôles doivent être en conformité avec la zone normale de référence établie par le laboratoire. Si
les valeurs des contrôles ne correspondent pas aux valeurs limites préalablement établies par le laboratoire, et
après avoir vérifié que le matériel utilisé ne présente aucune anomalie de fonctionnement, les résultats non
validés doivent être rejetés et le test doit être refait sur des réactifs fraîchement préparés. Dans tous les cas, la
valeur des plasmas contrôles normal et anormal doivent être dans les spécifications avant de commencer le
dosage des échantillons à tester.
TABLE 2. Répétabilité du coffret ACTICLOT dPT sur des plasmas contrôles Normal et Anormal
(Lupus Positif).
Instrument
de
coagulation
ACL 300R
TRACABILITE ET CONTROLE DE QUALITE
BCT
Toute information concernant la traçabilité du contrôle de qualité est disponible sur demande auprès de Sekisui
Diagnostics.16
CA-7000
LIMITE DU DOSAGE
Les temps de coagulation obtenus dans le test de screening de l’ACTICLOT dPT peuvent être allongés chez
des patients présentant des déficits en Facteurs congénitaux ou acquis. Les déficits congénitaux en Facteurs
peuvent être mis en évidence par réalisation de mélange comme décrit précédemment. Les plasmas contenant
des inhibiteurs de facteurs (déficit acquis) peuvent ou ne peuvent pas être identifiés par réalisation de mélange
du fait que l’inhibiteur ne peut pas être totalement neutralisé par le plasma normal utilisé pour le mélange.
MLA 900C
STart 4
Le réactif ACTICLOT dPT Activator contient un agent inhibiteur de l’héparine non fractionnée capable de
neutraliser jusqu’à 1.0 U/mL d’héparine. Les plasmas qui contiennent des quantités d’héparine supérieure à 1.0
UI/ml peuvent donner de faux résultats et ne peuvent pas être dosés.
Les plasmas des patients traités à la Coumadine et d’autres anticoagulants oraux peuvent avoir un temps de
coagulation allongé dans le test de screening ainsi que dans le test de confirmation. Les études de mélange
peuvent raccourcir ces temps de coagulation et donner des temps de coagulation dans la zone normale en
l’absence de LA.
Aucun test LA utilisé seul ne permet la mise en évidence de tous les échantillons LA positifs. Le ISTH/SSC
recommande au minimum deux tests de screening sur tous les échantillons suspectés LA positif et au moins un
utilisant de forte concentration de phospholipide comme test de confirmation.9
PERFORMANCES ET CARACTERISTIQUES
STA Compact
Moyenne du
temps de
coagulation
dPT
Screening
(sec)
Intraessai
CV (%)
Interessai
CV (%)
Moyenne du
temps de
coagulation
dPT
Confirmation
(sec)
Intraessai
CV (%)
Interessai
CV (%)
Normal
32.8
2.5
5.1
30.2
3.8
5.3
Anormal
63.8
1.9
7.1
36.9
3.2
3.8
Normal
47.5
0.5
3.2
51.6
1.7
4.5
Anormal
89.2
0.6
5.2
61.9
1.2
3.7
Normal
44.3
0.9
ND
37.9
2.0
ND
Anormal
84.1
5.4
ND
48.6
3.3
ND
Normal
27.9
2.5
3.7
27.2
2.8
4.1
Anormal
51.6
2.4
8.6
30.5
1.5
3.7
Normal
38.1
0.7
ND
37.3
3.8
ND
Anormal
60.6
6.5
ND
44.0
6.7
ND
Normal
40.2
0.8
3.4
39.7
0.9
4.3
Anormal
77.9
1.1
7.2
46.0
1.0
4.8
Contrôles*
* Sekisui Diagnostics REF 816N, 816A
ND = Non Déterminé
Spécificité et Sensibilité
Dans l’étude clinique I, la spécificité et la sensibilité du réactif ACTICLOT dPT sont déterminées sur 20 plasmas
normaux et 23 plasmas reconnus comme LA faiblement positifs. Les résultats sont résumés dans le tableau 3.
Les résultats de l’ACTICLOT dPT sont comparés à ceux obtenus avec les tests commercialisés disponibles: LA
tests DVVtest/DVVconfirm (de Sekisui Diagnostics).
TABLE 3. Etude clinique I – Spécificité et Sensibilité
Précision
Les études de reproductibilité du coffret ACTICLOT dPT sont réalisées par Sekisui Diagnostics dans deux
laboratoires indépendants utilisant des instruments de coagulation différents : ACL™ 300R de Instrumentation
Laboratory, le BCT® de Dade Behring, le Sysmex® CA-7000, le MLA® 900C de Instrumentation Laboratory, le
STart® 4 et STA Compact® de Diagnostica Stago. Les études ont été réalisées sur plusieurs tests à des jours
différents et en utilisant des plasmas contrôles du commerce. Les résultats sont résumés dans le tableau 2.
ACTICLOT dPT
Test de
screening
ACTICLOT dPT
Test de
confirmation
ACTICLOT dPT (S/C)
+ DVV (T/C)
20/20
20/20
NRb
100%
100%
NRb
No. de plasmas LA testés
21/23
18/23
22/23
Sensibilité
91%
78%
95.6%
No. de plasma normaux testés négatifs
No. de plasma normaux testés
Spécificité
No. de plasmas connus LA et testés positifs
a
b
8
réalisé sur l’instrument CA-7000
Non reporté
9
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Dans l’étude clinique II, 29 plasmas LA positifs connus sont dosés avec l’ACTICLOT dPT, DVVtest/DVVconfirm
et un réactif LA LA-sensitive aPTT disponible commercialement. La sensibilité du coffret ACTICLOT dPT utilisé
sur un panel comparativement à ces tests est reportée dans le tableau 4. La sensibilité augmente en combinant
les résultats de tous les tests.
TABLE 4. Etude clinique II: Sensibilités obtenus à partir d’un panel de test LA (ACTICLOT dPT,
DVVtest/DVVconfirm and aPTT).
No. de Plasmas connus positifs en LA
No. de plasmas LA connus Testés
ACTICLOT dPTa
ACTICLOT dPTa
+ DVVb
ACTICLOT dPTa
+ DVVb + aPTTb
23/29
25/29
28/29
78%
86%
97%
12. Arnout, J., Vanrusselt, M., Huybrechts, E. and Vermylen, J. Optimization of the Dilute Prothrombin Time
for the Detection of the Lupus Anticoagulant by Use of a Recombinant Tissue Thromboplastin. Br J
Haematol 1994, 87: 94-9.
13. Mackie, I. J., Lawrie, A. S., Greenfield, R. S., Guinto, E. R. and Machin, S. J. A New Lupus Anticoagulant
Test Based on Dilute Prothrombin Time. Thromb Res 2004, 114: 673-674.
14. CLSI. Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-based Coagulation
Assays and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guidelines-Fifth Edition", CLSI Document H21-A5,
Vol. 28, No. 5, 2008.
15. Lawrie, A. A., Mackie, I. J., Purdy, G. and Machin, S. J. The Sensitivity and Specificity of Commercial
Reagents for the Detection of Lupus Anticoagulants Show Marked Differences in Performance between
Photo-optical and Mechanical Coagulometers. Thromb Haemost 1999, 81: 758-762.
16. Data on file, Sekisui Diagnostics, Stamford, Connecticut 06902
Sensibilité
réalisé sur l’instrument de coagulation ACL® 300R
b réalisé sur l’instrument de coagulation Sysmex CA-1500
a
ACL est la propriété de la société Instrumentation Laboratory, SpA
BCT est une marque enregistrée par Dade Behring Inc.
MLA est une marque enregistrée par Instrumentation Laboratory, SpA
METHODE COMPARATIVE
Deux études de méthodes comparatives ont été réalisées avec l’ACTICLOT dPT et le DVVtest/DVVconfirm.
Les deux études utilisent des échantillons de patient préalablement testés positifs pour le LA ou trouvés dans la
zone normale. Dans la première étude, réalisée sur STA Compact, 49 plasmas testés sur 54 sont corrélés
(90.7%). Dans la deuxième étude, réalisée sur BCT, 82 plasmas testés sur 93 (88.2%) sont corrélés.16
STACLOT et STA Compact sont des marques enregistrées par Diagnostica Stago, sas
Sysmex est une marque enregistrée par Sysmex Corporation
BIBLIOGRAPHIE
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Procedure. Am J Clin Path 1983, 79: 678-682.
10
11
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Algorithme Décisionnel Pour Le Diagnostic Des LA: ACTICLOT dPT
Légendes des symboles
Plasma de Patient Suspecté
d’une SAPL
Protocole de Screening de
l’ACTICLOT dPT
LA NÉGATIF
NON
Temps de Coagulation
Allongé?

Lire le mode d’emploi

Lire le SDS

Dispositif de deiagnostic médical in vitro

Fabricant
OUI (1)
Tester Le Plasma Avec
d’Autres Tests LA (dRVVT,
aPTT, KCT, etc.) ou Tests
ELISA APA

Protocole de Confirmation de
l’ACTICLOT dPT

Conserver à une temperature
Numéro de lot
OUI
LA POSITIF
Test de Confirmation
Positif?

Date d’expiration
NON (2)

Préparer un Mélange de
Plasma à Tester + Plasma
Sample plus PNP (1/1)

Protocole de Screening de
l’ACTICLOT dPT

Numéro de référence dans le catalogue
Représentant européen autorisé
Marque CE
Caractérisation des Anticorps
Phospholipides Dépendants(3)
NON
Temps de Coagulation
Allongé?
LA NÉGATIF
OUI(1)
Protocole de Confirmation de
l’ACTICLOT dPT
Recherche de Déficit en
Facteurs, Inhibiteurs ou
Traitement Anticoagulants
NON(2)
OUI
Test de Confirmation
Positif?
LA POSITIF
(1) LA Suspecté
(2) Le temps de coagulation allongé n’est pas significativement corrigé
dans le protocole de confirmation.
(3) Rechercher des anticorps anti-ß2GP1, anti-prothrombine, anticardiolipine, anti-annexine V, etc… par méthode ELISA.
12
13
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