3ème Forum - Canceropole: Accueil - Cancéropôle du Grand-Est

Transcription

Liège
Luxembourg
Heidelberg
Strasbourg
Champagne Lorraine
Alsace
Ardenne
Freiburg
Basel
3
Bourgogne
Franche-Comté
e Forum du
Cancéropôle du Grand-Est
http://www.canceropole-ge.org/forum
Lausanne
19-20 novembre 2009
au Château de l’Ile à Strasbourg
1
Comité scientifique
Partenaires
Alsace
Bourgogne Franche-Comté
Lorraine Champagne-Ardenne
Joseph ABECASSIS
Laboratoire de Biologie Tumorale, Centre Paul Strauss, Strasbourg
Denise BAGREL
niversité Paul Verlaine, Laboratoire d’Ingénierie Moléculaire et Biochimie
U
Pharmacologique, Metz
Laurent BEDENNE
Inserm EMI 0106, Epidémiologie des Cancers Digestifs, CHU Dijon
Philippe BIREMBAUT
Inserm UMR S903, Laboratoire Pol Bouin, CHU Reims
Christophe BORG
ervice d’Oncologie Médicale du CHU de Besançon, EFS Bourgogne
S
Franche-Comté
Jean-François BOSSET
Service de Radiothérapie du CHU de Besançon
Jean-Christophe EYMARD
esponsable Médical du Département de Recherche Clinique, Institut Jean
R
Godinot, Reims
Jean FAIVRE
Inserm U866, Registre Bourguignon des Cancers Digestifs, Faculté de
Médecine, Dijon
Pierre FUMOLEAU
Service d’Oncologie, Centre Georges-François Leclerc, Dijon
François GHIRINGHELLI
Service d’Oncologie, Centre Georges-François Leclerc, Dijon
Hinrich GRONEMEYER
Département Biologie du Cancer, IGBMC, Strasbourg
Marc GUENNEUGUES
Chargé de mission scientifique, CGE
Francis GUILLEMIN
Centre d’Epidémiologie Clinique, CIC-EC INSERM, CHU Nancy
François GUILLEMIN
Centre Alexis Vautrin, Nancy
Jacques HAIECH
cole Supérieure de Biotechnologie de Strasbourg, Faculté de Pharmacie,
E
Strasbourg
Jean-Marc LIMACHER
Directeur Médical, Transgene, Strasbourg
François-Xavier MAQUART MEDyC, Université Reims Champagne-Ardenne
2
Laurent MARTINY
MEDyC, Université Reims Champagne-Ardenne, Reims
Christiane MOUGIN
EA3181, IFR133, Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire, CHU de
Besançon
Pierre OUDET
aboratoire de Biochimie et Biologie Cellulaire, CHU Strasbourg,
L
Coordinateur scientifique du CGE
Christian PIERALLI
Département d’Optique, FEMTO-ST, Besançon
Xavier PIVOT
Service de Cancérologie, CHU Besançon
François PLENAT
Laboratoire d’Anatomie et Cytologie Pathologiques, CHU Nancy
3
Editorial
Sommaire
Pierre OUDET – Coordonnateur scientifique
Laboratoire de Biochimie et Biologie Moléculaire du CHU de Strasbourg – Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire (IGBMC) à Illkirch
Le Rapport Grünfeld « Pour un Nouvel Elan » du Plan Cancer relève la contribution des cancéropôles pour la
mobilisation et l’animation des équipes de recherche dans le domaine de la cancérologie. Ceci vient conforter
notre démarche de mutualisation des ressources et expertises à l’échelle du Grand-Est dans le cadre de projets
de recherche de transfert du et vers le patient.
Près de 80 projets pilotés par des chercheurs du Grand-Est ont été financés par l’Institut National du Cancer
(INCa) depuis 2004, ce qui représente un montant de plus de 16,5 millions d’euros. En outre, 12 bourses
doctorales et 8 post-doctorales ont été attribuées. Ces chiffres illustrent la dynamique de structuration de notre
inter-région et témoignent du rayonnement au-delà du Grand-Est puisque 41 équipes françaises et européennes
sont partenaires dans au moins un projet.
L’année qui vient de s’écouler a connu des événements marquants pour le CGE, et tout particulièrement :
- Le démarrage de l’étude CiRCE sur les facteurs de risque environnementaux, nutritionnels et métaboliques
de carcinome hépatocellulaire (CHC) chez les patients atteints de cirrhose. La collecte systématisée de
prélèvements annotés alimente la recherche de biomarqueurs prédictifs de ce cancer. L’enjeu porte sur
la prévention et le traitement précoce du CHC dans une population à haut risque. Ce projet est porté par
un réseau initié en 2004 et coordonné par Dijon ; il associe cliniciens hépatologues, épidémiologistes,
biologistes et biostatisticiens de nos 5 régions. Une extension internationale est engagée avec le centre
hospitalier chinois d’Urumqi ;
- La création de la 1ère plateforme française de recherche clinique dédiée à la Qualité de Vie (QdV) par des
équipes multidisciplinaires du CGE. La QdV est une dimension essentielle de l’efficacité d’une prise en charge
thérapeutique. Labellisée par la Ligue Nationale Contre le Cancer, cette plate-forme apporte son soutien
pour l’évaluation de la QdV dans des essais cliniques ou des études épidémiologiques en cancérologie et
poursuit des développements méthodologiques de « transfert » selon 3 axes : i) validation, sélection et
utilisation de questionnaires de QdV, ii) analyses longitudinales de la QdV et iii) valeur pronostique de la
QdV et relation avec les critères cliniques ;
- La reconduction pour deux ans du financement du programme de recherche en virologie tumorale appliquée
mené en collaboration avec le DKFZ. Un comité d’experts international a évalué très favorablement en
novembre 2008 les avancées de ce projet ambitieux démarré en 2006 et qui a produit une vingtaine de
publications. Les 3 axes de recherche portent sur les infections aux papillomavirus humains : mécanismes de
carcinogenèse, identification de nouveaux biomarqueurs diagnostiques et pronostiques et développement
d’approches thérapeutiques innovantes notamment basées sur des virus oncolytiques. Les efforts dans le
champ de la formation (création d’un collège doctoral avec 8 thèses en co-tutelle) ont été reconnus par
l’université franco-allemande. Il nous faut à présent préparer l’avenir et un groupe de travail a été mis en
place pour construire la suite du programme (2011-2015) qui intégrera d’autres virus (HCV, EBV, HIV) et de
nouvelles équipes, notamment du Cancéropôle CLARA.
La compétitivité et l’innovation puisent dans les synergies entre les divers acteurs de la recherche. Le forum
scientifique du CGE est une belle opportunité pour faire émerger et consolider des projets collaboratifs et
multidisciplinaires de dimension interrégionale, nationale et transfrontalière, voire, et c’est son ambition,
susciter la réalisation d’études de recherche clinique précoces multicentriques adossées à des plateformes.
Après Vittel en 2007 et 2008, c’est à Strasbourg que nous nous retrouverons les 19 et 20 novembre 2009, et pour
la 1ère fois sur 2 journées complètes avec un programme enrichi de conférenciers extérieurs et d’interventions
sélectionnées parmi les réponses à l’appel à communication. Toute l’équipe de coordination du CGE se joint à
moi pour vous souhaiter un excellent 3ème Forum.
4
Programme du 3e Forum du Cancéropôle du Grand-Est.............................................................. 6
Résumés des interventions.................................................................................................................10
19 novembre
Épidémiologie et santé publique................................................................................................................10
Infections et cancers.................................................................................................................................... 13
Génomique, post-génomique, relations hôte-tumeur........................................................................ 16
La recherche translationnelle au sein du CGE....................................................................................... 19
20 novembre
Épidémiologie : de la qualité de vie aux déterminants sociaux....................................................... 22
Progression tumorale.................................................................................................................................... 23
Nouveaux marqueurs.................................................................................................................................... 25
Cibles thérapeutiques et traitements innovants.................................................................................. 27
Nouvelles approches chirurgicales........................................................................................................... 29
Résumés des communications affichées........................................................................................31
Épidémiologie....................................................................................................................................................31
Cancérogenèse viro-induite......................................................................................................................... 32
Cibles thérapeutiques.................................................................................................................................... 34
Marqueurs diagnostiques & pronostiques............................................................................................... 36
Progression tumorale : mécanismes & voies thérapeutiques............................................................. 40
Micro-environnement tumoral et relations hôte-tumeur................................................................... 44
Radiothérapie & dosimétrie......................................................................................................................... 49
Plan de la manifestation.....................................................................................................................50
5
Programme
19 novembre 2009 : les thèmes fédérateurs du CGE
10h00-10h30 : Accueil
10h30 – 11h00 : Ouverture du Forum
• Institut National du Cancer - Guy-Robert AULELEY, responsable de la recherche clinique
• Ligue contre le Cancer du Grand-Est - Bruno AUDHUY, Coordonnateur de la Conférence de Coordination
Interrégionale
• Cancéropôle du Grand-Est - Pierre OUDET, Coordonnateur scientifique
Session I - Epidémiologie et santé publique
Chairman : Francis GUILLEMIN (Centre d’Epidémiologie Clinique, CIC-EC INSERM, CHU Nancy)
11h00-12h30 :
• Dépistage du cancer colo-rectal : comparaison du test Hemoccult et des tests immunologique - Jean FAIVRE (Inserm U866, Dijon)
• Conséquences psychologiques du cancer du sein et thérapie EMDR - Cyril TARQUINIO
(Université Paul Verlaine, Metz)
• Construction et quotidienneté du proche : trajectoires de proches de patients atteints de
cancer - Joelle KIVITS (Société Française de Santé Publique, Nancy)
• Qualité de vie et réinsertion des patientes guéries d’un cancer du sein - Mariette MERCIER (Université de Franche-Comté, CHU Besançon)
• Qualité de vie et phénomène de response shift au cours des traitements des tumeurs du
sein - Franck BONNETAIN (Centre G.F. Leclerc, Dijon)
Communication orale : Progrès majeurs de la prise en charge et du pronostic du cancer primitif du foie sur 30 ans - Boris GUIU (CHU & Centre G.F. Leclerc, Dijon)
12h30-14h00 : Cocktail déjeunatoire et session de posters (N°1 à 19)
Session II - Infections et cancers
Chairman : Christine CLAVEL (Laboratoire Pol Bouin, Inserm UMRS-903, CHU Reims)
14h00-15h30 :
Conférence invitée : Polyomavirus MCV et carcinome à cellules de Merkel - Pierre COURSAGET
(Inserm U818, Université François Rabelais, Tours)
• Role of beta human papillomaviruses in skin carcinogenesis - Massimo TOMMASINO (IARC,
Lyon) & François AUBIN (CHU Besançon)
• Virus de l’Hépatite C et carcinome hépatocellulaire - Françoise STOLL-KELLER (Inserm U748,
CHU Strasbourg) & Jean-Marc LIMACHER (Transgene, Strasbourg)
• Virus Epstein-Barr et lymphomes - Sébastien PFEFFER (IBMC, Université de Strasbourg) &
Antoine DURRBACH (AP-HP, Paris)
Communication orale : Une nouvelle voie de carcinogenèse: la transformation cellulaire induite
par transfert horizontal d’oncogènes viraux via les corps apoptotiques - Emilie GAIFFE (Université
de Franche-Comté, Besançon)
6
Session III - Génomique, post-génomique, relations hôte-tumeur
Chairman : Joseph ABECASSIS (Centre Paul Strauss, Strasbourg)
15h30-17h00 :
Conférence invitée : Induction of multifunctional high avidity human tumor-specific CD8 T
cells can override tumor mediated immune suppression - Daniel SPEISER (Institut Ludwig de
Recherches sur le Cancer, Lausanne, Suisse)
• Dialogue entre les effets non génomiques et génomiques de l’acide rétinoique: dérégulation
dans certains cancers - Cécile ROCHETTE-EGLY (IGBMC, Strasbourg)
• Approches protéomiques en cancérologie - Alain VAN DORSSELAER (CNRS, Institut
Pluridisciplinaire Hubert Curien, Strasbourg)
• Rôle du système immunitaire dans la réponse à la chimiothérapie: le cas du cancer
mammaire - François GHIRINGHELLI (Centre G.F. Leclerc, Equipe Inserm AVENIR, Dijon)
Communication orale : La Cavéoline-1 contrôle la croissance et la survie des glioblastomes
humains via les intégrines α5β1 et les récepteurs TGF-β - Sophie MARTIN (Faculté de Pharmacie,
Strasbourg)
17h00-17h30 : Pause café, session de posters (N°20 à 41) et Espace Biopharma
Session IV - La recherche translationnelle au sein du CGE
Chairman : Pierre FUMOLEAU (Centre G.F. Leclerc, Dijon)
17h30-19h30 :
Conférence invitée : Recherche translationnelle et personnalisation de la prise en charge des
patients : l’exemple de la génomique clinique - Hélène PEYRO-ST-PAUL (Ipsogen, Marseille)
La PLATEFORME BIOPUCES de l’IGBMC : validation d’un profil génomique de tumeurs du
sein HER2-3+ traitées par chimiothérapie première à base de trastuzumab (Herceptin®) - Philippe
KASTNER (IGBMC, Strasbourg) & Sarab LIZARD (Centre G.F. Leclerc, Dijon)
ALSACE
La PLATEFORME CLIPP (CLinical & Innovation Proteomic Platform): un outil pour le
diagnostic et le criblage de molécules anti-cancéreuses - Patrick DUCOROY (IFR100 - EFS, Dijon) &
Pierre FUMOLEAU (Centre G.F. Leclerc, Dijon)
BOURGOGNE
La PLATEFORME D’IMAGERIE CELLULAIRE ET TISSULAIRE : diagnostic
différentiel des carcinomes cutanés par spectroscopie vibrationnelle - Michel MANFAIT (Unité
MEDIAN, CNRS UMR 6142, Reims) & Anne DURLACH (CHU Reims)
CHAMPAGNE-ARDENNE
La PLATEFORME ITAC (Innovative Immune Targetting in Cancer) : production
d’anticorps monoclonaux et élaboration de modèles précliniques pour le ciblage thérapeutique
des cancers - Christophe BORG (CHU Besançon) & Christophe FERRAND (Inserm U645 - EFS, Besançon)
FRANCHE-COMTE
La PLATEFORME XENOGREFFES ET MODELES ANIMAUX : modèles orthotopiques de
tumeurs cérébrales prédictifs d’effets thérapeutiques - François PLENAT (Faculté de Médecine,
Nancy) & Pascal CHASTAGNER (CHU Nancy)
LORRAINE
Communication orale : Les modèles pré-cliniques dans la souris nude de carcinomes rénaux
établis à partir de prélèvements de patients - Thierry MASSFELDER (Inserm U682, Faculté de
Médecine, Strasbourg)
CLÔTURE DE LA 1è JOURNÉE - Apéritif puis dîner de gala au Château de l’Ile (à partir de 20h)
7
Programme
20 novembre 2009
Session I - EPIDEMIOLOGIE : de la qualité de vie aux déterminants sociaux
Chairman : Michel VELTEN (Laboratoire d’Epidémiologie et de Santé Publique, Strasbourg)
8h30-9h10 :
• Analyse longitudinale de la qualité de vie dans un essai de phase III randomisé auprès
de patients ayant un cancer du pancréas métastatique - Emilie MAILLARD (FFCD & Inserm
U866, Dijon)
• Utilisation des typologies territoriales dans l’étude des déterminants sociaux des hémopathies lymphoïdes dans cinq départements disposant d’un registre de cancers - Mathieu
HÄGI (Registre des Tumeurs du Doubs, CHU Besançon, FRANCIM Toulouse)
Session II - PROGRESSION TUMORALE
Chairman : Monique DONTENWILL (UMR CNRS 7213, Strasbourg)
9h10-10h10 :
• L’expression de l’IP-10 à partir des PBMC reflète la progression tumorale du mélanome in
vivo - Franck ANTONICELLI (CNRS UMR 6237, Reims)
• Les polyphénols du raisin préviennent la croissance de la lignéee cellulaire d’adénocarcinome C26 et la néo-vascularisation - Nelly ETIENNE-SELLOUM (CNRS UMR 7213, Strasbourg)
• Des matériaux nanostructurés actifs pour la prévention des métastases osseuses - Nadia
JESSEL (Inserm U595, Strasbourg)
10h10-10h40 : Pause café, session de posters (N°20 à 41) et Espace Biopharma
Session III - NOUVEAUX MARQUEURS
Chairman : Alain VAN DORSSELAER (CNRS, Institut Pluridisciplinaire Hubert Curien, Strasbourg)
10h40-12h20 :
8
• Une nouvelle protéine deltaCD20, codée par un nouveau transcrit alternatif du gène CD20
associée à la résistance au Rituximab: marqueur moléculaire potentiel des hémopathies
B - Carole HENRY (Inserm U645 & EFS, Besançon)
• SOX-2 est un oncogène activé par des amplifications du locus 3q26.3 récurrentes dans les
carcinomes du poumon à cellules squameuses - Thomas HUSSENET (IGBMC, Strasbourg)
• Le CD148, un marqueur de surface potentiel des hémopathies lymphoïdes chroniques
identifié par approche protéomique - Sarah SANGLIER-CIANFERANI (CNRS, Institut
Pluridisciplinaire Hubert Curien, Strasbourg)
• Une plateforme de cytomique clinique dédiée à la recherche clinique - Gilbert FAURE (CHU
& Centre Alexis Vautrin, Nancy)
• Mise en place d’un réseau national d’analyse statistique des données de protéomique
clinique - Caroline TRUNTZER (IFR Santé STIC & CHU Dijon)
12h20-13h50 : Cocktail déjeunatoire et session de posters (N°1 à 19)
Session IV - CIBLES THERAPEUTIQUES ET TRAITEMENTS INNOVANTS
Chairman : Christian GAIDDON (Inserm U692, Strasbourg)
13h50-15h30 :
• Les composés dérivés du Ruthénium: développement d’une nouvelle classe de
chimiothérapies dotée d’une neurotoxocité réduite et agissant indépendamment de p53 Christian GAIDDON (Inserm U692, Strasbourg)
• Génotypage de KRAS dans les cancers colorectaux métastatiques: analyse comparative par
les techniques de PCR-RFLP, PCR-Taqman et HRM - Anne-Sophie CHRETIEN (Centre Alexis
Vautrin, Nancy)
• Fonction du gène Cdx2 au cours de l’émergence des leucémies aigües - Claire DOMON-DELL
(Inserm U682, Strasbourg)
• La protéine membranaire Hsp72 issue d’exosomes dérivés de tumeurs provoque la fonction
p-Stat3-dépendante des MSC (Myeloid Suppressor Cells) via la voie TLR2-MyD88 Grégoire MIGNOT (Inserm U866, Dijon)
• Modulation de la réponse moléculaire tumorale au Cetuximab par l’extinction de PTEN
dans la lignée cellulaire HNSCC: impact sur l’angiogenèse - Jihane MRIOUAH (Faculté de
Médecine, Nancy)
Session V - NOUVELLES APPROCHES CHIRURGICALES
Chairman : Christian DEBRY (CHU Strasbourg)
15h30-16h20 :
• Réalité virtuelle et robotique: nouvelles technologies appliquées à la recherche et au
traitement des cancers - Luc SOLER (IRCAD, Strasbourg)
• L’exérèse endoscopique de l’adéno-carcinome nasal permet de ré-écrire son histoire
diagnostique et thérapeutique - Roger JANKOWSKI (CHU Nancy)
LES PRIX DU JEUNE CHERCHEUR
16h20-16h30
16h30 : CLOTURE DU FORUM
RC Recherche clinique
RF Recherche fondamentale
RT Recherche translationnelle
9
19 novembre
Résumés des interventions
Session
Épidémiologie et santé publique
10
Dépistage du cancer colo-rectal : comparaison du
test Hemoccult et des tests immunologiques.
Evaluation randomisée de la prise en charge par
thérapie EMDR dans le cancer du sein.
Auteur : J. Faivre
Affiliation(s) : Inserm U866, Dijon
E-mail : [email protected]
Résumé : Le dépistage du cancer colorectal en utilisant un test
au guaiac de recherche d’un saignement occulte dans les selles
a fait la preuve que c’était un moyen de diminuer la mortalité
due à ce cancer. Cependant, ce test a été critiqué en raison
de sa sensibilité médiocre et parce qu’il réagit avec l’hème
contenu dans les aliments. Des tests immunologiques ont été
développés avec l’objectif d’améliorer l’efficacité du dépistage.
Les données disponibles sur la valeur clinique de ces tests sont
insuffisantes pour tirer des conclusions. L’objectif de cette étude
était de comparer des tests immunologiques au test au guaiac
de référence (test Hemoccult).
A l’occasion de la troisième campagne de dépistage organisée
du cancer colorectal dans les départements de la Côte-d’Or,
du Haut-Rhin, de l’Ille-et-Vilaine et de l’Indre-et-Loire, il a été
proposé aux sujets âgés de 50 à 74 ans (nés entre 1933 et
1957) de faire simultanément un test au guaiac sur 3 selles
consécutives et un test immunologique fourni par les 3 groupes
industriels permettant une lecture automatisée : OC Sensor®,
FOB Gold® et Magstream®. Les résultats ne sont disponibles
que pour les deux premiers tests, du fait de la mise à disposition
tardive du troisième. Près de 35 000 personnes ont fait un test
Hemoccult et un test OC Sensor et 36 000 un test Hemoccult et
un test FOB Gold. La proportion des tests positifs était plus élevée avec le test immunologique : 3,8% avec le test OC Sensor
(seuil de 150 ng/ml), 4,9% avec le test FOB Gold (au seuil de
175 ng /ml) qu’avec le test Hemoccult, respectivement 1,8% et
2,7%. La valeur prédictive positive pour la détection d’un cancer
était voisine pour tous les tests, comprise entre 6 et 8%. Par
contre, le taux de détection des cancers était plus de 2 fois plus
élevé avec les tests immunologiques qu’avec le test au guaiac.
Une étude de stabilité a été conduite pour les tests OC Sensor et FOB Gold. Les prélèvements ont été placés dans une
étuve à température contrôlée (15, 20, 25, 28 et 30°C), chaque
tube étant lu à 5 temps différents (JO, J3, J7, J10 et J14). La
stabilité du test OC Sensor était bonne à 15 et 20° C jusqu’à
J10. Pour les températures plus élevées, la décroissance est
modérée jusqu’à J7, mais atteint 30% à J10. La stabilité du test
FOB Gold est moins bonne : décroissance de 20% à 15 et 20°
C dès J3. Dès que la température atteint 25%C, la décroissance
est rapide (45% à J7).
Au total, les tests immunologiques, par leur taux de positivité,
induisent un plus grand nombre de coloscopies, mais permettent de dépister un nombre plus élevé de cancers. Leur stabilité
laisse à désirer à température élevée (conservation des tubes
au frigidaire avant leur envoi postal ?).
Auteur : C. Tarquinio
Affiliation(s) : Unité de Recherche APEMAC, EA 4360 « Approches Psychologiques et Epidémiologiques des Maladies
Chroniques », Equipe de Psychologie de la Santé – Metz
Résumé : Objective: The aim is to show the results of a randomized controlled pilot study about EMDR therapy in the care
of breast cancer patients. All patients met in the Hospital and
the treatment was performed in a private office with two EMDR.
The measures were realized by an independent psychologist
different of the two psychotherapists.
Subjects: A total of 20 subjects were randomly allocated to
eye-movement desensitization and reprocessing (EMDR) n =
10 versus waiting list (WL) (n = 10) in a primary care setting.
Methods: The subjects had to answer questions from the IES-R,
BDI and STAI scales. These different measures were administered to all of the subjects before beginning the therapy (T1), after
six sessions of sixty minutes of EMDR (T2), six months later
(T3) and eleven months later (T4).
Main results: The data were processed with non-parametric
tests. Results indicate that the group that received EMDR
treatment has lower depression, anxiety and PTSD score than
waiting list and in comparison to pretreatment baseline. The
initial results were maintained at the 6 and the 12-months follow-up
Construction et quotidienneté du proche : trajectoire
de proches de patients atteints d’un cancer du
poumon.
Qualité de vie et réinsertion des patientes guéries
d’un cancer du sein – Etude comparative à partir de
trois registres des cancers.
Auteur : J. Kivits, H. Kane
Affiliation(s) : Société Française de Santé Publique, Nancy
Résumé : Notre étude, d’approche socio-anthropologique, a
pour objectif d’analyser les « trajectoires » de proches de personnes atteintes d’un cancer du poumon. Plus ou moins dépendante de la trajectoire de la maladie, la trajectoire du proche est
appréhendée comme évolution qualitative de la relation avec la
personne atteinte. Le déroulement de cette trajectoire est envisagé au sein d’un entourage familial et/ou amical. Cette étude
repose sur une observation participante d’une année au sein
d’un service de pneumologie, la réalisation d’entretiens semi-directifs avec les proches aux domiciles des familles et l’organisation d’entretiens de groupe avec les équipes soignantes. Après
présentation des profils de proches participant à l’étude, nous
analyserons le cancer du poumon comme épreuve personnelle
et relationnelle. Cette épreuve réside dans les transformations
corporelles, la gestion de l’incertitude et de la mort, la recomposition des rôles dans l’entourage qui sont autant d’expériences
venant moduler les trajectoires des proches. Nous développerons ensuite les rôles investis par les proches auprès des malades, incluant la présence à l’hôpital et les relations avec le
personnel soignant ainsi que les pratiques d’information sur la
maladie. La discussion portera sur les spécificités du rôle du
proche révélées par l’étude, l’importance de la localisation du
cancer sur la définition des trajectoires des proches et le processus de réhabilitation de la personne malade par les proches,
garant du maintien de la qualité de la relation au malade et du
lien social. Cette communication sera enfin l’occasion de s’interroger sur l’apport des sciences sociales en santé publique, plus
particulièrement dans la recherche sur le cancer.
Auteur : M. Mercier1, M. Velten2, D. Klein2
Affiliation(s) : 1 Registre des cancers du Doubs, EA 3181, Université de Franche-Comté, Besançon
2
Registre des cancers du Bas-Rhin, EA 1801, Université de
Strasbourg, Strasbourg
Résumé : Contexte et objectifs : Compte tenu du nombre
croissant de femmes guéries d’un cancer du sein, dont une proportion importante de sujets jeunes, une étude en population
générale, à partir de trois registres français des cancers, a été
réalisée pour étudier l’impact de cette pathologie sur la qualité
de vie et de réinsertion 5, 10 et 15 ans après le diagnostic.
Patients et Méthodes : Les patientes considérées guéries d’un
cancer du sein (cas) ont été tirées au sort (TAS) à partir des
fichiers de trois registres des cancers (Bas-Rhin, Calvados et
Doubs) pour trois périodes de diagnostic: 1990, 1995 et 2000.
Les témoins ont été sélectionnés par TAS sur les listes électorales, avec stratification sur l’âge et l’habitat (urbain/rural).
Chaque sujet recevait cinq questionnaires: deux questionnaires
de qualité de vie (EORTC QLQ-C30 et SF-36), un questionnaire
d’anxiété (Spielberger), un questionnaire fatigue (MFI-20) et un
questionnaire de conditions de vie.
Une analyse de variance a été réalisée pour comparer la QdV
entre les cas et les témoins, ajustée sur les variables socio-démographiques significativement liées aux scores de QdV et sur
les variables de stratification.
Résultats : 652 cas et 1188 témoins ont participé à l’étude entre
2006 et 2007. Des différences cliniquement et statistiquement
significatives, variant de 10,0 à 12,7 points sur une échelle de
100, ont été mises en évidence entre les témoins et les cas 5
ans après le diagnostic pour plusieurs dimensions de QdV : activité physique, limitations dues à l’état physique, limitations dues
à l’état psychique et fatigue. Ces différences s’estompent avec
le temps pour la quasi totalité des indicateurs. Quinze ans après
le diagnostic, la qualité de vie des patientes est comparable à
celle des femmes indemnes de cancer. Des résultats relatifs à
la réinsertion seront également présentés.
Conclusion : Les répercussions de la maladie cancéreuse sur
la QdV sont importantes les premières années suivant le diagnostic puis s’estompent progressivement avec le temps chez
les femmes « considérées comme guéries », ce qui justifie une
attention particulière à la prise en charge psychosociale de ces
malades.
11
19 novembre
12
Qualité de vie et phénomène de response shift au
cours des traitements des tumeurs du sein.
Progrès majeurs de la prise en charge et du
pronostic du cancer primitif du foie sur 30 ans.
Auteur : F. Bonnetain, Thierry Conroy, Michel Velten, Damien
Jolly, Mariette Mercier, Sylvain Causeret, Jean Cuisenier, Olivier Graesslin, Mélanie Liegard, Delphine Hocquette, Francis
Guillemin pour la plateforme de recherche clinique Qualité de
vie et cancer
Affiliation(s) : Unité de biostatistique et d’épidémiologie,
Centre G.F. Leclerc EA 4184 & plateforme de recherche clinique
qualité de vie et cancer, Dijon
Résumé : Introduction : Dans le cadre d’essais cliniques en
cancérologie, la qualité de vie relative à la santé (QdV) est un
critère de jugement majeur pour évaluer l’efficacité des traitements. La “Response shift” ; définie selon 3 composantes
comme un changement de référence interne, de l’importance
relative des dimensions et une reconceptualisation de la QdV
; pourrait interférer dans l’évaluation comparative de la QdV de
prises en charge en sénologie. Les objectifs de notre étude sont
d’étudier l’impact des modalités de prise en charge du Cancer
du sein sur l’évolution de la qualité de vie, sur les 3 composantes de la « response shift » et sur les attentes de santé;
d’identifier les 3 composantes de la « response shift » et analyser leurs influences respectives sur la mesure et l’analyse longitudinale de la QdV et d’ étudier l’influence des attentes de santé
sur l’évolution de la qualité de vie et sur la « response shift » ;
Méthode : Cohorte prospective multicentrique incluant toutes
les patientes hospitalisées ou consultant pour un cancer primitif
du sein (ou une suspicion). La QdV a été évaluée à l’aide du
QLQ C30 et son module des cancers du sein BR 23, de l’EuroQOL EQ-5D lors de la première hospitalisation puis à la sortie,
à 3 mois et à 6 mois. Différentes méthodes statistiques et psychométriques («Then-test », « Ideal scales », « successive comparisons ») ont été implémentées pour caractériser les 3 composantes de la « Response shift ». L’ordre des questionnaires
a été randomisé. Nous rapportons les résultats concernant
l’occurrence de la « response shift » en sortie d’hospitalisation.
Résultats : De Février 2006 à Février 2008, 381 femmes ayant
un âge moyen de 56 ans ont été incluses, plus de 60% avaient
un cancer du sein confirmé et 30 % avaient une suspicion. En
sortie d’hospitalisation, l’évaluation rétrospective de la QdV
(then-test) montre que les femmes sous évaluaient significativement (p < 0.0001) leur QdV à l’inclusion pour les dimensions
émotionnelles (- 5 points) et cognitives du QLQ-C30 (-3 points),
la diminution de l’importance relative de douleur de l’EUROQOL
ayant un impact différentiel sur ces dimensions (p < 0.01). Les
symptômes de fatigue, d’insomnie, de diarrhée et de perte
d’appétit étaient significativement sur évalués. La dimension de
perspective future du BR23 était sous évaluée de – 7 points (p
< 0.00001) ne permettant pas de conclure à une amélioration
de cette dimension, après prise en charge, en sortie d’hospitalisation. L’ordre des questionnaires et les caractéristiques
cliniques n’ont pas d’influence significative différentielle sur ce
phénomène.
Conclusion : Nos résultats montrent un impact de la composante référence interne de la response shift évaluée par la
méthode then-test dès la sortie d’hospitalisation, elle influence
précocement le sens clinique du changement de QdV. Son analyse longitudinale est en cours.
Auteur : B. Guiu, A. Minello, C. Lepage, P. Hillon, J. Faivre,
A.M. Bouvier
Affiliation(s) : CHU Dijon le Bocage et Centre Georges-François Leclerc, Dijon
Résumé : Contexte : Très peu d’études ont été rapportées sur
les changements de la prise en charge diagnostique et thérapeutique du cancer primitif du foie (CPF) au cours du temps. Le
but de ce travail était d’étudier l’évolution des pratiques de soin
et du pronostic du CPF sur une période de 30ans.
Méthode : Les données sur la stratégie diagnostique, le traitement et le pronostic ont été collectées par le registre des
cancers digestifs de Côte d’Or sur la période 1976-2005. Les
facteurs associés à un traitement curatif ont été déterminés par
régression logistique. Une analyse multivariée de la survie relative a également été réalisée.
Résultats : Entre 1976 et 2005, 1267 patients (1044 hommes,
223 femmes) ont présenté un CPF. Le contexte du diagnostic
de CPF a changé au cours du temps : la proportion de patients
asymptomatiques a augmenté de 5.6% (1976-1985) à 43.8%
(2001-2005). Le diagnostic porté sur des seuls critères morphologiques a augmenté au cours du temps (2.6% en 1986-1990
contre 38% en 2001-2005), alors que celui porté sur des critères
histologiques a diminué (87.6% en 1986-1990 contre 40.2% en
2001-2005).
La proportion de patients traités de manière curative a considérablement augmenté : de 0.7% (1976-1980) à 23.6% (20012005). La survie s’est améliorée de manière concomitante :
la survie relative à 1 an passe de 4.4% (1976-1985) à 34.3%
(1996-2005) et la survie relative à 5 ans passe de 1.3% à 10.4%
(mêmes périodes). La survie à 5 ans des patients traités de
façon curative a considérablement augmenté pour atteindre
47.5% en 2001-2005.
En analyse multivariée, l’âge, la période du diagnostic, le type
de traitement, la présentation clinique et l’alfafoetoproteine
étaient des facteurs pronostiques indépendants.
Conclusion : Sur une période de 30ans, l’augmentation importante du nombre de CPF diagnostiqués chez des patients
asymptomatiques et les progrès considérables des thérapeutiques curatives et palliatives expliquent l’amélioration majeure
du pronostic.
Session
Infections et cancers
Polyomavirus MCV et carcinome à cellules de
Merkel.
Role of beta human papillomaviruses in skin
carcinogenesis.
Auteur : P. Coursaget
Affiliation(s) : Inserm U818 et Université François Rabelais, Tours
Résumé : Récemment, un virus dénommé Merkel cell polyomavirus (MCPyV ou MCV) a été découvert comme étant associé
au carcinome à cellules de Merkel (MCC) (Feng et al., Science
2008). Il s’agit du premier cancer humain associé à un polyomavirus. Nous avons confirmé la présence de ce virus dans
les MCC observés en France et la totalité du gène codant la
protéine VP1 a été obtenue par amplification à partir du tissu
tumoral de 7 sujets. Les gènes de ces souches ont été séquencés et présentent quelques mutations au niveau de la séquence
protéique. L’expression de la protéine VP1 de la souche virale
de référence MCV MCC350 (Feng et al. 2008) dans le système
baculovirus-cellules d’insecte ne conduit pas à l’obtention de
pseudo-particules virales ou VLPs, alors que l’expression de la
protéine VP1 de la souche française MK21 conduit à l’obtention
de nombreuses VLPs. Ces capsides induisent chez la souris
de fort titres d’anticorps spécifiques. Ces VLPs purifiées, ainsi
que des VLPs VP1 des virus BKV et LPV (lymphotropic polyomavirus) ont permis de rechercher les anticorps correspondants
dans différents groupes de population. Les anticorps anti-MCV
ont été détectés chez tous les sujets atteints de MCC et chez
75 à 95% des contrôles. Les titres des anticorps anti-MCV sont
toutefois généralement beaucoup plus élevés chez les sujets
atteints de MCC. À l’inverse, les anticorps anti-BKV et anti-LPV
ont été détectés à des fréquences et à des titres équivalents
chez les sujets atteints de MCC et les sujets contrôles. Ces
résultats confirment l’association entre MCV et MCC, mais ils
suggèrent qu’il pourrait exister d’autres étiologies que le MCV.
Les données obtenues indiquent également que les infections
à MCV sont ubiquitaires comme cela est observé pour les virus
BKV et JCV.
Auteur : M. Tommasino1, F. Aubin2
Affiliation(s) : 1 Infections and Cancer Biology Group, IARC, Lyon
2
Université de Franche Comté, EA3181, IFR133 et CHU, Service de Dermatologie, Besançon
E-mail : [email protected] - [email protected]
Résumé : Non-melanoma skin cancer (NMSC) is the most common form of malignancy in Caucasian adult populations. UV
light and immune suppression are risk factors for NMSC. The
fact that impairment of the immune system increases the risk for
development of skin cancers strongly suggests that infectious
agents are also involved in their aetiology. The epitheliotropic
human papillomaviruses (HPVs) are likely candidates, especially those classified in the genus beta of the HPV phylogenetic tree, also known as Epidermodysplasia verruciformis (EV)
HPV types. Independent investigations have shown that the
DNA of several EV HPV types is highly prevalent in NMSC of
both immunocompromised and immunocompetent individuals.
Despite this association, however, a direct role of the beta HPV
types in the development of skin cancer remains to be proven.
In addition, it is still not known whether, within the genus beta,
certain HPV types are more prevalent than others in malignant
skin lesions.
To further evaluate the role of beta HPV types in skin carcinogenesis, we are currently following two complementary strategies:
(i) Functional studies to characterize the biological properties
of different beta HPV types using in vitro and in vivo model systems;
(ii) Epidemiological studies to determine the presence of beta
HPV types in several human specimens.
The rationale of our functional studies is based on the fact
that viruses directly associated with human cancers have developed several mechanisms to efficiently evade the immune
surveillance and to promote cellular transformation. Therefore,
we have initiated the characterization of the ability of several
beta HPV types to de-regulate cellular pathways involved in the
immune response and cellular transformation in order to predict
their oncogenic potential.
Regarding the epidemiological approach, we conducted different studies in different groups of patients and skin lesions with
healthy skin controls and eyebrow hairs to evaluate the prevalence of cutaneous HPV infection.
The data obtained in the epidemiological and functional studies
will be presented.
13
Virus de l’Hépatite C et vaccin thérapeutique.
Virus Epstein-Barr et lymphomes.
Auteur : F. Stoll-Keller , J.M. Limacher , G. Honnet
Affiliation(s) : 1 Inserm U748, Strasbourg
2
Transgene, Strasbourg
Résumé : Les virus des hépatites B et C sont associés à 70%
des hépatocarcinomes (HCC) et indirectement responsables de
598 000 décès par an à travers le monde liés à cette tumeur et
dont l’incidence est en augmentation. Plus de 170 millions de
personnes sont chroniquement infectées par le virus de l’hépatite C (VHC) et les sujets nouvellement infectés évoluent dans
plus de 2/3 des cas vers une hépatite chronique. La cirrhose qui
se développe chez 10 à 20% des patients chroniquement infectés est associée à un risque de 2 à 5% par an de cancer du foie.
La réponse immunitaire à médiation cellulaire joue un rôle important dans le contrôle et / ou l’éradication du VHC. Le vaccin
TG4040 a été développé pour induire ou stimuler une réponse
cellulaire anti-VHC médiée par les lymphocytes T CD4+ et
CD8+. TG4040 est une suspension virale du Virus Modifié de
la vaccine de souche Ankara (MVA) contenant les séquences
du VHC (génotype 1) codant pour les protéines non structurales
NS3, NS4 et NS5B. Les objectifs de cette étude sont d’évaluer
l’innocuité, l’activité antivirale et l’immunogénicité de TG4040
chez des patients porteurs du VHC de génotype 1 et naïfs de
tout traitement.
Methode : 15 patients ont reçu 3 injections de TG4040 aux jours
1, 8 et 15 aux doses de 106 pfu (cohorte 1 : 3 patients), 107
pfu (cohorte 2 : 3 patients) et 108 pfu (cohorte 3 : 9 patients).
Une injection de rappel à 6 mois a été administrée aux patients
recevant la dose la plus élevée. Tous les patients ont été suivis
6 mois après leur dernière injection.
La quantification de l’ARN du VHC dans le sang a été réalisée
de même que l’analyse de la réponse immune cellulaire contre
le VHC. (ELISpot IFN-gamma, Luminex et prolifération).
Resultats : L’analyse de tolérance a été réalisée sur les 15
patients. Les effets secondaires les plus fréquents sont des
réactions légères à modérées au site d’injection, de la fatigue
et des syndromes grippaux. Aucun effet indésirable de grade
3/4 n’a été observé.
8 patients sur 15 ont présenté une réduction de leur charge virale de 0,5 à 1,2 log10 suite au traitement (dont 6 patients des
cohortes 1 et 2). Dans les 2 premières cohortes, une augmentation de cellules produisant de l’IFN-gamma (ELISpot) a été détectée chez 50 % des patients. La réponse cellulaire spécifique
contre NS3 et NS4B détectable à baseline chez seulement 1
patient et a été induite ou augmentée chez 5 patients sur 15
suite aux injections de TG4040.
Auteur : S. Pfeffer , A. Durrbach
Affiliation(s) : 1 IBMC – Université de Strasbourg, Strasbourg
2
Hôpital du Kremlin-Bicêtre, Paris
E-mail : [email protected] - antoine.durrbach@bct.
ap-hop-paris.fr
Résumé : Les lymphomes non hodgkin (NHL) sont les tumeurs
hématologiques les plus fréquentes. En dépit de progrès thérapeutiques, l’espérance de vie des patients avec NHL reste
faible nécessitant l’amélioration de la compréhension de la
physiopathologie de ces tumeurs, l’identification des marqueurs
précoces de la maladie et de nouvelles cibles thérapeutiques.
Le rôle d’EBV dans le développement des NHL a été mis en
évidence et l’EBV a été démontré comme étant associé au
développement des tumeurs lymphoïdes. Le rapport complexe
entre virus et l’organisme humain résulte de la transformation
cellulaire et la progression de la tumeur. Le mécanisme menant
à partir d’une infection virale habituellement bénigne au cancer est loin entièrement compris. Récemment, des microRNAs
(miRNAs) ont été démontrés comme pouvant avoir un impact
important sur le développement de plusieurs tumeurs. Dans les
lymphomes post transplantation (PTLD), les miRNAs viraux et/
ou les variations d’expression cellulaire de miRNAs pourraient
contribuer à la transformation de cellules. La détermination des
profils de miRNA pendant le développement de NHL peut offrir de nouvelles stratégies diagnostiques et thérapeutiques en
particulier en employant des anticorps convoyant des inhibiteurs
de miRNA. En outre, comme cela a été démontré dans le cancer de prostate, les miRNAs peuvent constituer un biomarker
plasmatique sensible pour les lésions pre-tumorales ou à développement infraclinique.
Dans ce projet, nous étudierons la participation des miRNAs
viraux et cellulaires dans le processus de lymphomagénèse
induit par EBV en étudiant l’expression des miRNAs viraux et
la déréglementation de l’expression cellulaire de miRNAs tous
les deux dans les patients transplantés qui ont développé un
PTLD, chez les patients immunocompetent (icNHL) aussi bien
que dans des contextes cellulaires expérimentaux. Nous établirons et comparerons les profils de miRNA des cellules naïve
et mémoire B, infectées ou pas avec EBV, des cellules principalement infectées (mononucléose), et des cellules dérivées
de PTLD ou d’icNHL. Nous corrélerons le profil des différents
miRNAs avec l’analyse histologique des PTLD et des NHL et
validerons à grande échelle le profil des miRNAs dans des biopsies de lymphome et dans le sérum par qPCR et hybridation
in situ. Nous analyserons l’implication de la réactivation d’EBV
sur l’expression virale et cellulaire de miRNAs aussi bien que
leurs effets sur les protéines pro-apoptotic de la famille Bcl-2,
Bad, Bax et Bim.
Nous déterminerons également si les miRNA circulants pourraient être employés en tant que biomarker précoce du développement de NHL ou comme marqueurs de réponse ou de
rechute thérapeutique en comparant des sérums des patients
transplantés PTLD ayant ou non un NHL ou un icNHL. Pour
le développement de de nouveaux outils thérapeutiques, nous
identifierons et évaluerons les miRNAs viraux et cellulaires
qui peuvent être efficacement modulés en employant des
approches biochimiques et informatiques. En conclusion, en
1
14
2
2
1
2
employant un vecteur ciblé par anticorps, des inhibiteurs de
ces miRNAs seront évalués in vitro et in vivo dans modèle de
souris Scid-NOD dans lesquelles un NHL aura aupréalable été
implanté.
Une nouvelle voie de carcinogénèse : la
transformation cellulaire induite par transfert
horizontal d’oncogènes viraux via les corps
apoptotiques.
Auteur : E. Gaiffe, S. Launay, M. Saunier, P. Oudet, J.L. Prétet,
C. Mougin
Affiliation(s) : Laboratoire de Biologie Cellulaire et Moléculaire
EA3181 «Carcinogenèse épithéliale» - URF SMP IFR 133, Besançon
Résumé : Le transfert horizontal de gènes par des corps apoptotiques a été documenté dans des modèles viraux (EBV) ou
cellulaires (oncogène c-myc ou H-rasV12). Les gènes transférés
s’avèrent fonctionnels car ils peuvent s’exprimer et dans le cas
des oncogènes ils conduisent à la transformation des cellules
receveuses. L’objectif de notre travail est de déterminer si des
corps apoptotiques dérivés de cellules cancéreuses du col de
l’utérus, infectées ou non par un HPV, sont capables de transformer des fibroblastes primaires.
Une suspension de corps apoptotiques dérivés de cellules HeLa
(HPV18+), CaSki (HPV16+) et C33A (HPV-) a été obtenue après
une irradiation UV de 20 mJ/cm² et un traitement par 300 nM de
staurosporine. Les corps apoptotiques ont été cocultivés avec
des fibroblastes humains ou murins pendant une durée de 30
min à 48 h. La cinétique d’internalisation des corps apoptotiques
par les fibroblastes a été déterminée par cytométrie de flux et le
mécanisme étudié par microscopie confocale. La transformation
cellulaire a été évaluée par 2 tests clonogéniques. Le transfert
de l’oncogène E6 a été mis en évidence par PCR en temps réel.
L’internalisation des corps apoptotiques est mise en évidence
dès 1 h de coculture (10%) et elle est quasiment totale (90%)
après 8h. Le mécanisme impliqué nécessite le recrutement de
filaments d’actine et est totalement inhibé à 4°C. Les tests clonogéniques indiquent que seuls les fibroblastes cocultivés avec
des corps apoptotiques dérivés de cellules abritant de l’ADN
d’HPV sont efficacement transformés. Enfin, des séquences
d’HPV16 ou d’HPV18 ont été amplifiées à partir d’ADN extrait
de fibroblastes transformés.
Ces résultats suggèrent que le transfert horizontal d’oncogènes
d’HPV est possible par l’intermédiaire de corps apoptotiques et
que les séquences virales délivrées peuvent être responsables
de la transformation des fibroblastes.
15
19 novembre
Session
Approches protéomiques en cancérologie.
Génomique, post-génomique, relations hôte-tumeur
16
Induction of multifunctional high avidity human
tumor-specific CD8 T cells can override tumor
mediated immune suppression.
Dialogue entre les effets non génomiques et
génomiques de l’acide rétinoïque : dérégulation
dans certains cancers.
Auteur : D. Speiser
Affiliation(s) : Ludwig Institute for Cancer Research, Lausanne, Switzerland
Résumé : T cell mediated destruction of cancer cells is based
on recognition of tumor-specific peptide antigens presented by
HLA-A/-B/-C molecules. Therapeutic vaccines are aiming to
promote activation of tumor-specific T cells in cancer patients.
However, there are major differences in the capacity of various
vaccine formulations to activate such T cells, and their functional
competence remains poorly characterized.
When combined with Incomplete Freund’s Adjuvant (IFA) and
antigenic peptide, CpG oligonucleotides (ODNs) are particularly
potent vaccine adjuvants, due to the capacity of CpG ODNs
to stimulate innate immune cells such as dendritic cells. After
vaccination of melanoma patients with a mixture of the tumor
peptide antigen Melan-A/MART-126-35, CpG ODNs and IFA,
Melan-A-specific T cells expanded rapidly and reached high
frequencies (on average >1% of circulating CD8 T cells). Direct
ex vivo analysis revealed considerable antigen specific cytotoxic
function and cytokine production by the T cells. Interestingly,
tumor recognition was fully achieved by nearly all T cells after
vaccination with the natural wildtype Melan-A/MART-126-35
peptide, whereas 38 % of T cells after vaccination with the analog (A27L) peptide failed to recognize tumor cells in vitro (unless they were labeled with synthetic peptide). Our data indicate
that tumor cell killing was in part hampered by low TCR avidity,
but also by deficiencies in perforin / granzyme expression and
cytolytic function, the latter of which was reversible by the addition of IL-12. Thus, the generation of competent CD8 effector
T cells depends on successful strategies to selectively activate
high avidity TCRs, and an environment that promotes T1 type
immune responses including IL-12 production.
T cell responses need to overcome tumor driven peripheral immune suppression. Multiple cell types and factors of the tumor
microenvironment have been shown to dampen effector T cell
responses, and even maintain a state of local T cell anergy.
Regulatory T cells and myeloid derived suppressor cells are
prominent in various tumor types. High levels of COX-2, IDO
and arginase are important metabolic barriers, and co-inhibitory
receptors (CTLA-4, PD-1) may mediate downregulation of T cell
function. We have uncovered BTLA (B and T cell attenuator) as
a new receptor inhibiting human tumor immunity. This molecular
circuit is alleviated by vaccination with peptide, CpG ODNs and
IFA, but not by vaccination without CpG ODNs.
I will discuss immunological and tumor responses to vaccination
of melanoma patients, and give novel insights in T cell activity
and immune suppression in melanoma patients.
Auteur : C. Rochette-Egly
Affiliation(s) : IGBMC, INSERM U596, CNRS UMR7104, Université de Strasbourg, Strasbourg
Résumé : L’acide rétinoïque (AR) et ses dérivés de synthèse
ou rétinoïdes sont utilisés avec succès dans le traitement d’un
certain nombre de cancers et leucémies. L’AR agit via des récepteurs nucléaires, RAR (α, β, γ) qui se comportent comme
des facteurs de transcription inductibles par le ligand et régulent
l’expression de toute une panoplie de gènes impliqués dans le
contrôle de la prolifération et de la différentiation des cellules
ainsi que de leur mort ou apoptose. Récemment notre équipe
a montré que, en plus de ces effets génomiques, l’AR exerce
des effets non génomiques comme l’activation de voies de
signalisation. En effet l’AR active rapidement les MAPKs qui
vont ensuite induire des cascades d’activation d’autres kinases
aboutissant à la phosphorylation des RARs eux-mêmes et de
leurs corégulateurs. Ces phosphorylations sont indispensables
à la dynamique des interactions des RARs avec leurs corégulateurs et les promoteurs des gènes cibles et donc à leurs effets
génomiques ou transcriptionnels.
D’après des études récentes, un nombre croissant de cancers
présente des anomalies ou des aberrations des voies de signalisation. Par exemple 30% environ des cancers du sein sont
caractérisés par la surexpression de récepteurs à activité tyrosine kinase du type erbB-2. Nous avons montré que dans des
cellules tumorales de ce type, les RARs sont phosphorylés de
façon aberrante. De plus, de telles cellules sont insensibles aux
effets non génomiques comme aux effets génomiques de l’AR.
Ces résultats mettent en exergue un nouveau concept selon
lequel les effets des rétinoïdes nécessitent l’intégrité des voies
de signalisation au sein de la cellule. Cela ouvre de nouvelles
perspectives non seulement au niveau du mécanisme d’action
des RAR mais aussi dans la mise en place de nouvelles combinaisons thérapeutiques associant des drogues ciblant les
voies de signalisation.
Auteur : A. Van Dorsselaer
Affiliation(s) : LSBMO, CNRS – IPHC-DSA, CNRS UMR7178,
Univ. de Strasbourg
Résumé : Les possibilités de la protéomique en cancérologie
n’ont pas toujours été utilisées à bon escient ces dernières
années par de nombreux laboratoires non avertis. Nous avons
focalisé nos efforts d’abord sur les développements méthodologiques nécessaires (augmentation de la gamme dynamique
des protéines identifiables). Nous avons ensuite appliqué ces
développements à une série de projets réalistes de recherche
de biomarqueurs et d’études de mécanismes biologiques fondamentaux importants pour la cancérologie.
Développement méthodologique :
- Traitement d’échantillons (plasmas, tissus, xénogreffes),
- Chromatographies à plusieurs dimensions sans milieu tamponné pour la LC-MS/MS,
- Nouvelles séquences MS/MS pour augmentation de la sensibilité et augmentation du nombre de protéines identifiées
- Automatisation des interprétations des spectres MS/MS (programme ANR VALANOT, 2008)
- Ecriture de nouveaux logiciels d’exploitation des données à
partir des banques de séquences génomiques et protéiques
- Mise au point d’une nouvelle méthode de détection sélective
d’une série de protéines (jusqu’à 1000 protéines) par spectrométrie de masse avec la technique MRM (projet soutenu par
l’INCa, appel à projet libre 2009 : PROTELL, Biomarkers identification in CNS relapse of diffuse large B cell lymphomas porté
par Catherine THIEBLEMONT, AP-HP)
CONCLUSION : L’effort en développement méthodologique
permet maintenant une approche crédible pour la recherche de
nouveaux biomarqueurs.
Recherche de nouveaux marqueurs :
- Xénogreffe de cancer du colon avec métastases. Comparaison d’extraits protéiques de xénogreffes de tumeurs. Etude
comparative d’une xénogreffe de tumeur primaire du cancer
du colon avec les xénogreffes de 2 métastases collectées dans
le foie. Démonstration de la possibilité de différencier l’origine
(homme ou souris) des protéines extraites des xénogreffes
grâce à une étude protéomique et l’utilisation de peptides trypsiques discriminants (programme soutenu par l’INCA Réseau
structurant 2005 ; collaboration avec E. Guérin et JF Launay,
Inserm U682 et CHU Strasbourg).
- Leucémie (malignant B-cells) : étude en protéomique comparative de trois types de leucémies (lymphome du manteau
MCL, lymphome à petites cellules SLL et leucémie lymphoïde
chronique LLC). Mise en évidence du CD 148 comme molécule
différenciante. (Soutien ARC en 2005 et de l’INCa projet PAIR
lymphome 2008, collaboration avec Pr. L. Miguet).
CONCLUSION : Un candidat « biomarqueur potentiel » est au
stade de validation au sein d’un PHRC.
Rôle du système immunitaire dans la réponse à la
chimiothérapie : le cas du cancer mammaire.
Auteur : F. Ghiringhelli
Affiliation(s) : Centre G.F. Leclerc, Equipe Inserm « Avenir »,
Dijon
Résumé : Les infiltrats tumoraux en lymphocytes T CD8 sont
corrélés avec un bon pronostics dans plusieurs type de cancers.
A l’inverse les infiltrats en cellules Foxp3 sont retrouvés comme
facteurs de mauvais pronostic dans de nombreux cancer et notamment chez les patientes porteuses de cancer du sein.
Nous avons pu démontré que dans des modèles animaux
comme chez l’homme la réponse à la chimiothérapie notamment aux anthracyclines est dépendante de la bonne fonction
de gène associé à la réponse immunitaire, en l’occurrence
TLR4 et P2X7. Ainsi une cohorte de 230 patientes présentant
un cancer du sein localisé et traitées en situation adjuvante
par anthracycline furent génotypées à la recherche de polymorphismes perte de fonction de P2X7 et TLR4. Ainsi cette
population les patientes présentent une mutation de TLR4 ou
de P2X7 présentent un plus mauvais pronostic et un plus grand
risque de récidive.
Le rôle de la réponse immunitaire au aussi été démontré en situation néoadjuvante. Ainsi la présence d’un riche infiltrat intratumoral en cellules CD8 associé à l’absence de cellules Foxp3
après chimiothérapie neoadjuvante pour un cancer mammaire
est un phénomène associé à une meilleur survie sans rechute.
Le caractère pronostic de l’infiltrat immunologique est retrouvé
indépendant du type de chimiothérapie et de la présence d’une
réponse histologique complète. Ces résultats sous-tendent
également l’hypothèse que la chimiothérapie néoadjuvante des
cancers mammaires peut induire une réponse immunitaire impliquée dans la récidive.
17
19 novembre
Caveolin-1 controls growth and survival of human
glioblastoma through α5β1 integrins and TGF-β
receptors.
Auteur : E. Cosset, D. Bonnet, M. Dontenwill, S. Martin
Affiliation(s) : LBP, UMR 7213 CNRS, Faculté de Pharmacie,
Strasbourg
E-mail : [email protected], [email protected]
Résumé : Glioblastomas (GBM) are the most common deadly
brain tumors for which new therapeutic approaches are needed.
Caveolin-1 plays a checkpoint function in the regulation of
processes often altered in cancer. We investigated the role of
caveolin-1 in GBM using genetic approaches and showed that
caveolin-1 controls the aggressivity of GBM with caveolin-1
negative cells exerting the most aggressive phenotype. Using
PCR array and Antibody array strategies we discovered that
caveolin-1 affects two signalling pathways crucial for GBM development, maintenance and chemoresistance, the α5β1 integrin
and the TGF-β1 receptor (TGF-βR) pathways. Interestingly, α5β1
integrin and TGF-βR expression and activation were inversely
correlated to caveolin-1 expression suggesting that caveolin-1
acts as a repressor on these pathways. Data therefore supported the notion that caveolin-1 acts as a tumor suppressor.
The inverse correlation between caveolin-1 and α5β1 integrins
was confirmed in human brain tumor biopsies and is under investigation for the TGF-βR. Our study also investigated and uncovered (1) the signalling pathways involved in the regulation of
α5β1 integrin and TGF-βR expression by caveolin-1 and (2) the
pathways activated by α5β1 integrins and the TGF-βR mediating
caveolin-1 effect on GBM with a special focus for ERK-1/2, Akt-1
and SMAD2/3. Given that α5β1 integrins and TGF-βR are overexpressed and activated in GBM, the response of GBM to either
α5β1 integrin antagonists (SJ749 and K34) or TGF-βR inhibitor
(SB431542) or a combination of both drugs was investigated.
Data suggest that the status of GBM in caveolin-1 can influence
the anti-tumor effect of each drug alone and the combination of
both drugs with a higher sensitivity of caveolin-1 negative cells.
In conclusion, our data open new aspects in the contribution of
caveolin-1 in the biology of glioma and uncovered new potential
therapeutic targets for the clinical management of GBM: α5β1
integrin and/or TGF-βR.
18
Session
La recherche translationnelle au sein du CGE Recherche translationnelle et personnalisation de
la prise en charge des patients : l’exemple de la
génomique clinique.
Auteur : H. Peyro-Saint-Paul
Affiliation(s) : Ipsogen, Marseille
Résumé : La recherche translationnelle, dont l’objectif est de
transformer aussi rapidement que possible les nouveaux savoirs
scientifiques en bénéfices pour les patients, est un champ en plein
essor.
Pour permettre une mise en œuvre optimale des connaissances
les plus récentes dans la pratique médicale quotidienne, la recherche translationnelle doit se développer au plus près des patients,
dans des centres de référence combinant expertises scientifique
et clinique. Le modèle traditionnel allait du laboratoire de recherche à l’application clinique. Grâce en particulier aux progrès de
la bioinformatique, de l’imagerie ou de la génomique, on peut
aujourd’hui faire le chemin inverse, à savoir partir de l’évolution
clinique d’un sous-groupe particulier de patients pour déchiffrer les
mécanismes pathologiques sous-jacents. Une des illustrations de
cette approche est l’identification de caractéristiques biologiques
génomiques permettant de guider la décision thérapeutique en
oncologie.
A la frontière des sciences dures, de la pratique clinique, et des
technologies de pointe, la recherche translationnelle doit consolider ses méthodes et ses critères d’évaluation. Trois niveaux
d’évidence doivent aujourd’hui être considérés pour toute nouvelle
procédure:
•Validité analytique, ou performances techniques, en particulier
lors de l’utilisation dans des laboratoires multiples
•Validité clinique, à savoir sa capacité à identifier précisément
les groupes de patients ciblés
•Utilité clinique, qui reflète sa valeur ajoutée dans la prise en
charge des patients
Enfin, deux questions essentielles demeurent à explorer:
l’intégration des nouvelles procédures issues de la recherche
translationnelle à la pratique clinique quotidienne, et l’équilibre
optimal entre niveau d’évidence scientifique et rapidité de transfert
des progrès scientifiques aux patients.
Ces différents points seront discutés au cours de la session, et en
prenant l’exemple de la génomique clinique et du cancer du sein
dans cette présentation.
ALSACE - La PLATEFORME BIOPUCES : validation
d’un profil génomique de tumeurs du sein HER23+ traitées par chimiothérapie première à base de
trastuzumab (Herceptin®).
Auteur : S. Lizard1, P. Kastner2
Affiliation(s) : 1 Centre G.F. Leclerc, Dijon
2
IGBMC, Strasbourg
Résumé : La chimiothérapie première dans les cancers du sein
HER2-3+ est capable d’obtenir une réponse histologique complète
dans 50% des cas. Il serait important de connaître les facteurs
génomiques concourant à cette excellente réponse au traitement,
et de meilleure survie à long terme, ou bien à contrario connaître
les facteurs de résistance à ce type de traitement.
Nous avons effectué l’analyse génomique de 38 tumeurs du
sein localement évoluées et traitées par chimiothérapie première
à base de trastuzumab afin de pouvoir déterminer des profils
génomiques expliquant les phénomènes de réponse ou bien de
moindre sensibilité à une thérapeutique ciblée en corrélant les
profils génomiques à la réponse histologique. Ce travail a été
réalisé en collaboration avec la plateforme génomique (IGBMC,
Strasbourg).
Vingt et une patientes ont été traitées par association de trastuzumab et docetaxel. Neuf patientes ont été traitées par association
de trastuzumab, docetaxel et carboplatine. 50 % des patientes ont
été mises en rémission complète histologique.
Pour les 25 patientes étudiées pour établir le profile génomique,
après 2 filtrages (heuristique et statistique, p<0.002), 28 gènes
sont corrélées à la réponse. Pour 13 patientes utilisées comme
groupe de confirmation, ces 28 gènes se retrouvent discriminants
réponse ou non réponse à la chimiothérapie à base de trastuzumab (herceptin®) avec une exactitude de 92%.
Ces résultats montrent pour la première fois une signature
génomique prédictive de la réponse à la chimiothérapie à base de
trastuzumab. Il devient donc important de valider sur une cohorte
indépendante supplémentaire cette signature génomique de sensibilité au traitement trastuzumab/chimiothérapie.
19
BOURGOGNE - La PLATEFORME CLIPP (Clinical
Innovative Proteomic Platform) : un outil pour
le diagnostic et le criblage de molécules anticancéreuses.
Auteur : P. Ducoroy1, P. Fumoleau2
Affiliation(s) : 1 CLIPP (Clinical Innovation Proteomic Platform),
IFR 100 Santé STIC, Université de Bourgogne, Dijon
2
Centre G.F. Leclerc, Dijon
E-mail : [email protected] - pfumoleau@dijon.
fnclcc.fr
Résumé : Des progrès significatifs ont été réalisés ces dernières
années en oncologie avec l’avènement de thérapeutiques ciblées.
La précocité du diagnostic et l’évaluation précise de la réponse
sont essentielles à la réussite du traitement. Pour pouvoir répondre
à ces deux critères il est primordial d’identifier de nouveaux marqueurs biologiques à la fois sensibles et fiables.
Les technologies de protéomique applicables à l’étude des liquides
biologiques, actuellement en plein essor, ont toutes leurs places
dans cette recherche ciblée.
Les résultats préliminaires issus de deux d’études cliniques réalisées sur la plateforme CLIPP en collaboration avec le Centre
Georges François Leclerc, seront présentés illustrant à la fois
l’apport potentiel des approches protéomique ainsi que les innovations récentes apportées dans le domaine. Ces études portent
sur la recherche de biomarqueurs précoces de la résistance à la
chimiothérapie néoadjuvante des cancers du sein et de biomarqueurs précoces d’efficacité thérapeutique pour la prise en charge
des cancers ovariens.
A travers ces exemples, nous soulèverons la nécessité de coordonner les études de protéomique clinique de manière multicentrique afin de répondre au besoin crucial de la puissance des
études et de la multiplicité des essaies thérapeutiques.
CHAMPAGNE-ARDENNE - La plateforme d’IMAGERIE
CELLULAIRE ET TISSULAIRE : Diagnostic différentiel
des carcinomes cutanés par microspectroscopie
vibrationnelle IR-TF et Raman.
Auteur : M. Manfait1, E. Ly1, O. Piot1, A. Durlach2
Affiliation(s) : 1 Unité MéDIAN CNRS UMR 6237 MEDyC, Université de Reims Champagne Ardenne, Reims
2
Laboratoire Pol Bouin, CHU Reims
Résumé : Les techniques de microspectroscopies vibrationnelles (absorption moyen infrarouge et diffusion Raman) sont
particulièrement bien adaptées à la caractérisation des échantillons biologiques. Ces techniques, basées sur l’interaction non destructive lumière - matière permettent d’accéder à des informations
d’ordre moléculaire et structural, caractéristiques de l’état physiopathologique d’un échantillon. Les investigations peuvent être
menées à différentes échelles, depuis la cellule unique jusqu’aux
approches tissulaires in vivo. Au sein de notre unité, la peau fait
l’objet d’une importante activité de recherche au niveau des pathologies tumorales cutanées.
De plus, la spectroscopie de diffusion Raman présente l’avantage
de pouvoir être mise en œuvre au moyen de systèmes fibrés, autorisant donc le développement d’applications in vivo, directement
20
sur les patients pris en charge à l’hôpital. Les applications actuelles portent sur la caractérisation in vivo des lésions tumorales
cutanées (carcinomes basocellulaires et spinocellulaires).
FRANCHE-COMTE – La plateforme ITAC (Innovative
immune Targetting in Cancer) : production
d’anticorps monoclonaux élaboration de modèles
précliniques pour le ciblage thérapeutique des
cancers.
Auteur : C. Borg1, C. Ferrand2
Affiliation(s) : 1 CHU Besançon, EFS Bourgogne FrancheComté
2
Inserm U645 – EFS Bourgogne Franche-Comté, Besançon
E-mail : [email protected] - christophe.borg@efs.
sante.fr
Résumé : La plateforme ITAC est située sur le site de l’institut
de bio-ingénierie de Franche Comté, et réunit les expertises des
unités de recherche de l’IFR133 et des entreprises du domaine biomédical (société Diaclone, EFS Bourgogne Franche Comté) pour
le développement de l’innovation et du transfert biotechnologique
en onco-hématologie.
Les principaux objectifs de cette plateforme comprennent :
i)la production d’anticorps monoclonaux pour le ciblage
thérapeutique des cancers ou des hémopathies,
ii)la production d’outils moléculaires pour l’identification de
molécules impliquées dans le suivi biologique des cancers ou
le ciblage thérapeutique (vaccins, screening de chimiothèque),
iii)l’élaboration de modèles précliniques in vitro et in vivo pour
obtenir la preuve de concept de l’intérêt clinique potentiel d’une
nouvelle stratégie thérapeutique.
Dans un premier temps, Christophe Borg décrira l’organisation de
la plateforme ITAC. La description de programmes de recherche
caractéristiques des équipes impliquées dans l’activité de transfert
illustreront les activités de la plateforme ITAC. Dans un second
temps, Christophe Ferrand détaillera comment l’identification
d’un épissage alternatif de la protéine CD20 peut contribuer à
l’élaboration de stratégies diagnostiques pour le suivi de la maladie résiduelle et la prédiction de la résistance au rituximab dans
le contexte des hémopathies B. Les applications thérapeutiques
potentielles seront également évoquées.
LORRAINE – La plateforme XENOGREFFES ET
MODELES ANIMAUX : modèles orthotopiques
de tumeurs cérébrales prédictifs d’effets
thérapeutiques.
Auteur : F. Plénat, S. Pinel, M.C. Lanhers, P. Chastagner
Affiliation(s) : EA 4421 « Signalisation, Génomique et Recherche Translationnelle en Oncologie » (SIGRETO), Faculté
de Médecine, Nancy
CHU Nancy
Résumé : La plateforme Xénogreffes est un élément structurel
de l’Equipe d’Accueil EA 4421 « Signalisation, Génomique et
Recherche Translationnelle en Oncologie (SIGRETO) de la Faculté de Médecine de Nancy. Cette plateforme a pour mission de
développer et de valider des modèles animaux de cancers par
greffes de tumeurs humaines chez la souris nude et de tester sur
ces modèles différents schémas thérapeutiques. Ces dernières
années, les efforts ont plus particulièrement porté sur la mise au
point de modèles orthotopiques de glioblastome et de métastases
cérébrales de tumeurs épithéliales. Ces modèles et leurs méthodes d’exploration seront décrits et des applications pré-cliniques
conçues pour être directement applicables chez l’Homme rapportées. Les dernières expérimentations concernent le traitement
de tumeurs cérébrales primitives et secondaires par des anthracyclines ou par le gefitinib, associées de façon concomitante à la
radiothérapie. Concernant les anthracyclines, nous avons montré
que les formes liposomales avaient une biodistribution intracérébrale (i) supérieure à celle obtenue avec la doxorubicine non liposomale, (ii) préférentielle au niveau de la tumeur par rapport au tissu cérébral sain (iii) intratumorale supérieure à celle observée en
sous-cutané. Nous avons déterminé le meilleur schéma thérapeutique pour obtenir une concentration intratumorale optimale durant
la radiothérapie. Les résultats de ces expérimentations nous ont
permis d’élaborer un protocole de traitement des gliomes malins
(phase I puis II) par une doxorubicine liposomale et de métastases
cérébrales de carcinome mammaire (phase I). Concernant le gefitinib, nous avons observé une importante radiopotentialisation
sur 2 lignées de glioblastome ainsi qu’une nette modification de la
vascularisation tumorale.
Preclinical models of human renal cell carcinoma in
nude mice directly from patients.
Auteur : L. Thomas, T. Charles, V. Lindner, S. Danilin, V. Dormoy, S. Rothhut, D. Jacqmin, H. Lang, T. Massfelder
Affiliation(s) : Inserm U682, Equipe Cancer du Rein et Physiopathologie Rénale, Faculté de Médecine, Strasbourg
Résumé : Human renal cell carcinoma (RCC) remains resistant
to therapy despite anti-angiogenic strategies, such as sunitinib.
New therapeutic options are thus needed. RCC is heterogeneous
for a same patient and show high cytogenetic variability among
patients. Preclinical validations of treatments should be done on
reliable models taking into account such parameters. One priority
in R&D is to accelerate proof of principle through translational research, to allow a better evaluation of clinical potential of the therapy studied by identifying biomarkers at the preclinical level. Such
strategy paves the way to personalized medicine. Actual models,
obtained from tumorigenic clonal cell lines not reflecting the tumor
in situ, are inadequate. The tumor xenografted nude mice model
with freshly harvested human RCC is today the most pertinent but
it is still poorly represented because it is difficult to developp and
necessitates a close collaboration with a department of urology.
Since March 2007, tumor and normal corresponding tissues of 127
patients (all stages and grades) with sporadic RCC were obtained
from the Urology department of the New Hospital of Strasbourg.
Tumor fragments were xenografted sub-cutaneously and orthotopically in 5 weeks nude male mice using a secret experimental approach. Tumors that have grown were sequentially retransplanted
until the fourth passage. Histopathologic, transcriptomic, genomic,
proteomic and metabolomic studies were performed in specialized
laboratories.
The tumor take rate was 14.6% and 8.2%, and the duration between grafting and growth was 3 and 6 months for sub-cutaneous
and orthotopic implantations, respectively, and did not correlate
with sex, histology, stage, Fuhrman grade, angioinvasion and
ischemia. Six models are still established. Histopathological parameters were conserved during sequential passages. Molecular
parameters are currently under investigation. The effects of sunitinib, everolimus and sorafenib on tumor growth were measured
in 6 tumors. Tumor growth arrest was observed in models depending on drug used. Molecular parameters will be analyzed to find
biomarkers of response.
These models should help researchers, clinicians and pharmaceutical companies to developp new therapies for RCC patients
depending on tumor’s characteristics.
21
20 novembre
Session
Épidémiologie : de la qualité de vie aux déterminants sociaux
Analyse longitudinale de la qualité de vie dans un
essai de phase III randomisé auprès de patients
ayant un cancer du pancréas métastatique.
RC
Auteur : E. Maillard1, L. Dahan2, J.F. Seitz2, E. Mitry3, M. Ychou4,
M. Gasmi5, J.L. Raoul6, C. Mariette7, L. Bedenne1, F. Bonnetain1
Affiliation(s) : 1 Fédération Francophone de Cancérologie Digestive, INSERM U866, Dijon
2
CHRU de Marseille AP-HM, Marseille
3
Hôpital Ambroise Paré AP-HP, Boulogne
4
Centre Val d‘Aurelle, Montpellier
5
Hôpitaux Nord de Marseille AP-HM, Marseille
6
Centre Eugène Marquis, Rennes
7
CHRU de Lille, Lille
Résumé : Contexte : L’essai FFCD de phase III comparant LV5FU2 puis Gemcitabine(bras A) versus la séquence inverse (bras
B) chez des patients atteints d’un cancer du pancréas métastatique, n’a pas démontré de différence significative sur la survie
globale. Pour comparer longitudinalement la qualité de vie (QdV)
selon les bras de traitement, nous avons exploré des définitions
du temps jusqu’à détérioration définitive (TDD) d’un score de QdV
selon la valeur minimale d’une différence de score ayant un sens
clinique (DSC).
Méthode : La QdV a été évaluée à l’aide du QLQ-C30 de l’EORTC
toutes les 8 semaines jusqu’au décès. Les TDD des scores de
Santé globale (SG), santé mentale, santé physique, fatigue et
douleur, intervalle de temps entre la randomisation et l’occurrence
d’une DSC>5 points sans amélioration ultérieure>5 points ou sans
aucun score disponible, ont été estimés à l’aide de la méthode de
Kaplan Meier et comparés par des tests du Log-Rank. Ces analyses ont été répétées en utilisant une DSC de 10 points, puis en
incluant les décès comme événement.
Résultats : Entre 08/2003 et 05/2006, 102 pts dans le bras A et
100 pts dans le bras B ayant un cancer du pancréas métastatique,
OMS 0-2 et sans chimiothérapie antérieure ont été randomisés.
Seuls 179 pts ont complété au moins un questionnaire de QdV
(89%). Pour une DSC de 5 ou de 10 points, le TDD des 5 scores
ne diffère pas selon le bras de traitement. Environ 25% des pts
ont une détérioration>5 et 15%>10 points. En intégrant le décès
comme événement avec une DSC de 5 points, le TDD médian
du score SG est de 5.2 mois (4.3-6.2) dans le bras A et 6.1 mois
(5.1-8.5) dans le bras B (Log-Rank p=0.50). Le modèle de Cox
multivarié montre que la localisation tumorale et la progression
sont significativement associées avec les TDD (p<0.05).
Discussion : La progression a un impact négatif sur la QdV. Les
modalités d’analyses de QdV employant les techniques d’analyse
de survie tiennent compte des données manquantes en offrant une
interprétation plus «classique» des résultats par les cliniciens.
22
Utilisation des typologies territoriales dans l’étude
des déterminants sociaux des hémopathies
lymphoïdes dans cinq départements français
disposant d’un registre de cancers.
RF RC
Auteur : M. Hägi1,7, A. Griffond-Boitier2, S. Grandjean1,7, A.
Buémi3,7, P. Grosclaude4,7, S. Olteanu5,7, F. Poncet6,7, M. Velten5,7,
D.A. Vuitton1,7, L. Daubisse-Marliac4,7, M. Colonna6,7, A. Danzon1,7
Affiliation(s) : 1 Registre des Tumeurs du Doubs, CHU de Besançon, EA 3181 Université de Franche-Comté, Besançon
2
Laboratoire ThéMA «Théoriser et modéliser pour aménager»,
UMR CNRS 6049, Université de Franche-Comté, Besançon
3
Registre des Cancers du Haut-Rhin, Mulhouse
4
Registre des Cancers du Tarn, Albi
5
Registre des Cancers du Bas Rhin, Strasbourg
6
Registre des Cancers de l’Isère, Grenoble
7
Réseau français des registres de cancer Francim, Toulouse
Résumé : Contexte : L’impact de l’environnement social et des
conditions de vie sur le risque de survenue d’une hémopathie
lymphoïde est encore peu connu. L‘objectif de notre étude est
d‘analyser le lien entre incidence des hémopathies lymphoïdes et
niveau socio-économique à partir des données de 5 départements
français disposant d’un registre de cancers (Doubs, Isère, BasRhin, Haut-Rhin, Tarn).
Méthode : Le découpage en Ilots Regroupés pour l‘Information
Statistique (IRIS) de l’INSEE a été utilisé. Deux typologies territoriales ont été développées, basées sur les indicateurs du recensement général de la population : une typologie « globale »
distinguant 7 types de territoires et une typologie « spécifique »,
analysant séparément les territoires ruraux et les zones urbaines
et périurbaines, distinguant 9 types de territoires. Un modèle
bayesien multiniveaux spatialisé a été utilisé pour modéliser le
nombre de cas observés de cancers par IRIS (modèle de Poisson). Les cas incidents d’hémopathies lymphoïdes diagnostiqués
entre le 1er janvier 1990 et le 31 décembre 2003 dans l‘un des
cinq départements ont été inclus. Deux pathologies témoins ont
également été étudiées afin de valider les typologies construites :
le cancer du poumon et les cancers ORL.
Résultats : Le risque d’hémopathie lymphoïde est apparu plus
important dans les zones caractérisées par un niveau socioéconomique élevé, plus particulièrement en zones urbaines et
périurbaines. Les liens déjà connus entre cancers du poumon et
ORL et niveau socio-économique ont été retrouvés : risque important en milieu urbain et dans les milieux les plus défavorisés, ainsi
que dans certaines populations aisées à forte proportion de cadres.
Discussion : Cette étude a permis de mettre en évidence une
incidence des hémopathies lymphoïdes particulièrement élevée
au sein des populations les plus favorisées. Ces résultats seront
approfondis par une analyse sociologique suivie d’une étude castémoins.
20 novembre
Session
Progression tumorale L’expression de l’IP-10 à partir des PBMC reflète la
progression tumorale du mélanome in vivo.
RT
Auteur : F. Antonicelli, J. Lorin, S. Kurdikowsky, S. Gangloff1, J.
Sallenave2, R. Le Naour1, W. Hornebeck, F. Grange, P. Bernard
Affiliation(s) : 1 Service de Dermatologie et CNRS UMR 6237,
EA 3796, URCA, Reims
2
INSERM U874, Institut Pasteur, Paris
Résumé : La progression tumorale du mélanome est en partie liée à la réponse immunitaire du malade qui participe via les
lymphocytes à la réaction stromale péri-tumorale. Le but de la
présente étude était de rechercher un lien entre l’état de progression tumorale clinique du mélanome et le profil des cytokines
sécrétées par les PBMC des malades, ainsi que leur capacité à
moduler la réaction stromale de cellules de mélanome in vitro.
L’étude a été réalisée à partir de PBMC préparés sur gradient de
Ficoll-Hypaque, provenant de malades atteints de mélanome en
rémission (n=10) ou présentant des métastases évolutives (n=10)
et de sujets normaux (n=10). L’effet inhibiteur des PBMC a été
étudié soit par contact direct, soit via leur surnageant sur l’invasion
in vitro de cellules de mélanome SK-Mel28 à travers un gel de
matrigel en système Transwell®. Le profil de sécrétion de 30 cytokines par les PBMC a été déterminé par protein array selon la
technologie Luminex (CliniSciences®). La modulation de l’invasion
tumorale in vitro était également étudiée après ajout des cytokines
d’intérêt définies par protein array. L’effet de l’IP-10 a aussi été
étudié in vivo dans un modèle murin (souris C57BL/6) avec injection sous-cutanée de cellules de mélanome B16F1.
Les résultats sur l’invasion des cellules de mélanome montrent
un effet par contact direct des lymphocytes circulants dépendant
du stade évolutif de la maladie (inhibiteur chez les malades en
rémission). Les effets étaient encore plus nets avec les milieux
de sécrétion des lymphocytes sanguins, suggérant le rôle crucial
des cytokines sécrétées dans la régulation de l’invasion tumorale
des cellules de mélanome. L’augmentation de la sécrétion d’IP10, molécule angiostatique et chimioattractante, est le meilleur
marqueur biologique caractérisant les malades en rémission de
mélanome. Son effet inhibiteur direct sur l’invasion tumorale in vitro
est démontré ici pour la première fois et confirmé in vivo (modèle
murin).
Grape polyphenols prevent C26 adenocarcinoma
growth and neovascularization.
RF
Auteur : A. Walter1, N. Etienne-Selloum1, D. Brasse2, H. Khallouf1, M.C. Rio3, A. Beretz1, V. Schini-Kerth1
Affiliation(s) : 1 Laboratoire de Biophotonique et Pharmacologie, UMR 7213 CNRS, Université de Strasbourg, Faculté de
Pharmacie, Strasbourg
2
Institut Pluridisciplinaire Hubert Curien, UMR 7178 CNRSIN2P3, Université de Strasbourg, Strasbourg
3
IGBMC, CNRS/INSERM U184 /Université de Strasbourg,
Strasbourg
Résumé : Introduction : Several lines of evidence suggest that colon cancer could be prevented by regular consumption of fruits and
vegetables, which are rich sources of polyphenols. The aim of the
present study was to determine whether Red Wine Polyphenols
(RWPs) prevent tumor growth.
Methods : C26 cells, derived from mice colon carcinomas, were
subcutaneously injected into BALB/c mice. Two days later, RWPs
(100 mg/kg/day) or vehicle were given in the drinking water for 26
days. The tumor macrovessel density was assessed by high definition microCT, and the microvessel density by immunohistochemistry. A proliferation index (Ki67), apoptosis (TUNEL, activated caspase-3) and the expression level of pro-angiogenic factors (VEGF,
MMPs) and tumor suppressor genes (p21, p16, p53 as determined
in tumors). In addition, the effect of RWPs on aberrant crypt foci
(ACF) formation was determined in a model of azoxymethaneinduced colon cancer in rats.
Results : After treatment with RWPs, tumor size was significantly
reduced by 30% compared to control. The vessel density assessed
by microCT and immunohistochemistry, was reduced by 40 % and
by 47 %, respectively in the RWPs-treated group. This effect was
associated with a decreased expression level of VEGF, MMP-2
and MMP-9 in tumor cells. Moreover, RWPs reduced by 61% the
proliferating index and increased by 81% the apoptotic index associated with high caspase-3 activity in tumor cells. RWPs also
induced the expression of tumor suppressor genes such as p16,
p21, p53 and p73 in tumor cells. Finally, treatment by RWPs reduced by 50% the number of ACF in colon.
Conclusions : RWPs reduced tumor growth by preventing tumor
neovascularisation and by inducing tumor cells apoptosis through
the expression of tumor suppressor genes. Additionally, RWPs inhibited the formation of pre-neoplasic lesions in colon. Altogether,
these findings indicate that RWPs have potent anti-cancer properties.
23
20 novembre
Nanostructured active materials for bone metastasis
prevention.
RT
Auteur : D. Vautier, M.C. Rio, J.C. Voegel, N. Benkirane-Jessel
Affiliation(s) : INSERM U595, IGBMC, Strasbourg
Résumé : The main objective of this project concerns the buildup
of a biomaterial aimed at (i) preventing inflammation and bone metastasis in the site of implantation, (ii) preventing in situ bone metastasis invasion after ablation, and (iii) bone repair. The proposed
ways are highly innovative and consist in a simple and progressive
spraying of all the elements constituting finally the biomaterial.
Considerable efforts have been devoted to the design of structured
materials with functional properties. Polyelectrolyte multilayer
films are now a well-established concept with numerous potential
applications, in particular as biomaterial coatings. This technique
allows the preparation of nano-structured architectures exhibiting
specific properties in terms of control of cell activation and the
development of local drug delivery systems. In this study, we
used this nanostructured system comprising of poly-(L-lysine),
β-cyclodextrin (CD) and PLL-CD (2:1) as a reservoir for an active
drug, the bisphosphonate Risedronate, in order to test its efficacy
on inhibition of cancer cell invasion in vitro and prevention of
cancer-induced bone metastases in animals. When incorporated
into the cavity of CD covalently coupled to PLL, the in-vitro and invivo inhibitory activity of Risedronate was substantially improved.
List of publications
- J essel et al. Short-time tuning of the biological activity of
functionalized polyelectrolyte multilayers. Adv. Functional
Materials, 2005, 15, 648-654
-S
chultz et al. Polyelectrolyte multilayers functionalized by a
synthetic analogue of an anti-inflammatory peptide, alpha-MSH,
for coating a tracheal prosthesis. Biomaterials, 2005, 26, 26212630
-G
angloff et al. Biologically active lipid A antagonist embedded
in a multilayered polyelectrolyte architecture. Biomaterials, 2006,
27, 1771-1777
- J essel et al. Multiple and time scheduled in situ DNA delivery
mediated by β-cyclodextrin embedded in a polyelectrolyte
multilayer. Proc. Natl. Acad. Sci (USA), 2006, 103, 8618-8621
-D
ierich et al. Bone formation mediated by growth factors
embedded in a polyelectrolyte multilayer film. Advanced
Materials. 2007, 19, 693-697
-N
adiri et al. Cells apoptosis Control by BMP-4 and Noggin
embedded in a polyelectrolyte multilayer film. Small, 2007, 3, 9,
1577-1583
-Z
hang et al. Nano letters, 2008, 13;8(8):2432-2436
-G
rossin et al. Step by step build up by spraying of cell containing
biologically active stratified architectures aimed to tissue
engineering. Advanced Materials 2008. in press
-D
aubine et al. Nanostructured system as drug delivery for bone
metastasis prevention. (Submitted)
Session
Nouveaux marqueurs Une nouvelle protéine ΔCD20, codée par un
nouveau transcrit alternatif du gène CD20 associée
à la résistance au Rituximab. Marqueur moléculaire
potentiel des hémopathies B.
RF
Auteur : C. Henry, M. Deschamps, P.S. Rohrlich, J.R. Pallandre, J.P. Rémy-Martin, C. Grandclément, F. Garnache-Ottou,
E. Deconinck, E. Robinet, P. Tiberghien, C. Borg, C. Ferrand
Affiliation(s) : INSERM UMR645, EFS-BFC, Laboratoire de
thérapeutique immuno-moléculaire des cancers, Besançon
Résumé : La molécule CD20 est un marqueur spécifique des
lymphocytes B, exprimée à la fois sur les cellules normales et
leucémiques. Cette protéine est la cible de l’anticorps monoclonal
Rituximab (Rx) utilisé en immunothérapie.
Par RT-PCR, nous avons identifié et caractérisé un nouvel
épissage alternatif du gène CD20. Cet ARNm (ΔCD20) délété
de la majeure partie de l’exon 3 jusqu’à l’exon 7 est détecté dans
différentes hémopathies B (lymphomes, leucémies), dans des
lymphocytes B (LB) activés in vitro ou transformés par EBV. Il n’a
pas été détecté dans des LB CD19+ ou CD20+ purifiés de moelle
osseuse ou sang de donneurs sains. Ce marqueur pourrait ainsi
constituer un marqueur moléculaire diagnostique et de suivi des
hémopathies B, comme nous l’avons illustré à travers 2 exemples.
Nous avons également mis en évidence par western blot que cet
ARNm épissé codait pour une protéine de 15-17Kd, délétée de la
majeure partie des 4 segments transmembranaires.
De manière très intéressante, sur des modèles de résistance
au Rx, nous avons observé une augmentation de l’ARN et de la
protéine ΔCD20 liée au traitement par Rx. Nos résultats montrent
également que la protéine ΔCD20 est associée à la protéine CD20
et module ainsi son expression.
Enfin, à partir de modèle de souris transgéniques HLA, nous
avons pu obtenir une réponse T cytotoxique CD8 contre un
peptide spécifique de la zone de jonction de l’épissage. Chez
l’homme, une réponse T a pu être déclenchée à partir de
cellules dendritiques chargées en peptide de jonction ΔCD20,
Ces résultats suggèrent que ΔCD20 pourrait être une cible
thérapeutique intéressante pour améliorer le traitement par Rx,
par des approches d’immunothérapie anti-tumorale.
En conclusion, nous dérivons l’existence d’un épissage du gène
CD20, codant pour une protéine impliquée dans les résistances
au Rx, par modulation de l’expression de CD20 sauvage. Ce
nouvel ARN ou cette nouvelle protéine pourrait constituer une cible
intéressante pour améliorer les traitements.
SOX-2 is an Oncogene Activated by Recurrent
3q26.3 Amplifications in Lung Squamous Cell
Carcinomas.
RF
Auteur : T. Hussenet*, S. Dali, J. Exinger, B. Monga, B. Jost,
24
D. Dembelé, N. Martinet, C. Thibault, J. Huelsken, E. Brambilla
and Stanislas du Manoir*
*Co-corresponding authors
Affiliation(s) : IGBMC, Cancer Biology Department, Strasbourg
Résumé : Squamous Cell Carcinoma (SCC) of the Lung is a frequent and aggressive cancer type. Gene amplifications, a known
activating mechanism of oncogenes, target the 3q26-qter region as
one of the most frequently gained/amplified genomic site in SCC of
various localizations. Here, we used array Comparative Genomic
Hybridization to delineate the consensus region of 3q26.3 amplifications in lung SCC. We show that recurrent amplifications occur
in about 20% of the cases (3 independent cohorts, 136 tumors in
total) and map to a core region of 2 Mb which encompasses SOX2,
coding for a transcription factor. SOX2 intense immunostaining is
frequent in nuclei of lung SCC (67% of tumors) indicating potential
active transcriptional regulation by SOX2 in a majority of tumors.
Analyses of the transcriptome of Lung Squamous Cell Carcinoma,
SOX2-overexpressing lung epithelial cells and Embryonic Stem
Cell (ESC) reveals that SOX2 contributes to activate ESC-like molecular phenotypes and provide clues on the deregulated genes
involved in the malignant phenotype. Finally, Sox2 over-expression
renders human lung bronchial epithelial cells tumorigenic upon
their implantation in immunocompromised mice. Our results newly
and clearly designate the SOX2 transcription factor, a major regulator of stem cell function, as a pleoitropic oncogene and a driver
gene of the recurrent 3q26.33 amplifications in lung SCC.
Le CD148, un marqueur de surface potentiel des
hémopathies lymphoïdes chroniques identifié par
approche protéomique.
RT
Auteur : L. Miguet, G. Béchade, L. Fornecker, E. Zink, C. Felden, C. Gervais, R. Herbrecht, A. van Dorsselaer, L. Mauvieux,
S. Sanglier-Cianferani.
Affiliation(s) : Laboratoire de Spectrométrie de Masse BioOrganique, ECPM, UMR/CNRS 7178, Institut Pluridisciplinaire
Hubert CURIEN, Universite de Strasbourg
Laboratoire d’Hématologie, CHU Strasbourg
[email protected]
Résumé : Contexte : Le diagnostic des hémopathies lymphoïdes
chroniques B (HLCB) repose aujourd’hui sur la morphologie et
l’immunophénotypage, les techniques cytogénétiques et moléculaires. Cependant le diagnostic par ces techniques usuelles
est encore trop souvent difficile ou ambigu, ce qui se fait au
détriment du choix du traitement le plus adapté et du suivi des
patients. De nouveaux marqueurs de surface utilisables en routine en clinique sont donc nécessaires pour mieux préciser le
diagnostic et orienter des explorations plus spécialisées.
Méthode : Pour ce faire, nous avons entrepris de rechercher les
25
20 novembre
protéines exprimées à la surface des cellules de HLCB par une
approche protéomique combinant la spectrométrie de masse et
l’utilisation d’un matériel cellulaire original, les microparticules
membranaires1,2. La mise en évidence d’une expression différentielle de protéines de surface dans le cas des HLCB permettrait ainsi de disposer d’une cible supplémentaire accessible aux
techniques immunologiques usuelles du diagnostic.
Résultats/Discussion : L’étude de différentes HLCB (lymphome
du manteau, lymphome à petites cellules et leucémie lymphoïde
chronique) a permis de mettre en évidence l’expression différentielle d’une protéine particulière : le CD148, récepteur membranaire à activité phosphatasique, dans le cas du lymphome
du manteau3. Cette différence d’expression a été confirmée par
cytométrie en flux chez 158 patients et 30 témoins.
Une expression élevée du CD148 est donc révélatrice du diagnostic du lymphome du manteau avec une spécificité de 91%
et une sensibilité de 78% (avec une valeur de fluorescence du
CD148 > 2 fois la valeur moyenne des contrôles). Cette étude
est une des premières où une approche protéomique a permis
la mise en évidence d’un biomarqueur potentiellement utilisable
en routine clinique.
Références
1
Miguet L, et al. Proteomics. 2006, 1, 153-71.
2
Miguet L, et al. Subcell Biochem. 2007; 43, 21-34.
3
Miguet L, et al. J Proteome Res. 2009, Epub in press
A cytomic core facility dedicated to clinical research.
RT
Auteur : G. Faure, M.C. Béné, V. Latger-Cannard, K. Montagne, M. De Carvalho, F. Plénat, E. Luporsi, T. Lecompte
Affiliation(s) : Pôle Laboratoires, Commission REDIF, CHU
Nancy Brabois
CLCC Alexis Vautrin, Nancy
CICP-Cancérologie, Nancy
Résumé : The cytomics concept covers the diverse means allowing for an extensive analysis of cell subsets characteristics down to
the level of individual cells. Cytomics covers a broad array of multiparametric (from 5 to at least 20) definition of various immunophenotypic and functional parameters of cell subpopulations. It allows
to assign cells to a well defined cell lineage, characterize their
differentiation stage and evaluate their functional capacities, such
as activation, ageing, pathological status. Cytomics through the
combination of morphological and immunological markers, can be
applied to normal or pathological cells (lymphocytes, monocytes,
endothelial cells, platelets, microparticles…) from peripheral blood,
bone marrow, biological fluids, and from cells eluted from tissues.
Cytomic studies of discrete and rare cells can now be used as a biomarker approach for diagnosis, follow-up and prognostic studies
of patients with various chronic or acute pathologies of inflammatory or neoplastic origin. Rare events detection and quantification
is the future challenge of clinical research which can now be conceivable with the new array of commercially available equipments.
This cytomics core facility will include three complementary equipments for multiparametric characterization of rare events:
- A multilaser multicolour flow cytometer allowing to use new fluorochromes and develop new techniques for the definition of discrete
26
cells (Treg, NKT, dendritic cell subpopulations, minimal residual
disease, platelets…) and microparticles.
- The Cell Search Veridex allowing to detect and quantify up to
10-7 cells in a quasi automated fashion. This equipment has been
validated as a very powerful tool to detect circulating tumoral epithelial cells (CTC) in metastatic breast, prostate, colorectal cancer and thus establish CTCs as a new prognostic biomarker for
adjuvant therapy protocols. It can also quantify endothelial cells in
inflammatory disorders and for follow-up of anti-angiogenic therapies. A preparative methodology opens new fields of cell isolation
for fundamental research
- The AMNIS system combining flow cytometry and image analysis
techniques with a powerful software allows a direct observation of
cell markers in individual cells, at a membrane, cytoplasmic and
nuclear levels and more efficient functional analysis of cells and
even cell interactions.
These equipments will be accessible in a mutualized fashion for
the developments of clinical research projects according to good
practice procedures of biological and clinical research from various
medical structures of the interregional area.
Mise en place d’un réseau national d’analyse
statistique des données de protéomique clinique.
RT
Auteur : C. Truntzer1, D. Maucort-Boulch2, N. Molinari3, P. Roy2
Affiliation(s) : 1 Plateforme Protéomique CLIPP IFR Santé Stic,
CHU Dijon
2
Laboratoire Biostatistique Santé, Hospices Civils de Lyon,
UMR5558, Université Lyon I
3
Laboratoire de Biostatistique, Université Montpellier 1, BESPIM, CHU de Nîmes
Résumé : A l’image des développements faits autour des données de génomique et transcriptomique, les outils statistiques
propres à la protéomique connaissent actuellement un essor considérable. Plusieurs laboratoires de recherche en mathématiques
appliquées travaillent en parallèle sur ce type de données.
Pour centraliser leurs forces et répondre au mieux aux besoins
des cliniciens souhaitant identifier et valider de nouveaux biomarqueurs protéiques, un réseau national d’analyse statistique des
données de protéomique clinique se constitue. Ce réseau se crée
à l’initiative de plusieurs équipes de chercheurs impliquées dans
des développements méthodologiques et dans l’application de ces
méthodes en protéomique clinique, tout particulièrement dans le
domaine de la cancérologie.
L’objectif majeur de ce réseau est de lever les différents verrous spécifiques à l’analyse statistiques de ces données. Seront
abordés les aspects de pré-traitement des données, d’erreurs de
mesure, de contrôle de qualité, de reproductibilité, de planification des études, de puissance des études visant à l’identification
ou à la validation de biomarqueurs, de sélection des modèles et
d’intégration des données clinico-biologiques. L’adaptation des
méthodes statistiques usuelles à ce nouveau domaine de recherche sera une priorité.
L’axe majeur du réseau demeure la recherche translationnelle, de
la méthodologie vers le patient.
Session
Cibles thérapeutiques et traitements innovants
Les composés dérivés du Ruthénium :
Développement d’une nouvelle classe de
chimiothérapies dotée d’une neurotoxicité réduite
et agissant indépendamment de p53.
RF
Auteur : X. Meng, M. Leyva, M. Sidhoum, P. Wlosik, A. Boos,
S. Harlepp, P. Hébraud, P. Bischoff, C. Sirlin, M. Pfeffer, J.P.
Loeffler, C. Gaiddon
Affiliation(s) : INSERM U692, Strasbourg
Résumé : Malgré le développement de thérapies anticancéreuses
dites ciblées, les chimiothérapies cytotoxiques, tel que les dérivés
du platine, sont encore largement utilisées dans les traitements de
nombreux cancers. Toutefois, l’activité anticancéreuse des chimiothérapies s’accompagne de deux types de complications : des
toxicités sur plusieurs organes (neurotoxicité) et des mécanismes
de résistances.
Dans ce contexte, nous avons synthétisé et caractérisé de nouveaux Composés Dérivés du Ruthénium (RDC) qui appartiennent
à la famille des organométalliques comme les dérivés du Platine.
Nous avons analysé leur potentiel anticancéreux via des expérimentations in vitro et in vivo. Nous avons ainsi montré que l’un de
ces composés, le RDC11, a une activité anticancéreuse comparable à celle du Cisplatine sur des modèles tumoraux syngéniques
ou xénogreffes (glioblastomes) tout en présentant deux avantages
importants : une toxicité plus faible et une activité sur des lignées
résistantes au Cisplatine, répondant ainsi aux limites du Cisplatine.
Par ailleurs, nous avons analysé le mode d’action du RDC11 sur
des gliomes. Nos travaux ont démontré que le RDC11 agit via des
mécanismes d’action multiples. L’un de ces mécanismes implique
le stress du réticulum endoplasmique et en particulier le facteur
pro-apoptotique CHOP. Cette activation s’effectue indépendamment de p53. D’autres mécanismes d’action originaux ont été
identifiés par le biais d’une analyse globale et comparative des
transcriptomes de cellules traitées au RDC11 ou au cisplatine,
démontrant l’existence de mécanismes communs et divergeants.
Le RDC11 fait l’objet d’expérimentations additionnelles dans le
but de l’amener jusqu’au stade de développement préclinique. En
complément du RDC11, nous avons identifié d’autres composés
avec des mécanismes moléculaires différents, suggérant qu’ils
pourraient avoir un spectre d’action différent de celui du RDC11,
ouvrant ainsi de nouvelles opportunités en terme de chimiothérapies.
Génotypage KRAS dans les cancers colorectaux
métastatiques : analyse comparative par les
techniques de PCR-RFLP, PCR-Taqman et HRM.
RT
Auteur : A.S. Chrétien1, M. Husson1, M. Rouyer1, C. Ramacci1,
P. Genin2, A. Leroux2, J.L. Merlin1
Affiliation(s) : 1 Unité de Biologie des Tumeurs, Centre Alexis
Vautrin, Nancy
2
Laboratoire d’Anatomie Pathologique, Centre Alexis Vautrin,
Nancy
Résumé : Contexte : La recherche de mutation du gène KRAS
est obligatoire pour envisager la prescription d’anticorps monoclonaux anti-EGFR dans les cancers colorectaux métastatiques.
La plateforme régionale lorraine de phénotypage KRAS réalise en
routine environ 700 analyses par an. Afin d’optimiser la qualité des
analyses et de réduire les délais de réponse, plusieurs approches
techniques sont envisagées.
Méthode : Cette étude rapporte une analyse comparative de 3
techniques : la PCR-RFLP, la PCR-Taqman et l’HRM, réalisées
à partir de 86 échantillons de cancer colorectaux adressés à la
plateforme de génotypage pour analyse en vue de prescription
d’anticorps anti-EGFR. Seules 7 mutations parmi 12 sont recherchées en PCR-Taqman.
Résultats : 6% des échantillons n’ont pu être analysés en raison
d’une fixation dans du liquide de Bouin. La population analysée est
conforme aux données bibliographiques avec 37% de mutations,
dont 77% sont situées dans le codon 12 (121GA, 121GT, 121GC,
122GA, 122GT, 122GC) et 23% dans le codon 13 (131GT). Une
excellente corrélation est observée entre les techniques PCRRFLP et HRM, dont les résultats concordent dans 99% des
cas. Globalement, les 3 techniques concordent dans 75 cas sur
81, probablement en relation avec les mutations rares non recherchées en PCR-Taqman. Les techniques les plus rapides sont
les techniques PCR-Taqman et HRM, la PCR-RFLP nécessitant
une double digestion enzymatique longue. A terme, la technique
HRM pourrait constituer une technique de screening permettant
d’identifier rapidement les échantillons porteurs de mutations, la
technique PCR-Taqman permettant de confirmer ces résultats et
d’identifier la mutation.
Discussion : Les résultats obtenus montrent une excellente corrélation entre les 3 techniques utilisées. Leur utilisation en routine
diagnostique est validée et permet de disposer de méthodes complémentaires qui garantissent un haut niveau de qualité de diagnostique moléculaire.
Fonction du gène Cdx2 au cours de l’émergence
des leucémies aigües.
RF
Auteur : B. Renouf, T. Saandi, I. Duluc, E. Martin, E. Solary, J.N.
Freund, C. Domon-Dell
Affiliation(s) : INSERM U682, Strasbourg
Résumé : Contexte : Cdx2 est un facteur de transcription qui est
exprimé spécifiquement dans l’intestin chez l’adulte et qui exerce
une fonction de suppresseur de tumeur dans l’épithélium intestinal. Récemment, une expression ectopique de Cdx2 a été mise
en évidence dans 80% des leucémies aigües myéloïdes et lym-
27
20 novembre
phoblastiques (AML et ALL). Dans un modèle d’irradiation/greffe
de moelle chez la souris, Cdx2 exerce une fonction oncogénique
dans le contexte ectopique des cellules hématopoïétiques.
Le but de notre travail est de comprendre comment le gène
homéotique Cdx2 exerce ses fonctions opposées : suppresseur
de tumeurs et anti-prolifératif dans l’intestin, oncogénique et prolifératif dans le tissu hématopoïétique. Notre hypothèse est que
la fonction de Cdx2 dépend du contexte cellulaire. Notre objectif
consiste à caractériser les partenaires moléculaires de Cdx2 dans
les cellules hématopoïétiques.
Méthode : Les partenaires de Cdx2 ont été purifiés par la technique de TAP-Tag (Tandem Affinity Purification) dans la lignée
leucémique humaine K-562 et la lignée cancéreuse colique humaine HCT116 et identifiés par spectrométrie de masse (collaboration avec l’équipe du Dr Alain Van Dorsselaers, LSMBO UMR
7509). Nous étudions la fonctionnalité de l’interaction entre Cdx2
et ses partenaires par une approche de perte ou de gain de fonction dans les cellules hématopoïétiques en analysant la prolifération cellulaire, l’apoptose et le pouvoir clonogénique.
Résultats : Actuellement, deux protéines ont retenu notre intention : une hélicase et un membre de la famille des facteurs de
transcription GATA. L’étude de l’importance des partenaires de
Cdx2 pour l’expression du pouvoir oncogénique de Cdx2 dans les
cellules leucémiques est en cours.
Discussion : Bloquer l’action oncogénique de Cdx2 en empêchant
son interaction avec ses partenaires pourrait constituer une approche thérapeutique nouvelle et originale des leucémies myéloblastiques et lymphoblastiques aiguës.
Membrane Hsp72 from tumor-derived exosomes
mediates p-Stat3 dependent function of myeloid
suppressor cells through the TLR2-MyD88 pathway.
RF
RT
Auteur : F. Chalmin, S. Ladoire, G. Mignot, J. Vincent, L. Apetoh, C. Rébé, F. Ghiringhelli
Affiliation(s) : INSERM U866, équipe « Avenir », Faculté de
Médecine et de Pharmacie, Dijon
Résumé : Myeloid suppressor cells (MDSCs) have been identified
in humans and mice as a population of immature myeloid cells
with ability to suppress T cell activation. MDSCs, which accumulate
in tumor bearing hosts, have been shown to contribute to cancer
development in mice and humans. Recent evidence suggests that
the transcriptional factor Stat3 is constitutively activated in many
mouse and human cancer cells : tumors that constitutively express
phosphorylated-Stat3 (p-Stat3) release some tumor derived factors that induced Stat3 activation in myeloid cells, a phenomenon
leading to MDSCs accumulation and immune suppressive activity.
However, the exact nature of these factors has not been investigated.
Here, we studied the factors released by 3 tumor cell lines that
constitutively expressed p-Stat3 and induced MDSCs suppressor
activity in a Stat3 dependent manner. Surprisingly, we showed that
tumor derived exosome (TDE) -and not a tumor derived soluble
factor- determines MDSCs Stat3-dependent suppressive activity.
Moreover, we could demonstrate that, in both mice and humans,
membrane Hsp72 from TDE triggers Stat3 activation in MDSCs
in a TLR2/MyD88 dependent manner through an autocrine pro-
28
duction of IL-6. Accordingly, targeting exosome production in vivo
using dimethylamiloride blunts the suppressive activity of MDSC
and enhanced the efficacy of cyclophosphamide treatment in three
different mouse tumor models. Finally, we also demonstrated that
this mechanism supporting suppressive MDSCs activity is relevant
in cancer patients. Collectively, our findings show for the first time
in both mice and human settings that membrane TDE associated
Hsp72 restrained tumor immune surveillance by supporting MDSCs suppressive functions.
Modulation of tumor molecular response to
cetuximab by PTEN silencing in HNSCC cell line :
impact on angiogenesis.
RF
Auteur : J. Mriouah1, C. Boura1, C. Ramacci1,2, J.L. Merlin1,2,
B. Faivre1
Affiliation(s) : 1 EA PREDICTHER-SIGRETO, Faculté de Médecine, Nancy Université.
2
Unité de Biologie des tumeurs, Centre Alexis Vautrin, Nancy
Résumé : Background: Cetuximab has been shown to be very potent for treatment of many cancers, including HNSCC in association with radiotherapy. However, several resistance mechanisms to
targeted therapies have been reported, among which loss of PTEN
expression. VEGF overproduction phenomenon is also reported in
resistance mechanisms.
As a main regulator of PI3K/AKT signalling pathway and because
this pathway is involved in angiogenesis control, we believe that a
loss of PTEN expression can lead to the overproduction of vascular endothelial growth factor (VEGF) and contribute to resistance
to cetuximab.
Methods: CAL27 human HNSCC cell line, sensitive to cetuximab, was transfected by PTEN-siRNA and exposed to cetuximab
(“siPTEN CAL27” cells). Cell growth inhibition and cytotoxicity
were evaluated using MTT assays and cells countings. Western
blot and Bioplex phospho-proteins array (BPA) assays were performed to evaluate PTEN and EGFR downstream signalling phosphoproteins expression. 48 hours after exposure to cetuximab, the
culture media were collected to serve as conditioned medium (CM)
for aortic ring culture. Aortic ring sprouting was investigated by
microscopy. The secretion of molecular proteins involved in angiogenesis regulation was evaluated in CM using BPA and Proteome
Profiler Array assay.
Results: In cells exposed to cetuximab, a significant increase in cell
proliferation and signalling proteins phosphorylation was observed
in siPTEN-CAL27 cells, correlated with a significant oversecretion
of VEGF. Surprisingly, CM from these siPTEN-CAL27 cells did
not induce sprouting of endothelial cells (EC) in aortic rings. CM
molecular characterisation shows changes in angiogenic balance.
Conclusions: In this study, we showed that loss of PTEN expression in CAL27 HNSCC cells leads to an increase in cell viability
and in VEGF secretion. We also show that VEGF is not the only
key protein involved in this angiogenic switch. The complexity level
of angiogenesis regulation could explain the failure of cetuximab
treatment in siPTEN-CAL27 cells.
Session
Nouvelles approches chirurgicales Réalité virtuelle et robotique : nouvelles technologies
appliquées à la recherche et au traitement des
cancers.
Figure 1 : Modélisations 3D précliniques et cliniques des
structures anatomiques et pathologiques.
RT
Auteur : L. Soler1, M. de Mathelin2, D. Mutter1, J. Marescaux1
Affiliation(s) : 1 IRCAD, 1 place de l’hôpital, 67091 STRASBOURG
2
LSIIT (UDS), IRCAD, 1 place de l’hôpital, 67091 STRASBOURG
Résumé : Les nouvelles technologies de la réalité virtuelle et de
la robotique offrent un nouvel espoir dans la lutte contre le cancer.
En effet, ces outils peuvent non seulement être utilisés de façon
bénéfique dans la mise au point de nouveaux traitements, mais
également dans la prise en charge opératoire actuelle des patients
quelle soit radiologique ou chirurgicale.
Nous avons ainsi développé un ensemble d’outils logiciels permettant dans une première étape préopératoire la modélisation 3D et
le suivi 4D des patients (Projet Européen FP7 PASSPORT). Le
logiciel VR-Render téléchargeable gratuitement, offre ainsi la possibilité de visualiser très rapidement et de façon tridimensionnelle
les images DICOM précliniques ou médicales. Le logiciel VR-Anat
permet quand à lui de délimiter de façon automatisée les structures anatomiques et pathologiques contenues dans l’image. Le
résultat peut alors être superposé à l’image initiale et visualisé en
3D avec VR-Render. Le logiciel VR-Planning permet ensuite de
planifier en la simulant, la thérapie opératoire
de destruction tumorale, qu’elle soit une thermoablation percutanée, ou bien un acte chirurgical de résection. De façon peropératoire, le logiciel AR-Surg offre enfin la possibilité de guider le
praticien dans son geste par la réalité augmentée qui fournit une
vision en transparence du patient.
Au delà des outils logiciels, les outils robotiques complètent
l’assistance opératoire par une assistance au geste. Pour la destruction par thermoablation, les projets en cours de développement nous ont permis d’aboutir à des premiers prototypes de robots d’insertion d’aiguilles pour le petit animal et pour les patients.
Sur le plan chirurgical, nous avons également développé de nouveaux systèmes robotisés pour la chirurgie mini-invasive et transluminale. Ces systèmes intègrent essentiellement l’automatisation
des gestes par l’asservissement visuel permettant d’atteindre précisément une tumeur grâce au suivi automatique temps réel du
mouvement des organes du patients.
L’utilisation préclinique sur le petit animal pour le traitement de cancers colorectaux, ou clinique pour des pathologies cancéreuses
digestives et endocrines, montre un bénéfice réel de ces systèmes
en offrant un meilleur diagnostique, une meilleure localisation des
lésions et un geste plus précis.
29
Figure 2 : Guidage per-opératoire par réalité augmentée pour le
foie, le pancréas et les parathyroïdes.
L’exérèse endoscopique de l’adéno-carcinome
nasal permet de réécrire son histoire diagnostique
et thérapeutique.
RT
Auteur : R. Jankowski
Affiliation(s) : CHU Nancy
Résumé : L’adénocarcinome nasal est un cancer qui se développe (presque) exclusivement chez les personnes exposées à
la poussière de bois avec un risque faible dès la première année
d’exposition qui devient majeur après 20 ou 30 ans d’exposition.
L’absence de dépistage systématisé, son apparition fréquente
après l’âge de la retraite, la banalité des signes d’appel entraînent
un diagnostic souvent tardif.
Le traitement de référence associe l’exérèse chirurgicale par voie
craniofaciale à la radiothérapie post-opératoire, avec une morbidité assez lourde et une survie autour de 60% à 5 ans. La majorité des récidives surviennent avant la 3ème année.
L’exérèse par voie endonasale endoscopique a permis de préciser
le comportement particulier de cette tumeur : le pédicule d’origine
se trouve dans la fente olfactive et donne naissance à un corps
tumoral volumineux qui refoule le labyrinthe ethmoïdal et la cloison
nasale et comble la cavité nasale : l’envahissement de la fosse
cérébrale antérieure au travers de la lame criblée se fait à partir du
pédicule et représente probablement le facteur pronostique majeur
(1). Ces données sont visibles radiologiquement. L’aspect TDM et
IRM de cette tumeur est suffisamment caractéristique pour permettre d’évoquer son diagnostic (2). Une nouvelle classification T
est en cours d’élaboration pour décrire ce comportement tumoral.
L’exérèse endoscopique de ces tumeurs centrée sur la fente et la
fosse olfactive (et non plus sur le labyrinthe ethmoïdal) améliore
significativement la morbidité chirurgicale et dans l’état actuel de
notre expérience le pronostic (survie à 3 ans de 82%).
Par ailleurs le développement initial de ces tumeurs dans la fente
olfactive devrait conduire à un dépistage beaucoup plus facile et
systématisé reposant sur un examen simple au cabinet ORL par
nasofibroscopie, et en cas de doute un TDM : toute opacité de la
fente olfactive est suspecte, surtout chez les travailleurs du bois.
Enfin une prévention basée sur le lavage des fosses nasales à
l’eau salée est envisageable.
Références :
1.Endoscopic surgery reveals that woodworkers adenocarcinomas originate in the olfactory cleft. R Jankowski, T Georgel,
JM Vignaud, B Hemmaoui, B Toussaint, P Graff, L Geoffrois, P
Henrot, MC Kaminsky. Rhinology 2007 ; 45 : 308-314
2.CT assessment of woodworkers’ nasal adenocarcinomas confirms origin in the olfactory cleft. T Georgel, R Jankowski, P
Henrot, C Baumann, S Kacha, B Toussaint, P Graff, MC Kaminsky, L Geoffrois, JM Vignaud. AJNR Am J neuroradiol 2009 ; 30
(7) : 1440-4
30
Résumés des communications affichées
Thème
Épidémiologie
N° 1
L’obésité viscérale : un facteur pronostique
indépendant chez les patients porteurs d’un cancer
colorectal métastatique traités en 1ère ligne par
bevacizumab.
RT
Auteur : B. Guiu, J.M. Petit, F. Bonnetain, S. Ladoire, S. Guiu,
J.P. Cercueil, D. Krausé, P. Hillon, C. Borg, B. Chauffert, F. Ghiringhelli
Affiliation(s) : CHU le Bocage et Centre Georges-François
Leclerc, Dijon
Résumé : Contexte : L’obésité est un facteur de risque de cancer colorectal. Le tissu adipeux secrète des facteurs pro-angiogéniques qui peuvent accélérer la croissance tumorale. La plupart des patients porteurs d’un cancer colorectal métastatique
reçoivent une chimiothérapie associée à un anti-angiogénique
(bévacizumab) en 1ère ligne. Le but de cette étude était de déterminer si le BMI, le taux de graisse sous-cutanée (GS) et le taux
de graisse viscérale (GV) avaient une influence sur la réponse
et la survie des patients métastatiques traités par bevacizumab
en 1ère ligne.
Méthode : Entre 2003 et 2008, 80 patients ont été traités
par chimiothérapie et bevacizumab en 1ère ligne au centre
Georges-François Leclerc à Dijon. Nous avons mesuré la
graisse sous-cutanée et la graisse viscérale sur les scanners
pré-thérapeutiques. Le BMI, le taux de GS et le taux de GV ont
été corrélés au taux de réponse à 2 mois, au temps jusqu’à
progression (TTP) et à la survie globale (OS).
Résultats : Durant le suivi (médiane=24 mois ; 95% IC, 19-30
mois), nous avons observé 64 progressions et 22 décès. Le
BMI, la GS et la GV étaient plus élevés chez les non répondeurs
(p=0.0022, p=0023 et p=00001 respectivement). Des valeurs de
BMI, de GS ou de GV supérieures à la médiane étaient significativement associées à l’absence de réponse à 2 mois. Le TTP
était significativement plus faible chez les patients avec un BMI
élevé (9 vs.12 mois, p=0.01) ou un taux de GV élevé (9 vs. 14
mois, p=0.0008). Un taux de GV élevé était associé à une OS
plus faible (p=0.0493). En analyse multivariée, un taux élevé de
GV était indépendamment associé avec la réponse à 2 mois,
le TTP et l’OS (p=0.008, p=0.005 et p=0.027 respectivement).
Conclusion : Dans cette étude, l’obésité viscérale est un facteur
prédictif de mauvaise réponse et un facteur pronostique majeur
chez les patients métastatiques traités en 1ère ligne par bévacizumab. Nos résultats restent à confirmer dans une cohorte
de validation.
N° 2
Systemic neoadjuvant versus adjuvant treatment in
breast cancer: population-based case-control study
using relative survival.
RC
Auteur : S. Dabakuyo1,2,4, A. Arnaud3, G. Créhange3, P. Maingon3, M.L. Poillot1,4, P. Arveux1,4, F. Bonnetain1,2,4
Affiliation(s) : 1 Breast and Gynecologic Cancer Registry of
Côte d’Or, Centre Georges François Leclerc, Dijon
2
Biostatistics and Epidemiology Unit, Centre Georges François
Leclerc, Dijon
3
Radiotherapy Department, Centre Georges François Leclerc,
Dijon
4
EA 4184, Faculty of Medicine, University of Burgundy, Dijon,
France.Centre Georges François Leclerc, Dijon
Résumé : Background: Despite clinical trials, the efficacy of
neoadjuvant chemotherapy remains uncertain. Based on the
Côte d’Or breast cancer registry data, a case-control study was
undertaken to study the efficacy of neoadjuvant chemotherapy,
using relative survival (RS) as the primary end point.
Methods: Cases were defined as receiving invasive primary
neoadjuvant chemotherapy followed by surgery and radiotherapy, whereas controls underwent surgery followed by adjuvant
chemotherapy and radiotherapy. The patients were matched
for cancer American Joint Committee on Cancer (AJCC) stage,
age (≤50 vs >50 years), date of diagnosis (1982-1999 vs 20002005) and the oestrogen receptors status (OR). The reverse Kaplan Meier method was used to estimate the potential follow-up
time. The Kaplan Meier method and log rank test were used to
estimate and compare the overall survival (all deaths). Multivariate Cox proportional hazards modelling was applied to assess
the independent prognostic effect for overall survival (OS). RS
was used to estimate excess mortality ratio in a generalized
linear model with a Poisson error structure.
Results: Based on registry data, 184 patients were matched.
The median potential follow-up time was 10 years [8 – 12] and
11 years [7 – 14] for cases and controls, respectively (logrank
p value = 0.0.1636). At the cut-off date, 29 (32%) and 39(42%)
deaths had occurred in cases and controls, respectively (logrank p value = 0.2514). OS at 1, 5 and 10 years were respectively 96%, 82% and 64% for cases and 97%, 72% and 62% for
controls. RS at 1, 5 and 10 years were respectively 99%, 83%
and 69% for cases and 99%, 76% and 60% for controls. Multivariate analyses showed that the use of neoadjuvant chemotherapy, independently of AJCC stage, age, date of diagnosis, OR
status and SBR, did not influence OS (HR=0.84[0.50 – 1.39],
p=0.488) and RS (HR=0.93 [0.53 – 1.64], p=0.80).
Conclusions: Despite a favorable trend, this population-based
case-control study failed to show any influence of neoadjuvant
chemotherapy on survival.
31
N° 3
Prevalence of human papillomavirus (HPV)
genotypes in eyebrow hairs, healthy skin, benign
cutaneous lesion, nonmelanoma skin cancers and
melanoma of nonimmunosuppressed individuals,
renal transplant recipients and HIV-infected patients
RC
Auteur : F. Aubin1, C. Biver-Dalle1, J.B. Ruer1, J.S. Guerrini1, T.
Gheit2, C. Mougin1, J.L. Prétet1, M. Tomassino2
Affiliation(s) : 1 Université de Franche Comté, EA3181, IFR133
et Centre Hospitalier Universitaire, Service de Dermatologie,
Besançon
2
IARC, Lyon
Résumé : Although the role of HPV infection in skin cancer is
suggested, the ubiquity of cutaneous HPV infection may indicate that HPV have no relevance in the genesis of skin cancer.
We conducted different studies in different groups of patients
and skin lesions with healthy skin controls and eyebrow hairs to
evaluate the prevalence of cutaneous HPV infection.
Materials and Methods: In a first study, 53 squamous cell carcinomas (SCC) from 40 renal transplant recipients (RTR), 50
benign epithelial skin lesions from 50 RTR with no history of
skin cancer and 51 SCC from immunocompetent patients were
investigated using PCR with two pairs of primers (MY09±MY11
and FAP59±FAP64). In a second study, 100 patients with cutaneous malignant melanoma diagnosed between 2002 and 2006
were included. Complementary wide excision (healthy skin) was
performed in 85 patients and was used as internal control. In
third study, the prevalence of HPV DNA in eyebrow hairs was
investigated in 63 HIV/AIDS patients 63, 50 immunocompetent
subjects and 50 RTR. After DNA extraction, 68 different HPV
types were studied using a multiplex PCR combined with microarray primer extension.
Results: HPV DNA was detected in 64% of SCC and 79% of
benign epithelial lesions from RTR (ns) and only in 37% of
SCC from immunocompetent patients (p <0.05). Significantly
more mucosal HPV were present in SCC from RTR. However,
the prevalence of cutaneous HPV was similar between these
groups (24.5%, 26%, and 12% respectively). We did not observe any statistical significant difference in terms of HPV DNA
prevalence in melanoma (38.8%) and in healthy skin from wide
excision (42.4%). The distribution of HPV genera and types was
similar in melanoma and HS, and beta-HPV were predominant
(30.6% and 31.8%). HPV DNA was detected in 86% of 63 HIVinfected patients, 76% of 50 immunocompetent subjects (ns)
and 90% of 50 immunosuppressed RTR (ns). However, the
median number of infecting beta HPV types was significantly
higher in HIV-infected patients (4 types) and in RTR (4.5 types)
than in immunocompetent subjects (2.7 types). In HIV-infected
patients, we did not observe any correlation between HPV DNA
prevalence and CDC clinical staging, HIV viral load, CD4 cell
count, and antiretroviral therapy. In RTR, HPV DNA detection
was not influenced by the immunosuppressive treatment (rapamycin-sirolimus versus ciclosporine, unpublished data).
Discussion: Our data do not support a role of HPV infection in
melanocarcinogenesis, Altogether, our results confim the ubi-
32
quity of cutaneous HPV infection and the frequency of occult
HPV infections. In particular beta HPV prevails in both immunocompetent and immunosuppressed subjects and in both healthy
skin, SCC and melanoma. However, the number of infecting
beta HPV types and/or specific HPV types, may be involved in a
sub-group of skin cancer.
Thème
Cancérogenèse viro-induite
N° 4
Expression des transcrits précoces d’HPV16.
RT
Auteur : J.L. Prétet1, M. Saunier1, C. Chaveriat1, V. Dalstein2, E.
Schwarz3, C. Mougin1
Affiliation(s) : 1 EA3181, IFR133, Université de Franche-Comté, Besançon
2
Laboratoire Pol Bouin, CHU Reims,INSERMUMRS903,Université de Reims Champagne-Ardenne, Reims
3
DKFZ, Heidelberg Allemagne
Résumé : Contexte : La charge virale (CV) en papillomavirus
humains (HPV) ainsi que l’intégration (estimée en déterminant
le ratio du nombre de copies du gène E2 / nombre de copies
du gène E6) de l’ADN d’HPV peuvent prédire un risque de lésions (pré)cancéreuses du col de l’utérus incidentes (CV>200eg
HPV16/103 cellules) ou prévalentes (CV>20.000eg HPV16/103
cellules ou E2/E6>0,5) (Saunier et al. 2008). Par ailleurs, le
processus de carcinogenèse induit par les HPV est lié à une
dérégulation de l’expression des gènes précoces E2, E6 et E7.
Notre objectif a été de déterminer si le niveau d’expression des
transcrits E2 et E6 d’HPV16 était corrélé à la charge virale ou
à l’intégration.
Méthode : Des PCR temps réel ciblant les gènes E2, E6 et albumine ont été utilisées pour mesurer la CV et évaluer le ratio
E2/E6. Des techniques de RTqPCR ont été développées pour
mesurer l’expression des transcrits E2, E6 et B2M dans des
cellules de frottis cervico-utérins. Nous avons sélectionné 836
prélèvements infectés par un HPV à haut risque. 392 abritaient
de l’ADN d’HPV16. Des ARN ont été extraits à partir de 98
échantillons.
Résultat : La proportion d’échantillons exprimant des transcrits
E2 et/ou E6 augmente avec la CV et avec l’intégration reflétée par le ratio E2/E6. L’expression des transcrits E2 et E6 est
maximale dans le groupe d’échantillons dont la CV est supérieure à 20.000eg ; elle est aussi maximale dans le groupe
d’échantillons avec un 0,5<E2/E6<0,8. De plus, l’expression
des transcrits codant E6 apparaît étroitement liée à la CV alors
que l’expression des transcrits codant E2 semble plutôt liée à
l’intégration.
Discussion : Ces données suggèrent que l’expression des
transcrits précoces d’HPV16, et en particulier celle de E6, est
d’avantage conditionnée par la charge virale que par le niveau
d’intégration.
N° 5
Structure fonction des oncoprotéines
papillomavirus humains oncogènes.
de
RF
Auteur : K. Zanier, A. Ould Sidi M’hamed Ould Sidi, S. Charbonnier, M. Masson, T. Ristriani, K. Luck, S. Fournane, Y. Nominé,
G.Travé
Affiliation(s) : Equipe Oncoprotéines, CNRS-UMR 7175-LC1,
ESBS, Strasbourg
Résumé : Papillomaviral E6 proteins participate to disruption of
cell-cycle controlling pathways for the sake of viral replication.
To achieve this they have evolved the capacity to bind (and often
degrade) many cellular proteins. Some E6 proteins also bind
nucleic acids of particular structures, such as four-way DNA
junctions. On the other hand, E6 sequences display relatively
strong variations throughout the different papillomavirus strains.
It is expected that these variations contribute to the variations
in tropism and pathogenicity observed for the different HPV
strains. Here we discuss several aspects of this topic in light of
the recent structural and functional data obtained on the HPV
E6 protein.
N° 6
Rôle du gène codant l’Amyloid β Precursor-Binding
Protein 1 (APP-BP1) dans la radiosensibilité d’une
lignée cellulaire cancéreuse de l’oropharynx HPVpositive.
RT
Auteur : S. Guihard, C. Macabre, L. Ramolu, G. Noël, J. Abecassis, A. Jung
Affiliation(s) : EA3430, Laboratoire de Biologie Tumorale,
Centre Paul Strauss, Strasbourg
Résumé : Contexte : Le papillomavirus humain (HPV) est un
facteur de risque pour la survenue de carcinome épidermoïde
de l’oropharynx. Ces tumeurs infectées par HPV sont supposées être particulièrement radio-sensibles. Nous avions précédemment identifié le gène APP-BP1 comme étant spécifiquement sous-exprimé dans ces tumeurs. APP-BP1 est un membre
de la cascade de NEDDYlation, et sa fonction est requise pour
la répression de l’activité transcriptionnelle de p53.
Méthode : Les niveaux d’expressions de gènes d’intérêt ont été
mesurés dans des lignées tumorales des voies aérodigestives
supérieures par qRT-PCR. La surexpression d’APP-BP1 a été
réalisée par transfection de cellules. La radiosensibilité des modèles cellulaires a été évaluée par test de prolifération cellulaire
et test de survie clonogénique après irradiation aux photons.
Résultats : L’analyse des niveaux d’expression du transcrit
E6/E7, et des gènes INK4Ap16 et CIP1/WAF1p21 nous a permis
de sélectionner les lignées SQ20B (HPV-négative) et SCC90
(HPV-positive) comme modèles d’étude. De plus, APP-BP1
est sous-exprimé dans la lignée SCC90 par rapport à la lignée
SQ20B dans un rapport similaire à celui observé entre tumeurs
HPV-positives et négatives. La lignée SCC90 est sensible de
manière dépendante de la dose de photons par rapport à la
lignée résistante de référence SQ20B. La surexpression d’APPBP1 dans les cellules SCC90 s’accompagne d’une augmentation de la résistance aux radiations ionisantes (SF 2 Gy=0.91)
en comparaison aux cellules SCC90 transfectées avec un vecteur contrôle (SF 2 Gy=0.46).
Discussion : APP-BP1 semble jouer un rôle dans la radiosensibilité des cellules SCC90. Il convient de déterminer si cet effet
dépend de l’activité transcriptionnelle de p53 ou passe par une
voie indépendante. De manière intéressante, un inhibiteur du
complexe APP-BP1/Uba-3 récemment décrit suggère que la
cascade de NEDDYlation est une cible thérapeutique potentielle
pour le traitement des cancers.
N° 7
NS1 cellular targets identification.
RF
Auteur : N. Paul1, W. Raffelsberger1, L. Brino1, A. Marchini2, O.
Poch1
Affiliation(s) : 1 IGBMC, Laboratoire de Biologie et Génomique
Intégratives, Strasbourg
2
DKFZ, Heidelberg, Allemagne
Résumé : Oncolytic viruses are strongly emerging as alternative
cancer therapies (1,3). They can reduce the incidence of spontaneous chemically induced and xenografts tumours in laboratory animals, while showing no apparent side effects (4,5). NS1,
a multifunctional protein, is considered to be a major mediator of
parvovirus induced cytotoxicy (6). However, the molecular mechanisms by which NS1 affects viral and cell transcription and
cytotoxicity remain poorly understood. In order to investigate
the role of NS1, besides the well caracterized transcriptional
activity on the parvoviral p38 promoter, we used an integrative
approach. It allowed us to intersect results from transcription
profiling and chIPchip experiments to identify potential targets
of NS1 on a genomewide level.
References
1
Tomanin R. and Scarpa M Why do we need new gene therapy
viral vectors? Characteristics, limitations and future perspectives of viral vector transduction. Current gene therapy. 4,
357372, 2004
2
Parato K, Senger D, Forsyth PA, Bell J. Recent progress in the
battle between oncolytic viruses and tumours. Nature Reviews
Cancer. 5:965976, 2005
3
Liu T. C., Galanis E. and Kim D. Clinical trial results with oncolytic virotherapy: a century of promise, a decade of progress.
Current opinion in molecular therapeutics. Nature clinical practice. 4, 101117, 2007
4
Cornelis J.J., Deleu L., Koch U. and Rommelaere J., Parvovirus oncosuppression. In: J.R. Kerr, S.F. Cotmore, M.E. Bloom,
R.M. Linden and C.R. Parrish, Editors, Parvoviruses, Hodder
Arnold, London (2006), pp. 365–378.
5
Cornelis J. J., Lang S. I., StrohDege A. Y., Balboni G., Dinsart
C., Rommelaere J.. Cancer gene therapy through autono-
33
mous parvovirusmediated gene transfer. Current gene therapy
2004;4(3):24961.
6
Nüesch, J. (2005). Regulation of nonstructural protein functions by differential synthesis, modification and trafficking, p.
275289. In M. E. Bloom, S. F. Cotmore, R. M. Linden, C.R.
Parrish, and J. R. Kerr (ed.), Parvoviruses. Hodder Arnold,
London, United Kingdom.
Thème
Cibles thérapeutiques
N° 8
Down-regulation of UHRF1 by epigallocatechin
gallate induces apotosis in Jurkat cells by reexpressing tumor suppressor genes.
RF
Auteur : M. Achour1, M. Alhosin1, E. Anselm1, G. Fuhrmann1,
J. Peluso2, D. Muller2, T. Chataigneau1, V.B. Schini-Kerth1, C.
Bronner1
Affiliation(s) : 1 UMR CNRS 7213, Laboratoire de Biophotonique et Pharmacologie, Strasbourg
2
UMR CNRS 7200, Laboratoire d’Innovation Thérapeutique,
Université de Strasbourg, Faculté de Pharmacie, Strasbourg
Résumé : Objectives: The aim of the present study was to investigate the role of UHRF1 (Ubquitin-like containing PHD and
Ring Finger domains 1) in the mechanism of action of epigallocatechin gallate (EGCG) induced-apoptosis and re-expression
of tumor suppressor genes. EGCG, the major polyphenol of
green tea extracts, exhibits anti-cancer activities through as
yet unknown mechanisms but probably involving re-expression
of tumor suppressor genes. UHRF1 is known for its cell cycle
regulation function, for its anti-apoptotic properties and for its
crucial role in the epigenetic code inheritance. Indeed, UHRF1 is
characterized by the presence of the SRA (Set and Ring Associated) domain able to recognize hemi-methylated DNA and to
recruit DNMT1 (DNA methyltransferase 1) for faithful duplication
of DNA methylation patterns.
Methods: Apoptosis was assessed by flow cytometry. Expression of UHRF1, DNMT1, p16INK4A and p73 were determined by
Western blot analysis.
Results: We showed, in the T-lymphocyte leukemic cell line
Jurkat, that down-regulation of UHRF1 by EGCG, up-regulated
tumor suppressor genes such as p16INK4A and p73. Moreover,
we observed that over-expression of UHRF1 down-regulated
the p73 expression in the presence of EGCG and counteracted
the apoptotic effects of EGCG. We have also observed, by sitedirected mutagenesis experiments, that preventing the “NKR
Finger” of the SRA domain to flip out the methyl cytosine from
the DNA helix, leads to an inability of UHRF1 to down-regulate
p73 expression.
Conclusions: Together these results show that down-regulation
of UHRF1 by EGCG is involved in the mechanism of action of
polyphenol-induced apoptosis thanks to a re-expression of tu-
34
mor suppressor genes such as p16INK4A and p73. We propose
that EGCG is able to hinder the “cancer signature” to be perpetuated from cell generation to generation by down-regulating
UHRF1.
N° 9
Evaluation du potentiel anticancéreux de dérivés
tétrasulfurés naturellement présents dans l’ail et
l’oignon sur des cellules de cancer du sein.
RF
Auteur : E. Viry, A. Anwar, M. Diederich, C. Jacob, G. Kirsch,
D. Bagrel
Affiliation(s) : LIMBP, Université Paul Verlaine, Institut Jean
Barriol FR CNRS 2843, Metz
Résumé : Depuis des décennies, certaines espèces d’Allium,
comme l’ail et l’oignon, ont largement été utilisées comme remède à de nombreuses pathologies. Des études épidémiologiques ont pu mettre en évidence l’existence d’une corrélation
existant entre la consommation de ces plantes et l’observation
d’effets bénéfiques sur la santé. Notamment, la consommation
d’ail contribuerait à réduire la fréquence d’apparition de certains
types de cancer (estomac, intestin,…). En plus de ces effets
préventifs, des travaux récents, utilisant des modèles cellulaires
et animaux de cancer, ont révélé l’existence d’une activité thérapeutique de certaines espèces d’Allium. Ces effets bénéfiques
ont pu être attribués à la présence de composés organosoufrés
(COS) tels que les allyl- et propyl- polysulfures.
Lors de cette étude, nous nous sommes intéressés à deux COS
qui restent encore peu étudiés à ce jour, les diallyl- (DAS4) et
dipropyl- (DPS4) tétrasulfures. Nous avons montré que ces
composés étaient capables d’inhiber, de manière irréversible,
les phosphatases Cdc25 in vitro. Ces phosphatases sont des
enzymes clés qui interviennent dans la progression du cycle
cellulaire en régulant l’activité des kinases dépendantes des
cyclines par une déphosphorylation très spécifique. Les Cdc25
sont des cibles thérapeutiques intéressantes car leur surexpression, notamment dans le cancer du sein, a pu être corrélée au
développement de résistance à certains agents anticancéreux
ainsi qu’à un mauvais pronostic.
Suite aux résultats obtenus in vitro, nous avons voulu évaluer
le potentiel anticancéreux des composés DAS4 et DPS4 sur
des cellules d’adénocarcinome mammaire humain : MCF-7 (lignée sensible) et Vcr-R (lignée résistante à la vincristine). La
croissance des cellules sensibles et résistantes est apparue
significativement altérée par ces deux composés. Cette activité
antiproliférative a pu être associée à un blocage des cellules
en phase G2-M. Cette étude suggère donc que l’inhibition des
phosphatases Cdc25 par les COS contribuerait à leur activité
anticancéreuse.
N° 10
N° 11
Ensembles flous pour la définition de profils
d’expression différentielle : application à des
données de transcriptomique du cancer colorectal.
Molecular interactions between human tumoral and
endothelial cells : effect of EGFR blockade.
RF
Auteur : S. Benadberrahmane, M.D. Devignes, M. Smaïl-Tabbone, A. Napoli, O. Poch, N.H. Nguyen, W. Raffelsberger
Affiliation(s) : LORIA, CNRS UMR 7503, INRIA, Nancy Université, Nancy
IGBMC, CNRS UMR 7104, INSERM, Université de Strasbourg,
Strasbourg
Résumé : Les approches haut-débit de la transcriptomique sont
utilisées massivement de nos jours pour tenter de comprendre
les dérèglements moléculaires qui conduisent aux cancers.
L’analyse des données d’expression repose le plus souvent sur
l’identification d’ensembles de gènes partageant des comportements transcriptionnels similaires.
L’approche que nous proposons vise à tenir compte d’une part
du point de vue et des connaissances du biologiste, d’autre part
du caractère bruité des signaux de transcription. Notre méthode
consiste à spécifier des profils d’expression différentielle (PED),
puis à classer les gènes dans ces profils selon une logique d’affectation floue.
Considérons un ensemble de gènes étudiés sur n situations différentes. Une mesure est proposée pour quantifier la variation
d’expression d’un gène entre deux situations. Pour toute paire
de situations, on définit ensuite trois ensembles d’expression
différentielle (EED) contenant des gènes qui sont : soit surexprimés, soit sous-exprimés, soit exprimés autant dans une situation par rapport à une autre. L’appartenance d’un gène à tel
ou tel EED est calculée selon une logique floue. Un PED sera
défini comme une combinaison d’EED. Sachant que l’on peut
définir 3[n(n-1)/2] PED différents, certains PED peuvent être étudiés
en priorité du fait de leur signification biologique.
La méthode a été appliquée à 222 gènes étudiés dans des tissus sains, des tumeurs colo-rectales et des lignées cellulaires.
Le calcul montre que les gènes se répartissent de façon floue
dans 11 PED, avec partage des gènes entre PED différents.
L’apport de la méthode a été testé en comparant les résultats
de classification fonctionnelle obtenus avec le logiciel DAVID,
d’une part sur l’ensemble des 222 gènes étudiés, d’autre part
sur les ensembles de gènes contenus dans chaque PED. Les
résultats révèlent que certaines interprétations fonctionnelles
des données d’expression peuvent être reliées à des comportements transcriptionnels particuliers.
RF
Auteur : V. Jouan-Hureaux, C. Boura, J.L. Merlin, B. Faivrer
Affiliation(s) : EA PREDICTHER-SIGRETO, Faculté de Médecine, Nancy Université, Nancy
Résumé : Overexpression of the epidermal growth factor receptor (EGFR) plays a key role in the development of head and
neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Blockade of this receptor with specific inhibitors decreases the tumoral cell proliferation, survival and differentiation and induces an anti-angiogenic effect attributed to the inhibition of VEGF secretion by tumor
cells. Recent studies have demonstrated that tumor-associated
endothelial cells (EC) overexpressed EGFR and are responsive
to EGF. Thus, EGFR inhibitors could have direct antiangionenic
effect due to their direct interaction on tumor-associated EC.
In this study, we investigated the potential of cetuximab to affect
the molecular signalling between tumoral and endothelials cells
and its impact on angiogenesis induced by conditioned media
(CM).
Methods: Metabolic activity and proliferation of HUVEC in
presence of cetuximab in culture media were analyzed using
MTT and Hoechst assays respectively. CM were obtained from
culture of CAL27 or FaDu cell lines. Analysis of angiogenesisrelated proteins in CM was performed using Proteome Profiler
arrays. For in vitro angiogenesis assays, HUVEC were allowed
to grow in CM and capillary structures were analyzed by fluorescence microscopy.
Results: Direct exposure of HUVEC at low concentrations of cetuximab had no effect on their proliferation, while inducing a significant decrease in tumor cells proliferation. CM collected from
culture of tumor cells in presence of cetuximab did not influence
HUVEC metabolic activity. Cetuximab modulate the release of
angiogenesis mediating proteins such as VEGF or MMP9 by
tumor cells and in these conditions induced changes in HUVEC
capillary behavior.
Conclusion: Cetuximab had no direct anti-angiogenic effect on
non-tumor-EC. Nevertheless, tumor cells treated by cetuximab
modifed the secretion of angiogenic factors that could interfere
with endothelial cells network. This could explain in part the therapeutical efficacy of cetuximab by normalizing the tumor vascularisation and offering a better access to chemotherapeutic
drugs into the tumor tissue or a better sensibility to radiotherapy.
35
N° 12
Etude du pouvoir radiosensibilisant du gefitinib et
des mécanismes potentiellement impliqués sur des
modèles de gliomes.
RT
Auteur : S. Pinel, M. Vandamme, J.L. Merlin, F. Plénat, P. Chastagner
Affiliation(s) : EA PREDICTHER – SIGRETO, Laboratoire
d’Histopathologie Expérimentale et Moléculaire , Faculté de
Médecine, Nancy Université, Nancy
Résumé : Contexte : 40% des gliomes malins présentent une
surexpression de l’EGFR1, associée à une plus grande radiorésistance des tumeurs2,3. Les inhibiteurs de l’EGFR semblaient
donc des thérapies prometteuses pour traiter ces tumeurs.
Mais les premiers résultats cliniques se sont avérés décevants
et les mécanismes de réponse ou de non-réponses restent à
éclaircir4-5.
Dans ce contexte, nous avons étudié sur des modèles de
gliomes malins humains xénogreffés, le pouvoir radiosensibilisant d’un anti-EGFR, le géfitinib, en nous intéressant aux dysfonctionnements de la signalisation en aval du récepteur, ainsi
qu’aux effets sur l’angiogenèse.
Méthode : Sur nos modèles, nous avons recherché la présence
d’altérations oncogéniques touchant les voies dépendantes de
l’EGFR. Pour deux lignées, nous avons étudié l’effet antitumoral
du géfitinib administré seul (75mg/kg/j, 5j/7) ou de façon concomitante à la radiothérapie fractionnée (2Gy/j, 5j/7) et nous avons
analysés les effets cellulaires (prolifération, mort cellulaire, angiogenèse par immunohistochimie) et moléculaires (expression
des phosphoprotéines par Bioplex® phosphoprotein array,
VEGF par ELISA).
Résultats : Nos modèles de gliomes présentent une forte activation de l’EGFR et des voies qui en dépendent. La perte de PTEN
est parfois retrouvée. Pour les deux lignées étudiées, malgré la
perte de PTEN, le géfitinib seul bloque les voies dépendantes
de l’EGFR. Il induit un effet antitumoral rapide mais transitoire,
associé à un remodelage du réseau vasculaire intratumoral
et une forte diminution de l’expression du VEGF. Le gefitinib
présente un pouvoir radiosensibilisant majeur et prolongé,
probablement sous-tendu par son effet sur la vascularisation
tumorale.
Références :
1
Behin, Lancet, 2003
2
Barker, IJROBP, 2001
3
Bonner, IJROBP 2004
4
Franceschi, Br J Cancer, 2007
5
Rich, J Clin Oncol, 2004
36
Thème
Marqueurs diagnostiques
& pronostiques
N° 13
DDB2: a potential and promising cancidate in
diagnosis of breast cancer.
RF
Auteur : V. Minig, Z. Kattan, S. Grandemange, N. Touche, L.
Domenjoud, P. Bécuwe
Affiliation(s) : EA SIGRETO, Université Henri Poincaré - Nancy
Université, Nancy
Résumé : Background: Despite advances in cancer research,
mechanisms involved in the breast tumor progression are not
well defined. Our study reports the identification of the Damaged
DNA binding 2 protein (DDB2) as a new potential marker for
breast tumor growth and its relation with the manganese superoxide dismutase (MnSOD), an antioxidant enzyme which is
already known to play a role in cancer. Previously, DDB2 was
known to play a role in DNA repair and chromatin remodelling in
normal cells. However, its role in cancer was not described yet.
In this study, we report the characterization of a new biological
activities of DDB2 in breast cancer cells.
Methods: We developed in vitro models of breast cancer cells in
which DDB2 and MnSOD expressions were modulated by RNA
interference, antisense RNA or expression vector strategies to
study consequences on cell growth and invasiveness. Molecular
biology were used to define precisely the functional activity of
DDB2 as transcriptional regulator.
Results: We showed that DDB2 is only overexpressed in estrogen receptor (ER)-positive breast cancer cells and tumors. With
in vitro models of breast tumor cells in which DDB2 is downregulated or overexpressed, we demonstrated that this protein
is involved in the cell growth by activating the G1/S phase
transition of the cell cycle. In addition, we purified and identified
DDB2 in a systematical proteomic analysis, which was done to
trap new potential transcription factors involved in the regulation
of the MnSOD gene. The DDB2 binding DNA sequence was
characterized precisely into the proximal promoter of MnSOD
gene. Functional analysis of this proximal promoter allowed us
to demonstrate that DDB2 regulates negatively the constitutive
expression of this gene. In addition, we showed that DDB2
exerts, at least in part, a control of breast cancer cell growth
through its negative regulation of constitutive expression of the
MnSOD gene.
Conclusions: Taken together, these data give for the first time
a supporting evidence that DDB2 may become a promising
candidate as a predictive marker in breast cancer progression
through its involvement in regulating cell cycle progression and
in transcriptional regulation of MnSOD, and that this molecular
mechanism may so have an important clinical interest in the
future.
N° 14
N° 15
IR spectral imaging of peritumoral areas in human
skin cancer biopsies.
IR spectral imaging for a new type of
histopathological study of colon adenocarcinomas.
RT
Auteur : D. Sebiskveradze1, V. Vriab2, C. Gobinet1, E. Ly1, M.
Manfait1, P. Jeannesson1, O. Piot1
Affiliation(s) : 1 MéDIAN, CNRS UMR 6237 MEDyC, IFR 53,
Université de Reims Champagne-Ardenne, Reims
2
CReSTIC, Université de Reims Champagne-Ardenne, Châlons-en-Champagne
Résumé : Context: Infrared (IR) micro-spectral imaging is an
efficient label-free optical method to analyze biological samples
and to provide spatially resolved information on the basis of
their biochemical composition. This method has the potential to
characterize cancerous tissues independently of visual morphology. IR microimaging could thus be developed as a sensitive,
nondestructive and objective diagnostic tool in clinical oncology.
The discrimination between tumoral and peritumoral tissues relies on the highlighting of subtle IR spectral differences.
Method: We developed an algorithm based on fuzzy clustering
techniques (FCM) which permits to automatically identify both
the tumoral areas and their normal counterparts.
Results and discussion: This approach has been directly performed on formalin-fixed paraffin-embedded tissue sections of
skin cancers (squamous cell carcinoma and melanoma), without
chemical dewaxing. The constructed IR color-coded spectral
images allow recovering the different histological structures
automatically and give access to interesting information on the
assignment of the IR images pixels to the tissular structures.
For each pixel, FCM provides with membership values, permitting to nuance their assignment. Such data are very valuable for
the pixels located at the interface between tumoral tissue and
its microenvironment. Thus, heterogeneous transitional areas
between tumor and environmental normal tissue were identified
on the examined tissue sections. These areas cannot be identified on hematoxylin-eosin staining or by conventional clustering
of IR data, such as K-means. They are characterized by a gradual increase of the membership value of the pixels, from tumor
to normal tissue to reach a maximum. Then, this value sharply
decreases at the edge of the normal tissue. Experiments are
underway to define the molecular assignments of the spectral
variations observed in these peritumoral areas.
(DS is a recipient of a doctoral fellowship from INCa.)
RT
Auteur : A. Travo1, P. Jeannesson1, R. Wolthuis1, C. Gobinet1,
M. Manfait1, J. Bara2, M. Forgue-Lafitte2, O. Piot1
Affiliation(s) : 1 CNRS, UMR 6237, Univ. de Reims Champagne-Ardenne, Reims
2
INSERM, U-482, CHU Saint Antoine, Paris
Résumé : Scientific background: FTIR spectral imaging (FTIRSI) is emerging as a promising tool for generating an automated
and non subjective histology based on the whole biochemical
composition of tissues. We reported previously that FTIR-SI
of colon carcinomas is highly efficient to reproduce histology
directly from paraffin-embedded (PE) tissue sections but also
to provide relevant information on the intra-tumor heterogeneity
that cannot be revealed by classical histology. Our study aimed
at a further exploration of the possibilities of the FTIR-SI approach for histopathological recognition, with a particular emphasis on secreted mucus.
Materiel and methods: Spectral acquisitions (Spotlight 300,
Perkin-Elmer) of human normal colon (n=7) and colon adenocarcinomas (n=9) PE tissue sections. No attempt was made to
remove paraffin.
Results: By referring to IR spectra originated from bovine purified mucins and human mucus extracted from benign cysts,
we show that secreted mucus of the tissue sections exhibit the
spectral fingerprint of mucin glycoproteins. This permitted an in
situ localization of mucus-rich areas and of tissular structures
devoid of mucus by constructing color-coded images using a kmeans clustering of spectral data. In addition, a clear distinction
can be achieved between the apical and basal parts of mucus
secreting cells, containing respectively high and low amount
of intracellular mucus. To discriminate normal from adenocarcinoma colon tissues, a k-means subclustering was performed
exclusively on secreted mucus spectra, onto i) 950-1750 cm1, containing all the spectral features of mucus attributable to
mucins, ii) 1000-1200 cm-1, related to glycosylated content of
mucins, iii) 1600-1700 cm-1, related to secondary structure of
mucin core proteins and iv) 1700-1750 cm-1, related to sialylated content of mucins. In all cases, the subclusters are present
in both tissue types, but the samples can present significant
differences of subcluster surface percentages that can be used
to discriminate normal from tumoral tissues. These results reflect changes in carbohydrate and sialic acid contents as well
as in secondary structure of mucin core proteins between tissue
types. Interestingly, k-means subclustering, performed on the
amide bands only, indicates that changes in mucin secondary
structure represent the most relevant spectral marker of mucus
to discriminate colon adenocarcinomas from normal tissues.
Conclusion: This study shows the possibility to use FTIR-SI to
study the mucin biochemical composition directly on PE tissue
sections and to discriminate the normal tissues from adenocarcinomas samples on the basis of mucin secondary structure
changes. Among this original result, this study demonstrates
the potential of FTIR-SI for the discovery of new tumor markers,
related to a label-free monitoring of biochemical heterogeneity
of tissue sub-types, not detectable with conventional histology.
37
N° 16
N° 17
TCRγ gene rearrangement in cutaneous T-cell
lymphoma: comparative study of PCR with
denaturing gradient gel electrophoresis and
GeneScan analysis.
Etude métabolomique des cancers séreux de
l’ovaire.
RC
Auteur : A.L. Goeldel1,3, P. Cornillet-Lefebvre2, A. Durlach3,
P. Birembaut3, P. Bernard1, P. Nguyen2, F. Grange1
Affiliation(s) : 1 Department of Dermatology, Hôpital Robert
Debré, Reims
2
Laboratory of Haematology, Hôpital Robert Debré, Reims
3
Laboratory of Histopathology, Hôpital Maison Blanche, Reims
Résumé : The usefulness of T-cell receptor gene rearrangement (TCR-GR) analyses for differentiating cutaneous T-cell
lymphoma (CTCL) from benign inflammatory disorders (BID)
has been insufficiently studied to date. Our objective was to
evaluate the diagnostic value of TCR-GR analyses, comparing
polymerase chain reaction (PCR) with denaturing gradient gel
electrophoresis analysis (DGGE) and BIOMED-2 standardized
protocol PCR with GeneScan analysis (BIOMED-2-GS). Both
were performed in 157 patients evaluated for initial features suggestive of CTCL between 1996-2007. After clinical and histological review, the final diagnosis was CTCL in 77 cases, and BID
in 80 cases. DGGE and BIOMED-2-GS had a similar diagnostic
value for distinguishing CTCL from BID, with a sensitivity of 74%
and 76.6%, respectively, and a specificity of 86.2%. Positivity
rates did not depend on the PCR method but varied according
to the type of CTCL (73-75% in mycosis fungoides, 90-100%
in Sézary syndrome, 40-60% in lymphomatoid papulosis and
100% in other types). The observed concordance between
both methods was 90% and the kappa coefficient was 0.79. We
conclude that BIOMED-2-GS analysis of the TCRγ gene is as
sensitive and specific as DGGE for CTCL diagnosis. In addition,
BIOMED-2-GS is less time-consuming and gives more information concerning the size and nature of TCR-GR.
38
RC
Auteur : D. Ben Sellem, K. Elbayed, A. Neuville, B. Dillmann, M.
Piotto, J.P. Bellocq, I.J. Namer
Affiliation(s) : Projet CARMeN, Hôpitaux Universitaires de
Strasbourg, Université de Strasbourg, Bruker Biospin Wissembourg
Résumé : Introduction : Les cancers de l’ovaire continuent à poser un défi aux cliniciens. Les récidives tumorales sont souvent
résistantes et réfractaires à la chimiothérapie. Le but de cette
étude est de caractériser métaboliquement les cancers séreux
de l’ovaire dans le but d’une adaptation thérapeutique.
Matériels et méthodes : 22 échantillons biopsiques de cancers
séreux de l’ovaire, 3 échantillons de tumeurs borderline
séreuses et 3 échantillons d’ovaires normaux ont été analysés
par la spectroscopie RMN HR-MAS. Les patientes étaient
âgées de 31 à 81 ans (moyenne 62,5 ans) et n’avaient bénéficié
d’aucun traitement en pré-opératoire.
Les inserts analysés contiennent une masse de 18 mg (valeur
médiane), et sont soumis à un test de 20min en rotation à
3500Hz, sans altération visible de l’intégrité des tissus.
Résultats : Les analyses multivariées PCA et PLS-DA utilisant
tous les métabolites n’ont pas permis de distinguer les
carcinomes séreux des contrôles. Les carcinomes séreux ont
été divisés, selon le score anatomopathologique de Silverberg,
en 2 groupes : 1er groupe de score élevé (13 biopsies) et
2éme groupe de plus bas score (9 biopsies). En utilisant les
métabolites les plus discriminatifs, les carcinomes séreux de
score Silverberg élevé ont pu être correctement séparés des
tissus sains grâce à une simple PCA (R2Y= 0,76, Q2 =0,6).
Ce modèle statistique ainsi élaboré a pu classer les tumeurs
borderline du côté des contrôles, alors que les cancers séreux
de bas score ont été dispersés entre les 2 composantes du
modèle. Les cancers séreux du 1er groupe présentaient une
concentration plus élevée en alanine, acétate, choline, NAA,
lysine et glutamate et plus faible en β-glucose que les tissus
sains.
Conclusion : Cette étude montre que les cancers séreux des
ovaires forment un groupe très hétérogène. Cette hétérogénéité
est potentiellement expliquée par une transition métabolique
lors de la progression tumorale.
N° 18
Expression de l’intégrine α5β1 et activité de
la protéine p53 : une nouvelle approche de la
chimiorésistance des glioblastomes.
RT
Auteur : D. Léger, A. Maglott, E. Martinkova, E. Cosset, S. Martin, M. Dontenwill
Affiliation(s) : LBP, UMR7213 CNRS, Université de Strasbourg, Faculté de Pharmacie, Strasbourg
Résumé : Les glioblastomes sont un défi majeur en oncologie :
les progrès thérapeutiques restent mineurs malgré l’association
de chirurgie, radio- et chimiothérapies. L’intégrine α5β1 a été
identifiée comme une nouvelle cible thérapeutique. Nous avons
mis en évidence un rôle important de cette intégrine dans la
résistance de lignées de glioblastomes humains (U87MG) au
Témozolomide (TMZ- drogue de référence en clinique). Les cellules U87MG sur-exprimant (U87-α5) ou sous-exprimant (U87shα5) la sous-unité α5 de l’intégrine présentent respectivement
une résistance et une sensibilisation à cette drogue in vitro.
L’activation de la voie p53 est un élément majeur de la réponse
des cellules au TMZ et provoque leur entrée en sénescence
prématurée. L’utilisation de PCR-arrays montre que le taux d’expression de la sous-unité α5 détermine le degré d’activation de
la protéine p53 et la transcription de gènes cibles particuliers.
Les cellules U87-shα5 ont une activité basale de p53 augmentée en absence de drogue qui est amplifiée en présence de TMZ
par rapport aux cellules contrôles. Inversement dans les cellules
U87- α5, la stimulation de p53 est minime en présence de TMZ.
Le blocage de l’activité de l’intégrine α5β1 par des antagonistes spécifiques réactive la signalisation dépendante de p53
et restore la sensibilité des cellules à la drogue. Les voies de
signalisation AKT et ERK, dépendantes de l’intégrine, ne sont
pas impliquées dans la régulation de la voie de p53 dans les
cellules U87-α5. Nos données sont en accord avec l’existence
d’une signalisation originale encore méconnue de l’intégrine
α5β1 régulant la voie de p53 et la résistance des glioblastomes
au TMZ. D’un point de vue clinique, une sous-population de patients porteurs de glioblastomes à fort taux d’intégrine α5β1 et
exprimant une protéine p53 fonctionnelle devraient bénéficier
d’une thérapie combinant le TMZ et un antagoniste de l’intégrine
α5β1. Des études précliniques en cours permettront de confirmer cette hypothèse.
N° 19
Valeur pronostique de l’expression de STAT3-P dans
le cancer du recteum.
RT
Auteur : F. Monnien, M. Mercier, C. Borg, C. Mougin, J.F. Bosset, B. Kantelip
Affiliation(s) : Service d’anatomie et cytologie pathologiques,
CHU Besançon
Résumé : Contexte : La protéine STAT3 (Signal Transducer and
Activator of Transcription 3) est impliquée dans le développement et la progression de nombreux cancers. L’expression de
STAT3 phosphorylée (STAT3-p), forme active de la protéine, serait liée au stade d’invasion tumorale et au mauvais pronostic du
cancer colorectal. La littérature relative à la valeur pronostique
de STAT3-p dans ce type de cancer est rare et pratiquement
inexistante pour les cancers du rectum seuls. A notre connaissance, dans le cancer colorectal, une seule étude a mis en
évidence une relation entre l’expression positive de STAT3-p et
une moins bonne survie globale.
Méthode : Pour éclaircir le rôle de STAT3 dans le cancer du
rectum, l’expression immunohistochimique de STAT3-p a été
corrélé à la survie sans récidive et globale de 104 patients atteints d’un cancer du rectum de stade III. Nous avons évalué la
valeur pronostique de l’expression de STAT3-p en prenant en
compte les facteurs pronostiques cliniques et les variables de
confusion. La survie sans progression et la survie globale ont
été estimées en utilisant la méthode de Kaplan-Meier et l’analyse multivariée a été effectuée grâce à un modèle de Cox à
risques proportionnels.
Résultats : l’expression nucléaire de STAT3-p a été observée
dans 35,6% des cas. En analyse univariée, STAT3-p n’était pas
lié à la survie sans récidive mais apparaissait comme un facteur
de meilleur pronostic concernant la survie globale (p=0.03). En
analyse multivariée aucune relation n’a été mise en évidence
entre l’expression de STAT3-p et le pronostic.
Discussion : ces résultats mettent en évidence un rôle de
STAT3-p dans les cancer du rectum de stade III et présentent
STAT3-p comme facteur de bon pronostic. Cependant, STAT3-p
n’étant pas lié à la survie globale en analyse multivariée, son
rôle paraît soumis à l’influence d’autres facteurs. Ce dernier aspect nécessite de poursuivre nos investigations.
39
Thème
Progression tumorale :
mécanismes & voies thérapeutiques
N° 20
Downregulation of UHRF1 by thymoquinone induces
apoptosis in acute lymphoblastic leukaemia via a
p73-dependent mechanism.
RF
Auteur : M. Alhosin1, A. Abusnina1, M. Achour1, C. Muller2, J.
Peluso2, T. Chataigneau1, C. Lugnier1, V. Schini-Kerth1, C. Bronner1, G. Fuhrmann1
Affiliation(s) : 1 CNRS UMR 7213, Laboratoire de Biophotonique et Pharmacologie, Strasbourg
2
CNRS UMR 7200, Laboratoire d’Innovation Thérapeutique,
Université de Strasbourg, Faculté de Pharmacie, Strasbourg
Résumé : Thymoquinone (TQ) has a strong antineoplastic activity against various human tumours through p53-dependent/
independent pathways which are not yet fully characterized. We
therefore investigated more in depth the molecular mechanisms
by which TQ mediates its anti-tumour activity on acute lymphoblastic leukaemia (ALL) p53-mutated cells, i.e. Jurkat cells. Our
results show that TQ inhibits the proliferation of Jurkat cells
and induces G1 cell cycle arrest in a dose-dependent manner.
Moreover, TQ treatment triggers cell death which is associated
with a dramatic downregulation of UHRF1 and two of its main
partners, namely DNMT1 and HDAC1, which are all involved in
the epigenetic code inheritance. TQ-induced apoptosis, confirmed by DNA fragmentation analysis, is also accompanied by a
sharp reexpression of the p53-related protein p73 and dose-dependent changes of the expression levels of caspase 3 cleaved
subunits. Knockdown of p73 expression inhibits TQ-induced
cell death, by restoring UHRF1 expression and reactivating
cell cycle progression. Our results show that TQ mediates its
growing inhibitory effects on ALL p53-mutated cells via the
activation of a p73-dependent cell cycle checkpoint signalling
pathway which subsequently targets UHRF1 as well as some of
its partners. We propose that preventing the epigenetic code replication is a prerequisite for TQ to exert its apoptotic properties.
N° 21
Red wine polyphenols induce apoptosis in Jurkat
cells by a redox-sensitive mechanism.
RF
Auteur : T. Sharif, M. Alhosin, M. Achour, C. Auger, N. ÉtienneSelloum, G. Fuhrmann, C. Bronner, V. B. Schini-Kerth
Affiliation(s) : UMR CNRS 7213, Laboratoire de Biophotonique
et Pharmacologie, Université de Strasbourg, Faculté de Pharmacie, Strasbourg
Résumé : Objectives: Several epidemiological studies suggest
40
that a diet rich in fruits and vegetables, which contain high levels
of polyphenols, is associated with a reduced risk of cancer. The
aim of the present study was to determine whether a red wine
polyphenolic extract (RWPs, a rich source of polyphenols; 2.9
g/L) induces apoptosis in human leukaemia cells (Jurkat cells)
and, if so, to determine the underlying mechanism.
Methods: Cell proliferation and viability were determined by the
MTS assay and trypan blue exclusion. Cell cycle analysis, apoptosis and oxidative stress were assessed by flow cytometry. Expression of UHRF1, p73 and activated caspase-3 were determined by Western blot analysis.
Results: RWPs concentration-dependently reduced Jurkat cell
viability and proliferation, and induced apoptosis. Cell cycle analysis indicated that RWPs arrested the cell cycle in the G0/G1
phase. This effect was associated with a reduced expression
level of UHRF1 and an increased expression of p73 and activated caspase-3. RWPs significantly increased the formation
of reactive oxygen species (ROS) in Jurkat cells. Intracellular
antioxidants (MnTMPyP, MnTBAP, PEG-SOD, PEG-catalase)
prevented the RWPs-induced formation of ROS and apoptosis,
while native extracellular antioxidants (SOD and catalase) were
without effect.
Conclusions: Red wine polyphenols induce apoptosis in Jurkat
cells by a redox-sensitive mechanism including the intracellular
formation of ROS and the activation of caspase-3.
N° 22
Mécanismes de la mort cellulaire suite au stress
oxydant induit par la thérapie photodynamique
avec le Foscan®.
RF
Auteur : S. Marchal, F. Guillemin, L. Bolotine-Bezdetnaya
Affiliation(s) : CRAN-CNRS UMR 7039 Nancy Université,
Centre Alexis Vautrin, Nancy
Résumé : La thérapie photodynamique (PDT) génère la mort
cellulaire par un mélange subtil d’effets allant de la mort violente
(nécrose) à la mort génétiquement programmée par la cellule
(apoptose, autophagie).
Suite à la PDT avec le Foscan®, l’implication de la mitochondrie dans la mort cellulaire est évidente puisque la réponse
mitochondriale (libération du cytochrome c et dépolarisation
membranaire) est parfaitement corrélée à la survie cellulaire.
Cependant, ces événements provoquent une apoptose modérée qui est compatible avec le fait que la mitochondrie n’est
pas l’organite cible du Foscan®, la localisation préférentielle de
ce photosensibilisateur (PS) étant le réticulum endoplasmique
(RE) et l’appareil de Golgi. Favoriser l’apoptose photoinduite
est cependant possible. En allongeant la durée de contact du
Foscan® avec les cellules MCF-7, un renforcement de l’accumulation du Foscan® dans le RE conduit à une augmentation
du stress oxydant du RE exprimée par une induction accrue de
la protéine chaperone GRP78. Bien que la réponse mitochondriale soit diminuée, l’activation de la caspase-7 est augmentée
et une bonne corrélation est obtenue entre les augmentations
d’expression de GRP78 et de caspase-7 active. Cette observa-
tion rend plausible l’hypothèse d’une activation de la caspase-7
via une voie indépendante de la mitochondrie mais dépendante
de la voie du stress du RE. Par la suite, les conséquences de
l’activation des caspases sur la mort cellulaire ont été déterminées. L’utilisation d’un inhibiteur spécifique des caspases n’a
pas montré de restauration de la survie cellulaire ce qui suggère
l’implication d’une autre voie de mort cellulaire. Nous avons mis
en évidence une induction de l’autophagie, celle-ci apparaissant
de façon concomitante avec l’induction de GRP78. L’autophagie
semble jouer un rôle déterminant dans la mort cellulaire après
Foscan®-PDT puisque l’emploi d’inhibiteurs spécifiques provoque une augmentation de la survie des cellules MCF-7.
N° 23
Développement
de
nouveaux
outils
pharmacologiques pour l’étude des rôles
physiologiques et pathologiques de la chimiokine
CXCL12.
RF
Auteur : M. Hachet-Haas, K. Balabanian, F. Arenzana-Seisdedos, J. Alcami, M. Hibert, N. Frossard, J.L. Galzi
Affiliation(s) : IREBS, FRE3211, Dpt Récepteurs et Protéines
membranaires, ESBS, Strasbourg
Résumé : La chimiokine CXCL12 ou SDF-1 (Stromal cell Derived Factor-1) et son récepteur CXCR4, un récepteur couplé aux
protéines G, sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques tels que le développement vasculaire et neuronal,
l’hématopoïèse, la réponse inflammatoire mais aussi pathologiques comme certaines infections, maladies auto-immunes
et depuis quelques années dans le cancer, tant au niveau du
développement des tumeurs primaires que dans celui des métastases. Ainsi, moduler pharmacologiquement les interactions
CXCL12/CXCR4 dans ces processus malins pourrait représenter une alternative thérapeutique de choix.
Lors d’un programme de recherche de nouveaux ligands non
peptidiques, nous avons identifié des composés de la famille
des chalcones comme agent capables d’interférer avec le
couple CXCL12-CXCR4. Ils réduisent la liaison CXCL12-CXCR4, inhibent les réponses cellulaires du récepteur (mobilisation calciques et internalisation) en réponse à CXCL12. De plus,
leur mécanisme d’action est original car ils se lient non pas au
récepteur mais directement à CXCL12. La chalcone de plus
haute affinité, LPS.10.C05, est biologiquement active ex vivo en
inhibant le chimiotactisme de lymphocytes T humains purifiés
et en empêchant CXCL12 d’exercer sa fonction anti-apoptotique sur des isolats de cellules tumorales humaines d’Hodgkins
Reed-Sternberg. Par ailleurs, in vivo dans un modèle d’asthme
chez la souris, elle réduit de près de 50% l’invasion des voies
aériennes par les éosinophiles et présente une efficacité équivalente à l’antagoniste du récepteur CXCR4, l’AMD3100.
Ces petites molécules neutralisantes, en exerçant leur effet au
niveau du ligand et non pas du récepteur, se démarquent des
antagonistes traditionnels par leur absence d’effet sur le récepteur. De plus, à l’inverse des anticorps neutralisant, ces molécules seront optimisables en termes de disponibilité et seront
moins immunogènes.
N° 24
Effets du peptide (VGVAPG)3 sur l’organisation
spatio-temporelle de protéines nucléaires de
fibroblastes dermiques humains normaux et de
cellules tumorales.
RF
Auteur : A. Chatron-Colliet, N. Lalun, L. Duca, D. Ploton, H.
Bobichon
Affiliation(s) : MEDyC UMR6237 CNRS, Faculté de Médecine,
Reims
Résumé : Lors de la progression des cancers cutanés, les cellules tumorales et les fibroblastes dermiques se retrouvent au
contact de peptides issus de la protéolyse de l’élastine. Les peptides possédant la séquence VGVAPG sont décrits pour leurs
diverses activités biologiques. Nous avons pu ainsi vérifier que
ce peptide induit la prolifération de lignées cellulaires dérivant
de mélanomes et de fibroblastes dermiques. Nous étudions
la réorganisation spatio-temporelle de protéines nucléaires de
cellules cancéreuses et normales sous l’influence du peptide
(VGVAPG)3. Le facteur SC35, régulateur de l’épissage des
ARNm, est localisé dans des amas irréguliers fréquemment
au contact de corps sphériques (PML bodies). A partir de populations cellulaires homogènes et après différents temps de
contact avec le peptide seul ou en présence de sérum de veau
fœtal (SVF), ces protéines sont immunolocalisées. L’association
de la microscopie confocale et de la reconstruction tridimensionnelle nous a permis de démontrer que l’augmentation à la fois
des volumes et nombres des amas SC35 et PML bodies est
fonction de la concentration de peptide, de la présence de SVF
et du temps de contact. La position relative des 2 composants,
visualisée grâce à la reconstruction 3D, reflète l’activation ou
de la répression de la synthèse des ARNm. La forme inactivée
de SC35 se trouve bloquée dans les PML bodies des cellules
non stimulées ou lorsque l’action du peptide est inhibée, tandis
qu’en fonction des concentrations de peptide et de la présence
de SVF, les PML bodies pénètrent dans les amas de SC35.
Notre étude est la première à montrer les profondes réorganisations des structures nucléaires en présence du peptide et/ou
du SVF. Des résultats préliminaires sur des lignées cellulaires
tumorales montrent une influence similaire mais plus rapide
du (VGVAPG)3. Nous envisageons également une étude 4D
(3D+temps) sur des cellules tumorales vivantes exprimant des
protéines nucléaires chimères GFP.
N° 25
MAPKinase activation and EGR1 expression in
breast cancer cells exposed to PPARγ agonists : a
PPARγ receptor independent pathway.
RF
Auteur : S. Chbicheb1, S. Salamone2, M. Boisbrun2, I. GrillierVuissoz1, Y. Chapleur2, S. Flament1, S. Mazerbourg1
Affiliation(s) : 1 EA SIGRETO – Faculté des Sciences, NancyUniversité, Nancy
2
Groupe S.U.C.R.E.S., UMR 7565 Nancy-Université, CNRS,
Nancy
41
Résumé : The nuclear receptor Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ) can be activated by natural
ligands such as 15-deoxy-delta(12,14)-prostaglandin J2 (PGJ2)
as well as synthetic drugs such as thiazolidinediones. The treatment of human breast cancer cell lines with PPARγ agonists is
known to have antiproliferative effects but the role of PPARγ
activation in the process remains unclear. We investigated the
effects of four PPARγ agonists, Rosiglitazone (RGZ), Ciglitazone (CGZ), Troglitazone (TGZ) and the natural agonist 15dPGJ(2), on hormone-dependent breast cancer cell line MCF7.
EGR1 (Early Growth Response gene 1) mRNA and protein levels peaked after 3 hours of incubation with 25 μM TGZ, CGZ or
PGJ2 and then gradually decreased. RGZ, the most potent activator of PPARγ did not show this effect. The PPARγ antagonist
GW 9662 did not block EGR1 mRNA induction which still occurred in case of PPARγ silencing as well as in case of treatment
with the PPARγ-inactive compound Delta2-TGZ. Moreover,
MEK/ERK inhibitors (PD098059, U0126) abolished the EGR1
mRNA induction by TGZ, CGZ and PGJ2. Indeed, 15 min TGZ
and Delta2-TGZ treatment of the cells induced the phosphorylation of ERK1/2. Interestingly, EGF Receptor (EGFR) inhibitors
(AG1478 and PD153035) blocked the ERK1/2 phosphorylation
and partially EGR1 mRNA induction by TGZ. Phosphorylation
status of EGFR and the mode of activation of the receptor after
thiazolidinediones treatment have to be determined. Overall,
these results demonstrate that natural and synthetic PPARγ
agonists, with the exception of RGZ, induce the activation of
MAPKinases followed by the expression of the early transcription factor EGR1. This early response is independent of PPARγ
receptors and the mechanism of induction of the MAPKinase
pathway may depend on EGFR activation. The implication of
EGFR-ERK1/2 pathway in the growth arrest of cancer cells by
PPARγ agonists has to be demonstrated.
N° 26
PPARγ-independent effects of original biotinylated
thiazolidinediones in two breast cancer cell lines
RF
Auteur : C. Colin1, S. Kuntz1, S. Salamone2, M. Boisbrun2, Y.
Chapleur2, S. Flament1, I. Grillier-Vuissoz1
Affiliation(s) : 1 EA SIGRETO., Faculté des Sciences, NancyUniversité, Nancy
2
Groupe S.U.C.R.E.S., UMR 7565 Nancy-Université, CNRS,
Nancy
Résumé : PPARs are ligand-activated transcription factors that
belong to the nuclear receptor superfamily. Thiazolidinediones
including Troglitazone are synthetic PPARγ agonists. These
compounds inhibit proliferation and migration of breast cancer
cell lines in vitro and in vivo. Because of their toxical effects, they
display a low therapeutic index for breast cancer treatment. Together wither other groups, we have showed that in fact several
biological effects of PPARγ ligands do not require the activation
of the nuclear receptor. To elucidate the mechanisms involved in
the PPARγ-independent effects of thiazolidinediones, new derivatives have been synthesized and their antiproliferative effects
42
analyzed. We showed that TGZ or Δ2-TGZ a derivative unable
to activate PPARγ, affect cell viability, cell proliferation both in
the hormone-dependent cell line MCF-7 and in the hormoneindependent cell line MDA-MB231. These data are correlated
to cyclin D1 level. Similar results were obtained in MDA-MD 231
cells for clonogenic growth and cell migration as demonstrated
by wound healing assays. These effects are associated with
diminished MMP2 transcripts and modification in the β catenin
localization. Moreover MDA-MB-231 cells appeared to be more
sensitive than MCF-7 cells. In order to trace these compounds,
biotinylated derivatives has been used. Surprisingly they drastically inhibited cell viability. Nevertheless intermediaries of
synthesis not bounded to the biotin appeared to be as efficient
as the biotinylated derivatives. More over the 15d-PGJ2b has
been localized in the cells but not the Δ2-TGZ-b.These results
suggest an important role of the phenol substitution of the phenol group whether as a direct biotin involvement.
Taken together, these results demonstrate PPARγ-independent
mechanisms that could be interesting for the application of thiazolidinedione derivatives to breast cancer therapy.
N° 27
Crosstalk between retinoid and steroid regulation
pathways controls proliferation and differentiation
of seminoma cells.
RF
Auteur : A. Wallacides, A. Chesnel, H. Ajj, S. Flament, H. Dumond
Affiliation(s) : EA SIGRETO, Faculté des Sciences, Nancy
Résumé : In human males, a decrease in sperm count and an
increase in the incidences of testicular cancer, cryptorchidism
and hypospadia have been observed in many industrialized
countries over the last 30 years. Such male reproductive disorders have been attributed to the increase in concentration
of xenobiotics, and of xenoestrogens in particular, in the environment and in food. Epidemiological, clinical and experimental
studies have suggested that excessive exposure to estrogens
during fetal/neonatal life can lead to reproductive disorders in
adulthood. In the laboratory, we demonstrated that proliferation
rate of the unique pure seminoma cell line TCam2 varies upon
steroid or retinoid treatments. Moreover, we point out crosstalk
between retinoid and steroid- dependant regulation pathways
through non-specific steroid receptors. Taken together, these
results allow classifying this type of testicular germ cell tumor as
a hormono-dependent one and could help to better understand
the origin of testicular dysgenesis syndrome. Therefore, we propose to use TCam2 cell line as bio-indicator for characterizing
the effects of emerging pollutant mixes at low doses on testicular tumor cell proliferation in vitro and in xenografted Nude mice.
N° 28
N° 29
The crystal structure of new vitamin D analogues
bound to the human ligand binding domain of the
nuclear receptor of Vitamin D explains their ability in
inhibiting the proliferation of human leukemia cells.
Rôle de la superoxyde dismutase mitochondriale
dans la croissance et le pouvoir invasif des cellules
cancéreuses mammaires hormono-indépendantes
humaines.
RF
Auteur : P. Antony1, Y. Sato1, T. Huet1, S. Hourai1, R. Segueiro2,
L. Rodriguez2, N. Ramalanjaona1, A. Mourino2, D. Metzger3, N.
Rochel1, D. Moras1
Affiliation(s) : 1 Department of Structural Biology and Genomics, CEBGS-IGBMC, Strasbourg
2
Universidad de Santiago de Compostela, Departamento de
Química Orgánica and Unidad Asociada al CSIC, Spain
3
Department of Functional Genomics, IGBMC, Strasbourg
Résumé : The lipid soluble seco-steroid 1α,25-dihydroxyvitamin
D3, (VD) regulates multiple biological functions such as cell
growth, differentiation, apoptosis, immune responses, bone
mineralization and calcium/phosphate homeostasis. VD or its
analogues action is achieved through the binding to its cognate
nuclear vitamin D receptor (VDR) whose deregulation may lead
to severe diseases such as cancers, psoriasis, rickets or autoimmunity. To minimize the intrinsic hypercalcemic character
of VD, chemical modifications have been made on the A and/
or CD rings or aliphatic chain of the natural ligand to generate
vitamin D superagonists analogues, which are able to mediate
transcriptional activity with a magnitude at least 10 fold higher
than the natural ligand.
We recently generated the synthetic VD analogue, AMCR277A
(C23S), which incorporates an oxolane ring between 17-C and
23-C of the side chain. We showed that it acts as a VD superagonist and has the capacity to inhibit the proliferation of human
promyelocytic HL60 cells and further induce their differentiation
into monocytes. To improve the capacity of VD agonists in directing transcription and cellular growth arrest, we synthesized
a novel VD analogue, the 2α-methyl AMCR277A (C23S) to increase its stability in the ligand binding pocket.
Using gene reporter assay, we found that the 2α-methyl AMCR277A is a more potent superagonist than its parental analogue. As observed by flow cytometry technology, this property is
associated with a greater capacity in directing the differentiation
of HL60 cells with concomitant proliferation inhibition. The different magnitude of these biological data is explained by the
crystal structure of the 2α-methyl AMCR277A vs AMCR277A
bound to the human ligand binding domain of VDR. In spite of
its hypercalcemic character, 2α-methyl AMCR277A represents
the template for more potent VD superagonists that may be
used to combat various types of cancers.
RF
Auteur : Z. Kattan, V. Minig, S. Grandemange, N. Touche, L.
Domenjoud, P. Bécuwe
Affiliation(s) : EA SIGRETO, Université Henri Poincaré - Nancy
Université, Nancy
Résumé : Contexte : La superoxyde dismutase mitochondriale
(SOD Mn) est une enzyme antioxydante, qui transforme une
espèce active de l’oxygène comme l’anion superoxyde, en peroxyde d’hydrogène (H2O2). Elle semble jouer un rôle important
dans le développement du cancer. Cependant, ce rôle n’est pas
décrit dans le cancer du sein, ainsi que les mécanismes moléculaires mis en jeu.
Méthodes et Résultats : Notre étude a donc porté sur le rôle
de la SOD Mn dans la croissance des cellules tumorales mammaires MDA-MB231, qui n’expriment pas le récepteur aux œstrogènes (ER négatives) et qui prolifèrent de façon hormono-indépendante. Nous avons montré que ces cellules ER négatives
surexpriment naturellement la SOD Mn de 16 fois, comparativement aux cellules épithéliales mammaires normales et aux
cellules ER positives, telles que les cellules MCF-7 et T47D.
Cette surexpression de la SOD Mn est associée à un taux faible
des enzymes antioxydantes éliminant H2O2 (catalase, glutathion
peroxydase et peroxirédoxine III), ainsi qu’à une production
importante d’H2O2 (2,6 fois) dans les cellules MDA-MB231,
comparativement aux cellules MCF-7. L’inhibition de l’expression de la SOD Mn dans les cellules MDA-MB231, par une
stratégie d’ARN antisens, a montré une stimulation de 2,3 fois
de la croissance et une diminution de 43,4% de l’invasivité cellulaires, associées à l’activité réduite de la métalloprotéinase 9.
L’addition d’antioxydants, éliminant spécifiquement H2O2 libéré
par l’activité de la SOD Mn, entraîne une inhibition jusqu’à 2,7
fois de la croissance et de 41,9% du pouvoir invasif des cellules
MDA-MB231 sauvages.
Conclusions et perspectives : L’ensemble de nos résultats
montre donc que la SOD Mn, en produisant de l’H2O2, serait
un facteur prédictif d’invasion tumorale dans le cancer du sein,
et que la surexpression de son gène serait un des mécanismes
conduisant les cellules cancéreuses mammaires à acquérir un
pouvoir métastatique. D’autres études seront nécessaires dans
l’avenir afin de préciser ce mécanisme dans d’autres types de
cancers.
43
Thème
Micro-environnement tumoral et
relations hôte-tumeur
N° 30
Modulation épigénétique de l’expression du gène
de la MMP1 dans des lignées tumorales humaines.
Corrélations avec les altérations de l’architecture
nucléaire.
RF
Auteur : A. Trussardi-Regnier, C. Doliwa, J. Ripamonti, J. Dufer.
Affiliation(s) : Unité MEDyC, Université de Reims Champagne-Ardenne, CNRS UMR 6237, IFR53, Reims
Résumé : L’expression de la MMP1 est observée au cours de
nombreux processus physiologiques, mais également dans diverses tumeurs. Les mécanismes de contrôle de cette expression ne sont pas entièrement élucidés mais pourraient inclure
des mécanismes épigénétiques (méthylation de l’ADN et/ou
modifications post-traductionnelles des histones). Le but de ce
travail a été d’analyser les effets de 2 molécules: un agent déméthylant, la 5 aza-désoxycytidine (5-Aza) et un inhibiteur des
histone désacétylases, la trichostatine A (TSA) sur l’expression
du gène de la MMP1 dans 2 lignées tumorales humaines : les
cellules de fibrosarcome HT-1080 et de mélanome SK-MEL28.
Ces cellules ont été cultivées en présence de 5-Aza, TSA ou
des 2 molécules et l’expression du gène MMP1 a été évaluée
par RT-PCR en temps réel. Simultanément, l’architecture nucléaire a été évaluée par une étude quantitative de la texture
chromatinienne sur des noyaux cellulaires colorés par la méthode de Feulgen. Dans les 2 lignées cellulaires, la TSA seule,
bien que provoquant une hyperacétylation des histones H4, ne
permet pas l’induction de l’expression de la MMP1 et ne module
pas l’architecture nucléaire globale. Au contraire, la 5-Aza provoque l’apparition d’une expression accrue de la MMP1 avec
une augmentation de l’ARNm de l’ordre de 10 fois dans les
cellules HT1080 et 100 fois dans les cellules SK-MEL28. Cette
induction s’accompagne d’une décondensation significative de
la chromatine nucléaire. Lorsque TSA et 5-Aza sont appliqués
simultanément, un effet synergique de ces 2 molécules est
observé dans les cellules HT1080 mais non dans les cellules
SK-MEL28, et ce tant au niveau de l’expression de la MMP1
que de l’induction d’altérations architecturales nucléaires. Ces
résultats suggèrent que des mécanismes épigénétiques seraient impliqués dans le contrôle de l’expression du gène MMP1
dans ces lignées cellulaires, en corrélation avec des altérations
importantes de l’architecture chromatinienne.
44
N° 31
N° 32
N° 33
Ethoxyfagaronine decreases integrin-mediated in
vitro adhesion and inhibits phosphorylation of focal
adhesion kinase in murine L1210 cell line.
The in vitro anti-angiogenic effect of curcumin is
mediated by PDE isozyme inhibition.
Lumican inhibits B16F1 melanoma cell lung
metastasis.
RF
Auteur : F. Ouchani, J. Devy, S. Salesse, J.J. Helesbeux, O.
Duval, L. Martiny, E. Charpentier
Affiliation(s) : UMR CNRS 6237, Laboratoire SiRMa, Faculté
des Sciences Exactes et Naturelles, Reims
Résumé : In acute lymphoblastic leukemia (ALL), leukemic
cells have the potential to be invasive and infiltrate many organs (lymph nodes, spleen, gonads and CNS). Dissemination
and organ invasion by leukemic cells can roughly be subdivided
into several steps: dissociation of leukemia cells from extracellular matrix and stromal cells in bone marrow, penetration into
vascular lumen, extravasation from vessels into extramedullary
organs, and leukemia cell proliferation in the organs. The tissue
infiltration of extra-medullary organs by leukemic cells is a major
cause of relapse and must be taken into account for the development of new therapeutic strategy. This project concerns the
ethoxyfagaronine (Etxfag), a benzo[c]phenanthridine derived
from fagaronine, a natural compound known for its in vitro antileukemic activities on different human and murine cell lines. In
a previous study, we have shown that Etxfag decreases L1210
acute lymphoblastic cells in vitro invasion. We have demonstrated that Etxfag acts by inhibiting plasminogen activator system
and both MT1-MMP expression and activation
The aim of this work was to evaluate the effects of Etxfag on
in vitro adhesion properties of L1210 acute lymphoblastic cell
line. We showed that Etxfag acts on adhesion by decreasing β1
integrin level at the cell surface. Co-immunoprecipitation experiments using an anti- β1 integrin monoclonal antibody revealed
that Etxfag prevents the phophorylation of FAK on Y-577 and
Y-861 and of PYK2 phosphorylation on Y-579. These phosphorylation sites are implied in migration and invasion processes.
All these results were confirmed by confocal microscopy. Collectively, our results showed that Etxfag exhibits a potent anti-leukemic effect and could constitute a new alternative chemotherapeutic anticancer agent. Further studies are ongoing to define
its mechanism of action and relationship between adhesion and
invasion process.
RF
Auteur : A. Abusnina, T. Keravis, C. Lugnier
Affiliation(s) : CNRS UMR 7213, Strasbourg
Résumé : VEGF, by stimulating endothelial cells to migrate,
proliferate and differentiate, plays a major role in angiogenesis.
Increase in intracellular cAMP is known to inhibit basal as well
as VEGF-induced endothelial cell proliferation. Cyclic nucleotide
phosphodiesterases (PDEs) play a key role in signal transduction by hydrolyzing specifically cyclic nucleotides (Lugnier, Pharmacol Ther 2006; 109: 366-398).
We have previously reported that PDE2 and PDE4 up-regulations (activity, protein and mRNA) in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) are implicated in VEGF-induced angiogenesis and that inhibition of PDE2 and PDE4 isozyme activities
prevents the development of angiogenesis by increasing cAMP
level, by inhibiting cell proliferation, cell migration and cell cycle
progression (Favot et al., Thromb Haemost 2003; 90: 334-343
and 2004; 92: 634-645). Furthermore, we have shown that polyphenols inhibit PDEs (Álvarez et al., Br J Pharmacol. 2006;
147: 269-80).
The polyphenol curcumin, isolated from Curcuma longa, present
in curry powder, is known to have anti-inflammatory, anti-oxidant
and anti-cancer properties. This study investigated the participation of PDEs in anti-angiogenic properties of curcumin.
The effect of curcumin on PDE activities was assessed by the
determination of IC50 values on the five isozymes PDE1-PDE5
purified from vascular tissues. Curcumin inhibited PDE1, PDE2,
PDE3 and PDE4 with IC50 values between 10 to 20 µM, and
PDE5 with an IC50 value of 35 µM.
Curcumin (10µM) inhibited both basal and VEGF-stimulated
HUVEC proliferation (58% and 54% respectively, P=0.003) and
inhibited significantly (52%, P<0.001) the VEGF-induced HUVEC migration similarly to the selective PDE2 inhibitor (0.1µM
BAY-60-7550, 69% P=0.003) and the selective PDE4 inhibitor
(10µM rolipram, 41%, P=0.006). Furthermore, cAMP level in
HUVECs was significantly increased by 10 min treatment of
curcumin (10 µM, +37%), rolipram (10 µM, +30%), BAY-60-550
(0.1 µM, +39%) and rolipram+BAY-60-550 (+50%), indicating
that PDE isozymes within the endothelial cells were effectively
inhibited.
This shows for the first time that curcumin inhibits PDE activities
within endothelial cells and suggests that curcumin present in
food might inhibit angiogenesis at endothelial cell level by inhibiting PDE activities.
RF
Auteur : S. Brézillon1, C. Zeltz1, L. Schneider2, C. Terryn1, B.
Vuillermoz1*, L. Ramonti1,3, C. Perreau1, M. Pluot2,3, M.D. Diebold2,3, A. Radwanska4, M. Malicka-Blaszkiewicz4, F.X. Maquart1,3, Y. Wegrowski1
Affiliation(s) : 1 Laboratoire de Biochimie Médicale et Biologie
Moléculaire, CNRS UMR 6237, IFR53 Biomolécules, Faculté de
Médecine, Université de Reims Champagne-Ardenne, Reims
2
Laboratoire d’Anatomie Pathologique, CNRS UMR 6237, Université de Reims Champagne-Ardenne.
3
CHU de Reims, 51095 Reims Cedex, France.
4
Department of Cell Pathology, Faculty of Biotechnology, University of Wroclaw, 51-148 Wroclaw, Poland
* Present address : iDD Biotech, Dardilly
Résumé : Lumican is a small leucine-rich proteoglycan (SLRP)
of the extracellular matrix (ECM) involved in the control of melanoma growth and invasion. The aim of the present study was to
analyse the role of lumican in the regulation of the development
of lung metastasis. B16F1 melanoma cells stably transfected
with lumican expressing plasmid (Lum-B16F1) were injected
to syngenic mice. The lung metastasis was compared to mice
injected with mock-transfected B16F1 cells (Mock-B16F1). The
expression of lumican, cyclin D1, apoptotic markers, Vascular
Endothelium Growth Factor (VEGF) and Von Willebrand Factor (vWF) within lung metastasis nodules was investigated by
immunohistochemistry. In parallel, cells cultured in presence of
lumican were assayed for apoptosis and motility. We observed
that the number and the size of lung metastasis nodules were
significantly decreased in mice injected with Lum-B16F1 cells
in comparison to Mock-B16F1 cells. This was associated with
an increase of tumour cell apoptosis within metastasis nodules
but the cell proliferation rate remained constant in the two mice
groups. In contrast, the VEGF immunostaining and the number
of blood vessels within the lung metastasis nodules were decreased in the lumican-expressing tumours. In vitro, a significant
decrease of apoptotic markers in wild type B16F1 cells incubated with increasing amounts of lumican core protein was observed. Pseudotube formation on Matrigel® and the migratory capacity of endothelial cells was inhibited by lumican. Altogether,
our results indicate that lumican decreases lung metastasis
development not only by inducing tumour cell apoptosis but also
by inhibiting angiogenesis.
45
N° 34
N° 35
N° 36
N° 37
Lumican core protein inhibits melanoma cell
migration via alterations of focal adhesion
complexes.
Lumcorin : un peptide dérivé du LRR9 du lumicanne
humain inhibe la migration des cellules de
mélanome.
L’implication de l’intégrine alpha6/beta4 dans
l’inflammation intestinale.
Une nouvelle matrikine à activité anti-tumorale: le
domaine NC1 de la chaîne α4 du collagène IV.
RF
RF
RF
RF
Auteur : S. Brézillon1, A. Radwanska4, C. Zeltz1, A. Malkowski4,
D. Ploton1,3, H. Bobichon1, C. Perreau1, M. Malicka-Blaszkiewicz4, F.X. Maquart1,3, Y. Wegrowski1
Affiliation(s) : 1 Laboratoire de Biochimie Médicale et Biologie
Moléculaire, CNRS UMR 6237, IFR53 Biomolécules, Faculté de
Médecine, Université de Reims Champagne-Ardenne, Reims
2
Laboratoire d’Anatomie Pathologique, CNRS UMR 6237, Université de Reims Champagne-Ardenne.
3
CHU de Reims, 51095 Reims Cedex, France.
4
Department of Cell Pathology, Faculty of Biotechnology, University of Wroclaw, 51-148 Wroclaw, Poland
* Present address : iDD Biotech, Dardilly
Résumé : Lumican is a small leucine-rich proteoglycan (SLRP)
of the extracellular matrix (ECM) with anti-tumor activity. Lumican inhibits the migration of melanoma cells and identified β1
integrin as mediator of this effect (D’Onofrio et al, Biochem.
Biophys. Res. Communic. 365 (2008) 266-272). The aim of
the present work was to study β1 integrin, focal adhesion
complexes, actin distribution and expression in the presence
of lumican substratum in comparison to type I collagen or fibronectin substrata in A375 human melanoma cells. The protein distribution was investigated by immunocytochemistry and
confocal microscopy. In parallel, their expression was evaluated
by Western immunoblotting and Real-time Reverse Transcription-PCR analyses. The interaction of melanoma cells with the
lumican substratum resulted in heterogeneous distribution of
β1 integrin on cell membrane. Concomitantly, a reorganization
of actin stress fibers and a significant decrease in vinculin immunostaining at focal adhesion complexes were observed. No
alteration of the expression was detected at protein and mRNA
levels. However, a cytosolic accumulation of vinculin focal adhesion protein was observed on lumican substratum by confocal
microscopy. Moreover, vinculin expression was significantly
increased in cytosolic fractions in comparison to cells seeded
on type I collagen or fibronectin substrata. Our results suggest
that lumican induces an alteration of the link between actin filaments and β1 integrin, characterized by a cytosolic accumulation of vinculin focal adhesion protein, which could lead to a
destabilization of focal adhesion complexes. In addition, focal
adhesion kinase phosphorylated at tyrosine-397 (pFAK) was
significantly decreased. Therefore, the cytoskeleton remodeling
and the decreased pFAK phosphorylation induced by lumican in
melanoma cells might explain, at least in part, the anti-invasive
effect of this SLRP.
46
Auteur : C. Zeltz1, S. Brézillon1, C. Perreau1, J. Heino3,4, CM.
Franz4, F-X Maquart1,2, Y. Wegrowski1
Affiliation(s) : 1 Laboratoire de Biochimie Médicale et de Biologie Moléculaire, CNRS UMR 6237, Université de Reims-Champagne-Ardenne, Reims
2
CHU de Reims
3
Department of Biochemistry and Food Chemistry, University
of Turku, Finland
4
Center for functional Nanostructures, Universität Karlsruhe,
Germany
Résumé : Le mélanome est le cancer cutané le plus grave en
raison de son potentiel métastatique élevé et son pronostic
redoutable. Le lumicanne est une glycoprotéine présente au
sein de la matrice extracellulaire dermique. Il appartient à la famille des petits protéoglycannes riche en leucine (SLRP) et est
constitué de onze régions riches en leucine (LRR). Aux cours de
précédents travaux réalisés dans notre laboratoire, il a été montré que le lumicanne présente des propriétés anti-tumorales.
Le but de la présente étude est de déterminer les mécanismes
impliqués dans l’inhibition de la migration des cellules de mélanome par le lumicanne. Ainsi, la protéine coeur du lumicanne
inhibe la migration de trois lignées cellulaires de mélanome
(A375, HT144 et B16F1). Nous avons démontré, par l’utilisation de siRNA dirigés contre la sous-unité d’intégrine α2, que
cette inhibition était médiée par l’intégrine α2β1. Nous avons par
la suite identifié la séquence peptidique active du lumicanne,
responsable de l’inhibition de la migration. Ainsi, à partir de
différents fragments recombinants et de peptides synthétiques
dérivés du lumicanne, nous avons localisé le site actif au niveau
du domaine LRR 9 du lumicanne. Nous avons proposé le nom
de lumcorin (lumican core protein) pour le peptide dérivé de ce
domaine. Lumcorin inhibe significativement la migration des
cellules de mélanome in vitro d’une manière équivalente à la
protéine coeur du lumicanne.
Auteur : L. Tossé , A. De Arcangelis , S. Siebert , S. Robine, E.
Georges-Labouesse (en collaboration avec Inserm U682)
Affiliation(s) : IGBMC, Université de Strasbourg, Inserm U964,
CNRS UMR7104, Strasbourg
Résumé : Les intégrines sont des récepteurs hétérodimériques
transmembranaires qui interagissent avec la matrice extracellulaire. Plusieurs de ces récepteurs, telles que les intégrines α6β1
et α6β4, se lient à la laminine, un élément majeur de la lame
basale. Le présent projet cible l’intégrine α6β4, un important
composant des hémidesmosomes, la jonction d’ancrage de
l’épithélium (peau, intestin) à la lame basale.
Dans l’intestin, des hémidesmosomes partiels comprenant l’intégrine α6β4 sont présents au pôle basal des cellules épithéliales. En plus de leur fonction d’adhésion, les intégrines sont
également responsables de la connexion transmembranaire
au cytosquelette et déclenchent des transmissions de signaux.
Elles ont ainsi une grande influence sur des propriétés fondamentales de la cellule telles que la prolifération et survie, la polarité cellulaire, la motilité, l’expression des gènes et la différenciation. Par ailleurs, l’intégrine α6β4 est associée à la plectine, une
grande molécule de la famille des plakines. Il a été démontré
que la plectine servait à contrôler la localisation d’éléments de
signalisation, en particulier des voies MAPK.
L’équipe a produit récemment un nouveau modèle de souris où
le gène codant pour l’intégrine α6 peut être délété spécifiquement dans l’intestin. Ces souris développent une inflammation
chronique intestinale. De plus, par immunohistologie, une forte
diminution du marquage basal de la plectine a été constatée
chez ces mutants. Le but de mon travail est d’une part d’étudier les voies de signalisation de l’intégrine α6β4 (FAK, ILK,
certaines kinases des voies MAPK et shc/Grb2) et d’autre part
d’analyser son implication dans la progression de l’inflammation
intestinale.
Auteur : K. Senechal1, J. Thevenard1, L. Ramont1, L. Di Stefano1, L. Mir2, F.X. Maquart1, S. Brassart-Pasco1, J.C. Monboisse1
Affiliation(s) : 1 UMR CNRS 6198, UFR Médecine, Reims
2
UMR CNRS 8121, IGR, Villejuif
Résumé : Les différentes étapes de la progression tumorale
mettent en jeu des cascades protéolytiques impliquant les métalloprotéinases matricielles (MMPs) et le système d’activation
du plasminogène, responsables de la dégradation de la matrice
extracellulaire environnante, et plus particulièrement des membranes basales, nécessaire à la migration des cellules. Ces
différentes étapes peuvent être contrôlées par les macromolécules de la matrice extracellulaire elles-mêmes ou par certains
de leurs domaines protéiques libérés par protéolyse limitée, et
pour lesquels nous avons proposé le terme de matrikines.
Parmi ces matrikines, nous nous sommes plus particulièrement intéressés au domaine non collagénique C-terminal de la
chaîne α4(IV) du collagène de type IV. Cette matrikine exerce
un effet anti-tumoral dans un modèle de mélanome in vivo
chez la souris. Dans ce modèle expérimental, l’utilisation de
la protéine recombinante correspondante ou sa surexpression
par des cellules de mélanome transfectées de manière stable
induit une réduction de la croissance tumorale. Cette diminution
résulte d’une inhibition d’une part de la prolifération cellulaire
en induisant un blocage du cycle cellulaire et d’autre part de
l’expression et de l’activation de diverses MMPs et du système
d’activation du plasminogène. Le développement d’une stratégie thérapeutique chez la souris, par surexpression de cette
matrikine après électroporation in vivo, réduit fortement la croissance tumorale et augmente la survie des animaux.
L’ensemble de ces résultats met en évidence une nouvelle
matrikine à activité anti-tumorale et permet d’envisager de nouvelles stratégies thérapeutiques pour lutter contre la progression tumorale et la dissémination métastatique.
47
N° 38
N° 39
Rôle des kinases JAK2 et Lyn dans la survie des
cellules érythroleucémiques humaines UT-7 induite
par le TIMP-1.
Etude systématique des effets immunologiques
de drogues chimiothérapeutiques classiquement
utilisées en thérapie humaine.
RF
Auteur : L. Bridoux, N. Etique, E. Lambert, J. Devy, M.L. Sowa,
L. Martiny, E. Charpentier
Affiliation(s) : Laboratoire SiRMa, MEDyC UMR6237 CNRS,
Université de Reims Champagne-Ardenne, Reims
Résumé : Les Inhibiteurs Tissulaires des Métalloprotéinases
(TIMPs), initialement décrits comme inhibiteurs endogènes
des métalloprotéinases matricielles (MMPs), se révèlent être
des protéines multifonctionnelles dont certaines activités sont
totalement indépendantes de l’inhibition des MMPs. Parmi les
quatre TIMPs identifiés, le TIMP-1 est présent dans le microenvironnement hématopoïétique et semble jouer un rôle dans la
physiologie des progéniteurs hématopoïétiques. Notre équipe
a montré que le TIMP-1 induit la survie des cellules érythroleucémiques humaines UT-7 en activant la voie JAK2/PI 3-kinase/
Akt. Récemment, nous avons montré que le TIMP-1 se fixe à
un complexe pro-MMP-9/CD44 localisé à la membrane plasmique pour induire son effet anti-apoptotique. Dans ce travail,
nous avons étudié plus spécifiquement le lien entre le complexe
membranaire TIMP-1/pro-MMP-9/CD44 et la voie de signalisation JAK2/PI 3-kinase/Akt.
Nous montrons par immunoprécipitation, immunofluorescence
et modélisation moléculaire que JAK2 et CD44 sont associées
constitutivement dans les cellules UT-7 via le domaine FERM de
JAK2 et que CD44 est nécessaire à la phosphorylation de JAK2
induite par le TIMP-1.
Nous mettons également en évidence la participation de la Src
kinase Lyn dans la signalisation anti-apoptotique du TIMP-1.
Comme JAK2, Lyn semble être associée à CD44. En présence
de TIMP-1, Lyn est activée (phosphorylation de l’énolase et déphosphorylation de la tyrosine 507 de Lyn) et son inhibition (par
le PP1 et des siRNA ciblant Lyn) bloque l’effet du TIMP-1 sur la
survie cellulaire et l’activation de la voie PI 3-kinase/Akt.
L’ensemble de ces résultats démontre que les kinases JAK2 et
Lyn sont impliquées, via le complexe membranaire pro-MMP-9/
CD44, dans la signalisation anti-apoptotique du TIMP-1 en
amont de la voie PI 3-kinase/Akt.
48
RF
RT
Auteur : F. Chalmin, S. Ladoire, G. Mignot, J. Vincent, L. Apetoh, C. Rébé, F. Ghiringhelli
Affiliation(s) : INSERM U866, équipe « Avenir », Faculté de
Médecine et de Pharmacie, Dijon
Résumé : Les interactions entre les cellules du système immunitaire (SI) et les cellules cancéreuses semblent avoir un impact
majeur sur l’évolution tumorale. Il a ainsi été décrit que le SI
est capable de rejeter les tumeurs, mais que dans des conditions spontanées les tumeurs se protègent contre son action
par différents moyens. D’une part, la faible immunogénicité des
cellules tumorales limite leur visibilité par les effecteurs du SI.
D’autre part, les tumeurs induisent une subversion du SI en promouvant l’expansion et l’activation de populations immunosuppressives : les lymphocytes T régulateurs (Tregs) et les cellules
myéloïdes suppressives (MDSC)
Il a été montré que le cyclophosphamide est capable d’éliminer spécifiquement les Tregs et que la gemcitabine diminue
fortement la présence des MDSC. Enfin, il a été montré que
les anthracyclines provoquent une mort cellulaire immunogène,
c’est-à-dire augmentent la visibilité des cellules tumorales tuées
par la chimiothérapie.
Notre étude vise, par des moyens simples, à étudier systématiquement les effets immunologiques de cinq drogues de chimiothérapie classiquement utilisée en thérapeutique humaine : le
cyclophosphamide, le 5-fluorouracile (5-FU), l’oxaliplatine, la
gemcitabine et la doxorubicine et de comparer leurs capacités
à 1) induire une mort cellulaire immunogène ; 2) diminuer le
nombre ou l’activité des Tregs et 3) diminuer le nombre ou l’activité des MDSC.
Notre étude montre que l’effet antitumoral de ces traitements
sauf pour la gemcitabine nécessite la présence de lymphocytes
T. Le cyclophosphamide et l’oxaliplatine diminuent le nombre de
Tregs infiltrant les tumeurs. La gemcitabine et le 5-FU diminuent
l’infiltration des tumeurs par les MDSC. La doxorubine, l’oxaliplatine et la gemcitabine semble induire une mort immunogène.
Enfin, associant le cyclophosphamide, pour éliminer les Treg, et
la gemcitabine ou le 5- FU, éliminant les MDSC, nous avons pu
mettre en évidence une synergie entre le cyclophosphamide et
le 5- FU, mais pas entre le cyclophosphamide et la gemcitabine.
Thème
Radiothérapie & dosimétrie
ments and Methods in Physics Research B 266 1085-1093
2
Walters, I. Kawrakow, DWO Rogers 2005 DOSXYZnrc Users
Manual, NRCC ReportPIRS-794 revB
3
X. Wu and Y. Zhu 2000 A neural network regression model for
relative dose computation Phys. Med. Biol. 45 913-922
N° 40
Artificial neural networks in external beam
radiotherapy.
RF
Auteur : E. Martin, A. Vasseur, R. Gschwind, L. Makovicka
Affiliation(s) : IRMA/Enisys/FEMTO-ST, Pôle universitaire des
Portes du Jura, Montbéliard
Résumé : Introduction: In external beam radiotherapy, the
Treatment Planning Systems (TPS) are a crucial requirement
for dose distribution calculations. Monte Carlo methods are well
known for their accuracy, particularly in following the particles in
heterogeneous media. However their use in routine clinical is
possible only with bias techniques, particularly for the electrons.
That’s why our team works in collaboration with a computer laboratory AND/LIFC to propose an alternative solution: the artificial neural networks.
Materials and methods: An artificial neuron, based on biological
model, is a non-linear operator mathematical which receives
one or more inputs and computes a sum of them to produce a
single output. This sum is passed though a non-linear function
entitled the activation function. The artificial neural networks interconnect simply the neurons together. By using this technique,
we are developing the code called NeuRad in order to compute
dose distributions inside a voxelized phantom.
During a calibration phase (training phase), some Monte Carlo
calculation (and/or measurements) for homogeneous media
are used in order to build our neural network. Within a second
phase, clinical dosimetric calculations (for unknown heterogeneous media) can be performed by using the trained network
(Figure 1). This approach permits us to obtain results in less
than one minute (by using a low end PC) without exceeding
an error of few percents, comparing with non-biased MC calculations (several days of calculation using a multi-processors
workstation).
Results: In a first time, the NeuRad results were compared to
Monte Carlo simulations, performed in homogeneous media, in
order to validate our method. Then, in a second time, complex
modelisations were realized for heterogeneous media and clinical situation (Figure 2). The calculation time (and accuracy) of
training phase and dose distributions were analyzed and compared with DOSXYZnrc results.
Conclusion: For now, our study demonstrates the usefulness of
Artificial Neural Network for external beam radiotherapy. Mainly,
using neural networks permits us to obtain very accurate dosimetric results while spending far less computing time, comparing with non biaised Monte Carlo calculation
References
1
Vasseur, L. Makovicka, E. Martin, M. Sauget, S. ContassotVivier, J. Bahi 2008 Dose calculations using artificial neural
networks : a feasibility study for photon beams Nuclear Instru-
N° 41
Exploring the possibility to use case-based
reasoning to retrieve and store voxelised phantoms.
RF
Auteur : J. Henriet1, M. Bopp1, B. Chebel-Morello2, D. Franck3,D.
Broggio3, L. Makovicka1
Affiliation(s) : 1 IRMA/ENISYS/ Institut FEMTO – UMR CNRS
6174, Pôle Universitaire des Portes du Jura, Montbéliard
2
COSMI/AS2M/Institut FEMTO – UMR CNRS 6174, Besançon
3
LEDI/SDI/DPRH, IRSN, Fontenay-aux-Roses
Résumé : Introduction: In case of accidental radiation, it is
necessary to establish a dosimetric report. These reports are
based on voxelised phantoms that represent the internal organs
of the victim in 3-Dimensions. The closer to the victim the phantom is, the more accurate the report is. Consequently, our teams
explore the possibility to use an innovative computer science
technique to adapt known voxelised phantoms to a victim.
Materials and methods: On the one hand, the problem is that
there are not so much phantoms in the literature. On the other
hand, the Case-Based Reasoning (CBR) is an innovative technique from Artificial Intelligence which retrieves known cases in
order to adapt them to a new unknown case. The characteristics of the known phantoms are stored in a database. In case
of accidental radiation, the known characteristics of the victim
(age, gender, wrist diameter, lung volume, etc.) are compared to
the ones of each known phantom. Actually, some characteristics
may not have the same importance, thus, a weight is associated
to each measure.
Results and conclusion: A similarity index is computed between
the victim and the phantom compared to. At the same time,
some characteristics may not be known nor measurable, so a
confidence index, based on the unknown victim characteristics
ratio, is also computed. This platform allows us to retrieve and
compare easily the known voxelised phantoms to a victim. We
have also designed a user-friendly interface which allows quick
diagnosis and graphical comparisons between the victim and
the stored voxelised phantoms.
49
Plan de la manifestation
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1er étage
Badges / Doc
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Couloir
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Salles Ostwald
&
Ill Wickersheim
39
Pauses café
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Posters 20 à 41
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Salles Ostwald & Ill Wickersheim
Conférence
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Rez-de-chaussée
Salle Heydt
1
2
3
4
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9
Restauration
Dîner de gala
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Posters 1 à 19
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Contact : Dominique MARILLEY - Tél. : +33 (0)6 77 27 65 48
Les halls et salles du Chateau de l’Ile sont équipés du système WIFI
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2exvia.com
www.canceropole-ge.org
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3ème Forum - Canceropole: Accueil - Cancéropôle du Grand-Est

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