Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK

FRANÇAIS
ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal
Code Y5400
Intérêt
ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal, est destiné à la détection par hybridation in situ en fluorescence (FISH) des translocations impliquant
le gène ETV6 sur le bras p13 du chromosome 12. Lorsque la sonde est utilisée sur des échantillons cytologiques, la trousse Dako
Cytology FISH Accessory Kit, code K5499, est recommandée.
ENGLISH
Intended use
L'interprétation des résultats doit être faite par un professionnel qualifié dans le contexte de l'histoire clinique du patient et des autres
examens diagnostics.
For in vitro diagnostic use.
ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal, is intended for the detection of translocations involving the ETV6 gene at chromosome 12p13 by
fluorescence in situ hybridization (FISH). When the probe is used on cytology specimens the Dako Cytology FISH Accessory Kit, code
K5499, is recommended.
Introduction
Le gène humain ETV6 (ETS Variant gene 6, appelé également TEL) est composé de 8 exons mesurant environ 240 kb sur le bras p13 du
chromosome 12 (1,2). Le gène ETV6 code pour un facteur de transcription nécessaire spécifiquement à l'hématopoïèse dans la moelle
osseuse (3). La protéine ETV6 contient deux domaines critiques: le domaine de dimérisation hélice-boucle-hélice (HLH) 5', codé par les
exons 3 et 4, et le domaine 3' de liaison à l'ADN spécifique à la transformation d'E26, codé par les exons 6 à 8 (2). La translocation d'ETV6
a été identifiée avec différents partenaires chromosomiques (4). Les deux sondes ADN utilisées pour la détection par hybridation in situ en
fluorescence à signal divisé des translocations impliquant le gène ETV6 sont conçues pour s'hybrider en amont et en aval de la région du
segment de rupture commun. La colocalisation des sondes provoque un signal jaune, alors que les évènements de translocation dans la
région vont diviser le signal en deux signaux séparés, l'un vert (fluorescéine) et l'autre rouge (rouge Texas).
Cible (rouge)
La sonde ADN marquée au rouge Texas (ETV6-TR) se lie à un segment de 264 kb télomère à la région du segment de rupture
(breakpoint) d'ETV6 sur le chromosome 12p13.
Cible (verte)
La sonde marquée à la fluorescéine (ETV6-Flu) se lie à un segment de 483 kb centromère à la région du segment de rupture d'ETV6 sur
le chromosome 12p13.
Ecart-type (entre les sondes)
L’écart entre ETV6-TR et ETV6-Flu est de 44 kb.
Réactif fourni
ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal, est un mélange de deux sondes ADN marquées par un fluorochrome et de deux sondes PNA de
blocage non marquées. Les sondes ADN du mélange consistent en une sonde marquée à la fluorescéine (ETV6-Flu) et une sonde
marquée au rouge Texas (ETV6-TR) et elles doivent être utilisées avec la trousse Dako Cytology FISH Accessory Kit, code K5499 sur les
échantillons cytologiques. Le réactif est fourni sous forme liquide dans une solution d'hybridation contenant du formamide à 45 %, du
sulfate de dextran à 10 %, du NaCl à 300 mmol/L, du phosphate à 5 mmol/L et un agent de blocage. Chaque flacon contient 200 µL,
correspondant à 20 tests (10 µL par test).
Spécificité
99,4 %. Définie comme la moyenne de six numérations indépendantes de 1 050 cellules de sang périphérique normal.
Sensibilité
96,7 %. Définie comme la moyenne de six numérations indépendantes de 1 050 cellules dans une lignée cellulaire REH positive à la
translocation (5).
Valeur de coupure
Lors de la numération de 50 cellules, les échantillons présentant plus de 4 signaux divisés doivent être considérés comme positifs à la
translocation d'ETV6. Sur la base de la spécificité et de la sensibilité de la sonde, cela garantira que 99 % de tous les échantillons
contenant moins de 2 % de cellules avec des évènements de signal divisé seront caractérisés comme négatifs à la translocation, tandis
que 99 % de tous les échantillons contenant plus de 12 % de cellules avec des évènements de signal divisé seront caractérisés comme
positifs à la translocation. En cas de doute, un nouveau comptage doit être effectué pour l'échantillon.
Précautions d'emploi
1. Pour utilisateurs professionnels.
Interpretation of results must be made within the context of the patient’s clinical history and other diagnostic tests by a certified
professional.
Introduction
The human ETV6 gene (ETS Variant gene 6, also known as TEL) consists of 8 exons spanning ~240 kb on chromosome 12 band p13 (1,
2). The ETV6 gene encodes a transcription factor required specifically for hematopoiesis within the bone marrow (3). The ETV6 protein
contains two critical domains: the 5´ helix-loop-helix (HLH) dimerization domain, coded by exons 3 and 4, and the 3´ E26 transformationspecific DNA-binding domain coded by exons 6-8 (2). The ETV6 translocation has been identified with different chromosome partners (4).
The two DNA probes used for split-signal FISH detection of translocations involving the ETV6 gene are designed to hybridize upstream
and downstream of the common breakpoint cluster region. Co-localization of the probes results in a yellow signal, whereas translocation
events in the region will split the signal in separate green (fluorescein) and red (Texas Red) signals.
Target (red)
The Texas Red-labeled DNA probe (ETV6-TR) binds to a 264 kb segment telomeric to the ETV6 breakpoint cluster region on chromosome
12p13.
Target (green)
The fluorescein-labeled DNA probe (ETV6-Flu) binds to a 483 kb segment centromeric to the ETV6 breakpoint cluster region on
chromosome 12p13.
Probe gap
The gap between ETV6-TR and ETV6-Flu is 44 kb.
Reagent provided
ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal, is a mixture of two fluorochrome-labeled DNA probes and unlabeled PNA blocking probes. The DNA
probes in the mixture consist of a fluorescein-labeled probe (ETV6-Flu) and a Texas Red-labeled probe (ETV6-TR), and should be used in
combination with Dako Cytology FISH Accessory Kit, code K5499, on cytology specimens. The reagent is provided in liquid form in
hybridization solution containing 45% formamide, 10% dextran sulphate, 300 mmol/L NaCl, 5 mmol/L phosphate, and blocking agent. Each
vial contains 200 µL corresponding to 20 tests (10 µL per test).
Specificity
99.4%. Defined as the mean of 6 independent countings of 1050 cells from normal peripheral blood.
Sensitivity
96.7%. Defined as the mean of 6 independent countings of 1050 cells in a translocation-positive cell line REH (5).
Cut-off value
When counting 50 cells, specimens with more than 4 split signal events should be considered ETV6 translocation positive. Based on the
specificity and sensitivity of the probe, this will ensure that 99% of all specimens containing less than 2% cells with split signal events will
be characterized as translocation negative, while 99% of all specimens containing more than 12% cells with split signal events will be
characterized as translocation positive. In case of doubt, the specimen should be re-counted.
Precautions
1. For professional users.
2. Le réactif contient ≥25 - <50% formamide et ≥1 - <3% chlorure de sodium. Le réactif est étiqueté :
2. The reagent contains ≥25-<50% formamide and ≥1-<3% sodium chloride. The reagent is labeled:
Danger
Danger
H360D
P201
P280
P308 + P313
P405
P501
Storage
(128373-001)
Pour diagnostic in vitro.
H360D
P201
P280
May damage the unborn child.
Obtain special instructions before use.
Wear protective gloves. Wear eye or face protection. Wear protective clothing.
IF exposed or concerned: Get medical attention.
Store locked up.
Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, national and international
regulations.
Store in the dark at 2-8 °C. Do not use after expiration date stamped on vial. If reagents are stored under any conditions other than those
specified, the conditions must be verifyed by the user. There are no obvious signs to indicate instability of this product. Therefore, positive
and negative controls should be run simultaneously with patient specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained
by variations in laboratory procedures and a problem with the product is suspected, contact Dako Technical Services.
P04169EFG_01_Y540029-2/2015.10 p. 1/4
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
P308 + P313
P405
P501
Stockage
(128373-001)
Peut nuire au foetus.
Se procurer les instructions avant utilisation.
Porter des gants de protection. Porter un équipement de protection des yeux ou du visage. Porter des
vêtements de protection.
EN CAS d’exposition prouvée ou suspectée: Consulter un médecin.
Garder sous clef.
Éliminer le contenu et le récipient en conformité avec toutes réglementations locales, régionales, nationales,
et internationales.
Conserver dans l'obscurité entre 2 °C et 8 °C. Ne pas ut iliser après la date de péremption indiquée sur le flacon. Si les réactifs sont
conservés dans des conditions autres que celles préconisées, les conditions doivent être vérifiées par l'utilisateur. Aucun signe visible
n'indique l'instabilité de ce produit. Par conséquent, des contrôles positifs et négatifs doivent être traités simultanément avec les
échantillons du patient. En cas de résultats imprévus qui ne peuvent pas être expliqués par des changements de procédures de
laboratoire et si un problème avec le produit est suspecté, contacter les Services Techniques de Dako.
P04169EFG_01_Y540029-2/2015.10 p. 2/4
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DEUTSCH
Zweckbestimmung
References/ Références/ Literatur
Zur Verwendung für In-vitro-Untersuchungen.
Die Sonde ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal, dient zur Detektion von Translokationen unter Beteiligung des ETV6 Gens auf
Chromosom 12p13 durch Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung . Beim Einsatz der Sonde auf zytologischen Proben wird der Dako Cytology
FISH Accessory Kit, Code-Nr. K5499, empfohlen.
Die Befunde müssen unter Berücksichtigung der klinischen Anamnese des Patienten und im Kontext weiterer diagnostischer Verfahren
von einem zertifizierten Facharzt interpretiert werden.
Einleitung
Das menschliche ETV6 Gen (ETS Variante Gen 6, auch als TEL bekannt) besteht aus 8 Exonen, die ca. 240 kb auf Band p13 von
Chromosom 12 umspannen (1, 2). Das ETV6 Gen kodiert einen Transkriptionsfaktor, der spezifisch für die Hämatopoese im
Knochenmark benötigt wird (3). Das ETV6 Protein enthält zwei kritische Domänen: die 5´ Helix-Schleife-Helix (HLH)Dimerisierungsdomäne, die durch Exone 3 und 4 kodiert werden, sowie die 3´ E26 Transformations-spezifische DNA bindende Domäne,
die durch die Exone 6-8 kodiert wird (2). Die ETV6-Translokation erfolgt mit unterschiedlichen Partnerchromosomen(4). Die zwei DNASonden, die zur Split Signal Fish-Detektion von Translokationen unter Beteiligung des ETV6 Gens verwendet werden, sind so ausgelegt,
dass sie sowohl upstream wie auch downstream von der gemeinsamen „breakpoint cluster region“ hybridisieren. Eine Ko-Lokalisation der
Sonden führt zu einem gelben Signal, wohingegen Translokationsvorgänge in der Region das Signal in separate grüne (Fluorescein) und
rote (Texas-Rot) Signale aufspaltet.
1.
Golub TR, Barker GF, Lovett M, Gilliland DG. Fusion of PDGF receptor beta to a novel ets-like gene, tel, in chronic myelomonocytic
leukemia with t(5;12) chromosomal translocation. Cell 1994;77:307-16.
2.
Baens M, Peeters P, Guo C, Aerssens J, Marynen P. Genomic organization of TEL: the human ETS-variant gene 6. Genome Res
1996;6:404-13.
3.
Wang LC, Swat W, Fujiwara Y, Davidson L, Visvader J, Kuo F, et al. The TEL/ETV6 gene is required specifically for hematopoiesis in
the bone marrow. Genes Dev 1998;12:2392-402.
4.
van der Burg M, Poulsen TS, Hunger SP, Beverloo HB, Smit EME, Vang-Nielsen K, et al. Split-signal FISH for detection of
chromosome aberrations in acute lymphoblastic leukemia using a new PNA-based blocking method. Leukemia 2004;18:895-908.
5.
Cell line REH provided by DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Germany.
Explanation of symbols/ Légende des symboles/ Erläuterung der Symbole
Catal ogu e numbe r
Référe nce du ca ta log ue
Tempera tu re li mi ta tion
Li mi tes de tempéra tu re
Use b y
Util iser ju sque
Bestell nummer
Zulä ssi ge r Tempe raturb ereich
Verwe ndb ar bi s
In vi tro d iag nostic medi cal
devi ce
Kee p away from sunlig ht
(con sult sto rage sectio n)
Man ufacturer
Disp ositif médi cal de
dia gno sti c i n vitro
Protég er de la lumièr e du sole il
(voi r se ction stockag e)
In -Vitro-Di agn ostikum
Li chtgesch ützt la gern (sie he
Absch nitt zu r L age rung)
Con sult instructio ns fo r u se
Con sulter le s instruction s
d’u ti lisa tion
Ge brau chsan wei sung
bea chten
Ziel (rot)
Die Texas-Rot-markierte DNA Sonde (ETV6-TR) bindet an ein zur breakpoint cluster region
Chromosom 12p13.
Ziel (grün)
Die Fluorescein-markierte DNA Sonde (ETV6-Flu) bindet an ein zur breakpoint cluster region zentromerisches 483 kb-Segment auf
Chromosom 12p13.
Sonden-Abstand
Der Abstand zwischen ETV6-TR und ETV6-Flu beträgt 44 kb.
Geliefertes Reagenz
ETV6 FISH DNA Probe, Split Signal, ist eine Mischung aus zwei Fluorochrom-markierten DNA Sonden und unmarkierten PNABlockierungssonden. Die DNA Sonden in dieser Mischung bestehen aus einer Fluoreszein-markierten Sonde (ETV6-Flu) und einer TexasRot-markierten Sonde (ETV6-TR) und sind in Kombination mit dem Dako Cytology FISH Accessory Kit, Code Nr. K5499, auf zytologischen
Proben zu verwenden. Das Reagenz wird in flüssiger Form in Hybridisierungslösung geliefert, die 45% Formamid, 10% Dextransulphat,
300 mmol/L NaCl, 5 mmol/L Phosphat und Blockierungsmittel enthält. Jedes Fläschchen ist ausreichend für 200 Tests (10 L pro Test).
Spezifität
99,4%. Definiert als Mittelwert von 6 unabhängigen Auszählungen von 1050 Zellen aus normalem peripheren Blut.
Empfindlichkeit
96,7%. Definiert als Mittelwert von 6 unabhängigen Auszählungen von 1050 Zellen in einer auf Translokation positiven Zelllinie REH (5).
Cut-off-Wert
Beim Auszählen von 50 Zellen werden Proben mit mehr als 4 aufgespaltenen Signalen als ETV6 Translokation-positiv angesehen. Auf der
Basis der Spezifität und Sensitivität dieser Sonde führt dies dazu, dass 99% aller Proben mit weniger als 2% Zellen mit aufgespaltenen
Signalvorgängen als Translokation-negativ angesehen werden, während 99% aller Proben mit mehr als 12% Zellen mit aufgespaltenen
Signalvorgängen als Translokation-positiv eingestuft werden. Im Zweifelsfall muss die Probe erneut ausgezählt werden.
Vorsichtsmaßnahmen
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Fabricant
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zu den Si cherh eitshi nwe isen )
telomerisches 264 kb-Segment auf
1. Für geschultes Fachpersonal.
2. Das Reagenz enthält ≥25-<50% Formamid und ≥1-<3% Natriumchlorid. Das Reagenz ist wie folgt ausgezeichnet.
Gefahr
H360D
P201
P280
P308 + P313
P405
P501
Lagerung
(128373-001)
Kann das Kind im Mutterleib schädigen.
Vor Gebrauch besondere Anweisungen einholen.
Schutzhandschuhe tragen. Augenschutz oder Gesichtsschutz tragen. Schutzkleidung tragen.
BEI Exposition oder falls betroffen Ärztliche Hilfe anfordern.
Unter Verschluss aufbewahren.
Inhalt und Behälter in Übereinstimmung mit allen lokalen, regionalen, nationalen und internationalen
Gesetzen entsorgen.
Bei 2–8 °C aufbewahren. Nach Ablauf des auf dem Fl äschchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden. Werden die Reagenzien
unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt, müssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden. Es gibt keine
offensichtlichen Anzeichen für eine eventuelle Produktinstabilität. Positiv- und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die
Patientenproben getestet werden. Falls es zu einer unerwarteten Färbung kommt, die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erklären
lässt und auf ein Problem mit dem Antikörper hindeutet, ist der technische Kundendienst von Dako zu verständigen.
P04169EFG_01_Y540029-2/2015.10 p. 3/4
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(128373-001)
P04169EFG_01_Y540029-2/2015.10 p. 4/4
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