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Les ANCA au laboratoire
Yves Renaudineau, PU-PH
Laboratoire d’Immunologie et Immunothérapie
EA2216 Immunologie, Pathologie et Immunothérapie
CHU Morvan, Brest
Club des jeunes néphrologues, 15 mars 2013
Découverte
Foie de rat
AAN
PNN humains
AAN
ANCA
Davies et al, 1982
Van der Woode et al, 1985
I- Immunofluorescence indirecte
II- Cibles antigéniques
III- Interprétation
Technique
Antigène
1- PNN humains
Fixation (éthanol, formol…)
Conservation
Ac sérique
Antiglobuline
Fluorescente
2-Sérum/Plasma
Seuil de positivité 1/20ème
Phénomène de pro-zone
3-Antiglobuline (IgG+++)
4-Contrôles de qualité internes
ANCA 13,6% positifs
- 46% vascularites à ANCA
ANCA PNN/éthanol
- 54% autres pathologies
Fluorescence
cytoplasmique
c-ANCA 5,8% positifs
- 37% vascularites
- 63% autres pathologies
Fluorescence
périnucléaire
PNN/formol-acetone
Fluorescence
cytoplasmique
p-ANCA 7,8% positifs
- 54% vascularites
- 46% autres pathologies
Fluorescence
(péri)nucléaire
NANA
(nuclear associated
neutrophil Ab)
Deguillaume, IBS, 2006
HOUSTON...
WE HAVE A PROBLEM
formes “atypiques” (>25% des ANCA positifs)
cANCA atypiques
cANCA atypiques
AAN+
Fluorescence
nucléaire?
HEp-2
Monocytes
I- Immunofluorescence indirecte
II- Cibles antigéniques
III- Interprétation
1-Repos
2-Facteur déclenchant
Infection, génétique,
5-Lésions
Endothéliales
envirronnement…
Cytokines (IL8)
C’
2-Adhésion
4-Dégranulation
par les ANCA
et complément
3-Activation des PNN
Récepteurs pour antigènes du PNN
I
PR3
MPO
Lamp1
Granules
II
gélatinase
PR3
BPI
Elastase
Cat. G
Lysozyme
Lys.
Lactoferrine
Etc...
PR3
Lysozyme
Surface
NB1+Mac1
???
Lamp1
Cas particulier des anti-PR3
Discordance IFI/ELISA: quantitative et qualitative
Sensibilité c-ANCA (85%) > anti-PR3 (60-65%) > deux (55-60%)
Structure 3D
Deux formes
Epitopes masqués
ANCA
PNN/éthanol
Fluorescence
cytoplasmique
Fluorescence
périnucléaire
c-ANCA+
p-ANCA
PNN/formol-acetone
Fluorescence
+/(péri)nucléaire
NANA
(titration sur
PNN/Ethanol)
anti-PR3
anti-MPO
Si négatif
anti-LF, -BPI, -elastase, cathepsine G, etc
Si AAN (HEp-2) négatifs
C-ANCA+
P-ANCA+
NANA
PR3+
MPO+
BPI+
33%
0
22%
Divers*
15%
PR3+
MPO+
6%
65%
BPI+
Divers*
5%
13%
Aucune spécificité
*Cathepsine G, élastase, lactoferrine
Granulomatose avec polyangéite
infections (pneumopathies à Pyo)
cholangites sclérosantes
GAP (qq cas)
GAP, (MICI qq cas)
G. éosinophilique avec polyangéite
GN pauci-immunes,
Goodpasture
rhumatismes, lymphome B,
rhumatismes, infections
Colite ulcérative, Crohn, RCH
I- Immunofluorescence indirecte
II- Cibles antigéniques
III- Interprétation
Importance du contexte clinique+++
ANCA
Sensibilité
Granulomatose avec polyangéite
G. éosinophilique avec polyangéite
Polyangéite microscopique
Glomérulonéphrite nécrosante focale
85%
40-66%
81%
82%
Horton
Takayasu
<5%
<5%
Témoins normaux
2%
Témoins malades
23%
Spécificité
95%
75%
Hagen, Kidney Int, 1998
Suivi des patients
c-ANCA
p-ANCA
GAP
- Corrélation imparfaite
taux
ANCA(PR3)/clinique > Anapath
SCS
- Si ANCA+ risque
rechute 20% à 5ans
- Favoriser l’ELISA pour
le suivi
Syndrome pneumorénale de Goodpasture
Anti-GBM
antibodies
Syndrome des Ac anti-GBM
ANCA/MPO retrouvés 1/3 des cas
Formes plus sévères
Evolution favorable après traitement
MBG
pANCA/MPO
Luque-Paz, Autoantibodies, 2013
Anti-GBM
Serratrice, AJKD, 2004
ANCA et autres pathologies
Maladies inflammatoires chroniques du TD
(rectocolite hemorragique, Crohn)
NANA
(PR3+)
Hépatites auto-immunes
pANCA/
NANA
Infections P.aeruginosae
dans mucoviscidose
cANCA
atypiques
(BPI+)
“take home messages”
- Faible prévalence des ANCA/PR3/MPO en pratique (<15%)
- De nombreuses interférences (<50% vascularites à ANCA)
- Nécessiter d’avoir des techniques de confirmation
malgré les limites (anti-PR3)
- Importance du contexte clinique
- Faible relation entre le titre des ANCA et l’évolution de la
maladie
- Importance du dialogue (biologistes/cliniciens/anatomopathologistes/industriels)
Remerciements
• CHU de Brest
- Laboratoire d’immunologie/EA2216 Immunologie Pathologie
• - Service de Néphrologie
- Service de Rhumatologie
• CHG St Malo
- Service de Néphrologie
Conflits d’intérets: non