25-OH Vitamin D

25-OH Vitamin D
Essai immunoenzymatique pour la quantification de la concentration totale en 25-OH-vitamine D dans le sérum humain
Résumé de l'essai de dosage de la
25-OH-vitamine D MicroVue™
Préparation des réactifs, étalons et contrôles
q Diluer 1 volume de solution concentrée de tampon de lavage
dans 200 volumes d’eau déionisée.
q Reconstituer les étalons, les contrôles et le au moyen d'eau
déionisée ou distillée
Protocole de dosage
Pipeter 50 μl d'étalons, de contrôles et d'échantillons
dans des puits
Pipeter 150 μl de solution tampon dans des puits
Laisser incuber pendant 2 heures en agitant à 300 – 700 tr/min
à une température de 18 à 28 °C
q Dans les 15 minutes suivant le début de l'incubation de
l'échantillon, diluer le conjugué de 25-OH-vitamine D à 1:100
et le Streptavidine-HRP concentré à 1:200 avec la solution
tampon de reconstitution
Laver 3 fois avec de la solution
de lavage
Pipeter 200 μL de conjugué HRP actif
Laisser incuber pendant 30 minutes en agitant à 300 – 700 tr/min
à une température de 18 à 28 °C
Laver 3 fois avec de la solution
de lavage
Pipeter 100 μl de solution de substrat
Laisser incuber pendant 15 minutes en agitant à 300 – 700 tr/min
dans le noir à une température de 18 à 28 °C
Pipeter 100 μL de solution d'arrêt
(lire les résultats dans un délai d'une heure)
Lire la densité optique à 450 nm en utilisant un filtre de référence
de 650 nm. Analyser les résultats obtenus à l’aide d’une équation
à quatre paramètres ou de l'équation B/B0%
1483FR01 (2013/04)
UTILISATION PRÉVUE
L’essai immunoenzymatique de dosage de la 25-OHvitamine D MicroVue mesure la quantité totale de 25-OHvitamine D dans le sérum humain.
RÉSUMÉ ET EXPLICATION
La vitamine D est un groupe de sécostéroïdes liposolubles
produits par les couches profondes de l’épiderme des
vertébrés sous l’action du rayonnement ultraviolet. Elle est
disponible sous des formes artificielles ou est présente
naturellement dans certains aliments. Dans certains pays,
des denrées de consommation courante comme le lait, la
farine et la margarine sont artificiellement enrichies en
vitamine D. Cette vitamine est également proposée en tant
que complément alimentaire sous forme de pilules.
Certains aliments comme les poissons gras, les œufs et la
viande sont riches en vitamine D et sont souvent
recommandés aux personnes souffrant d’une carence en
vitamine D.
Il existe trois formes différentes de vitamine D, mais la
25-OH-vitamine D est le marqueur recommandé pour
déterminer le taux de vitamine D. La 25-OH-vitamine D
totale représente la mesure combinée de deux formes
majeures : la vitamine D2 (ergocalciférol) et la vitamine D3
(cholécalciférol), collectivement connues sous l’appellation
de calciférol. La vitamine D est transportée jusqu’au foie par
la circulation sanguine, où elle est métabolisée en calcidiol,
une prohormone. Le calcidiol présent dans la circulation
sanguine peut alors être transformé en calcitriol, la forme
biologiquement active de la vitamine D, soit dans les reins,
soit par les macrophages monocytes présents dans le
système immunitaire. Une fois synthétisé par les
macrophages monocytes, le calcitriol agit localement
comme une cytokine et défend l’organisme contre les
invasions microbiennes.
Une fois synthétisé dans les reins, le calcitriol circule sous la
forme d’une hormone qui régule, notamment, la
concentration en calcium et en phosphate dans la
circulation sanguine et favorise ainsi la minéralisation, la
croissance et le remodelage des os. Une carence en
vitamine D peut rendre les os fins, cassants ou difformes et
entraîner un rachitisme chez l’enfant et une ostéomalacie
chez l’adulte. Avec le calcium, elle aide à protéger les
personnes âgées de l’ostéoporose. La vitamine D module
également la fonction neuromusculaire, réduit les
inflammations et influe sur l’action de nombreux gènes qui
régulent la prolifération, la différenciation et l’apoptose des
cellules.
La plupart des experts considèrent qu’il y a carence en
vitamine D lorsque le taux de 25-OH-vitamine D est
inférieur à 20 ng par millilitre de sang (50 nmol par litre).
On estime à un milliard le nombre de personnes dans le
monde souffrant d’une carence ou d’une insuffisance en
vitamine D (21 - 29 ng/ml). Selon plusieurs études, de 40 à
100 % des personnes âgées américaines et européennes
(hommes et femmes) présentent une carence/insuffisance
en vitamine D. La Mayo Clinic suggère que la vitamine D
pourrait jouer des rôles importants et émergents dans les
maladies psychiatriques, cardiovasculaires, infectieuses,
circulatoires, pulmonaires et osseuses/musculaires, ainsi
que dans le cancer.1-9
PRINCIPE DE LA PROCÉDURE
L’essai immunoenzymatique de dosage de la 25-OHvitamine D MicroVue destiné à la quantification de la
concentration totale en 25-OH-vitamine D dans le sérum
humain est une procédure en trois étapes réalisée au
moyen (1) d’une microplaque de dosage revêtue d’un
anticorps monoclonal de souris qui se lie spécifiquement à
la 25-OH-vitamine D2 humaine et à la vitamine D3, (2) de
25-OH-vitamine D biotinylée, (3) d’un composé
streptavidine-péroxydase du raifort (HRP) et (4) d’un
substrat chromogénique.
Lors de la 1ère étape, les étalons, les contrôles et les
échantillons à tester sont ajoutés dans des puits
préalablement recouverts d’un anticorps monoclonal
primaire anti-25-OH-vitamine D2 humaine et antivitamine D3. La 25-OH-vitamine D totale (D2 et D3) dans les
étalons, les contrôles et les échantillons est dissociée des
protéines liant le sérum et se lie à l’anticorps monoclonal.
Durant la 2ème étape, une fois le premier cycle de lavage
effectué, une quantité fixe de 25-OH-vitamine D biotinylée
mise en présence d’un composé constitué de streptavidine
et de péroxydase de raifort (HRP) entre en concurrence avec
la 25-OH-vitamine D2 non marquée et avec la 25-OHvitamine D3 liée à l’anticorps monoclonal. À la fin de
l’incubation, un cycle de lavage stoppe la réaction de
concurrence.
Lors de l’étape 3, un substrat enzymatique chromogène est
ajouté dans chacun des puits. Le conjugué HRP lié réagit
avec le substrat pour former une couleur bleue. Après
incubation, la réaction enzymatique est chimiquement
interrompue, la couleur vire au jaune et l’intensité de la
couleur est mesurée à l’aide d’un spectrophotomètre à
450 nm. L’intensité de la couleur est proportionnelle à la
concentration de la 25-OH-vitamine D totale présente dans
les échantillons, les standards et les contrôles.
RÉACTIFS ET MATÉRIEL FOURNIS
L’essai immunoenzymatique de dosage de la 25-OHvitamine D MicroVue est constitué des éléments
suivants :
L
H
Contrôle de 25-OH-vitamine D Réf. 4219716
1 x 1 ml
Lyophilisé. Une fois reconstitué, chacun contient du sérum humain
additionné de Proclin®.
Contrôle de 25-OH-vitamine D Réf. 4219717
1 x 1 ml
Lyophilisé. Une fois reconstitué, chacun contient du sérum humain
additionné de Proclin®.
 Micro-plaque de dosage
Réf. 4219708 12 x 8 puits
Huit puits recouverts d’un anticorps monoclonal de souris anti-25OH-vitamine D2 et anti-vitamine D3 dans un sachet d’aluminium
re-scellable.
 Solution d’arrêt
Réf. SS04
Contient de l’acide chlorhydrique (HCl) 1,5 N (3,65 %)
 Concentré de lavage 200X
Contient du TRIS-HCl.
Réf. 4219711
12 ml
10 ml
 Substrat TMB
Réf. SB04
12 ml
Prêt à l’emploi. Contient du 3,3’,5,5’-tétraméthylbenzidène (TMB).
 25-OH-vitamine D biotinylée
Réf. 4119703
0,4 ml
Contient de la 25-OH-vitamine D conjuguée à de la biotine.
 Composé streptavidine-HRP
concentré 200X
Réf. 4119713
Contient de la péroxydase du raifort conjuguée à de la
streptavidine.
Réf. 4119705
Contient de la caséine et du Proclin®.
0,2 ml
 Solution de reconstitution
30 ml
 Solution tampon de dosage
20 ml
Réf. 4219713
Contient de la caséine et du Proclin®.
Proclin® est une marque déposée de la Rohm and Haas Company.
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Minuteur (60 minutes)
Plaques à usage unique, plaque de dilution à 96 puits
et/ou tubes à essais et portoirs
Récipient en plastique pour la dilution de la solution
tampon de lavage
Bouteille de lavage ou tout autre équipement de
lavage homologué
Micropipettes et embouts
Multipette ajustable (8 ou 12 canaux) ou pipetteur
automatique
Pipettes propres de 1 ml, 5 ml et 10 ml
Réservoirs de réactif pour ajouter des anticorps, des
solutions de substrat et d’arrêt à la plaque (utiliser des
réservoirs vides et propres pour chaque réactif)
Lecteur de microplaque capable de lire une densité
optique A450 et A650 (lecture bichromatique)
Eau déionisée ou distillée
Agitateur orbital/rotateur d’une capacité de 300 à
700 tr/min
A Étalons de 25-OH-vitamine D Réf. CAL A – CAL F
1 x 2 ml (CAL A)
1 x 1 ml (CAL B-F)
F Lyophilisé. Chacun contient de la 25-OH-vitamine D humaine
totale purifiée avec une concentration protéinique assignée
(ng/ml) dans le sérum de cheval additionnée de gentamycine et
de Proclin®. L’étalon zéro est une matrice biologique constituée de
gentamycine et de Proclin®.
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2
MISES EN GARDE ET PRÉCAUTIONS
1. Destiné au diagnostic in vitro uniquement.
2. Les composants du sang humain inclus dans cette
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
trousse ont été testés selon des méthodes approuvées
par l’Union européenne et/ou la FDA et ont obtenu
des résultats négatifs aux tests AgHBs, anti-VHC et
anti-VIH 1 et 2. Aucune méthode connue ne permet de
garantir à 100 % que les dérivés du sang humain ne
transmettront pas l’hépatite, le SIDA ou d’autres
infections. Par conséquent, traiter tous les échantillons
comme des produits potentiellement dangereux.
Observer les précautions standard lors de la
manipulation de cette trousse et des échantillons de
patients.10, 11
Tous les produits et dérivés d’origine animale ont été
prélevés sur des animaux sains. Les composants bovins
proviennent de pays dans lesquels aucun cas d’ESB n’a
été recensé. Toutefois, les composants contenant des
substances d’origine animale doivent être traités
comme des composants potentiellement infectieux.10
Porter des vêtements, des gants, un masque et des
lunettes de protection lors de la manipulation de cette
trousse.
Utiliser ensemble tous les réactifs avant la date
d’expiration indiquée sur l’étiquette de la boîte.
Les réactifs provenant des divers numéros de lots ne
sont pas interchangeables.
Suivre les recommandations pour la conservation des
réactifs.
Ne pas utiliser les barrettes revêtues si leur emballage
est abîmé.
La solution d’arrêt est une solution corrosive
susceptible de provoquer des irritations. Ne pas
ingérer. Éviter tout contact avec les yeux, la peau et les
vêtements. En cas de contact, rincer immédiatement la
zone exposée à l’eau. En cas d’ingestion, appeler un
médecin.
Le Proclin est un conservateur. Un contact accidentel
avec ou l’ingestion de tampons ou de réactifs contenant
du Proclin peut entraîner une irritation de la peau, des
yeux ou de la bouche. Suivre les bonnes pratiques de
laboratoire pour réduire l’exposition. Consulter un
médecin si des symptômes apparaissent. L’utilisation de
multipettes ou de pipetteurs automatiques est
recommandée pour limiter le temps de distribution des
réactifs.
Pour obtenir une mesure précise des échantillons,
pipeter avec précautions les échantillons et les
standards. Pipeter soigneusement en utilisant du
matériel correctement étalonné.
Pour obtenir des résultats précis, il est indispensable
de recueillir et de conserver correctement les
échantillons (voir COLLECTE ET CONSERVATION DES
ÉCHANTILLONS).
Éviter toute contamination microbienne ou croisée des
échantillons et des réactifs.
Doser chaque échantillon en double.
Ne pas utiliser un même puits pour plusieurs tests.
Toute modification du temps ou de la température
d’incubation indiqués dans le protocole de dosage
peut entraîner des résultats erronés.
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17. Le substrat TMB doit être protégé de la lumière et de
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
tout contact avec du métal ou du caoutchouc pendant
le stockage et l’incubation. Éviter tout contact avec les
yeux, la peau et les vêtements. En cas de contact, rincer
immédiatement la zone exposée à l’eau.
Ne pas laisser les puits sécher pendant le dosage.
Lors du retrait de liquide des puits, ne pas gratter ni
toucher le fond des puits.
Pour éviter la formation d’aérosol pendant le lavage,
aspirer le liquide de lavage dans une bouteille
contenant de l’eau de Javel.
Utiliser une bouteille de lavage ou un système de
remplissage automatique pour laver les microplaques
(PROTOCOLE DE DOSAGE, étape 5). Pour un résultat
optimal, ne pas utiliser de multipette pour le lavage de
la microplaque.
Éliminer les réactifs non utilisés et leurs flacons
conformément à la réglementation en vigueur.
Afin d’éviter toute dérive génétique, le temps entre le
pipetage du premier étalon et le pipetage du dernier
échantillon ne doit pas dépasser 20 minutes après que
l’étalon ait été introduit dans les puits recouverts
d’anticorps.
Pour plus d’informations, consulter la fiche de données
de sécurité sur le site quidel.com.
CONSERVATION
La solution tampon de dosage, le substrat TMB et la
solution d’arrêt sont prêts à l’emploi. Conserver tous les
composants du kit non ouverts ou reconstitués à une
température comprise entre 2 et 8 °C.
PRÉPARATION DES RÉACTIFS
Amener tous les réactifs et le matériel à température
ambiante avant utilisation.
Après utilisation, conserver les réactifs et le
matériel inutilisés à la température requise (voir
CONSERVATION).
Barrettes de puits
Déterminer le nombre de barrettes nécessaires pour le
dosage. Quidel recommande de doser en double les
blancs, les étalons et les contrôles. Refermer avec soin la
pochette contenant le reste des barrettes, ajouter du
dessiccant et la conserver à 2-8 °C. Placer les barrettes
destinées au dosage sur le support.
Étalons et contrôles
Reconstituer l’étalon A (étalon zéro standard) avec 2,0 ml
d’eau distillée ou déminéralisée et mélanger. Pour chaque
étalon (CAL B à F) et pour les contrôles 1 et 2 de la trousse,
reconstituer chaque flacon à l’aide de 1,0 ml d’eau distillée ou
déionisée et mélanger. Mélanger soigneusement en
retourner doucement pour garantir une totale reconstitution.
Après reconstitution, les étalons et les contrôles sont stables
pendant une semaine à 2-8 °C. Pour des périodes de
stockage plus longues, des aliquotes doivent être réalisées
et conservées à une température de -20 °C pendant trois
mois maximum. Éviter les cycles congélation/décongélation
successifs.
3
Solution de conjugué HRP
Sérum
REMARQUE : La solution de conjugué de HRP active
doit être préparée dans les 15 minutes suivant le début
des deux premières heures d’incubation (PROTOCOLE
DE DOSAGE, étape 4).
En fonction du nombre de barrettes utilisées, préparer un
volume adéquat de solution de conjugué de HRP actif en
mélangeant le conjugué de 25-OH-vitamine D concentré, le
HRP concentré et la solution tampon de reconstitution (cf.
Tableau 1 pour les volumes). Bien mélanger la solution au
vortex. Conserver le conjugué de HRP actif à température
ambiante jusqu’à son utilisation et éviter la lumière directe
du soleil (la préparation peut être réalisée dans un flacon en
verre marron, par exemple). Le conjugué HRP actif n’est pas
stable et doit être jeté s’il n’est pas utilisé.
Tableau 1. Préparation d’une solution
de conjugué HRP actif
La détermination de la concentration totale en 25-OHvitamine D doit être effectuée avec du sérum.
Les échantillons sur sérum doivent être recueillis selon
une technique aseptique standard.11 Après avoir laissé le
sang se coaguler, séparer rapidement le sérum avec une
centrifugeuse réfrigérée de préférence. Les échantillons
de sérum doivent être conservés à une température
comprise entre 2 et 8 °C. Si l’essai n’est pas réalisé dans les
24 heures, il est recommandé de stocker les échantillons
à une température de -20 °C ou moins. Éviter les cycles
congélation/décongélation successifs. Ne pas utiliser
d’échantillons préparés avec de l’azoture de sodium. Éviter
les échantillons fortement hémolysés ou lipémiques.
Nb de
barrettes
Volume de
conjugué
concentré (µl)
Volume de HRP
concentré (µl)
Volume de
solution tampon
de reconstitution
(ml)
1
30
15
3
2
50
25
5
3
60
30
6
4
80
40
8
5
90
45
9
6
100
50
10
7
120
60
12
8
140
70
14
9
160
80
16
10
180
90
18
11
200
100
20
12
220
110
22
Solution de lavage
Mélanger la solution de lavage concentrée 200X en
retournant le flacon à plusieurs reprises. Si la solution
concentrée de lavage 200X a été stockée à une
température comprise entre 2-8 °C, il est possible que des
cristaux se soient formés. Pour dissoudre ces cristaux,
réchauffer le flacon dans un bain-marie à 37 °C jusqu’à
dissolution et mélanger soigneusement. Préparer un
volume adéquat de solution de lavage en diluant
1 volume de solution de lavage concentrée 200X dans
199 volumes d’eau distillée ou déionisée. Bien mélanger.
La solution de lavage doit être utilisée le jour même et ne
doit pas être conservée.
COLLECTE ET CONSERVATION DES
ÉCHANTILLONS
Manipuler et éliminer les échantillons en appliquant les
précautions standards.
Collecte des échantillons
ATTENTION : Traiter tous les échantillons comme
potentiellement infectieux. Suivre les précautions
standard. Ne pas utiliser d’échantillons contaminés ou
mal conservés.
1483FR01 (2013/04)
PROTOCOLE DE DOSAGE
Lire l’intégralité de la notice du produit avant de
procéder au dosage.
Voir MISES EN GARDE ET PRÉCAUTIONS et
PRÉPARATION DES RÉACTIFS.
1. Placer un nombre suffisant de barrettes recouvertes
d’anticorps anti-25-OH-vitamine D2 et anti-vitamine D3
dans un support pour utiliser les six (6) étalons de
25-OH-vitamine D [A à F, la concentration exacte est
indiquée sur l’étiquette collée sur le flacon], les
contrôles et les échantillons.
2. Pipeter 50 µl d’étalon, de contrôle ou d’échantillon
dans le puits désigné ou déterminé. Congeler (- 20 °C)
les étalons et les contrôles restants dès que possible
après usage. Ajouter tous les échantillons dans les puits
recouverts d’anticorps dans les 20 minutes suivant
l’ajout du premier étalon.
3. Ajouter ou délivrer 150 µl de solution tampon de
dosage dans chaque puits contenant l’étalon, le
contrôle ou l’échantillon.
4. Placer dans un agitateur de microplaques ou un
rotateur réglé sur 300 - 700 tr/min à température
ambiante (18 - 28 °C) pendant 2 heures.
5. Laver les micropuits en suivant la procédure suivante :
a. Jeter ou aspirer le contenu de chaque puits.
b. Ajouter environ 400 µl de solution de lavage dans
chaque puits, à l’aide d’une bouteille de lavage ou
d’un système automatique.
c. Aspirer le contenu de chaque puits.
d. Répéter les étapes a à c deux (2) fois de plus pour
trois (3) lavages au total.
6. Ajouter ou délivrer 200 µl de conjugué de HRP actif
dans chacun des puits contenant un étalon, un
contrôle ou un échantillon.
7. Placer dans un agitateur de microplaques réglé sur
300 - 700 tr/min à température ambiante (18 - 28 °C)
pendant 30 minutes.
8. Laver les micropuits en suivant la procédure suivante :
a. Jeter ou aspirer le contenu de chaque puits.
b. Ajouter environ 400 µl de solution de lavage dans
chaque puits, à l’aide d’une bouteille de lavage ou
d’un système automatique.
c. Aspirer le contenu de chaque puits.
d. Répéter les étapes a à c deux (2) fois de plus pour
trois (3) lavages au total.
4
9. Ajouter ou délivrer 100 µl de substrat de TMB dans
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
chacun des puits de dosage lavés dans les 15 minutes
suivant le lavage final.
Après avoir installé un couvercle approprié pour
empêcher l’exposition à la lumière, placer la/les
microplaque(s) dans un agitateur ou dans un rotateur
réglé sur 300 - 700 tr/min à température ambiante
(18 - 28 °C) pendant 15 minutes.
Ajouter ou délivrer 100 µl de solution d’arrêt dans tous
les puits pour arrêter la réaction enzymatique.
Tapoter doucement la plaque pour permettre un
développement uniforme de la coloration.
Lire l’absorption à 450 nm (utiliser un filtre de
référence de 630 ou 650 nm) pour chaque puits dans
l’heure qui suit l’ajout de la solution d’arrêt (étape 11),
en faisant une correction pour les blancs selon le
système spectrophotométrique utilisé.
Noter sur la courbe les valeurs B/B0% pour chaque
point d’étalonnage comme une fonction de la
concentration en 25-OH de chaque étalon
Par interpolation de l’échantillon (valeurs B/B0%),
déterminer les concentrations en 25-OH-vitamine D de
l’échantillon en se servant de la courbe standard.
Éliminer le reste des échantillons, substrats et barrettes
utilisées (voir MISES EN GARDE ET PRÉCAUTIONS).
CONTRÔLE QUALITÉ
Le certificat d’analyse inclus dans ce kit est spécifique au
lot et doit être utilisé pour vérifier si les résultats obtenus
dans votre laboratoire sont semblables à ceux qui ont été
obtenus par Quidel Corporation. Les densités optiques
sont mentionnées uniquement à titre indicatif. Les
résultats obtenus dans votre laboratoire peuvent être
différents.
Des plages de contrôle de la qualité sont fournies. Les
valeurs de contrôle sont destinées à vérifier la validité de
la courbe standard et des résultats obtenus pour les
échantillons. Chaque laboratoire doit établir ses propres
critères de validation. Si les valeurs obtenues NE sont PAS
dans les limites acceptables du laboratoire, les résultats
seront considérés comme douteux, et un redosage des
échantillons devra être effectué.
INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
Utilisation de la courbe standard
En utilisant les valeurs d’absorption finales obtenues à
l’étape 13 du PROTOCOLE DE DOSAGE, tracer une courbe
d’étalonnage utilisant une interpolation 4 PL ou B/B0(%)
pour quantifier la concentration en 25-OH-vitamine D
totale. La plupart des ordinateurs et logiciels de lecture de
microplaques sont capables de réaliser ces calculs.
Les données peuvent être mises en graphe manuellement.
Pour les mesures relevées à 450 nm, construire une courbe
d’étalonnage en utilisant les étalons fournis (étalons A à F).
Calculer la moyenne des déterminations. Pour chaque
étalon, contrôle et échantillon, calculer :
B/B0(%) = DO (étalons B-F, contrôle ou échantillon) X 100
DO (étalon A)
En utilisant du papier quadrillé ou semi-logarithmique,
placer sur la courbe les valeurs B/B0(%) pour chaque point
de l’étalon comme une fonction de la concentration en
25-OH-vitamine D de chaque étalon. Rejeter les valeurs
manifestement aberrantes. Les valeurs (en ng/ml) des
échantillons testés peuvent être lues directement sur la
droite d’ajustement de la courbe d’étalonnage. Un
exemple de courbe standard typique est fourni dans la
Figure 1.
Figure 1. Courbe standard typique
Concentration en 25-OH-vitamine D (ng/ml)
Tableau 2. Données d’échantillon à A450
Échantillon
A450
B/B0(%)
Étalon A
3,043
102,54
0
Étalon B
2,788
92,32
5,3
Étalon C
2,242
70,50
15
Étalon D
1,816
53,44
25,7
Étalon E
1,079
23,95
54,3
Étalon F
0,348
-5,28
133
Remarque : 1 ng/ml = 2,5 pmol/ml
VALEURS OBSERVÉES
Du sérum provenant de 20 donneurs a été testé à l’aide de la
trousse d’essai immunoenzymatique de dosage de la 25-OHvitamine D MicroVue. Les résultats sont présentés ci-dessous.
Échantillon
n
Moyenne
(ng/ml)
Valeurs extrêmes
(ng/ml)
Sérum
20
15,6
6,0 – 39,4
REMARQUE : Le comportement de la moyenne et de l’écart type des
concentrations de 25-OH-vitamine D calculé pour les échantillons de sérum
peut varier d’un laboratoire à l’autre. Il est donc recommandé que chaque
laboratoire calcule les valeurs de concentration moyenne en
25-OH-vitamine D et d’écart type des échantillons.
RÉSULTATS ATTENDUS
Le régime alimentaire, l’origine ethnique, la saison et l’âge
sont des facteurs connus pour affecter les taux normaux
de 25-OH-vitamine D3. Chaque laboratoire doit fixer ses
propres plages de valeurs acceptables en fonction de la
population locale. Des articles récents suggèrent les
plages de valeurs suivantes pour la classification du taux
de vitamine D :5, 8
Valeurs extrêmes (ng/ml)
Carence
0 - 10
Insuffisance
10 - 30
Taux suffisant
30 - 150
Toxicité
1483FR01 (2013/04)
ng/ml
>150
5
Linéarité
PERFORMANCES DU TEST
Limites
LD : La limite de détection (LD) pour le dosage de la
25-OH-vitamine D est de 1,5 ng/ml et se définit comme
étant la concentration apparente deux écarts-types
en-dessous de la DO moyenne à la liaison zéro.
La linéarité a été réalisée en diluant des échantillons de
sérum avec l’étalon A (étalon zéro). Les résultats sont
indiqués ci-après :
Échantillon
Facteur de
dilution
Valeurs
attendues
(ng/ml)
Valeurs
observées
(ng/ml)
Récupération (%)
1/1
66,2
66,2
100
1/2
33,1
34,5
104
1/4
16,6
15,5
94
1/8
8,3
8,2
99
4,1
4,4
106
Spécificité
Le pourcentage de réactivité croisée a été estimé par
comparaison de la concentration générant une inhibition
de 50 %. Les résultats sont fournis ci-après :
A
Composé
Réactivité croisée (%)
1/16
25-OH-vitamine D3
100
1/32
2,1
2,2
106
25-OH-vitamine D2
84
1/1
62,0
62,0
100
1,25-(OH)2-vitamine D3
50
1,25-(OH)2-vitamine D2
<0,2
1/2
31,0
38,3
123
1/4
15,5
15,8
102
Vitamine D3
<0,2
1/8
7,8
7,5
97
Vitamine D2
<0,2
24,25-(OH)2-vitamine D3
>100
1/16
3,9
4,0
103
25,26-(OH)2-vitamine D3
>100
3-épi-25-OH-vitamine D3
<0,2
B
Récupération maximale
Les performances du dosage ne sont pas affectées par l’hémolyse (5 g/l
d’hémoglobine testés), la bilirubinémie (0,5 g/l de bilirubine testé), les
triglycérides (5 g/l testés), l’acide ascorbique (vitamine C, 1 g/l testé) et le
conjugué de bilirubine (1 g/l testé).
Précision
La précision intra-essai a été déterminée à partir de
35 dosages réitérés pour chacun des 2 échantillons.
Échantillon
Valeur
moyenne
(ng/ml)
N
Variation
intra-essai
(%)
Échantillon A
27,4
35
5,7
Échantillon B
43,0
35
2,7
La précision inter-essai a été déterminée en se basant sur les
résultats de 10 essais de dosage différents réalisés sur
2 échantillons.
Échantillon
Valeur
moyenne
(ng/ml)
N
Variation
inter-essai
(%)
Échantillon A
26,3
10
4,7
Échantillon B
42,1
10
4,3
1483FR01 (2013/04)
La récupération maximale a été déterminée en ajoutant
différentes quantités de 25-OH-vitamine D3 ou de 25-OHvitamine D2 aux échantillons et en calculant le
pourcentage de récupération. Les résultats sont fournis
ci-après :
25-OH-vitamine D3
ajoutée (ng/ml)
Récupération
(%)
0
100
25
96
50
92
25-OH-vitamine D2
ajoutée (ng/ml)
Récupération
(%)
0
100
25
105
50
95
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Pour passer une commande ou pour toute demande
d’assistance technique, veuillez contacter un conseiller
Quidel au 800-874-1517, du lundi au vendredi, de 8:00 à
17:00, heure du Pacifique. Les commandes peuvent
également être passées par courrier électronique à l’adresse
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les livraisons en dehors des États-Unis, veuillez contacter
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6
RÉFÉRENCES
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MMWR. 36(suppl. 2S):001.
GLOSSAIRE
Utilisation prévue
8046 –
25-OH Vitamin D EIA Kit
MDSS GmbH
Schiffgraben 41
30175 Hannover, Germany
1483FR01 (2013/04)
7