Procédures du Laboratoire L3 à l`IRB

Procédures du Laboratoire L3 à l'Institut de
Recherche en Cancérologie de Montpellier
Version : 1.0
Date : 24/06/2015
Validée par :
-
Mme Béatrice ORSETTI , référent L3
M. Vincent DENIS, référent L3
I.
Généralités ......................................................................................................................... 3
A.
B.
Responsabilités ......................................................................................................................... 3
Comité de pilotage .................................................................................................................... 3
1. Composition .............................................................................................................................................. 3
2. Réunion ..................................................................................................................................................... 3
3. Responsabilités .......................................................................................................................................... 4
C.
II.
A.
B.
Autorisations d’accès ............................................................................................................... 4
Procédures générales .................................................................................................... 5
Entrée ........................................................................................................................................ 5
Précautions de manipulation en laboratoire L3 ................................................................... 6
1. Principes généraux..................................................................................................................................... 6
2. Utilisation des PSM ................................................................................................................................... 7
3. Utilisation des incubateurs......................................................................................................................... 7
4. Utilisation des centrifugeuses .................................................................................................................... 8
5. Utilisation de l'autoclave ........................................................................................................................... 8
6. Utilisation de l’interphone/téléphone du L3 .............................................................................................. 8
7. Utilisation de l’ordinateur .......................................................................................................................... 8
C.
Sortie.......................................................................................................................................... 8
D.
Intervention entreprise extérieure ........................................................................................ 10
E.
Approvisionnement au magasin ............................................................................................ 10
III.
Entretien et décontamination du laboratoire L3 ........................................................ 10
IV.
Plan d’urgence en cas d’accident / incident en zone confinée de niveau 3 .............. 10
A.
Règles générales de comportement en cas d’incident ......................................................... 11
B.
Incidents mineurs et situations d’urgence............................................................................ 11
C.
Numéros d’appel d’urgence .................................................................................................. 11
D.
Planification des situations d’urgence .................................................................................. 11
1.
Renversement de matériel infectieux avec libération d’aérosols et risque d’inhalation (contamination
se limitant à l’intérieur du laboratoire) ........................................................................................................ 11
2.
Blessures / Malaise nécessitant une évacuation du L3 ....................................................................... 13
3.
Incendie / Explosion L3 ..................................................................................................................... 13
ANNEXE 1 .............................................................................................................................. 15
ANNEXE 2 .............................................................................................................................. 16
ANNEXE 3 .............................................................................................................................. 17
ANNEXE 4 .............................................................................................................................. 18
ANNEXE 5 .............................................................................................................................. 19
ANNEXE 6 .............................................................................................................................. 20
ANNEXE 7 ....................................................................................................................................... 23
Entrée ............................................................................................................................................... 24
2
I.Généralités
A.
Responsabilités
Le laboratoire L3 est placé sous l’autorité du directeur de l’IRCM.
Le laboratoire L3 est géré par un comité de pilotage comme défini en section I-B.
Les deux référents fonctionnels ont pour rôle d’assurer le bon fonctionnement au quotidien
du L3 et de faire respecter le règlement par tous les utilisateurs. Ils seront le relais privilégié
en cas de problème.
Chaque chef d’équipe sera responsable du respect du règlement par les membres de son
équipe.
Chaque utilisateur aura la responsabilité de respecter chaque point du règlement.
Tout nouvel entrant devra être formé aux pratiques du L3 par les référents.
Le non-respect des règles établies, pourra entraîner jusqu’à l’exclusion du L3 des personnels
mis en cause.
B.
Comité de pilotage
1. Composition
Le comité de pilotage du L3 est constitué comme suit :
• Directeur de l’Institut IRCM ou son représentant
• La Secrétaire Générale de l’IRCM
• Les assistants de prévention Hygiène et Sécurité de l’IRCM
• Chefs d’équipes utilisatrices du L3
• Les référents fonctionnels du L3
• L’ingénieur Hygiène et sécurité de l’INSERM
• Le médecin du travail de l’INSERM
2. Réunion
Le comité de pilotage du L3 se réunit au minimum une fois par an.
Il peut être convoqué à tout moment sur demande de l’un de ses membres ou de tout
utilisateurs du L3.
3
Un compte rendu de ses réunions sera établi, validé par ses membres et transmis à
l’ensemble des utilisateurs du L3.
3. Responsabilités
Il débat des questions d’organisation et de fonctionnement du L3.
Il règle les problèmes internes au laboratoire L3.
Il valide les éventuelles procédures particulières.
Il s’occupe de la mise à jour et des modifications du règlement qu’il soumet à l’approbation
du directeur de l’IRCM.
C.
Autorisations d’accès
L'autorisation d’accès au L3 est sous la responsabilité du directeur de l’IRCM.
Toute expérience entreprise dans le L3 devra avoir été ratifiée au préalable par le Haut
Conseil des Biotechnologies (HCB) et avoir obtenu un classement de niveau de sécurité
correspondant (Dossier OGM).
Le laboratoire L3 est utilisé uniquement pour les expériences qui nécessitent un niveau de
confinement 3.
Avant son entrée dans le L3, tout nouvel utilisateur devra contacter les référents et leur
fournir :
-
Formulaire de projet expérimental (disponible en Annexe 1), dûment complété.
Devront être spécifiés clairement les types de virus, de vecteur, et d’insert utilisés.
Pour le remplir correctement, n’hésitez pas à vous rapprocher des référents. En
cas de modification de projet ou de type de virus utilisé, l’utilisateur s’engage à en
avertir les référents du L3 en mettant à jour ce formulaire.
-
Certificat de non contre-indication au travail en L3 délivré par la médecine
préventive. Pour cela, un rendez-vous sera sollicité auprès du médecin de
prévention pour un examen clinique et biologique de départ via la Lettre d’accès
L3 pour médecin de prévention (Annexe 2).
-
Autorisation d’accès et de manipulation en zone confinée L3 (Annexe 3)
signée et complétée. Cette signature vaut acceptation pleine et entière des règles
en vigueur dans la zone L3.
Le nouvel utilisateur devra être formé aux pratiques du L3 par les référents et
éventuellement encadré par une personne de son équipe aussi longtemps que nécessaire,
avant d’être autorisé à travailler seul dans le laboratoire de confinement, sous la
responsabilité de son chef d’équipe.
Lorsqu’il sera estimé que l’utilisateur peut travailler en toute autonomie dans le L3, les
référents L3 ainsi que l’encadrant valideront l’autorisation d’accès et de manipulation en
zone confinée L3. Les autorisations d’accès de son badge personnel seront alors mises à
jour afin de lui permettre l’entrée au L3.
4
La liste actualisée des personnes autorisées à pénétrer dans le L3 est affichée sur la porte
d’entrée du L3.
En aucun cas des personnes n’ayant reçu l’autorisation ne sont autorisées à pénétrer dans
le L3.
L’accès au L3 est possible 5j/7 de 8h à 19h. Une autorisation d’accès exceptionnelle en
dehors de ces heures peut néanmoins être sollicitée auprès du directeur de l’institut. Il faudra
pour cela renseigner votre nom, celui de la 2eme personne également présente dans
l’institut, la date et les horaires prévus, sur la fiche située à l’administration.
Rappels :
- pour le travail en horaires décalés, même hors L3, une déclaration préalable doit
être effectuée auprès de l'administration.
- Il est interdit de se rendre au L3 en travailleur isolé, notamment les week-ends.
Une autorisation temporaire (VISITEUR) peut être accordée. Cet accès vise à montrer des
équipements ou des procédures à une personne qui n’a pas d’autorisation permanente
d’entrée au L3 (Annexe 5)
Pour cela, il est entendu que le visiteur ne pourra accéder au L3 qu’accompagné en
permanence par un personnel autorisé qui est responsable du visiteur, en particulier le
visiteur s’habillera et se déshabillera sous le contrôle de son responsable, il ne manipulera ni
ne touchera aucun élément potentiellement contaminé.
II.Procédures générales
Le risque biologique est signalé sur la porte d’entrée du L3.
Le nom des membres du comité de pilotage ainsi que la liste des personnes autorisées à y
pénétrer, la nature des agents potentiellement pathogènes utilisés y sont également affichés.
L'efficacité du niveau de confinement est assurée par une bonne gestuelle de laboratoire, le
respect des procédures en vigueur et le maintien en bon état de fonctionnement du matériel
et des installations techniques du laboratoire.
A.
Entrée
Avant d'entrer dans le L3
 Il est préférable de ne rien entrer dans le L3. Les effets personnels restent dans les
bureaux ou les labos L1
 Bien préparer sa manipulation (durée, matériel et réactifs nécessaires).
 Réserver une plage horaire pour l’utilisation des PSM sur le planning accessible via
l’intranet / Plateaux techniques/ Laboratoire L3.
 S’assurer qu’on ne présente pas de plaies aux mains ou sur le visage ; dans le cas
contraire éviter d’entrer ou à défaut les recouvrir d’un pansement étanche disponible
dans l’armoire à pharmacie au niveau N2F3.
 S’inscrire sur le registre d’entrée et vérifier les pressions des SAS et du L3 :
o SAS 1 : environ +20 Pa
o SAS 2 : environ -10 Pa
o L3 : environ - 40 Pa
5
En cas de pressions non réglementaires, NE PAS ENTRER, noter l'anomalie sur le
registre "entrée / sortie L3" et prévenir Carmen Rodriguez :poste 24 00 ou à défaut
par email [email protected] en mettant dans la boucle d'information
un des référents du L3 ou un assistant de prévention.
 Mettre dans le passe plat, le matériel nécessaire aux manipulations prévues.
 S’inscrire sur le registre d’entrée/sortie.
Remarques :
- L’entrée d’instruments exceptionnellement nécessaires à une expérimentation doit être
soumise à l’autorisation des référents.
- L’entrée de glace est interdite. Des blocs réfrigérants sont disponibles pour maintenir à
4°C et à -20°C.
Entrée
o Badger et pénétrer dans le SAS1. S’assurer de la bonne fermeture de la porte
d’entrée du SAS1.
o Pénétrer dans le SAS2 en appuyant sur le bouton bleu. S’assurer de la bonne
fermeture de la porte d’accès au SAS2.
o Le banc délimite le passage en zone propre. Avant de le franchir :
laisser le badge et les éventuels effets personnels dans les casiers prévus à
cet effet
passer une 1ere paire de gants
s’asseoir sur le banc,
enfiler une surchausse,
passer le pied surchaussé de l’autre côté du banc, répéter l’opération pour
l’autre pied.
passer une blouse jetable
mettre un masque
se recouvrir la tête d’une charlotte, cheveux attachés si besoin est.
o Badger pour pénétrer dans le L3. S’assurer de la bonne fermeture de la porte
d’accès au L3
o
o
enfiler une 2eme paire de gants
éventuellement une paire de lunette de protection sauf en cas en port de
verres correcteurs
 L’introduction de documents, cahiers, bloc-notes, téléphones, mp3 sont interdits dans
le L3. L’ordinateur relié au réseau pourra être utilisé pour consulter des documents ou
envoyer des résultats (tableau, photos…) vers un dossier distant du réseau partagé.
L’ordinateur ne doit en aucun cas servir de stockage de résultats.
B.
Précautions de manipulation en laboratoire L3
1. Principes généraux
6
En cas de non respect des règles établies, les personnes mises en cause pourront
alors être exclues du laboratoire L3.
L’utilisation correcte des PSM et le respect des bonnes pratiques de laboratoire L3
sont les meilleurs garants de la sécurité de tous.
-
-
-
-
-
Il est strictement interdit de fumer, de boire ou de manger dans le laboratoire L3.
Il est conseillé de ne rien toucher avec une partie découverte du corps.
Il est interdit d’entrer tout matériel informatique (en particulier les clés USB, cartes
microSD), appareil photographique, téléphone portable ou baladeur mp3 dans
l’enceinte du L3.
Utiliser uniquement le matériel disponible (stylos, feutres, carnets …) identifié L3.
Chaque matériel, bouteille, tube, boite présents dans le L3 doit être identifié avec les
initiales du manipulateur et la date d’entrée.
Il est impératif de changer la deuxième paire de gant après manipulation sous PSM
et notamment avant de toucher tout matériel présent dans la pièce (ordinateur,
téléphone, interphone, microscope…)
Tout matériel infectieux doit être manipulé sous un PSM.
Toute manipulation pouvant induire des aérosols doit être réalisée sous un PSM
(ouverture des plots et des tubes de centrifugation).
L’usage d’aiguille, de pipettes en verre, verrerie ou tout autre objet coupant et piquant
est strictement interdit dans le L3. Il est préférable d’utiliser du matériel en plastique à
usage unique.
Respecter les consignes d’usage de chaque appareil conformément aux consignes
du fabricant. Vérifier leur état de fonctionnement avant de les utiliser. Les
décontaminer après usage.
Toute manipulation de radioéléments est interdite dans le L3.
2. Utilisation des PSM
Les PSM du L3 sont de type II conformément à la réglementation.
Avant de commencer toute manipulation, entrer le matériel nécessaire sous le PSM.
Veiller à ne pas trop encombrer cet espace de travail au risque de gêner le flux laminaire
et de créer des zones de non stérilité. Eviter de rentrer du papier qui est générateur de
particules pouvant boucher les filtres.
Veiller à manipuler calmement et proprement afin d’éviter la formation d’aérosols et de
contaminations du PSM.
Pour être bien protégé par le bandeau de reprise, ne rien poser sur la partie rainurée au
bord de la grille et manipuler bien au centre du plan de travail.
Les déchets liquides sont inactivés à l’Aniosyme DD1 0,5% pendant 5min minimum dans
un Erlenmeyer autoclavable qui doit rester sous le PSM. Une fois plein, il sera autoclavé.
Les emballages et autres déchets fermés sont jetés dans la poubelle autoclavable.
Les déchets solides tels que les pipettes et cônes sont gardés sous le PSM dans un
sachet, qui sera refermé et mis à la poubelle en fin de manip.
Après chaque manipulation, l’utilisateur fermera son sachet de pipettes usagées pour le
jeter à la poubelle et décontaminera le plan de travail du PSM en accord avec la
procédure de décontamination (Annexe 4).
3. Utilisation des incubateurs
7
Tous les flacons, boîtes et plaques de culture doivent être identifiés avec la lignée
cellulaire, le nom du manipulateur et la date. Ils doivent être décontaminés avant d’être
déposés dans les incubateurs.
Signaler tout problème de contamination (champignons, levures, bactéries …) aux
référents du L3.
4. Utilisation des centrifugeuses
Veiller à bien équilibrer les tubes dans les plots de la centrifugeuse qui doivent être
fermés sous le PSM.
Il est obligatoire d’utiliser les couvercles de nacelles pour chaque centrifugation.
Après la centrifugation, les plots de la centrifugeuse doivent être ouverts sous le PSM
afin de récupérer les tubes ( ou plaques)
5. Utilisation de l'autoclave
Seules les personnes formées et habilitées à la conduite de l’autoclave du L3 pourront
mettre en service l’autoclave.
La liste à jour des personnes habilitées sera affichée sur celui-ci.
6. Utilisation de l’interphone/téléphone du L3
Les personnes souhaitant vous contacter alors que vous êtes dans le L3 peuvent
utiliser :
* l’interphone en actionnant le bouton situé à l’extérieur du L3.
* le téléphone en appelant le poste 4591
7. Utilisation de l’ordinateur
Un ordinateur est à disposition dans L3. Il est à manipuler obligatoirement avec des
gants propres.
Cet ordinateur est connecté au réseau afin de faciliter la sauvegarde ou l’importation de
données vers ou depuis un autre poste de l’institut.
Il est également relié au microscope pour l’enregistrement des photos.
Chaque équipe utilisatrice du L3 dispose d’un dossier, dans lequel elle pourra
sauvegarder ses données.
C.
Sortie
En fin de manipulation
o
o
o
o
Fermer l’Erlenmeyer contenant les déchets liquides inactivés.
Fermer avec de l’adhésif le sachet contenant les pipettes et le jeter dans la
poubelle autoclavable.
Désinfecter son poste de travail.
Replacer le matériel pour le prochain utilisateur
Avant de sortir du L3
o
vérifier que les appareils (microscope, centrifugeuse, PSM…) soient bien
éteints
8
o
o
Une fois plein, fermer les sacs à autoclave en utilisant un ruban adhésif
témoin et placer la poubelle devant l’autoclave. Mettre un nouveau sac dans
une poubelle propre.
Jeter la 2eme paire de gants avant de sortir du L3.
Sortie
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
Badger
Sortir dans le SAS2, s’assurer de la bonne fermeture de la porte.
Jeter charlotte et masque dans le sac poubelle autoclavable du sas 2.
Enlever la blouse et la suspendre sur un cintre identifié. En cas de doutes sur
la propreté de la blouse ou si une utilisation prochaine n’est pas prévue, la
jeter dans le sac autoclavable.
Retirer les surchausses en franchissant le banc et les jeter dans la poubelle
du sas 2.
Retirer la dernière paire de gant et la jeter dans la poubelle du sas 2.
Récupérer vos effets personnels
Sortir dans le SAS1 (s’assurer de la bonne fermeture de la porte (témoin
lumineux).
Sortir du SAS1
Noter l’heure de sortie sur le registre entrée/sorties ainsi que les éventuelles
anomalies ou non-conformités constatées, contaminations ou lancement de
cycle d’autoclavage.
Autoclavage des déchets
L’autoclave doit être utilisé uniquement par des personnes titulaires d’une habilitation
à la conduite des autoclaves.
Devront être autoclavés avant sortie :
 les déchets souillés (pipettes, boîtes, Petri, cônes).
 les Erlenmeyer contenant les déchets liquides
 la poubelle du SAS2 contenant les déchets non souillés (blouses, surchausses,
masques, charlottes)
 les papiers et plastiques d’emballage
 tout matériel devant sortir du L3
Les flasques contenant des cellules vivantes à sortir du L3 sont évacuées par le
passe plat une fois aspergées d’Anios DDSH puis essuyées.
Les déchets solides sont placés dans l’autoclave où ils subiront un cycle de
décontamination à 121°C pendant 20,5 min.
Les Erlenmeyers de déchets liquides seront autoclavés au moins une fois par semaine lors
d’un cycle à 121°C pendant 20,5 min.
A la fin du cycle de l’autoclave, vérifier le bon déroulement du cycle (T° de plateau et durée
de la phase plateau).
• Si le cycle s’est déroulé normalement, les déchets autoclavés sont sortis de
l’autoclave et placés dans la poubelle jaune (DASRI), d’où ils seront évacués par le
circuit normal de collecte des déchets de l’institut.
• En cas de cycle anormal, les déchets ne doivent pas sortir de la zone confinée.
Relancer le cycle adéquat.
9
•
D.
En cas d’anomalies ou de panne de l'autoclave, il doit être fait appel aux référents.
Intervention entreprise extérieure
Lorsqu’une entreprise doit intervenir dans le laboratoire L3 de l’IRCM un plan de prévention,
informant de la situation et des risques encourus par ses employés et décrivant les règles à
suivre, doit être établi.
Ce document de procédure est spécifique à l’entreprise extérieure et au travail effectué. Il est
établi pour une période déterminée.
Un référent du L3 suivra l’intervention de l’entreprise et aura pour responsabilité d’informer
de façon adéquate et conformément à la procédure l’entreprise intervenante.
Ce document sera signé par le directeur de l’IRCM, un référent du L3, un assistant de
prévention ainsi que par l’entreprise intervenante avant le début des travaux (Annexe 6).
E.
Approvisionnement au magasin
Seuls les utilisateurs du L3 peuvent aller au magasin pour faire des sorties de stock via le
cahier d’approvisionnement de la salle de culture cellulaire N2F3.
La liste des consommables disponibles dans le L3 figure dans un fichier du bureau de
l’ordinateur. Les référents se chargent de réapprovisionner en consommables le L3 dans le
SAS 2.
III.Entretien et décontamination du laboratoire L3
Le ménage de la zone confinée est à la charge des utilisateurs, formés aux risques du
laboratoire L3, selon un planning établi par les référents.
Cette tâche consiste à :
• nettoyer les surfaces (paillasses, poignées de porte, interrupteurs, portes des
frigidaires, étuves, téléphone,
• nettoyer les appareils
• Laver le sol avec le balai spécifique pour le L3
Une procédure de nettoyage complète est disponible (Annexe 7).
La décontamination générale du laboratoire L3 aura lieu dans trois cas :
- décontamination annuelle durant laquelle seront effectuées les opérations de
maintenance préventive planifiées
- Suite à une contamination majeure avérée (champignons, levures …)
- En cas de besoin absolu, exemple : sortie du gros matériel nécessaire pour le
fonctionnement du L3.
Les manipulateurs seront prévenus à l’avance afin que toutes les manipulations soient
arrêtées pour permettre ces opérations.
IV.Plan d’urgence en cas d’accident / incident en zone
confinée de niveau 3
10
A.
Règles générales de comportement en cas d’incident
Par principe, il y a lieu de respecter les instructions concernant les voies d’évacuation, les dispositifs
d’extinction et les boutons d’alarme qui sont apposées dans le bâtiment.
B.
Incidents mineurs et situations d’urgence
Lors d’incidents mineurs, la /les personnes(s) qui les ont provoqués peuvent généralement y
remédier à l’aide des responsables L3. En cas d’incidents graves, il y a lieu d’appeler les services
d’intervention externe.
Dans une situation d’urgence, il y a toujours lieu de réagir selon le même schéma et par une
procédure linéaire.
Incidents mineurs
1. Garder son
calme
2. Donner
l’alarme
Prendre la mesure de
l’incident
Informer les responsables
L3
3. Sécuriser
Délimiter la zone
contaminée
4. Prendre des
mesures
Désinfecter ou
décontaminer
conformément à la
procédure L3 (disponible
dans les pièces L3 et au
secrétariat)
C.
Situation d’urgence
Quitter la zone dangereuse
en cas de formation
d’aérosol, d’incendie, etc.
Appeler les responsables L3
et les services d’intervention
SAMU 15 - POMPIERS 18
Prévenir la direction et les
assistants de prévention
Porter secours
Interdire l’accès au L3
Évacuer la personne
Éteindre l’incendie, etc.
Numéros d’appel d’urgence
Les numéros d’appel d’urgence des services d’intervention externes et des responsables L3
sont affichés à l’intérieur du L3 à côté du téléphone.
D.
Planification des situations d’urgence
La planification des situations d’urgence distingue les situations suivantes, qui nécessitent
des comportements différents:
1.
Renversement de matériel infectieux
2.
Blessures / Malaises
3.. Incendie / Explosion
1. Renversement de matériel infectieux avec libération d’aérosols et risque
d’inhalation (contamination se limitant à l’intérieur du laboratoire)
11
 Contamination matérielle
En cas de renversement d’un liquide biologique contaminé :
• limiter la diffusion avec du papier absorbant, lui ajouter du décontaminant ;
• après 15 minutes de contact, le jeter à la poubelle ;
• changer de gants ;
• nettoyer la surface contaminée à l’Aniosyme DDSH ;
• informer les référents du L3 ;
• prévenir l’assistant de prévention et renseigner l’incident sur le registre santé et
sécurité au travail de l’unité
En cas de renversement sur la blouse :
• Retirer la blouse et la mettre dans un sac pour autoclavage
• Si les vêtements personnels sont contaminés, limiter la diffusion avec du papier
absorbant, ajouter du décontaminant
 Contamination humaine
Procédures à suivre :
• Prévenir un secouriste (cf. liste affichée dans le L3).
• Le secouriste, formé au préalable à entrer dans le L3, se rend auprès de la victime.
• Il porte les premiers soins et décide si les pompiers / le SAMU doivent être appelés.
• Prévenir l’assistant de prévention et renseigner l’incident/accident sur le registre
d’hygiène et sécurité de l’unité.
1/ En cas de projection de matériel contaminé sur la peau ou les muqueuses:
• L’épithélium cutané est lavé rapidement une première fois à l'alcool à 70%.
• La victime est sortie du L3.
• En dehors du L3, la peau est lavée 15 minutes à l'eau courante et au savon.
2/ En cas de plaie exposée à du matériel contaminé
• La zone corporelle atteinte est lavée rapidement une première fois à l'alcool à 70%.
• La victime est sortie du L3.
• En dehors du L3, la zone corporelle atteinte est lavée au savon 3 minutes, puis rincée
et désinfectée 15 minutes à l'alcool à 70%.
3/ En cas de projection de matériel contaminé dans l'œil
• Le pourtour de l'œil est rapidement lavé à l'alcool à 70%.
• La victime est sortie du L3.
• En dehors du L3, l'œil est lavé au « rince œil », tête en arrière, paupières écarquillées
l'œil touché en bas pour ne pas contaminer l'autre par les effluents, jusqu’à l’arrivée
des secours.
Après les premiers secours
• Prévenir le SAMU, et appeler le service des maladies infectieuses.
• La victime est accompagnée par le SAMU aux urgences du CHU où seront
effectuées si besoin les sérologies nécessaires et éventuellement un traitement
prophylactique.
En cas de risque de contamination appeler, sans attendre, le service des Maladies
Infectieuses et Tropicales (SMIT) du CHRU Gui de Chauliac: 04 67 33 72 18/19 ou le
secrétariat général 04 67 33 77 05, un médecin vous prendra en charge directement.
La direction de l’unité est informée et met en œuvre les actions nécessaires.
12
Le médecin de prévention de l’agent concerné est consulté dans les 24 heures.
Les assistants de prévention de l’IRCM et les services prévention des tutelles sont
informés.
Une déclaration d'accident du travail est effectuée.
2. Blessures / Malaise nécessitant une évacuation du L3
1ère situation : Il y a une personne blessée mais consciente et sans contamination visible
• Aider la personne à aller dans le sas
• Enlever ses vêtements de protection dans le sas
• La confier à une 2ème personne qui va l’emmener dans le couloir
• La personne qui est entrée dans le L3 doit enlever son équipement de protection
avant de quitter la zone L3
2ème situation : La personne est inconsciente
• Contacter un secouriste habilité à entrer dans le L3
• Si la personne est contaminée, elle doit être décontaminée dans le labo L3 avant de
quitter la zone
• La transporter dans le SAS
• Lui retirer ses vêtements de protection
• La transporter dans le couloir
• La personne qui est entrée dans le L3 doit enlever son équipement de protection
avant de quitter la zone
Procédures à suivre une fois la victime sortie :
• Prévenir un secouriste (cf. liste affichée dans le L3).
• Le secouriste se rend auprès de la victime.
• Il porte les premiers soins et décide si les pompiers / le SAMU doivent être appelés.
• La personne blessée doit être sortie de la zone L3 pour que les secours extérieurs
puissent intervenir.
La direction de l’unité est informée et met en œuvre les actions nécessaires.
Le médecin de prévention de l’agent concerné est consulté dans les 24 heures.
Les assistants de prévention de l’IRCM et les services prévention des tutelles sont
informés.
Une déclaration d'accident du travail est effectuée.
En cas de problème grave nécessitant une sortie rapide, la décontamination des SAS doit
être prévue. Le local devra être décontaminé avant toutes nouvelles manipulations.
3. Incendie / Explosion L3
En cas d’alarme incendie dans le bâtiment, interrompre rapidement mais correctement les
manipulations en cours et sortir du L3 pour suivre la procédure d’évacuation.
En cas d’incendie dans le L3
• Tenter de circonscrire l’incendie avec l’extincteur à CO2 en évidence dans le L3
• Les détecteurs de fumées provoquent l’arrêt de la ventilation.
• L’alarme est retransmise chez le gardien
13
•
•
•
•
•
Sortir de la zone L3 en fermant toutes les portes
Donner l’alarme ou appeler les pompiers
Couper l’alimentation électrique de la zone
Evacuer le bâtiment
Informer les pompiers de la présence d’agents biologiques pathogènes
En cas d'incendie, les pompiers ne rentreront pas dans le L3 mais éteindront le feu de
l'extérieur.
14
ANNEXE 1
Formulaire de projet expérimental
Formation de recherche :
Equipe :
Responsable du projet :
BUT DU PROJET
:
RESUME DES PRINCIPALES ETAPES EXPERIMENTALES DU PROJET
:
PLAN EXPERIMENTAL ANNOTE DE L’IDENTIFICATION DES RISQUES
:
Parties à renseigner obligatoirement
Agents biologiques non OGM
Type d'agent biologique :
Agents biologiques OGM
Type d'agent biologique :
Agrément OGM correspondant
Oui (copie à joindre)
Non
Information du public effectuée
Oui (accusé de la mairie à joindre)
Non
Phénotype :
Phénotype :
Agrément OGM à demander
Oui
Non
Information du public à effectuer
Oui
Non
15
ANNEXE 2
Lettre accès L3 pour le Médecin de prévention
Dr S. Alomène
INSERM U1194
Monsieur Claude Sardet
Institut de Recherche en Cancérologie
de Montpellier (U1194)
Campus Val d'Aurelle
34298 Montpellier cedex 5 FRANCE
Médecin de Prévention Inserm
Tél :04 67 84 76 40 / 04 67 20 98 15
Dr C. Bec
Médecins de Prévention UM1
Tél :04 67 60 11 24
Tel : 33.(0)4.67.61.85.77
Dr F. Mann
Médecin de Prévention ICM
Tél :04 67 61 25 70
Dr. M. Dumas
Médecin de Prévention CNRS
Tel :04 67 61 35 85
A Montpellier, le ……………………………
Docteur,
J’ai l’honneur de vous demander de bien vouloir effectuer un examen médical préalable à l’accès au
laboratoire
de
confinement
3
de
l’IRCM
(Inserm
U1194)
pour
M./Mme…………………………………………………………
Email : …………………………
Téléphone : ………………………
Les agents pathogènes manipulés par cette personne dans le L3 de l’Unité 1194 sont :
………………………………………………………………………………………………………….
Je vous serais reconnaissant de bien vouloir remplir et signer le document de non contre-indication au
travail en L3 que vous trouverez ci-dessous.
Je vous prie d’agréer, Docteur, l’expression de mes meilleures salutations.
M. Claude SARDET
Directeur Inserm U1194
Certificat de non contre-indication au travail en L3 de l’IRCM
Délivré par le médecin de prévention
Je
soussignée
Dr.
Dumas/Alomène/Bec/Mann,
Médecin
de
Prévention
du
CNRS/INSERM/UM/ICM, atteste que M./Mme ………………………………………………..suite à la
visite médicale en date du ……………………… est apte à travailler dans le laboratoire L3 de
l’IRCM.
Fait à …………………, le ……………….………….
Dr M. Dumas / S. Alomène / C. Bec / F. Mann
Dr Claude SARDET, INSERM U1194, Institut de Recherche en Cancérologie de Montpellier (U1194)
Campus Val d'Aurelle - 34298 Montpellier cedex 5 FRANCE
16
ANNEXE 3
Autorisation d’Accès au Laboratoire de Niveau de
Confinement L3 de l’IRCM
Je, soussigné, ………………… …, membre de l’équipe ………… ….. et demandeur d’accès au L3,
déclare avoir pris connaissance des procédures de travail au laboratoire L3 de l’IRCM et de
ses règles de sécurité, et m’engage à les respecter.
Certificat médical de non contre-indication à la manipulation en laboratoire L3 effectué le… ………
Fait à Montpellier le…………….
Signature :
Je, soussigné, ……………………., membre de l’équipe…… ………….et tuteur de ………………..,
certifie avoir formé cette personne aux procédures de travail en L3, afin qu’elle en ait une
connaissance suffisante pour effectuer les expérimentations décrites dans son projet.
Fait à Montpellier le………………
Signature :
Signature d’un référent du L3 :
Signature du directeur de l’IRCM :
A Montpellier le……………..
Signature :
A Montpellier le……………..
Signature :
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ANNEXE 4
Décontamination
Décontamination des surfaces (paillasses, appareils,
PSM…) :
Anios DDSH en pulvérisateur :
- Appliquer la mousse détergente désinfectante sur la surface à
traiter. Bien répartir à l’aide d’un papier absorbant
- Laisser agir 5min
- Le rinçage est inutile
Décontamination des liquides :
Aniosyme DD1 : à diluer à 0,5% final
- verser le volume adéquat d’Aniosyme DD1 au fond d’un
Erlenmeyer (1mL pour 200mL de liquide à décontaminer).
- Sous le PSM, verser les liquides contaminés dans cet
Erlenmeyer
- Laisser agir au minimum 5min
- Fermer l’Erlenmeyer avec son bouchon pour le sortir du PSM.
- Autoclaver en cycle « liquides ».
Décontamination des sols :
Surfanios (doses de 20mL)
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ANNEXE 5
Autorisation temporaire « visiteur » pour l’accès au
L3 de l’IRCM
Je soussigné ……………………….référent du Laboratoire L3 de l’IRCM, confirme que
Mr
/
Mme /
Melle*
…………………………………………pourra accéder
au L3 le
………………………. en tant que « visiteur » sous la responsabilité de l’utilisateur
………………………………………..
Un accès en tant que visiteur permet de montrer des équipements ou des procédures à une
personne qui n’a pas d’autorisation permanente d’accès au L3.
Le visiteur ne pourra accéder au L3 qu’accompagné en permanence par un personnel
autorisé qui est responsable du visiteur pour toute la durée de sa visite. En particulier, le
visiteur s’habillera sous le contrôle de son responsable, il ne manipulera ni ne touchera
aucun élément potentiellement contaminé.
Référent du Laboratoire L3 IRCM :
Le visiteur
(nom et signature)
Le responsable du visiteur
(nom et signature)
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ANNEXE 6
Intervention d’une entreprise extérieure
ENTREPRISE INTERVENANTE :
...............................................................................................................................................
...............................................................................................................................................
Coordonnées de l’Entreprise :
...............................................................................................................................................
...............................................................................................................................................
...............................................................................................................................................
Date et durée de l’intervention :
...............................................................................................................................................
Nature des travaux :
...............................................................................................................................................
...............................................................................................................................................
...............................................................................................................................................
...............................................................................................................................................
Une copie de ce document préalablement signé par un responsable du L3 ou son
représentant sera fournie à l’entreprise intervenante pour qu’elle en prenne connaissance.
Ce document devra être signé par l’entreprise intervenante représentée par son employé et
l’utilisateur du L3 en charge de l’intervention avant de pénétrer dans le L3.
Il est à la charge de l’entreprise intervenante de vérifier qu’elle a été correctement informée
des points précisés dans ce document.
 Dans le cas de travaux, il sera établi au préalable de l’intervention, en concertation
avec l’entreprise intervenante, un plan de prévention suivant les règles en vigueur au
sein de l’institut.
 Dans le but de réduire le risque de renversement ou contact avec du matériel
biologique ou du matériel contaminé, l’utilisateur L3 en charge de l’intervention
s’engage à ce que la zone de travail à l’intérieur du laboratoire L3 ait été débarrassée
et les surfaces décontaminées par les utilisateurs L3.
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 L’utilisateur L3 en charge de l’intervention s’engage à ce que les utilisateurs L3 de la
pièce concernée par l’intervention soient avertis afin de stopper leurs activités durant
l’intervention.
 L’entreprise intervenante sera accompagnée pour l’entrée dans le L3 par l’utilisateur
L3 en charge de l’intervention afin de recevoir les instructions. Elle devra prévenir
l’utilisateur L3 en charge de l’intervention ou à défaut un autre utilisateur L3 lorsqu’il
quitte l’institut.
 L’entreprise intervenante sera habillée suivant les mêmes règles que lors de la
manipulation d’échantillons biologiques dans le L3 i.e. double paire de gants, sur
chausses, masque et blouse. Il sera précisé les bonnes pratiques d’utilisation de ces
équipements.
 Une présentation élémentaire du L3 sera fournie par l’utilisateur L3 en charge de
l’intervention à l’entreprise intervenante accompagnée des instructions d’opération et
de sécurité détaillées dans les points suivants.
 L’utilisateur L3 en charge de l’intervention devra expliquer les procédures
d’entrées/sorties du laboratoire L3.
 Les méthodes d’utilisation du téléphone et de l’interphone du laboratoire L3 seront
fournies par l’utilisateur L3 en charge de l’intervention. Il sera évidemment précisé les
numéros de postes à joindre.
 La procédure de déblocage des portes du laboratoire L3 sera précisée par l’utilisateur
L3 en charge de l’intervention.
 L’entreprise intervenante s’engage à ne toucher ni déplacer quoi que ce soit qui ne
soit strictement nécessaire à son intervention sans autorisation de l’utilisateur L3 en
charge de l’intervention.
 L’entreprise intervenante s’engage à ne pas manger, ne pas boire, ne pas fumer
dans le laboratoire L3.
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 L’entreprise intervenante s’attachera à utiliser un minimum de matériel. Elle tachera
également de soigneusement prévoir le matériel nécessaire à l’intervention afin de
réduire au maximum les entrées/sorties. Elle s’engage par ailleurs à entreposer celuici sur un emplacement propre précisé par l’utilisateur L3 en charge de l’intervention.
La désinfection du matériel utilisé sera supervisée par l’utilisateur du L3 en charge de
l’intervention.
 Les prises électriques utilisables seront indiquées par l’utilisateur L3 en charge de
l’intervention.
 En cas d’accident ou d’incident, l’entreprise intervenante préviendra les utilisateurs
L3 qui prendront les mesures adéquates en conformité avec le plan de prévention.
 Seront précisés ci-dessous le cas échéant les points particuliers liés à la spécificité
de l’intervention (formolisation, arrêt totale du L3, signalisation extérieure etc.).
……………………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………
…………………………………..
SIGNATURES
Le Directeur de l’IRCM :
Le référent L3 en charge de l’intervention
Nom :
Nom :
Pour l’entreprise intervenante
Nom :
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ANNEXE 7
Entretien des locaux MENAGE
Nettoyage mensuel des SAS et du L3
- Lavage du sol du sas 1 avec le balai sas + lingettes imprégnées de Surfanios
- Lavage du sol de la « zone propre » du sas 2 avec le balai dédié au sas + lingettes
imprégnées de Surfanios
- Mettre la combinaison, les gants, le masque et la charlotte comme décrit dans le protocole
d'habillage
- Lavage du sol de la « zone sale » du sas 2 au Surfanios à l’aide du balai dédié au L3
- Entrer dans le L3
- En partant du fond de la salle, nettoyage au spray DDSH des surfaces (paillasses, dessus
des mobiliers…) et de tous les objets relais (poignées, téléphone, interrupteurs, chaises,
ordinateurs (écran,…)
- Nettoyage de l’intérieur des PSM à l’aide de papier absorbant imprégné de DDSH : parois,
surface de travail et bac de rétention.
- Lavage du sol du L3 à l'aide du balai L3 muni d’une lavette pré-imprégnée de Surfanios.
Elles seront jetées après utilisation dans le sac à déchets biologiques.
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Entrée
Avant d'entrer dans le L3 :
o Bien préparer sa manipulation (durée, matériel et réactifs
nécessaires).
o Réserver une plage horaire pour l’utilisation des PSMs sur le
planning accessible via
l’intranet / Plateaux techniques/
Laboratoire L3.
o S’assurer qu’on ne présente pas de plaies aux mains ou sur le
visage ; dans le cas contraire éviter d’entrer ou à défaut les
recouvrir d’un pansement étanche disponible dans l’armoire à
pharmacie au niveau N2F3.
o Vérifier les pressions des SAS et du laboratoire L3, et les noter sur
le registre d’entrées/sorties :
 SAS 1 : environ +30 Pa
 SAS 2 : environ - 15 Pa
 L3 : environ - 30 Pa
En cas de pressions non réglementaires, NE PAS ENTRER, noter
l'anomalie sur le registre "entrée / sortie L3" et prévenir un des
référents du L3 ou un assistant de prévention.
o Mettre dans le passe plat, le matériel nécessaire aux manipulations
prévues.
o S’inscrire sur le registre d’entrée/sortie.
Remarques :
- L’entrée d’instruments exceptionnellement nécessaires à une
expérimentation doit être soumise à l’autorisation des référents.
- L’entrée de glace est interdite. Des blocs réfrigérants sont
disponibles pour maintenir à 4°C et à -20°C.
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Habillage
Avant de franchir le banc :
o laisser le badge et les éventuels effets personnels dans
les casiers prévus à cet effet
o s’asseoir sur le banc,
o enfiler une surchausse,
o passer le pied surchaussé de l’autre côté du banc, répéter
l’opération pour l’autre pied.
o enfiler une première paire de gants
o passer une blouse jetable
o mettre un masque si nécessaire
o se recouvrir la tête d’une charlotte, cheveux attachés si
besoin est.
o Badger pour pénétrer dans le L3. S’assurer de la bonne
fermeture de la porte d’accès au L3
o Enfiler une deuxième paire de gants
o Mettre une paire de lunette de protection si nécessaire sauf
en cas en port de verres correcteurs
Remarques :
L’introduction de documents, cahiers, bloc-notes, téléphones, mp3
sont interdits dans le L3. L’ordinateur relié au réseau pourra être utilisé
pour consulter des documents ou envoyer des résultats (tableau,
photos…) vers un dossier distant du réseau partagé. L’ordinateur ne
doit en aucun cas servir de stockage de résultats.
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Avant de sortir du L3
o Vérifier que les appareils (microscope, centrifugeuse, PSM,
ordinateur…) soient bien éteints
o Fermer les sacs à autoclave une fois plein en utilisant un ruban
adhésif et les placer devant l’autoclave à double entrée.
o Jeter la paire de gants externe avant de sortir du L3.
o Badger pour sortir dans le SAS2.
o S’assurer de la bonne fermeture de la porte d’accès au L3.
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Sortie
o Jeter charlotte et masque dans la poubelle située dans le sas 2.
o Enlever la blouse, et la suspendre sur un cintre identifié si une
entrée prochaine dans le L3 est prévue, sinon, la jeter dans la
poubelle du sas 2.
o Retirer les surchausses en franchissant le banc et les jeter dans la
poubelle du sas 2.
o Retirer la dernière paire de gant et la jeter dans la poubelle du sas
2.
o Récupérer vos effets personnels
o Sortir dans le SAS1 (s’assurer de la bonne fermeture de la porte
(témoin lumineux).
o Sortir du SAS1
o Noter l’heure de sortie sur le registre entrée/sorties ainsi que les
éventuelles anomalies ou non-conformités constatées,
contaminations ou lancement de cycle d’autoclavage.
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