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Evaluation du kit SD BioLINE TB Ag MPT64® dans le cadre
du diagnostic de la tuberculose
M. Fabre(1), R. Vong(1), T. Gaillard(2), A. Merens(3), F. Nouridjan(2), P. Saint-Blancard(1), P. Gérôme(1), C.Soler(1)
(1)
H.I.A PERCY, Clamart ; (2) H.I.A. SAINT-ANNE; Toulon; (3) H.I.A. BEGIN, Saint-Mandé
RÉSUMÉ
Objet : évaluer le kit SD BioLINE TB Ag MPT64® (Standard diagnostics, INC.) dans le cadre du diagnostic
antigénique de la tuberculose après culture en milieu liquide ou solide.
Méthodes : - le kit, test rapide d’immunochromatographie utilisant un anticorps monoclonal de souris anti MPT
64 pour la capture; nécessite une simple extraction à partir de 100 µl d’une culture en milieu liquide ou à partir
de colonies ou du liquide de condensation sur milieu solide (durée du test 15 minutes).
étude de la sensibilité : 99 souches cliniques de mycobactéries du complexe tuberculosis (78% de
prélèvements pulmonaires; 75% de souches isolées en milieu solide, 15% en milieu liquide, 10% dans la
phase de condensation).
étude de la spécificité : 10 souches de mycobactéries atypiques, 30 entérobactéries, 55 souches bacilles à
Gram +.
Résultats : Sensibilité : 99%, résultat négatif avec la souche de BCG (déjà rapporté, lié à des mutations sur le
gène); parfaite identification pour les autres espèces; en milieu liquide (MGIT®, BACTEC 960® BD) si analyse
faite sur échantillons avec faible unité de croissance, image de moindre intensité pour M. africanum par rapport
à M. tuberculosis / Spécificité : 100%.
Conclusion : Ce test basé sur la mise en évidence de l’antigène MPT64 (protéine spécifique du complexe
tuberculosis, actuellement incriminée dans la virulence) présente des performances excellentes. Il s’agit d’un
test unitaire, rapide, ne nécessitant pas de matériel particulier, beaucoup moins cher que les méthodes
diagnostiques basées sur des techniques moléculaires.
INTRODUCTION
Le diagnostic de la tuberculose revêt un caractère particulièrement urgent. Ces dernières
années l’avènement de la biologie moléculaire a permis de disposer de multiples
techniques permettant un diagnostic immédiat sur le prélèvement voire la mise en
évidence de résistance aux antituberculeux pour certaines d’entre elles; mais le plus
souvent le diagnostic se fera à partir de bactéries isolées en milieu liquide et au moyen
d’une technique d’hybridation, association permettant une réduction considérable du délai
diagnostic. Le diagnostic antigénique de la tuberculose après croissance bactérienne a été
mis au point à la fin des années 90, mais a été très peu utilisé; un kit basé sur la détection
de l’Ag MPT64, protéine uniquement secrétée par les souches du complexe tuberculosis
vient d’être commercialisé en France. Le but de notre étude consiste à apprécier les
performances de ce réactif et de le situer au sein des méthodes diagnostiques.
PATIENTS ET METHODES
Patients et souches
Θ 99 patients tuberculeux: sexe ratio F/H = 0.46; Age moyen = 36 ans; Origine: 63 Djibouti,
18 France, Afrique occidentale et Asie du sud-est. 99 prélèvements dont 71 pulmonaires et
28 extrapulmonaires.
Θ 99 souches Complexe tuberculosis (76 M. tuberculosis,11 M. canettii, 8 M. africanum,
3 M. bovis, 1 M. bovis BCG)
Θ10 mycobactéries atypiques (3 M. gordonae, 3 M. intracellulare, M. chelonae, M.
mucogenicum, M. simiae, M. xenopi).
Θ autres bactéries pour étude de spécificité 55 bacilles à Gram + (Corynebacterium 16
espèces, Nocardia, Actinomyces, Arcanobacterium/ 30 entérobactéries.
RESULTATS
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Espèces
Test (+)
Test (-)
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Complexe tuberculosis
M. tuberculosis (76)
76
0
M. canettii (11)
11
0
M. africanum (8)
08
0
M. bovis (3)
03
0
BCG (1)
0
1
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Mycobactéries atypiques
M. gordonae (3)
0
3
M. intracellulare (3)
0
3
M. chelonae (1)
0
1
M. mucogenicum (1)
0
1
M. simiae (1)
0
1
M. xenopi (1)
0
1
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Autres
Bacilles Gram (+) (55)
0
55
Entérobactéries (30)
0
30
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
DISCUSSION
Θ La protéine MPT64 est spécifique du complexe tuberculosis; le gène a été cloné
souche de BCG (1989) puis chez M. tuberculosis (1994). C’est une protéine de 22,4
AA). Elle est impliquée dans la virulence (favorise la sécrétion de protéines qui
l’apoptose des cellules géantes. Le premier anticorps monoclonal anti MPT64 (1997) a
support au premier kit antigénique (CapiliaTB, TAUNS Nippon BD).
sur une
kd (205
inhibent
servi de
Θ Dans la littérature 4 études pour le Capilia et 1 seule pour le SD Bioline: spécificité de 100%
pour les différentes études ; la sensibilité est proche de 100% si exclusion des souches de BCG.
Θ Synthèses des faux négatifs
- Certaines souches de M. bovis BCG:
. Test (-) : avec les souches « tardives » Copenhague, Pasteur, Glaxo, Tice;
. Test (+) avec les souches « précoces » Brésil, Tokyo, Russie, Suède.
- Mutations sur le gène mpt64:
. Hirano (2004): 5 mutations 196/ délétion de 63 bp, 266/ C délétion, 402/ substitution G/A,
501/ insertion IS6110, 512 /délétion de 872 bp;
Méthodes
Θ Ensemencement du prélèvement: Milieu liquide (MGIT 960, BD ou BacT/Alert, BM);
. Hilleman (2005) 3 mutations 285: C insertion, 388 / substitution A/T, 177 insertion IS6110.
- Précocité de la réalisation du test ( en milieu liquide) car Seuil ≥ 105 UFC/ml.
Θ Culture (+): ED Ziehl-Neelsen puis identification par
- Hybridation moléculaire (Accuprobe® ou GenoType MTBC®)
- Méthode phénotypique traditionnelle
- Méthode antigénique: SD BioLINE TB Ag MPT64® (test immunochromatographique)
Θ Avantages du test:
- performances élevées: Se et Sp; ne nécessite aucun appareillage particulier
- simplicité des manipulations résultat obtenu souvent en moins de 2 minutes
1) Utilisation
Prélevez 100 µl de culture en milieu
- conservation des réactifs à T° ambiante (1 à 30°)
liquide, 100 µl de condensation ou
- pas d’interférence avec des contaminants éventuels
colonies dissoutes dans 100 µl de
diluant.
- réalisable à partir des différents milieux de culture
- moins cher que les techniques d’hybridation 5 € vs 13 à 28 €
2) Lecture après 15 mn
NEGATIF
Visualisation de la bande
contrôle
POSITIF
Visualisation de la bande
contrôle et de la bande test
du complexe M. tuberculosis
Θ Remarques: manipulations en laboratoire P3, pas de précision de l’espèce dans le complexe
tuberculosis; pour la culture en milieu liquide il est préférable de respecter un délai de 24 heures
après détection automatisée avant de faire le test.
CONCLUSION
Le SD BioLINE TB Ag MPT64® est le premier kit d’identification antigénique de la tuberculose commercialisé en France. Celui-ci offre l’avantage de pouvoir être
réalisé sur tous les milieux de culture. Ces performances analytiques sont excellentes. Cette méthode simple, qui ne nécessite aucun matériel permet un
diagnostic immédiat de la tuberculose et est appelée à s’implanter dans tous les laboratoires de mycobactériologie: en métropole pour ceux utilisant des méthodes
de diagnostic moléculaires ou non, mais surtout en zone d’endémie tuberculeuse.