Colorations topographiques Hémalun, Phloxine, Safran

Colorations topographiques
Hémalun, Phloxine, Safran (H.P.S.)
Principe
Coloration histologique topographique standard, associant à une coloration nucléaire par
l’hémalun, une coloration cytoplasmique par la phloxine et une coloration du collagène par le
safran. C’est une coloration trichromique.
Réactifs
Hématoxyline de MAYER :
Solution aqueuse saturée d’alun de potassium (≅ 2%)
1000ml
Hématéine (CI 75290)
2g
Acide Acétique
20 ml
Faire bouillir la solution d’alun de potassium.
Arrêter le chauffage et ajouter au liquide bouillant l’hématéine.
Laisser bouillir à nouveau pendant 5 minutes.
Refroidir
Filtrer.
Ajouter l’acide acétique
Eau chlorhydrique à 1% dans l’eau distillée.
Eau ammoniacale à 1% dans l’eau distillée.
Phloxine (CI 45410) à 2 o/oo dans l’eau distillée.
Safran en solution alcoolique (CI 75100)
1Sécher à 56°C, pendant 24H00, 20g de safran du Gâtinais
2Pulvériser au mortier.
3Ajouter 200ml d’alcool éthylique absolu.
4Remettre à l’étuve pendant 3 jours, en agitant tous les jours.
5Laisser décanter et récupérer l’alcool surnageant.
Renouveler à 5 reprises les étapes 3, 4 et 5 et regrouper le colorant dans un même flacon.
Résultats :
-
Les
Les
Les
Les
noyaux sont bleus violets
cytoplasmes sont roses
hématies sont rouges ou non colorées
fibres de collagène sont roses – orangées
Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour AVRIL 2007
Colorations topographiques
Hémalun, Phloxine, Safran (H.P.S.)
Technique
Plonger la lame dans trois bains de xylène en agitant
3x5 min
Plonger dans deux bains d’alcool absolu en agitant les lames
2x3 min
Plonger dans un bain d’alcool à 80% en agitant
2 min
Réhydrater à l’eau courante puis à l’eau distillée
Colorer à l’Hémalun
5 min
Rincer à l’eau courante
Plonger dans l’eau chlorhydrique
Rincer à l’eau courante
Plonger dans l’eau ammoniacale
Rincer à l’eau courante
Contrôler la différenciation au microscope
Rincer à l’eau distillée
Colorer à la Phloxine
3 min
Rincer à l’eau courante
Plonger dans l’alcool absolu en agitant la lame
≈1 min
Plonger dans un deuxième bain d’alcool absolu
≈2 min
Colorer au Safran
4 à 6 min
Rincer dans deux bains d’alcool absolu en agitant la lame
Plonger dans trois bains de xylène en agitant la lame
Monter sous lamelle à l’aide de résine
Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour AVRIL 2007