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Spécialiste en biologie moléculaire,
votre partenaire de l’extraction à l’amplification
CATALOGUE HOSPITALIER
Sommaire
■ Extraction p6
Maxwell ® 16 IVD instrument, extraction petits volumes
Extraction manuelle p 13
HSM 2.0 Instrument, extraction grands volumes p 14
p7
■ Quantification
p 16
■ Analyse STR p 20
■ Focus épigénétique
p 26
■ Amplification (Coffrets - Mix)
p 28
■ Identification (Spectrométrie de Masse)
p 36
■ Recherche Translationnelle
p 38
■ Démarche Promega
p 40
Services
p 40
Centre de formation PETAL
p 41
Site Feynman Center cGMP
p 42
Développement durable p 43
Les produits sont identifiés CE IVD s’ils bénéficient du marquage CE IVD (Conformité Européenne
pour le Diagnostic In Vitro) ou RUO (Research Use Only) s'ils sont utilisés en recherche uniquement.
Promega, des solutions
automatisées et ciblées
pour répondre aux besoins
des laboratoires hospitaliers
Les progrès en biologie moléculaire ces dernières années
ont permis l’émergence de découvertes médicales
extraordinaires dans des domaines tels que les maladies
rares, la cancérologie, les maladies infectieuses...
En plus des nouvelles armes thérapeutiques en cours de
développement (biomédicaments), les techniques de biologie
molécu­laire permettent également d’étudier les pathologies
au niveau moléculaire d’un point de vue génétique humaine,
comme la détection de mutations. Le facteur pronostic, basé
sur une caractérisation moléculaire des maladies, devient
un élément fondamental dans la prise en charge du patient.
L’émergence d’une méde­
cine personnalisée est désormais
possible.
Des techniques universelles, telles que la PCR largement
utilisée en recherche, sont désormais routinières dans de
nombreux laboratoires hospitaliers.
Les tests de biologie moléculaire ouvrent ainsi la voie
à une biologie nouvelle et trouvent leur place dans le
paysage de la biologie hospitalière.
3
Avec plus de
30 ans d’existence,
Promega est présent
dans le monde avec
14 filiales et 50 distributeurs.
Il se positionne comme un acteur
incontournable en biologie
moléculaire. Détenteur de plus de
500 brevets pour la conception
de réactifs, notamment dans les
domaines de la génomique, de la
protéomique, de l’identification
génétique humaine, Promega
contribue aux travaux
de la communauté
scientifique internationale.
4
Promega, une solide expertise en
biologie moléculaire
Plus qu’un spécialiste, un partenaire
Promega a développé une expertise et un savoir-faire dans des domaines
variés tels que la recherche fondamentale, la biologie clinique, le screening de
molécules à visée thérapeutique ou la médecine légale. Ses produits sont cités
au travers de milliers de publications scientifiques et médicales parmi lesquelles
Oncology, Science, Nature.
Promega développe des solutions automatisées et ciblées à destination des
laboratoires hospitaliers : services de génétique (oncogénétique, cytogénétique…),
HLA, immunologie, hématologie, oncologie, anatomopathologie, infectiologie.
Promega vous accompagne ainsi depuis l’extraction (automatisée ou manuelle)
jusqu’à l’amplification.
Un service de qualité optimale
•
Un marquage CE IVD ou RUO selon les produits
•
Des normes ISO 9001 et ISO 13485
•
Un SAV de qualité et de proximité
•
Une plateforme technique à votre écoute (Hotline - Messenger)
•
Des délais et des conditions de livraison optimaux (respect de la chaîne du froid)
•
n laboratoire d’application disponible pour suivre, tester des produits, réaliser
U
des formations (Lyon)
•
n site industriel classé cGMP pour la production de produits réglementés pour
U
l'industrie pharmaceutique ou l'industrie du diagnostic
5
Extraction
Promega offre des solutions automatisées dans le
but de répondre aux besoins de standardisation des
méthodes et d'optimisation des flux de laboratoires.
De la microbiopsie au grand volume de sang (10 mL),
Maxwell ® 16 IVD System et HSM 2.0 Instrument
permettent d’extraire ADN ou ARN en toute confiance.
Maxwell 16 IVD System (CE IVD)
®
Extraction automatisée de petits volumes
Rapidité
Extraction automatisée de 1 à 16 échantillons en 30-45 minutes.
Facilité d’utilisation
•D
es cartouches pré-remplies adaptées
à un large panel d’échantillons
• Moins de traitements en amont
• P rotocoles pré-enregistrés et faciles
d'utilisation
• U n écran tactile
Traçabilité
• U n lecteur de code barres pour le suivi
des échantillons et des runs
• E xportation des données vers un PC
Fiabilité
AS3050
• A bsence de contamination croisée
• L ampe UV pour la décontamination
• Procédé unique de déplacement de billes
magnétiques, sans pipetage de liquides
• A reproductibilité assurée : aucune
variation d'un run à l'autre
• S ervice de maintenance préventive
pour garantir le fonctionnement
optimal du système
Extraction à partir d'un large panel d’échantillons
ADN génomique
• Sang total / Buffy coat
• Tissus frais/congelés
• FFPE • Cellule • Salive
• Ecouvillons • Fluides corporels
ARN total
• Sang total / Buffy coat
• Cellules
• Tissus
Gagnez 6 fois plus de temps dans vos extractions !
ADN/ARN de virus
• Plasma
• Sérum
• Ecouvillons
Optimisation des coûts : réduisez de 50% vos dépenses en extractions*
Coût des extractions
Temps utilisateur
90 min.
15 min.
22,5 E
11,5 E
-50%
Colonnes
(manuel)
Cartouches
(automate)
Colonnes
(manuel)
Cartouches
(automate)
* Coût global = prix du réactif + temps technicien
7
Hématologie / Oncologie / Génétique
Extraction d'ARN à partir de prélèvements de sang, cellules et tissus
Moins de contamination par l'ADN
80
35
80
70
30
60
70
50
60
40
50
30
40
20
30
Maxwell® 16/simply RNA
Q
TRIzol-Manual
Faible contamination
par l’ADN génomique
6,5 à 9 Ct
de moins
sur ces réactions
correspondent à
une contamination
en ADN génomique
90 à 500 fois
plus élevée
25
20
simply RNA Blood
15
simply QRNA
Marque
RNABlood
Blood Mini
10
20
lisée
par3 mL de sang (ng/µl)
Donneur
0
10 6
10 5
10 4
10 3
HEK 293 Cells
ang (ng/µl)
10027MA
5
par mL de sang (ng/µl)
33,6
24,6
27,1
2 mL
Donneur
3
Marque Donneur
Q RNA Blood
Mini de sang
normalisée
par
(ng/µl)
Donneur
3
Concentration
Marque
Q RNA Blood Mininormalisée
27,8
27,8
25,6
simply
RNA Blood
Donneur
1
Concentration
10
Marque Q RNA Blood Mini
Donneur 3
24,1
24
24
simply RNA
Blood2
Donneur
Donneur 1
0
20
19,7
20,8
0
10
17
18,1
18,4
Donneur 2
Des concentrations élevées en ARN
Average Cq (n=3)
RNARNA
(ng/ul
per per
ml blood
input)
(ng/ul
ml blood
input)
by Absorbance
by Absorbance
La qualité de l’ARN extrait d’un prélèvement est primordiale pour la recherche de mutations génétiques impliquées dans les cancers ou les
maladies héréditaires. Trois kits Maxwel ® 16 dédiés à l’extraction d’ARN à partir de sang (EDTA et Paxgene), cellules ou tissus sont désormais
disponibles et offrent une solution rapide et efficace. Grâce au traitement à la DNase inclus dans la cartouche, l’ARN obtenu est quasi exempt
d’ADN (<0,017%).
10 6
No RT
Rendement d’extraction d’ARN sur 10 millions de cellules
N° échantillon
Rendement
extraction en ng
Ratio A260/A280
concentration
en ng.µl-1
volume d'élution
en µl
1
7680
2,06
256
30
2
6060
2,06
202
30
3
6450
2,07
215
30
4
7950
2,09
265
30
5
9030
2,07
301
30
6
8310
2,08
277
30
7
7620
2,06
254
30
8
8700
2,09
290
30
9
9120
2,09
304
30
10
5100
2,08
170
30
11
4470
2,09
149
30
12
8760
2,07
292
30
13
7920
2,06
264
30
14
5160
2,04
172
30
15
4050
2,05
135
30
16
8550
2,05
285
30
8
L'automate
Maxwell®
nous
permet d'extraire simultanément
jusqu'à 16 ARN en 1 heure
environ. Ceci représente un
gain de temps considérable en
comparaison de notre ancienne
technique manuelle. Ainsi à partir
de culots secs de 10M de cellules
nous obtenons des ARN de
quantité et de qualité adéquates
pour nos techniques de qPCR.
Dr O. K.
Laboratoire d'Hématologie
Moléculaire, APHP
Anatomopathologie
Extraction d'ADN à partir de tissus inclus en paraffine
Promega propose une solution automatisée d’extraction d’ADN à partir de tissus inclus en paraffine. L’association du Maxwel® 16 et du kit
Maxwel ® LEV FFPE offre une solution complète aux laboratoires d’Anatomopathologie et d’Oncologie, permettant une extraction en 30 minutes
sans étape de déparaffinage au préalable. Cette solution permet de s’affranchir des contraintes liées à l’extraction manuelle, technique longue
et fastidieuse nécessitant souvent l’utilisation de solvants toxiques.
Les laboratoires augmentent ainsi en rapidité et en efficacité pour le rendu d’analyses.
200bp100bp
pur
1/5
1/10
Trois dilutions (pur, 1/5, 1/10) de l’ADN extrait à partir d’une
coupe d’adénocarcinome colique macrodisséquée qui est
amplifiée par PCR multiplexe ciblant les exons 11 et 13 du
gène KIT (respectivement 150 et 116bp) et l’exon 15 du
gène BRAF (173bp).
Nous utilisons l’extracteur Maxwell®pour
extraire l’ADN à partir de coupes de tissus
inclus en paraffine. L’augmentation du
nombre d’échantillons traités nécessitait
d’automatiser l’étape d’extraction pour
réduire les risques d’erreurs liés à la
manipulation des échantillons et pour
gagner du temps. La qualité des éluats
issus du Maxwell®a réduit le nombre
d’échec d’amplification surtout pour les
petites biopsies.
AS3050
Kit Maxwell® 16 FFPE Plus LEV
DNA Purification
9
Dr C. L.M.
Laboratoire de Génétique Moléculaire
Plateforme de Génétique Moléculaire
des Cancers (INCa) de Brest
HLA / Transplantation / Immunologie
Des extractions sécurisées pour des résultats reproductibles
Pourquoi le Maxwell ® est la solution des laboratoires HLA ?
U ne solution automatisée qui remplace les méthodes d’extraction d’ADN sur colonne, consommatrices de temps et sujettes aux erreurs de
manipulation.
L e nombre de transplantations d’organes et de moelle osseuse augmente. Les laboratoires HLA sont amenés à travailler plus vite.
L e Maxwell ® apporte un gain de temps considérable dans le typage HLA pour la recherche de donneurs compatibles. Il donne des résultats
reproductibles et des rendements élevés. Le risque d’erreur est également réduit du fait d'une simplification des manipulations rendant
l’automate facilement accessible.
50
Laboratoires HLA
EFS Rhône-Alpes
Sang
Buffy Coat (2,5 ml)
40
Rendement (µg)
Nous cherchions justement un
véritable
automate
d’extraction
des acides nucléiques. Une partie des manipulations nécessitait
l’intervention d’une technicienne,
et seuls six échantillons pouvaient
être traités à la fois. Désormais en
40 min. environ, ce sont jusqu’à 16
échantillons qui sont préparés. Le
Maxwell® 16 nous a donc permis
de libérer du temps technicien, il se
révèle particulièrement utile pour les
grandes séries.
30
20
6691MC
10
0
1
2
3
4
5
Echantillon
Publications
1. Effects of infectious mononucleosis and HLA-DRB1*15 in multiple sclerosis. TR. Nielsen, K. Rostgaard, J. Askling, R. Steffensen, A. Oturai, C. Jersild, N. Koch-Henriksen, PS. Sørensen,
and H. Hjalgrim. Multiple Sclerosis, Apr 2009; 15: 431 - 436.
2. IL-17 Is Necessary for Host Protection against Acute-Phase Trypanosoma cruzi Infection. Yoshiyuki Miyazaki, Shinjiro Hamano, Seng Wang, Yohei Shimanoe, Yoichiro Iwakura, and Hiroki
Yoshida. J. Immunol., Jul 2010; 185: 1150 - 1157.
10
Virologie
Pourquoi le Maxwell ® est la solution des laboratoires de virologie ?
L’automate Maxwell ® 16 permet de répondre à des besoins urgents, tout en garantissant la qualité optimale des acides nucléiques extraits.
Ce système d'une grande fiabilité donne des résultats reproductibles d’un run à l’autre. Sa lampe UV et son procédé unique de déplacements
de billes magnétiques, sans avoir recours à l'aspiration de liquide, assurent l’absence de contamination croisée et préserve la sécurité des
utilisateurs.
Le risque d’erreur est réduit du fait de la simplification des manipulations.
Virus
Acides Nucléiques
Type d'échantillons
Applications
Influenza (Flu)
ARN
Sécrétions Nasales (M4 media)
RT PCR classique (CDC 5 primer set)
Respiratory virus panel
ARN
Sécrétions Nasales / NP / BAI
Luminex RV
Hepatis C Virus (HCV)
ARN
Plasma
Genotypage HCV (Siemens)
Adenovirus
ADN
Sécrétions
QuantiTect Virus (Qiagen)
Human Immunodeficiency Virus (HIV)
ARN
Plasma
PCR classique
Cyto megalovirus (CMV)
ADN
Plasma
PCR en temps réel (Roche Hvb-probe), Artus (Qiagen)
Herpes Simplex Virus (SHV)
ADN
Sécrétions
PCR classique
HPV
ADN
Sécrétions
Third Wave Invader
Extraction personnalisée selon les virus.
Validation de l’extraction d’une large gamme de virus avec le Maxwell ® 16 Viral Total nucleic acid purification kit.
Cette solution a été adoptée par de nombreux biologistes qui souhaitent détecter des infections grippales, des infections du système nerveux
(ex. CMV, VIH), des infections respiratoires (adénovirus), des infections du tractus génital (ex. HPV), des infections systémiques (ex. HCV)…
Le Maxwell® 16 nous a permis d’extraire des acides nucléiques viraux à partir de sécrétions respiratoires. Nous avons pu
faire, en 36 min., des extractions sur 16 prélèvements différents à partir de volumes de 200 μl et ainsi mettre en évidence
la présence de virus à partir d’ADN génomique ou d’ARN. La limite dans la détection des virus ne dépend pas de la
méthode d’extraction utilisée mais de la sensibilité de l’amplification utilisée. Les rendements obtenus sont comparables
à ceux du QIACube, qui utilise des colonnes de silice. Mais en plus nous avons particulièrement apprécié le gain de temps
grâce au Maxwell® 16 et sa simplicité d’utilisation.
F. P., Pilar Pérez-Breña Inmaculada Casas - Centro Nacional de Microbiología. Instituto de Salud Carlos III - Madrid
Publications
1. Association of polymorphism in FcGR3A gene and progression of low-grade precursor lesions of cervical carcinoma - P. Conesa-Zamora, V. Santaclara, E. Gadea-Niñoles, S. Ortiz-Reina
and M. Perez-Guillermo.
2. Genotype distribution of human papillomavirus (HPV) and co-infections in cervical cytologic specimens from two outpatient gynecological clinics in a region of southeast Spain - Pablo
Conesa-Zamora, Sebastián Ortiz-Reina, Joaquín Moya-Biosca, Asunción Doménech-Peris, Francisco Javier Orantes-Casado, Miguel Pérez-Guillermo and Marcos Egea-Cortines.
11
Kit d'extraction automatisée avec le Maxwell® 16
Volume
d’élution
Type d'acide
nucléique
Type
d'échantillon
Prise d’essai
Kit Maxwell® 16
Elution dans
300 à 600 µL
Cartouches SEV
ADN
Sang
Buffy coat
400 µl de sang frais
500 µl de buffy coat
Maxwell® 16
Blood DNA
Purification Kit
AS1015 (CE-IVD)
AS1010
Tissus
20 à 50 mg
Maxwell® 16
Tissue DNA
Purification Kit
AS1030
Cellules
5 millions cell.
Maxwell ® 16
Cell DNA
Purification Kit
AS1020
DNA IQ™ Reference Sample
Kit for Maxwell® 16
AS1040
Traces
Elution dans
50 à 100 µL
Cartouches LEV
ADN
Sang total
Fluides biologiques
400 µl
Maxwell® 16
LEV Blood
DNA Kit
AS1290
Ecouvillons buccaux
1 ou 2
Maxwell® 16
Buccal Swab LEV DNA
Purification Kit
AS1295
Tissus paraffinés
10 x 5 µ
Maxwell ® 16
FFPE Plus LEV DNA
Purification Kit
AS1135
Cellules
<10000 cell.
Maxwell ® 16
Cell LEV DNA
Purification Kit
AS1140
DNA IQ ™
Casework Pro Kit
AS1240
Traces
ARN
ADN + ARN viral
Référence
catalogue
Sang total
(EDTA et Paxgene)
2,5 mL de sang frais
Maxwell® 16 LEV
simplyRNA Blood Kit
AS1310
Tissus
20 mg
Maxwell® 16 LEV
simplyRNA Tissue Kit
AS1280
Cellules
5 millions cell.
Maxwell ® 16
LEV simplyRNA Cells Kit
AS1270
Plasma
Sérum
Fluides biologiques
300 µl
Maxwell® 16
Viral Total Nucleic Acid
Purification kit
AS1155 (CE-IVD)
AS1150
Maintenance Préventive
Maintenance Préventive
Annuelle
Vérification de l’appareil et réalisation des tests standards
Contactez votre délégué commercial pour en savoir plus sur les autres contrats et services après-vente disponibles
12
SA1310
Extraction manuelle
Type d'acide
nucléique
Type
d'échantillon
Solution Promega
Rendements
(µg)
Méthode
d'extraction
ADN
Sang, tissu, cellules, bactéries,
levures, champignons
Wizard ® Genomic
DNA Purification
Variable selon
les échantillons
Solution saline
ARN
Conditionnement
Cat.#
100 extractions /
300 µl de sang
A1120
500 extractions /
300 µl de sang
A1125
100 extractions /
10 ml de sang
A1620
Tissu Cellules
Wizard® SV Genomic
DNA Purification System
30
Membrane
50 preps
250 preps
A2360
A2361
Tissu Cellules
Wizard ® SV 96 Genomic
DNA Purification System
30
Membrane
1 x 96 preps
4 x 96 preps
A2370
A2371
Tissu FFPE
MagneSil® Genomic, Fixed
Tissue System
400 ng
Billes magnétiques
100 preps
MD1490
Sang
Reliaprep™ Blood gDNA
Miniprep System
4-10 µg
Membrane
10 preps
100 preps
250 preps
A5080
A5081
A5082
Tissu
ReliaPrep™ gDNA Tissue
Miniprep System
4-10 µg
Membrane
100 preps
250 preps
A2051
A2052
Tissu paraffinés FFPE
ReliaPrep ™ FFPE gDNA
Miniprep System
4-10 µg
10 réactions
100 réactions
A2351
A2352
Sang, tissus animal
ou végétal, bactéries
SV Total RNA
Isolation System
Variable selon
les échantillons
Membrane
10 preps
50 preps
250 preps
Z3101
Z3100
Z3105
Cellules
ReliaPrep™ RNA Cell
Miniprep System
Variable selon
les échantillons
Membrane
10 preps
50 preps
250 preps
Z6010
Z6011
Z6012
Tissu paraffinés FFPE
ReliaPrep ™ FFPE Total RNA
Miniprep System
Variable selon
les échantillons
Membrane
10 réactions
100 réactions
Z1001
Z1002
Tissu
ReliaPrep ™ RNA Tissue
Miniprep System
Variable selon les
échantillons
Membrane
10 preps
50 preps
250 preps
Z6110
Z6111
Z6112
13
NOUVEAU
NOUVEAU
HSM 2.0 Instrument
(Kit associé : ReliaPrep™ Large Volume HT gDNA System)
Extraction automatisée d’ADN à partir de grands
Intégré dans la plateforme de pipetage Freedom EVO 100
pour une extraction ADN entièrement automatisée
A2715
- Research Use Only -
14
volumes de sang (2 à 10 ml)
Concentration (ng/ul)
250
150
100
50
0
INPUT
Tubes primaires de sang
Moyenne A260/A280 = 1,86
200
2 2,5
PROCESS
Extraction ADNg (de 2 à 10 ml)
• Jusqu’à 32 échantillons (2 à 10 ml)
• Sang total (frais ou congelé), buffy coat, salive
• Identification
des tubes primaires par lecture
de code-barre (système PosID)
•H
SM 2.0 (agitation, chauffage et aimantation)
couplé au robot pipeteur Tecan
• Technologie d’extraction en billes magnétiques (ReliaPrep™ LV HT purification system)
• P as de déplacement d’échantillons pendant
l’extraction
3
3,5
4
4,5
5
5,5
Volume de sang (ml)
6
6,5
OUTPUT
Obtention d’ADN pur
• Coûts en réactifs et consommables maitrisés
• P rêt pour des applications type PCR, long
PCR, séquençage, CGH Array, HRM…
• Prêt pour être archivé dans une biobanque
• Rendement # 300 µg pour 10 ml
• Traçabilité totale des échantillons (du tube
primaire à l’ADN extrait)
• 32 échantillons extraits en # 3,5h
Kits d'extraction automatisés
Type d'acide
nucléique
Type
d'échantillon
Solution Promega
Rendements
(µg)
Temps moyen
(minutes)
Conditionnement
Cat.#
ADN
Sang total,
buffy coat, salive
ReliaPrep™ Large Volume HT gDNA
Isolation System
# 300 μg pour
10 ml
32 échantillons
extraits en # 3,5h
96 × 10 ml preps
A2751
15
Quantification
fine et précise
d'ADN et d'ARN
Promega offre une solution complète (réactif
et lecteur) de dosage de l’ADN ou de l’ARN en
fluorescence. Les nouveaux systèmes Quantifluor
permettent ainsi de mesurer de façon simple et
rapide de petites quantités avec une linéarité et
une sensibilité optimale.
PLus
10 fois
Sensible
optimisé
pour les
que le Qubit 2.0
fluorometer
Aucun
accessoire
marqueurs
fluorescents
QuantiFluor
simple &
fourni avec le
intuitif
Quantus
Software
Calibration
unique
pour le
traitement
des données
Produit (Instrument & réactifs)
Conditionnement
Réf.
Instrument
E6150
QuantiFluor dsDNA System
1 ml
E2670
QuantiFluor ssDNA System
1 ml
E3190
QuantiFluor RNA System
1 ml
E3310
Quantus™ Fluorometer
™
™
™
En savoir plus
- Research Use Only -
17
Instrument Quantus Fluorometer
Quantification d’acides nucléiques
Haute sensibilité
Combinés au Quantus ™, les marqueurs fluorescents Quantifluor ™ permettent d’obtenir une sensibilité supérieure à l’absorbance pour les
échantillons :
• précieux ou difficiles
Limites de détection
• pauvres en acides nucléiques
• de mesurer précisément vos acides nucléiques
• d e garantir le succès de vos applications telles que
la qPCR ou le séquençage haut débit
QuantiFluor® ST Fluorometer
200 pg/ml
FOIS
10 PLUS
Sensible
Qubit® 2.0 Fluorometer
500 pg/ml
40
000
FOIS PLUS
• d e distinguer les molécules d’intérêt (ADN simple ou
double brin, ARN) au sein d’échantillons complexes
Compatible avec tous types de fluorophores
Sensible
10−2
10−1
100
101
102
dsDNA (ng/ml)
Spécifications
Taille
22,7 x 11,5 x 4,5 cm
Poids
400 grammes
Gamme dynamique linéaire
5 logs (dépend du type de mesure)
Détecteur
Capteur de silicium solide
Filtres d’excitation
Filtres d’émission
Rouge : 640 nm (shortpass)
Bleu : 495 nm (shortpass)
Rouge : 660-720 nm
Bleu : 510-580 nm
Type de calibration
Point unique (blanc et standard)
Format des tubes
Tubes PCR de 0,5 ml (Axygen - Référence PCR-05-C)
Arrêt automatique
Après une heure d’inactivité
Compatibilité électrique
5V - 0,2A maximum
Configuration nécessaire
(pour le Quantus® Software en option)
Garantie
Windows® XP, Windows® 7 (32 ou 64 bit)
.NET Framework 4.0 ou supérieur
1 port USB libre
1 an
- Research Use Only -
18
103
NanoDrop® 2000 Fluorometer
2 µg/ml
104
11574MC
Haute spécificité
La quantification par fluorescence permet :
Quantus™ Fluorometer
50 pg/ml
• très dilués
Réactifs
QuantiFluor™ dsDNA
System
Comparing QuantiFluor dsDNA against PicoGreen
1000000
100000
10000
•H
aute spécificité : se lie spécifiquement à
l'ADN double brin
RFU
1000
•S
ensibilité augmentée : beaucoup plus sensible
que la mesure de l’absorbance à 260 nm pour les
échantillons faiblement concentrés. Une détection
supérieure ou équivalente au PicoGreen avec une
limite à 50 pg/ml
PicoGreen
100
QuantiFluor DNA
10
9587MA
1
0.1
0.001
0.01
0.1
1
10
100
1000
10000
100000
Calf Thymus DNA [ng/mL]
QuantiFluor™ RNA
System
RNA Detection Range
UV abs (NanoDorp)
•S
ensibilité augmentée : une sensibilité qui augmente
significativement par rapport au Nanodrop sur de faibles
concentrations d'échantillons
QuantiFluor™ RNA
} High Concentration Range
Competitor P
•P
lus économique : moins de template d'ARN requis
comparé à la spectrophotométrie
QuantiFluor™ RNA
Competitor P
}
Low Concentration Range
10
-3
10
-2
10
-1
10
0
10
1
10
10556MA
Competitor Q
2
10
3
10
4
RNA Concentration (ng/µ)
• Facile à mettre en place : un système qui inclus
tous les réactifs nécessaires à la préparation et la
quantification d'ARN
•B
on ratio coût/efficacité : des prix compétitifs pour
tenir compte des contraintes budgétaires des utilisateurs
- Research Use Only -
19
Analyse
moléculaire
Promega a développé une expertise de pointe
dans le domaine de l’analyse moléculaire et plus
spécifiquement dans les techniques d’analyses
de fragments STRs par électrophorèse capillaire,
permettant d’identifier des mutations à l’origine de
certaines pathologies.
Leader du marché en identité génétique, Promega
développe de nouveaux kits d’analyse STR, ouvrant
de nouvelles perspectives pour les laboratoires
hospitaliers de génétique, de cytogénétique et
d’immunologie (transplantation de moelle).
Y Chromosome Analysis System
La prévalence des troubles de la fertilité masculine est estimée à 10% de la population générale. Ces troubles
sont définis par un déficit quantitatif et/ou fonctionnel des spermatozoïdes et peuvent être liés à des anomalies
chromosomiques comme des micro délétions du chromosome Y.
L'identification de ces troubles majeurs de la fertilité liés à ces microdélétions est possible grâce au kit de détection
Promega Y Chromosome Analysis System suivant les recommandations de la EAA / European Molecular Genetic
Quality Network.
Bénéfices
• F acile à utiliser : un Master Mix multiplex avec 20 paires
de primers, dont un contrôle interne garantissant un panel
standardisé de résultats
• A nalyse "State-of-the-Art" : le kit est marqué CE IVD et
les paires de primers sont en accord avec les recommandations
EMQN et incluent l'amplification SRY
• R obuste : utilisation de la GoTaq ® DNA Polymérase qui
minimise les pics
B
A
M
1
2 M
3
C
4
M
5
• F lexible : amplifie l'ADN génomique purifié en utilisant
des méthodes variées et avec un thermocycleur PE480 (oil
overlay) ou PE9600/9700 (non-oil overlay)
Applications
• Infertilité masculine
• Procréation médicalement assistée (FIV, ICSI)
•D
étection de régions spécifiques du chromosome Y humain
D
6
M
7
E
8
M
9
10
M
500 –
400 –
300 –
– 500
– 400
– 300
200 –
– 200
100 –
– 100
– 50
50 –
4322TA09_3A
bp
Analyse en multiplex d'ADN génomique mâle. Puits : 1, produits de réactions d'amplification utilisant le Master Mix Multiplex
A avec l'ADN mâle ; 2, réaction contrôle sans ADN ; 3, produits de réactions d'amplification utilisant le Master Mix Multiplex
B avec l'ADN mâle ; 4, réaction contrôle sans ADN ; 5, produits de réactions d'amplification utilisant le Master Mix Multiplex
C avec l'ADN mâle ; 6, réaction contrôle sans ADN ; 7, produits de réactions d'amplification utilisant le Master Mix Multiplex
D avec l'ADN mâle ; 8, réaction contrôle sans ADN ; 9, produits de réactions d'amplification utilisant le Master Mix Multiplex
E avec l'ADN mâle ; Puit M : 50bp DNA.
Step Ladder (Cat.# G4521). Les réactions ont été réalisées sur thermocycleur et séparées sur gel 4% NuSieve ® 3:1 Plus
TBE Buffer Reliant ® gel.
Produit
Nous avons choisi le kit
Promega pour sa facilité
d'utilisation, le fait qu’il soit prêt
à l'emploi permettant une validation simple de notre méthode
avec un Kit CE IVD puisque
nous sommes actuellement en
démarche d'accréditation selon
la norme EN NF ISO 15189, et
enfin la réponse qu’il apporte
à une demande expresse de
nos correspondants qui souhaitent faire bénéficier à leurs
clients du test le plus complet
du marché avec une cartographie détaillée de la région AZF
Laboratoire Alpigene - Lyon
Conditionnement
Réf.
Y Chromosome Deletion Detection System, Version 2.0
25 réactions
MD1531
Y Chromosome AZF Analysis System (CE IVD)
25 réactions
MD1631
- Research Use Only -
- Research Use Only -
21
Microsatellite Instability (MSI) Analysis System
Permet de mesurer l’instabilité des microsatellites (MSI) qui se caractérise par la variation anormale du nombre de
séquences répétées dans l'ADN tumoral comparé à l'ADN du même patient provenant de tissus sains.
Bénéfices
•O
btention du phénotype complet MSI : une simple multiplex PCR amplifie 5 marqueurs mono nucléotidiques pour le
génotypage du statut MSI-H
• T raçabilité de l’échantillon : la co-amplification de séquences répétées pentanucléotidiques hautement polymorphiques
permet un suivi des échantillons
• S uit les recommandations : 2003 NCI Workshop, Bethesda
Applications
•D
ans le cadre de la recherche de prédispositions héréditaires au cancer colorectal (HNPCC, Syndrome de Lynch),
les instances internationales recommandent la recherche d'instabilité de microsatellites (MSI) dans l'ADN tumoral du
patient. Ce précriblage somatique permet d'orienter le clinicien vers l'étude constitutionnelle des gènes MMR, facilitant le
diagnostic précoce et la prise en charge du patient
Purification
ADN
Dosage
ADN
Amplification
ADN
Electrophorese
Capillaire
Analyse des
profils
Maxwell ® 16 FFPE Plus
ReliaPrep ™ FFPE gDNA
Quantifluor dsDNA Dye
MSI Analysis system v1.2
Spectrale dédiée
(ABI 3100/3130/3500)
Panel et bins
téléchargeables pour
GeneMapper 4.0
- Research Use Only -
22
NR-21
BAT-26
BAT-25
NR-24
MONO-27
Penta D
4639TA
Penta C
Instabilité des Microsatellites
mise en avant grâce au kit
MSI Analysis System. Lecture
sur électrophorégramme.
Une comparaison entre des
échantillons témoins (en haut)
et des échantillons avec une
tumeur du colon MSI positive
(en bas) en utilisant le kit MSI
Analysis System. Deux nanogrames d'ADN génomique
ont été amplifiés et analysés
avec l'analyseur ABI PRISM®
3100, et les modèles alléliques des différents échantillons représentés graphiquement. La présence de
nouveaux allèles au niveau
des échantillons tumoraux
(cf. les flèches) absents dans
l'échantillon témoin indique
une instabilité des microsatellites.
Ce kit est dérivé de marqueurs déterminés par notre groupe, l’UMRS INSERM 938, et amplifiant dans une réaction
de PCR pentaplex (Suraweera et al., Gastroenterology, 123(2002)1804). Il permet de déterminer le statut MSI des
tumeurs héréditaires et sporadiques quels que soient leur défaut moléculaire et leur localisation tumorale. Dans la
majorité des cas, il n’est pas indispensable d’analyser de manière comparative les ADN normaux des patients (Buhard
et al., J. Clin. Oncol., 24(2006)241). Cette comparaison est cependant conseillée pour les tumeurs présentant un défaut
du gène MSH6 et/ou provenant de l’endomètre (Wong et al., Carcinogenesis, 27(2006)951).
R. H., DR1 INSERM - Equipe Microsatellites et Cancers
Mononucleolides
Pentanucleolides
BAT-25
Penta C
BAT-26
Penta D
Produit
MSI Analysis System, Version 1.2
MONO-27
NR-21
NR-24
- Research Use Only -
23
Conditionnement
Réf.
100 réactions (50 paires réactions)
MD1641
Kits d’analyse STRs
Un outil puissant pour l’identification de cellules humaines et la caractérisation de mélanges d’ADN.
Promega STR kit
Avantages
Pouvoir discriminant
PowerPlex 16 HS System
Multiplex, validé sur de nombreux cycleurs et analyseurs
3.10 -19
PowerPlex® Fusion System
Analyse multiplex sur 24 locis discriminants, 5 dye fluorencents
Amplification directe sur papiers FTA, non FTA et écouvillons
Très sensible. Obtention d'un profil ADN à partir de 100 pg de template d'ADN
6.58 * 10 -29
PowerPlex® 18D System
Multiplex, optimisé pour l’amplification directe sur carte FTA
4.10 -22
PowerPlex® 21 System
Multiplex, excellent pouvoir discriminant, résistance accrue aux inhibiteurs
et compatible avec l’amplification directe (FTA)
7.10-27
PowerPlex® CS7 System
Multiplex sur 7 loci discriminants, économique
NC
PowerPlex® Y23 System
Nombre de loci supérieur aux autres kits sur le marché - Le plus sensible
Amplification rapide (90min) - Compatible avec amplification directe
-
Analyse locus par locus
-
- Research Use Only -
®
MonoPlex System
PowerPlex® 16 HS Systems
Bénéfices
• S ensible : obtention de résultats reproductibles à partir de 0,1ng d'ADN
• D iscriminant : système avec 16 loci (D18S51, D21S11, TH01, D3S1358, Penta E, FGA, TPOX, D8S1179, vWA, Amelogenine,
CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317, D5S818 et Penta D). Indice de paternité de 1,520,000
• F lexible : convient à l'utilisation d'une large variété d'analyseurs génétiques d’Applied Biosystems
• C omplet : le kit contient un standard de poids moléculaire et une échelle allélique
Applications
•
•
•
•
•
•
•
A nalyse ADN médecine légale
Test de paternité
Test d’identité humaine
Identification sur des cultures de cellules souches
C ontamination cellulaire maternelle
E tude de zygotie des jumeaux
D étermination du sexe fœtal à un stade précoce
D3
THO1
D5
A
60
100
D21
D13
D7
vWA
D8
D18
D16
TMR
CSF1PO
TPOX
200
Penta E
Penta D
FGA
300
Fluorescein
- Research Use Only -
24
400
JOE
500
Exemple d’utilisation des STRs en pratique clinique
Analyse STRs et cytogénétique
Fœtus
Père
Mère
Nous utilisons le kit PowerPlex 16 en routine pour la recherche de contamination du matériel fœtal (villosités trophoblastiques et liquide amniotique) non cultivé par des cellules maternelles lors du prélèvement. Le profil obtenu à partir
du prélèvement est systématiquement comparé à celui de la mère et, si possible à celui du père. Nous avons déterminé
expérimentalement un seuil de sensibilité de 0,5 % de contamination en mélangeant les ADN d’une fille et de sa mère à des
concentrations différentes (de 10 à 0,01 %). Le marqueur présenté sur l’exemple montre une contamination du tissu fœtal
par des cellules maternelles (trois allèles chez le fœtus dont les deux de la mère). Ce prélèvement n’a pu être analysé et
l’éventualité de refaire un prélèvement a été discutée avec la famille et le gynécologue préleveur.
Dr F. P., pôle biologie-pathologie-pharmacie-santé publique, GH Paris Sud
Produit
Conditionnement
Réf.
PowerPlex® 16 HS System
100 réactions
400 réactions
DC2101
DC2100
PowerPlex ® Fusion System
200 réactions
800 réactions
DC2402
DC2408
PowerPlex ® 18D System
200 réactions
DC1802
PowerPlex 21 System
200 réactions
DC8902
PowerPlex CS7 System
100 réactions
DC6613
PowerPlex Y23 System
50 réactions
DC2305
PowerPlex Y23 System
200 réactions
DC2320
- Research Use Only -
®
®
®
®
- Research Use Only -
25
Epigénétique
L’épigénétique est la science relative aux changements
de phénotype biologique sans changement fondamental du génome de l’organisme. Orchestrés par des
enzymes qui modulent la structure de la chromatine,
les changements épigénétiques influent sur les
modifications post-traductionnelles et donc sur les
profils d’expression génique et leur répression. La
compréhension des processus globaux de la régulation
des gènes permet d’améliorer la compréhension
de la biologie du développement et cellulaire. Cette
approche fournit des pistes d’identification de
nouveaux agents thérapeutiques contre diverses
maladies humaines telles que les cancers.
La Méthylation de l’ADN est l’un des processus à l’origine
des changements épigénétiques. Heritage parental ou
réponse à un facteur environnemental, ce mécanisme
influence directement le niveau d’expression des gènes
et peut être la cause de pathologies.
Promega propose des solutions pour l’étude de ces
processus et leurs analyses.
MethylEdge™ Bisulfite Conversion System
Le Methyledge Bisulfite Conversion System est une méthode rapide et efficace pour réaliser la conversion au bisulfite et évaluer
le niveau de méthylation de l'ADN. Ce kit permet une conversion de l’ADN en 2h tout en conservant son intégrité. L’ ADN converti est
ainsi directement utilisable pour différentes applications nécessitant une haute sensibilité.
Le système permet de travailler à partir de petites quantités d’ADN genomique (100 pg - 2 µg) et le système garantit une conversion
supérieure à 90% avec une fragmentation minime. Le kit permet de réaliser 50 réactions de conversion au bisulfite et inclut les
contrôles ADN pour la validation pré et post conversion.
Bénéfices
• Haute efficacité de conversion de l’ADN
• Conversion rapide en moins de 2h
D1
D1
P1
P1
Z1
Z1
N1
N1
D2
D2
P2
P2
Z2
Z2
N2
N2
Protocole rapide
B
B
Input Genomic
DNA (100pg - 2µg)
8 Min
60 Min
Incubate
Incubate
Bisulfite Conversion
Reduced DNA Fragmentation
Degree of DNA fragmentation after conversion. DNA was purified
from whole blood using the ReliaPrep™ Blood gDNA Miniprep
System (1) or Maxwell® 16 LEV Blood Kit (2) and was converted
using the Promega MethylEdge™ Bisulfite Conversion System (P) or
a competing bisulfite conversion kit (Z or N). B = BenchTop 1kb DNA
Ladder, D = nonconverted, purified DNA.
Elute
In-column Desulfonation
Schematic diagram of the MethylEdge™ Bisulfite Conversion System protocol. Convert DNA samples
efficiently in less than 2 hours with minimal preprocessing steps.
11325TA
11325TA
Denature DNA
~24 Min
11407MA
B
B
• Fragmentation minime : obtention d’ADN intact
• C onservation pratique à température ambiante réduisant les
manipulations de préparation
Produit
Conditionnement
MethylEdge Bisulfite Conversion System
Réf.
50 réactions
N1301
Methylated Human Control DNA
5 μg
N1231
Converted Methylated Human Control DNA
1 μg
N1221
™
Methylation Specific Restriction Enzymes
Conditionnement
Réf.
1000 u
5000 u
R6311
R6315
MboI
200 u
R6711
MspI
2000 u
10 000 u
10 000 u
R6401
R6405
R4404
100 u
500 u
R6191
R6195
HpaII
MspI (HC)
Sau3AI
En savoir plus
sur la méthylation
En savoir plus
sur l'épigénétique
- Research Use Only -
27
Amplification :
précision,
rendement,
sensibilité
Promega a développé des solutions innovantes et
ciblées pour répondre aux besoins précis requis par
les méthodes de PCR actuelles. Tous les réactifs
Promega pour la PCR ont été testés minutieusement
pour y assurer l’obtention de résultats optimaux. Ces
réactifs sont largement utilisés en laboratoire dans le
domaine de la recherche et ont démontré toute leur
efficacité. Ces produits sont notamment utilisés dans
les tests d’identité génétique et de contrôle qualité
en industrie.
PCR avec les Taq Promega
Des résultats compétitifs et reproductibles dans le temps, sans aucune variation
d'un lot à l'autre
GoTaq® G2 Hot Start
Polymerase et ses
Master Mixes
Formulés avec la nouvelle Taq deuxième génération,
pour une utilisation facile à température ambiante.
Les nouveaux “Master Mixes” sont sensibles, et
résistants aux inhibiteurs de PCR.
• S implification des réactions de mise au point et
gain de temps avec un master mix prêt à l’emploi
• Préparation des réactions à température ambiante
• Absence d'amplifications non spécifiques grâce à la
technologie de l’enzyme Hot Start
GoTaq® G2 Hot Polymerase produces excellent specificity and higher
yield with difficult targets. The 1.5kb fragment of the Corynephage omega
gene, a hot-start model of specificity, was amplified from 500ng of plasmid
DNA using GoTaq® G2 Hot Start Polymerase with Green (G) and Colorless (C)
Buffers and the competitors (R, Q, L1, L2, L3).
• P erformance PCR Satisfaction Garantie pour une
utilisation sans risque
Les premiers essais avec la GoTaq G2 Hot Start Green Master Mix
sont très satisfaisants. Nous n'observons à ce jour aucune différence
notable avec la première génération. De plus, le colorant simplifie
grandement les manipulations et n'interfère pas avec les séquences.
Mme A.P Ingénieur
Plateau de Biologie Moléculaire - CHU de Nîmes
Gels d’agarose de fragments d’ADN de différents gènes amplifiés
avec le MasterMix GoTaq® G2 Hot Start
Analyse de séquence ADN amplifiée avec le MasterMix GoTaq® G2 Hot Start
- Research Use Only -
29
GoTaq® Long PCR Master Mix
Obtenir une bonne élongation et une amplification fidèle de longs
fragments d’ADN est une condition importante pour réussir clonages,
mutagenèses dirigées ou séquençage ADN. La Gotaq ® Long PCR
Master Mix répond à cette exigence.
• P erformante sur de longs amplicons
U ne amplification optimisée sur de longs amplicons d’ADNg jusqu’à
30kb (40kb sur de l’ADN lambda)
• S pécificité et sensibilité supérieures
L e mix contient la Gotaq ® Hot Start Polymérase et une polymerase
thermostable à activité « proofreading » dont l’efficace activité
correctrice permet une haute processivité
• Simple à utiliser
P réparation à température ambiante
• Confiance assurée
C omprend des dimères de primers et un template d’ADNg
Diagnostic de l’Incontinentia Pigmenti, maladie dominante lié à l’X,
en recherchant la délétion récurrente de l’exon 4 à l’exon 10 du gène
NEMO (IKBKG)
Bande 14 KB
(tout NEMO)
Le kit GoTaq® Long PCR
Master Mix de Promega est très
facile d’utilisation du fait de
la présentation en mix prêt à
l’emploi.
En suivant exactement le protocole de PCR proposé, nous
avons réussi à amplifier sans
problème un fragment d’intérêt
de 14 Kb jusqu’alors jamais
amplifié. Nous avons aussi
obtenu des résultats de très
bonne qualité en travaillant sur
de l’ADN mitochondrial.
Dr B. T.
Plateau Technique de Biologie
Moléculaire - CHU Bordeaux
Hôpital Pellegrin
Bande parasite
variable non spé
2.5 KB
Délétion 4-10
1.8 KB
LR non spé :
1 : délété
2 : échec
3 : délété
4: normal
LR spé NEMO :
1 : délété gène NEMO
2 : normal
3 : délété
4 : normal
Bande parasite
2.4 KB
Dél 4-10 2.6 KB
- Research Use Only -
30
Les GoTaq® G2 DNA Polymérases disponibles à l'unité
Application
Produit
PCR
GoTaq ® G2 Hot Start
Polymerase
Caractéristiques
Cdt.
Réf.
• Tampon de charge coloré pour un dépôt direct sur gel
• Concentration en MgCl2 ajustable
100 u
500 u
2 500 u (5 x 500 u)
10 000 u
M7401
M7405
M7406
M7408
GoTaq ® G2 DNA
Polymerase
• Tampon de charge coloré pour un dépôt direct sur gel
• Concentration en MgCl2 1,5mM
100 u
500 u
2 500 u (5 x 500 u)
M7841
M7845
M7848
GoTaq® G2 Flexi DNA
Polymerase
• Tampon de charge coloré pour un dépôt direct sur gel
• Concentration en MgCl2 ajustable
100 u
500 u
2 500 u (5 x 500 u)
10 000 u (20 x 500 u)
M7801
M7805
M7806
M7808
Cdt.
Réf.
• M élange prêt à l'emploi, incluant un tampon vert pour le dépôt sur gel
100 réactions
1000 réactions
MXXXX
MXXXX
GoTaq ® G2
Colorless Master Mix
(bientôt disponible)
• M élange prêt à l'emploi, tampon incolore
100 réactions
1000 réactions
MXXXX
MXXXX
GoTaq ® G2 Hot Start
Green Master Mix
• Mélange prêt à l'emploi avec la GoTaq ® Hot Start Polymérase
• Tampon coloré pour dépôt direct sur gel
100 réactions
1 000 réactions
M7422
M7423
GoTaq ® G2 Hot Start
Colorless Master Mix
• Mélange prêt à l'emploi avec la GoTaq ® Hot Start Polymérase
• Tampon incolore
100 réactions
1 000 réactions
M7432
M7433
100 réactions
M4021
200 μl
1000 μl
U1511
U1515
4 x 40 µM
10 µM
4 x 200 µM
4 x 25 µM
U1240
U1330
U1410
U1420
Les GoTaq® G2 DNA Polymérases disponibles en coffrets
Gagnez du temps et diminuez le risque d’erreur en limitant le nombre de manipulations !
Application
Produit
Coffrets PCR
Master Mix
GoTaq® G2
Green Master Mix
(bientôt disponible)
Coffrets PCR
GoTaq ® Long PCR Master Mix
dNTPs
dNTP Mix
Set of dATP, dCTP, dGTP, dTTP
Set of 4 dNTP's, 100mM
Caractéristiques
• Mélange prêt à l'emploi pour l'amplification de fragments PCR >10kb
• Contient la Hot Start polymérase plus une polymérase thermostable à
l'activité correctrice
• Haut degré de pureté (>98%), solution prémélangée contenant
des dATP, dCTP, dGTP, et dTTP à 10mM
• Haut degré de pureté (>98%).
Nos dNTPs sont également disponibles séparément, et sous forme de mix
PCR Nucleotide Mix
Une solution contenant chaque dNTP (dATP, dTTP, dGTP, dCTP) à 10 mM.
Il est recommandé d’utiliser 200 µM de chaque dNTP pour une réaction PCR de 50 μl.
Produit
Conditionnement
Réf.
PCR Nucleotide Mix, 200 μl
200 rx
C1141
PCR Nucleotide Mix, 1000 μl
1000 rx
C1145
- Research Use Only -
31
Reverse Transcriptase
Sensible, efficace et compétitive !
GoScript
•
•
•
•
512 E
™
U
ltra-active : des économies sur chaque réaction
S ensible : détection des transcrits d'ARN rares
P
rocessive : transcription de longs ARN messagers
R
ésistante : synthétisez des ADNc en présence
d'inhibiteurs forts
290 E
267 E
Enzyme X ou Y
(50 réactions)
255 E
GoScript RT
(100 réactions)
Système complet X
(50 réactions)
GoScript System
(50 réactions)
Comparaison tarifaire
No RT
Application
Produit
RT, RT PCR,
RT qPCR
GoScript™ Reverse
Transcriptase
GoScript ™ Reverse
Transcription System
O
R
O
R
Enzyme X
O
R
Enzyme Y
O
R
Enzyme Z
O
GoScript ™
R
O
R
8672TA
Les ARN Totaux humains ont été transcrits en utilisant des oligo(dT) (O)
ou random primers® selon les recommandations du fabriquant. Le cDNA a
été ensuite analysé par PCR en utilisant la Gotaq (Cat.# M7122) avec des
amorces pour un amplicon de 940bp à l'extrémité 5’ du transcript APC de
8.9kb. Les Gels représentent les résultats de 3 expériences distinctes.
No RT : réaction de contrôle sans reverse-transcriptase.
Enzyme W
Caractéristiques
Cdt.
Réf.
• GoScript Reverse Transcriptase
• Tampon réactionnel 5X, 25 mM MgCl2
100 réactions
500 réactions
A5003
A5004
• Oligo(dT)15primer, Random Primers, dNTPs Mix, RNAsin®
• MgCl2, GoScript Reverse Transcriptase
50 réactions
100 réactions
A5000
A5001
Autres Reverse Transcriptases
Application
Produit
Caractéristiques
Cdt.
Réf.
One-step RT-PCR
(Haute Sensibilité)
Access
RT-PCR System
•R
éaction de RT PCR en une seule étape
• Utilisé pour des ARNs rares ou des templates avec des structures
secondaires importantes
• Contrôle maximum : chaque composant est en tube séparé
20 réactions
100 réactions
A1260
A1250
500 réactions
A1280
• Réaction de RT PCR en une seule étape
• Utilisé pour des ARNs rares ou des templates avec des structures
secondaires importantes
• Prêt à l'emploi
20 réactions
100 réactions
A1701
A1702
500 réactions
A1703
• Polymérase RNA-dependante utilisée pour des templates d'ARN
messager de grande taille (>5 kb)
10 000u
50 000u
M1701
M1705
AccessQuick™
RT-PCR System
Reverse Transcription (synthèse
d'un simple brin d'ADNc)
M-MLV
Reverse Transcriptase
Set de dUTP, dATP, dCTP et dGTP
Produit
Concentration
Conditionnement
Réf.
Set de dUTP, dATP, dCTP et dGTP
10 µmol chacune
1000 rx
U1335
Set de dUTP, dATP, dCTP et dGTP
40 µmol chacune
4000 rx
U1245
Sélectionnez la Reverse Transcriptase
pour votre application
- Research Use Only -
32
PCR en temps réel avec le Mix qPCR
Des résultats fiables et reproductibles à des prix compétitifs !
GoTaq® qPCR Master Mix avec BRYT Green® Dye
•P
lus grande intensité du signal
Identification précoce des Ct, détection de faibles quantités d’ADN de départ
• P lus haute sensibilité
D étection précise des cibles contenues dans un même échantillon
• S pécificité et stabilité garantie
P erformance de la GoTaq ® Hot Start Polymérase qui empêche la formation de
dimères d’amorces, fiabilité du kit
•C
onfiance assurée
D es résultats et une facilité d’utilisation identiques au SYBR ® Green I,
compatibilité avec l’ensemble des thermocycleurs utilisés pour le SYBR ®
Green I, une performance Promega PCR Garantie
A.
B.
C.
Courbes de fusion (A et B) et d’amplification (C) obtenues avec le kit GoTaq® qPCR Master Mix, l’automate LightCycler 2.0 et un programme d’amplification-fusion en temps réel
du gène rrs (ADNr 16S).
Cette qPCR a été réalisée pour la détection d’ADN bactérien dans des prélèvements cliniques (prélèvements
osseux dans cet exemple). Les courbes A et B montrent l’excellente répétabilité des points de fusion déterminés
pour la bactérie mise en évidence dans tous les prélèvements testés (Staphylococcus epidermidis). La courbe C
montre l’excellente sensibilité (ADN bactérien non mis en évidence par PCR en point final) et spécificité (témoin
négatif : pas de signal) de détection de l’ADN cible bactérien.
Unité de Bactériologie - Pôle de Biologie-Pathologie - CHRU - Hôpital Cavale Blanche - Brest
Application
Produit
Caractéristiques
Cdt.
Réf.
qPCR
GoTaq ® qPCR Master Mix
• 2X GoTaq® Master Mix avec GoTaq® Hot Start, CRX inclus
200 réactions (1 x 5 ml)
1 000 réactions (25 x 1 ml)
A6001
A6002
RT qPCR
GoTaq ® 2-Step
RT-qPCR System
•C
ombine la GoScript ultra-actif pour synthétiser l’ADNc,
avec la fluorescence ultra-brillante de GoTaq® qPCR Master
Mix afin de fournir une quantification optimisée et sensible
d’ARN complets
RT-qPCR & qPCR plus sensibles et résultats optimisés
50 réactions RT
+ 200 réactions qPCR
A6010
GoTaq ® 1-Step
RT-qPCR System
• E laboré pour l’analyse quantitative de l’ARN en utilisant un
protocole en une étape dans un seul tube
Combine le BRYT Green ® Dye et le tampon RT optimisé pour
améliorer l’exactitude et la sensibilité des données
200 réactions
A6020
- Research Use Only -
33
PCR en temps réel avec la qPCR Probe
Des nouveaux masters mixes sensibles et résistants aux inhibiteurs de PCR
GoTaq® Probe qPCR Master Mix
Ces masters mix 2X, prêts à l’emploi permettent de simplifier la préparation des réactions qPCR basées sur la technologie de
sonde fluorescente. Trois kits sont actuellement disponibles : qPCR, 1-Step RT-qPCR et 2-Step RT-qPCR. Ces mix ont été conçus
et optimisés pour la détection et la quantification de séquences spécifiques, l’analyse de l’expression de gènes et la détection de
variations de séquence. L’activation rapide de la hot-start et la processivité des enzymes permettent une utilisation des Gotaq Probe
Systems avec un large panel de thermocycleurs standards et “Fast Cycling”.
• Excellente sensibilité
• Résistant aux inhibiteurs
• H aute stabilité : utilise une chimie hot Start bloquée par
anticorps. Réactions de préparation possibles à température
ambiante
• A daptabilité : compatible avec des programmes de qPCR
standards et "fastcycling”. Adapté à tous les thermocycleurs
• S imple d'utilisation : ajoutez seulement vos échantillons,
sondes et amorces. Le mix ne contient pas directement de
fluorophore de référence. Un tube séparé de carboxy-Xrhodamine (CXR) est inclus dans le kit permettant de l’ajouter
aux réactions d’amplification en fonction de l’instrument
Les résultats obtenus avec le kit GoTaq Probes
qPCR Master Mix sont satisfaisants et comparables
à notre kit habituel. Les efficacités obtenues pour
les 2 systèmes de qPCR testés sont très proches et
les courbes d’amplification ont une allure normale.
Nous avons fait quelques tests en double, ce qui
explique le peu de positifs en dehors des contrôles
pour les programmes d’amplification, j’ai juste allongé les temps de dénaturation.
Y.B - Ingenieur hospitalier
Laboratoire de Bacteriologie - Bron
Mix Takara
Mix Promega
Application
Produit
qPCR
GoTaq ® Probe qPCR System
RT qPCR
GoTaq® Probe 2-step
RT-qPCR System
GoTaq® Probe 1-step
RT-qPCR System
Caractéristiques
Cdt.
Réf.
200 réactions
1000 réactions
A6101
A6102
• S ystème composé du GoScript Reverse Transcription System
& GoTaq® Probe qPCR master mix. Très robuste, synthétise
de longs cDNA en présence d'inhibiteurs. Grande stabilité à
température ambiante pour travailler en haut débit
200 réactions
A6110
• S ystème 50X combinant de GoScript Reverse Transcriptase
200 réactions
A6120
• A ctivation rapide de la hot-start, préparation facile à
température ambiante, compatible avec un large panel
de thermocylceurs standards et "Fast Cycling"
et RNasin Plus Rnase Inhibitor. Incorpore la GoTaq® Probe
qPCR Master Mix formulée avec du dUTP, pour permettre
aux utilisateurs d'incorporer l'UNG pour un contrôle des
possibles contaminations. Stable à température ambiante
- Research Use Only -
34
Marqueurs ADN de poids moléculaire
bp
5 μl/lane
(250 μl - 50 lanes)
G7511
BenchTop pGEM® DNA Markers
5 μl/lane
(250 μl - 50 lanes)
G7521
BenchTop 1 kb DNA Ladder
BenchTop 100 bp DNA Ladder
G7531
6 μl/lane
(600 μl - 100 lanes)
G7541
6 μl/lane
(300 μl - 50 lanes)
G8291
– 1,353
– 1,078
– 872
– 1,605
– 603
–
–
–
–
–
676
517
460
396
350
–
–
–
–
222
179
126
75/65
[51,36]
–
–
–
–
–
–
–
–
–
– 2,645
– 1,198
310
281/271
234
194
– 118
– 72
3177TA12_0A
BenchTop PCR Markers
6 μl/lane
(300 μl - 50 lanes)
bp
2% agarose
2% agarose
BenchTop ΦX174
DNA/Hae III Markers
Cat.# g 7511
BenchtTop
pGEM® DNA Markers
Cat.# g 7521
– 1,500
10,000
8,000
6,000
5,000
4,000
–
–
–
–
–
–
– 3,000
– 2,500
– 2,000
bp
1,000
900
800
700
600
500
– 400
– 1,000
– 750
– 1,500
– 300
– 500
– 1,000
– 200
– 300
– 750
– 150
– 500
– 50
2% agarose
BenchTop
PCR Markers
Cat.# g 7531
– 100
– 250
253
0973TC03_5A
BenchTop ΦX174 DNA / HaeIII
Markers
bp
bp
1409TA03_6A
Réf.
0094TA05_3A
Conditionnement
3176TA12_0A
Produit
0.7% agarose
BenchTop
1kb DNA Ladder
Cat.# g 7541
2% agarose
BenchTop
100bp DNA Ladder
Cat.# g 8291
Biochimie de laboratoire
Diamond Nucleic Acid Dye
Sensible et stable à température ambiante, ce fluorophore se lie à l’ADN simple et double brin ainsi qu’à l’ARN. Il peut ainsi être
utilisé pour visualiser facilement par coloration les acides nucléiques sur gel, sans prélavage, ni décoloration préalable.
Ce fluorophore est compatible avec les gels d’agarose natif et dénaturé ou polyacrylamide. De même il peut être lu par n’importe
quel système de lecture de gels par imagerie.
• S ensible : Détection de petites quantités d’acides nucléiques
• Peu toxique : Alternative au Bromure d’Ethidium
• S table 90 jours à température ambiante : Conservation
facile et utilisation rapide
• F lexible : Compatible avec une grande variété de gels et
d’équipements d’imagerie (UV transillumination avec caméra
Polaroid ou digitale, GE ImageQuant ou Bio-Rad Gel Doc
systems)
Produit
Diamond Nucleic Acid Dye
Conditionnement
Réf.
500 μl
H1181
Nuclease-Free Water
Chaque lot est testé par notre process qualité et certifié sans activité Dnase et Rnase.
Produit
Nuclease-Free Water
Conditionnement
Réf.
50 ml (2x25 ml)
150 ml
P1193
P1195
Consultez les solutions disponibles
pour la biochimie et le laboratoire
- Research Use Only -
35
Identification:
Spectrométrie
de masse
L'analyse protéomique, appliquée aux pathologies
humaines, a vu ces dernières années l'émergence de
nouvelles techniques. Ces progrès significatifs ont
montré l'importance de l'approche protéomique globale dans l'identification de marqueurs biologiques.
Ces méthodes, en particulier en spectrométrie de
masse, se sont montrées convaincantes pour suivre
rapidement et précisément l'évolution de certaines
pathologies, en particulier en cancérologie.
La préparation des échantillons est une étape cruciale dans l’analyse protéomique des prélèvements
biologiques.
Promega offre des solutions qui permettent
d’optimiser cette étape pré-analytique et qui
conditionnent l’obtention de résultats fiables par
spectrométrie de masse.
36
Trypsines pour l'identification des protéines
Produit
Trypsin Gold, Mass Spectrometry Grade
Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade
Immobilized Trypsin
Sequencing Grade Modified Trypsin
Conditionnement
Réf.
100 μg
V5280
20 μg
100 μg
100 μg (5 × 20 µg)
V5071
V5072
V5073
2 ml
4 ml (2 × 2 ml)
V9012
V9013
100 μg (5 × 20 µg)
100 μg (1 × 100 µg)
V5111
V5117
ProteaseMAX™ Surfactant, Trypsin Enhancer
Améliore la performance enzymatique des digestions par les protéases en facilitant l'accès de celles-ci aux sites
de coupure.
Produit
ProteaseMax Surfactant, Trypsin Enhancer
™
(a)
Conditionnement
Réf.
1 mg
5 x 1 mg
V2071
V2072
Un panel de protéases pour un séquençage de qualité
Des protéases spécifiques et non spécifiques permettent de générer de multiples peptides pour les analyses en
spectrométrie de masse.
Produit
Conditionnement
Réf.
Thermolysin
25 mg
V4001
Elastase
5 mg
V1891
Pepsin
Chymotrypsin, Sequencing Grade
250 mg
V1959
25 μg
4 x 25 μg
V1061
V1062
rLys-C, Mass Spec Grade
15 μg
V1671
Glu-C, Sequencing Grade
50 μg ((5 × 10 µg)
V1651
Asp-N, Sequencing Grade
2 μg
V1621
Endoproteinase Lys-C, Sequencing Grade
5 μg
V1071
Arg-C, Sequencing Grade
10 μg
V1881
Glycosidases
Détermination de la localisation et de la structure des glycons par spectrométrie de masse. Suivi du trafic des protéines.
Produit
Endo H
Protein Deglycosylation Mix
Conditionnement
Réf.
10 000 unités 500 u/μl
50 000 unités 500 u/μl
V4871
V4875
20 réactions
V4931
Fetuin
500 μg 10 mg/ml
V4961
PNGase F
500 unités 10 u/μl
V4831
- Research Use Only -
37
Recherche
translationnelle
Véritable
intermédiaire
entre
la
recherche
fondamentale et la recherche clinique, la recherche
translationnelle permet de répondre à des besoins
ciblés en biologie clinique.
Promega, fort de son expérience reconnue en
recherche fondamentale, est un véritable partenaire
dans l’élucidation des complexités de la vie à l’échelle
cellulaire et génétique. Du cancer aux cellules
souches en passant par les maladies infectieuses,
génétiques ou hématologiques, Promega apporte les
outils nécessaires aux scientifiques pour comprendre
les processus fondamentaux de la vie. Il s'agit par
exemple de comprendre de quelle manière une maladie
se développe pour ainsi mettre en place des techniques
maisons adaptées en matière de prévention, de
dépistage et de traitement.
La biologie fondamentale en pleine évolution
contribue ainsi, avec Promega, à l’essor de la biologie
clinique et à l’expansion d’une médecine de plus en
plus personnalisée.
Un expert reconnu pour répondre à des
besoins ciblés en recherche translationnelle
Transduction du Signal
• A nalyse des mécanismes cellulaires
•G
PCR
• R écepteur nucléaire
• Tests biochimiques
Métabolisme / ADME
• Cytochrome P450
• UDP Glucuronosyltransferase
• Glutathione
• Proteasome
• DUB/SENP/NEDP
• NAD/NADH-Glo ™ Assay
• Acétylation des histones
Mort cellulaire
• Viabilité cellulaire
• Cytotoxicité
• Apoptose
• Stress oxidatif (Ros-Glo ™)
ATP Gas
AC
cAMP
ATP
ATP ATP
PKA
DEAD CELL
PROTEASE
GSSG
P450
GSH
LIVE CELL
PROTEASE
P450
UGT
Caspase-3 ProCaspase-3
Analyse du génome
!"
Fonction des protéines
• qPCR
• E xtraction d'acides nucléiques
manuelle et automatisée
• F onction des promoteurs
• C ontrôle post-transcriptionnel
• A uthentification des lignées cellulaires
• Méthylation de l’ADN
• E xpression
• L ocalisation
• Interactions protéine-protéine
• A nalyse structurale
• Tests biochimiques
39
Un service
de qualité
Depuis plus de 30 ans, la société Promega s’engage
au quotidien auprès des scientifiques au fil de leurs
projets. Plus que des produits innovants, c’est la notion
de partenariat qui est renforcée grâce à des services de
proximité, de qualité (hotline avec des spécialistes, délais
de livraison réduits, respect total de la chaine du froid).
Promega met également à disposition des scientifiques
un centre de formation PETAL pour des formations
standards ou sur-mesure. L’exigence de qualité passe
également par l’installation d’un nouveau site de
production industriel classé cGMP (Manheim, USA).
Enfin Promega, c’est un engagement environnemental
global acté grâce à un ensemble de mesures.
Laboratoire de formation et d'application
Biologie moléculaire
Identification Humaine
Protéomique
Le centre de formation et d’application européen
PETAL ouvert en 2009 à Charbonnières accueille
tout au long de l’année des groupes (jusqu’à
30 personnes) pour des formations standards
ou sur- mesure. Ces formations centrées sur
la biologie moléculaire, la biologie cellulaire,
la protéomique et l'identification humaine sont
destinées aux chercheurs, cliniciens, techniciens,
étudiants qui souhaitent aborder sous un angle
pratique les dernières techniques de laboratoire.
Programme complet
Pour plus de renseignements
Tél. 04 37 22 50 00
[email protected]
Biologie Cellulaire
Programme personnalisé
41
Site industriel Promega classé cGMP*
Une référence en terme d'exigence de production industrielle
Conformité cGMP = emballage dans le respect des règles de bonne pratique de fabrication.
•
ualité maintenue grâce à des mécanismes multiples de sécurité intégrés à l’ensemble
Q
du processus
•
25 000 m2 de production, laboratoires d’essai et de formation :
- Production de produits règlementés pour l’industrie pharmaceutique ou diagnostic
- Laboratoire pour tester les produits en condition réelle
•
Bâti selon les normes de développement durable
•
Plus de 100 personnes
*Current Good Manufacturing Practices
Promega, un engagement environnemental
Business Travel Carbon Footprint
Global Carbon Footprint
Goal Status
2,097
11%
75
7
72
67
67
2012 2014 GOAL
2008
29
9
RAIL
80
AUTO
83
2008
Reams per Million in Revenue
Gallons Per Million in Revenue
64
2,880
2,813
55
45
1,213
62
10
52
8
576
686
9
681
1,463
2,139
2,087
10%
Indexed /Million
in Revenue
607
1,044
2012
Global Paper Usage
3%
66
2,090
2008
Less Water
Used
58
40
7
855
Global
Water Usage
Global Water
Usage
64
1,691
Reduction in
CO2 Emissions
Million BTUs of Gross
93
AIR
Tons of C02 Per Million in Revenue
Une responsabilité environnementale entretenue par un programme strict qui a débuté en juillet
2009 et matérialisé par la publication d’un rapport développement durable annuel (2009 et
2012) qui rend compte de son engagement :
6600
574
8%
Below Goal
98
2008
2012 2014 GOAL
En savoir plus sur l'engagement
environnemental Promega
43
107
65
88
96
96
2012 2014 GOAL
Service marché public
04 37 22 50 01
Conditions commerciales
04 37 22 50 03
[email protected]
Renseignements techniques
0 800 488 000
[email protected]
Pour commander
0 800 487 999
Parc d’activités des Verrières - 24, chemin des Verrières
69260 Charbonnières-les-Bains
Tél. 04 37 22 50 00
www.promega.com
Panacee - ©istockphoto, fotolia
[email protected]