Recherche de mutations - du Fi-LMC

Recherche de mutations:
pourquoi, comment, pour qui,
quand, par qui?
Catherine Roche-Lestienne
Claude Preudhomme
Pourquoi?
fElles peuvent être un des mécanismes de la
résistance au traitement par Glivec®
f Leurs effets varient selon leur nature et leur localisation
Boucle P
Fixation IM
Boucle A
20
Biochimique
Cellulaire
15
10
5
H396P/R
L387M
V379I
F359V
E355G
M351T
F317L
T315I
F311L
E255K/V
Y253F/H
Q252H
G250E
M244V
WT
f Certaines peuvent être sélectionnées sous traitement
Suivi
2 mois
6 mois
11 mois
13 mois
Barthe C et coll., Br J Haematol. 2002
f L’émergence des mutations est corrélée avec
la phase de la maladie
f S Branford et coll (ASH 2005):
probabilité de détection de mutations sous IM:
26% si traitement en seconde intention
7% si traitement en première intention
f M Deininger et coll. (ASH 2004):
corrélation entre la détection des mutations et la
phase de la maladie p=0,0008
Marqueur de progression
Notion de risque
Soverini S et coll;, J Clin Oncol. 2005
f Certaines mutations semblent être
associées à un moins bon pronostique
Soverini S et coll., J Clin Oncol. 2005
f étude multicentrique Fi-LMC
89 patients résistants et mutés:
100
Autres n=37
Autres n=28
80
P-loopn=11
P-loop n=9
60
T315I n=8
40
T315I n=6
20
OS, p=0.05
0
0
10
PFS, p=0.0227
20
30
40
0
10
20
Mois depuis la détection des mutations
30
40
Comment?
Techniques
Sensibilité
Spécificité
Biais
Accessibilité
++
non
+++
10%
+++
non
++
DG-DGGE
5%
++
non
++
D-HPLC
10%
++
non
++
PCR+PNA
0.2%
++
oui
+
0.01%
+++
oui
+
PCR + Séquence 25%
directe
Séquence après
clonage
« clamping »
ASO-PCR
Quand, pour qui ?
Critères de résistance à l’IM (STIC)
f Patients réfractaires
f Patients qui échappent au traitement
fPeut-on définir des facteurs de risques de
développer des mutations?
Brandford S et coll., ASH. 2005:
Etude retrospective sur 222 patients en phase
chronique de la LMC
Surveillance de l’émergence de mutations
indépendamment de la réponse au Glivec®
• Haut risque (70%):
Blastose > 2%; diagnostique > 2 ans avant J1 IM
recherche de mutations tous les 3 mois après J1 IM
• Risque intérmédiaire (22%):
Blastose ≤ 2%; diagnostique > 2 ans avant J1 IM
• Faible risque (5,6%):
Blastose ≤ 2%; diagnostique < 2 ans avant J1 IM
recherche de mutations tous les 3 mois après J1 IM
si absence de réponse cytogénétique majeure
si augmentation en RQ-PCR
NB: Intensification de la recherche de mutations dans
la population à haut risque?
fDoit-on détecter de manière précoce les
mutations?
Willis S et coll., Blood 2005:
66 patients traités par Glivec®
Recherche de mutations par ASO-PCR et séquençage
La détection précoce des mutations est corrélée
avec la réponse cytogénétique
T315I
Q252H
Q252H
+
F359V
La détection précoce des
mutation n’est pas corrélée avec:
-la réponse au Glivec®
- la survie globale
-la survie sans progression
STIC 2005
f Technique de biologie moléculaire permettant d’évaluer la sensibilité
aux inhibiteurs de tyrosine kinase
f Cible :
- mutations BCR-ABL (LMC+LAL)
- CKit (CBF et mastocytoses)
- PDGFRα (HES)
- PDGFRβ (aCML)
- NUP-ABL (LAL T)
f BCR-ABL
- Permettre que tout patient nécessitant une recherche de mutation
puisse l’avoir
- Comparer différentes approches méthodologiques avec GoldStandart : séquençage direct BCR-ABL
- Recueillir l’évolution des patients
* déclaration base registre FI LMC
* suivi (fiche) : ARC à 2/3 temps
Qui étudier ?
Critères de résistance à imatinib (STIC)
Résistance Primaire:
f Absence de rémission hématologique à 3 mois de TT
f Absence de réponse cytogénétique à 6 mois de TT
f Absence de réponse cytogénétique complète à 12 mois de TT
f Ratio normalisé BCR-ABL/ABL≥1% au moins 12 mois après
traitement par ITK
Résistance secondaire:
f Perte de la rémission hématologique
f Progression de la LMC (phase accélérée, crise blastique)
f Perte de la réponse cytogénétique complète
f Augmentation du % de mitoses Ph+
f Apparition d’anomalie(s) clonales additionnelles dans des
mitoses Ph+
f Augmentation du taux de transcrit BCR-ABL≥0.5 log
confirmée sur 2 examens successifs à moins d’1 mois
d’intervalle
Par qui ?
• LILLE (NO)
• ST LOUIS/CRETEIL
(AP-HP)
• POITIERS (GO)
• LYON (SE)
• BORDEAUX
(SO)
• NIMES (PACA)
quantité transcrit mbcr /Tom
Patiente F.B.
10
05/07/04 : Y253H
25/11/04 : mutation non
retrouvée
1
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
Dasatinib
DLI+Glivec
Sept.04 Sept.05
AU 03/05/04
Sept.03
Ê GLIVEC 600 MG
Sept.02
DLI +Glivec
Sept.01
DLI
Sept.00
DLI
Sept.99
allogreffe
Lala 94
0,000001
Sept.98
100
09/08/04 : pas de
mutation
détectée
10
1
06/09/05 : F317L
0,1
0,01
18/04/05 : pas de
mutation
détectée
0,001
0,0001
25/11/05 : pas de
mutation
détectée
0,00001
Nov. 04
Fév. 05
Mai 05
Août 05
Nov. 05
Dasatinib
Dex+glivec600
+zometa
Induction
ham
Allogreffe
Août 04
Glivec
0,000001
Hydrea
quantité de transcrit Mbcr/K562
Patient C.A.
Patient C.J.L.
M0
Mi
M7
M0
Control
M7
Control
315I
WT
C
T
C
T
C
T
B: RT-PCR and RFLP
A: ASO PCR
100
10
23/08/02 : T315I
1/12/04 : T315I
+ Y253H
1
0,1
12/10/05 :
0,01
Y253H
0,001
uniquement
0,0001
Mai 05
Glivec+INF
Glivec+INF
Mai 04
INF
Mai 03
HomoHT
Glivec
0,000001
Mai 02
Glivec+Arac
0,00001
Glivec+INF
T
quantité de transcrit Mbcr/K562
C
100
14 et 15/10/03
: pas de
mutation
détectée
10
1
20/01/05 :
L324Q
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
Dasatinib
ct
Glivec
O
5
6
4
5
0
04 l 04
0
5
0
0
5
.
.
.
4
.
0
0
.0
pt
r il
ri
il.
nv
nv
nv
il.
ct
e
v
v
u
a
a
a
u
J
J
O
J
J
J
A
A
S
Allogreffe
il.
3
.0
Dasatinib
Ju
03
Ê Glivec 600 mg
0,000001
Glivec
quantité de transcrits Mbcr/K562
Patient Q.J.
CONCLUSION
f Recherche mutation : étape importante dans bilan
résistant
MAIS
f Autres causes : - cytogénétique
- pharmaco-cinétique
- efflux…
• Nécessité langage commun : critère de résistance et
techniques
• Ce qui est clair : T315I ne répond pas aux nouveaux inhibiteurs
Tous les autres patients mutés ne répondent pas obligatoirement
en particulier sur le plan cytogénétique et moléculaire
• Nécessité d’une prise en charge multidisciplinaire
Remerciements
♦ Laboratoire d’hématologie et moléculaire
CHRU
♦ Service clinique NPC
♦ Service cytogénétique NPC
♦ Groupe Phi LMC
♦ Participants protocole SPIRIT