Une gamme de services dédiés à la qualité cellulaire Autres

Une gamme de services dédiés
à la qualité cellulaire
Autres services
Clean Cells met également en œuvre son expertise dans des programmes :
Ø d'iingénierie pour la conception de laboratoires,
Ø d'a
accompagnement en management de la qualité,
Ø d'a
audit sur
site,
de
formation aux « Bonnes Pratiques de Culture
Cellulaire ».
En fonction de vos besoins et applications, les références des fiches techniques décrites
ci-après seront toujours prémunies d’une des mentions suivantes sur tous nos devis :
§
§
§
§
2. : réalisation en routine en confinement biologique L2,
3. : réalisation en routine en confinement biologique L3,
B2. : réalisation selon les BPL en confinement biologique L2,
B3. : réalisation selon les BPL en confinement biologique L3.
L’engagement de Clean Cells pour vous fournir une assistance de qualité est reconnu au
travers de notre certification ISO 9001:2000 "Prestations de Service en Culture Cellulaire
et Recherche de Contaminants" (AFAQ N° QUAL/2002/19363).
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Parc d’Activités Vendée Sud-Loire 1 - 85600 BOUFFÉRÉ - FRANCE
Tél : +33 (0) 2 51 09 27 57 - Fax : +33 (0) 2 51 09 27 58 - Mail : [email protected]
Clean Cells, Société Anonyme au capital de 154.720 € - RCS 432 370 526 La Roche sur Yon - APE 731 Z - N° TVA : FR 424 323 70 526
ENVOI D'ECHANTILLONS
Pour tout envoi, merci de bien vouloir compléter et joindre la fiche de renseignements,
premier maillon de la chaîne de traçabilité. De plus, n'hésitez pas à nous fournir des
protocoles détaillés afin d'optimiser la culture de vos cellules.
Pour un envoi de cellules en culture :
Les cultures doivent être subconfluentes. Nous recommandons d’envoyer les cellules 3-4
jours suivant le dernier repiquage, en fonction des caractéristiques cellulaires.
Les cellules adhérentes à tester peuvent être envoyées sous la forme d’un flacon (25 ou
75cm²) rempli de milieu. Les cellules non adhérentes peuvent être envoyées dans un
tube (15 ou 50ml) rempli de milieu. A leur arrivée, l’excès de milieu est retiré, pour
permettre aux cellules de reconditionner leur environnement et la viabilité est vérifiée.
Le bouchon doit être recouvert de Parafilm®. Les flacons ou tubes sont placés dans un
sac ou un container étanche, avec suffisamment d’absorbant pour éviter toute fuite.
Pour les envois d’échantillons congelés, les flacons ou tubes sont placés dans un sac
ou un container étanche, avec suffisamment d’absorbant pour éviter toute fuite en cas de
décongélation accidentelle. Merci de veiller à indiquer la température de stockage sur le
colis.
Si les cellules sont généralement cultivées en présence d’antibiotiques, nous
recommandons d’effectuer au minimum 2 passages sans antibiotique avant l’envoi des
cellules à notre laboratoire.
Les résultats sont envoyés sous la forme d’un Rapport d’Essai établi conformément à la
norme NF EN ISO/CEI 17025.
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DETECTION DES MYCOPLASMES
VSV.05.01
Détection par
épifluorescence sur
cellules indicatrices
Temps de l’essai :
1 semaine
Ce test est utilisé pour détecter par co-culture la présence de
mycoplasmes dans les échantillons biologiques d’origine
animale ou humaine.
L’échantillon (milieu, suspension cellulaire…) à tester est
incubé en présence de cellules indicatrices sensibles (ex.
cellules de rein de singe). Après 2 passages, les cellules sont
marquées par un agent intercalant de l’ADN fluorescent
(Hoechst), puis analysées sous microscope à épifluorescence
contre la présence de mycoplasmes.
Pour chaque test, des contrôles internes sont réalisés : un
contrôle négatif de cellules non contaminées et un contrôle
positif de cellules contaminées par une quantité de
mycoplasmes de référence.
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée,
1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks
d’échantillons génomiques, viraux....
VSP.05.01
Cet essai est basé sur l’amplification spécifique d’une région
d’ADN des mycoplasmes.
Détection par PCR
Temps de l’essai :
48 heures
A sa réception, l’ADN total de l’échantillon est extrait. Les
extraits d’ADN totaux rentrent ensuite dans un cycle de PCR.
L’amplification d’ADN est réalisée en présence d’amorces
complémentaires et spécifiques du génome des mycoplasmes.
En fin de PCR, le produit obtenu est séparé sur gel d’agarose.
La présence d’une bande spécifique des mycoplasmes révèle
une contamination dans l’échantillon cellulaire testé.
En parallèle à l’amplification de l’ADN de l’échantillon test,
deux types de témoins sont réalisés : un positif (ADN extrait
de cellules volontairement contaminées par des mycoplasmes)
et un négatif (ADN extrait de cellules exemptes de tout
mycoplasme)
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée,
1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks
d’échantillons génomiques, viraux...
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DETECTION DES MYCOPLASMES
VDHP.05.01
Détection croisée par
PCR-épifluorescence
directe
Temps de l’essai :
48 heures
Ce test est utilisé pour détecter rapidement et directement
la présence de mycoplasmes dans les échantillons cellulaires
d’origine animale ou humaine.
Après vérification de la viabilité, les cellules sont repiquées, un
aliquote de celles-ci étant incubé sur lamelle de verre (pour les
cellules adhérentes). Les cellules sont marquées par un agent
fluorescent intercalant de l’ADN (Hoechst) et analysées sous
microscope à épifluorescence pour déterminer la présence de
mycoplasmes.
Parallèlement au marquage direct des cellules, l’ADN d’un
échantillon de cellules et de milieu est extrait et analysé par
PCR (cf. : référence VSP.05.01 ci-dessus).
En fin de double détection, un échantillon est considéré comme
négatif si les deux tests réalisés le sont.
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture de
7 jours est à prévoir, réf. : DMC.05.01).
VDVP.05.01
Détection croisée par
PCR et
épifluorescence sur
cellules indicatrices
Temps de l’essai :
1 semaine
Cet essai est utilisé pour détecter la présence de mycoplasmes
dans les échantillons biologiques d’origine animale ou
humaine.
Dans ce test l’échantillon est co-cultivé avec des cellules
indicatrices, capables de promouvoir l’expansion des
mycoplasmes. Outre l’échantillon-test, cet essai inclus des
contrôles positif (contaminé par une espèce de mycoplasmes
de référence) et négatif (cellules cultivées dans des conditions
normales). A la fin de la co-culture, les cellules sont repiquées,
un aliquote étant incubé sur lamelle de verre pendant une nuit,
marquées au Hoechst, puis observées au microscope à
épifluorescence.
En parallèle, l’ADN des cellules indicatrices va servir de
substrat pour la recherche par PCR de la présence d’ADN
mycoplasmique dans l’échantillon biologique.
En fin de double détection, un échantillon est considéré comme
négatif si les deux tests réalisés le sont.
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée,
1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks
d’échantillons génomiques, viraux...
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IDENTIFICATION DES MYCOPLASMES
VSVR.05.01
Détection
par épifluorescence
sur cellules
indicatrices selon les
recommandations
réglementaires
Ce test est utilisé pour détecter par co-culture la présence de
mycoplasmes dans les échantillons biologiques d’origine
animale ou humaine, utilisés dans des applications
thérapeutiques humaines. Le test est réalisé dans les
conditions décrites par les autorités réglementaires (Ph.EU,
sup.98, 6.2.7 ; PTC, CBER, FDA, 1993)
2 prises d’essai de l’échantillon à tester (milieu, suspension
cellulaire…) sont incubées dans 2 flacons de 25 cm² en
présence de cellules indicatrices pendant 3 passages. Le
Sensibilité :50-100 CFU dernier jour, les cellules sont marquées par un agent
intercalant de l’ADN fluorescent (Hoechst), puis analysées sous
microscope à épifluorescence pour détecter la présence de
Temps de l’essai :
mycoplasmes.
2 semaines
Pour chaque test, deux types de contrôles sont réalisés : un
contrôle négatif de cellules non contaminées et au moins deux
contrôles positifs de cellules contaminées par des espèces de
mycoplasmes de référence.
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée.
Notes :
Ces essais peuvent être réalisés directement à partir de milieu de culture conditionné,
mais nous conseillons de le faire sur un milieu contenant des cellules.
Conformément aux recommandations réglementaires (PTC, CBER, FDA, 1993), les prises
d'essai peuvent être conservées entre 2 et 8°C 24 heures avant le test, pour des
périodes plus longues, le stockage est à – 60°C maximum.
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IDENTIFICATION DES MYCOPLASMES
CDPHE.05.01
Détection par culture
directe selon :
Ph.EU, sup98,
§ 2.6.7
Sensibilité : 100 CFU
Durée de l’essai :
6 semaines
PTC.05.01
Détection croisée
selon :
« Point To Consider,
CBER, FDA, 1993 »
Sensibilité :50-100 CFU
Temps de l’essai :
5 semaines
Cette technique par culture directe est utilisée pour détecter
les mycoplasmes présents dans les préparations vaccinales
pour usage humain. Nous utilisons un milieu de culture solide
et un milieu de culture liquide qui permettent la pousse des
mycoplasmes
de
référence
(Acholeplasma
laidlawii,
Mycoplasma orale et Mycoplasma pneumoniae). La recherche
de mycoplasme est réalisée sur milieu solide en aéro et
anaérobiose. Chaque nouveau lot de milieu solide est testé
pour sa capacité à permettre la pousse des souches de
référence (Test dit des propriétés nutritives). Ces mêmes
tests sont réalisés lors d’un essai en présence du produit à
analyser afin de déterminer si ce dernier peut être inhibiteur
et donc nuire à la croissance des mycoplasmes (Test dit de
Substances inhibitrices). A J0, on réalise un ensemencement
en milieu liquide et en milieu solide. Des sous-cultures sont
réalisées à partir du milieu liquide à J3, J7 et J14. Les lectures
sont réalisées à J7, J14, J21, J23, J28 et J35. Un premier
résultat est envoyé à J14 mais le résultat final est celui du
35ème jour.
Cet essai est utilisé pour détecter la présence de
mycoplasmes par deux types de techniques : la culture
directe (sur milieu solide et liquide) et la culture sur cellules
indicatrices.
L’échantillon à tester est incubé pendant 3 passages avec des
cellules indicatrices dans 2 flacons de 25 cm². Les cellules
seront ensuite fixées, marquées à l’aide d’un agent intercalant
de l’ADN (Hoechst 33258) et observées au microscope à
fluorescence pour détecter la présence de mycoplasmes.
En parallèle des boîtes de Pétri et un tube de milieu liquide
sont inoculés avec l’échantillon test et sont incubés en
conditions aérobie et anaérobie. 3 sous-cultures des tubes de
milieu liquide sont réalisées en milieu solide (J3, J7 et J14).
Puis toutes les boîtes sont examinées après au minimum 14
jours de culture.
Au moins deux espèces de mycoplasmes sont utilisées comme
contrôles positifs et sont incubées dans les mêmes conditions
que l’essai.
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IDENTIFICATION DES MYCOPLASMES
ID.05.01
Identification des
mycoplasmes
Temps de l’essai :
une semaine
En cas de contamination des échantillons biologiques, une
identification des mycoplasmes peut être proposée afin de
déterminer l’origine de celle-ci. Cet essai est réalisé à partir d’une
amplification des fragments d’ADN mycoplasmique (PCR). Ces
fragments sont ensuite découpés par des enzymes de restriction.
Les variations de taille des fragments obtenus sont spécifiques de
chaque espèce de mycoplasmes.
Ce test permet d’identifier les principales espèces de
mycoplasmes impliquées dans plus de 95 % des contaminations
observées en culture cellulaire dont M.fermentans, M.hyorhinis,
M.arginini, M.orale et A.laidlawii…
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée,
1 aliquote congelé de milieu, de sérum ou de stocks
d’échantillons génomiques, viraux...
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DECONTAMINATION CELLULAIRE
ED.05.01
Entrée en
décontamination
SD.05.01
Sortie de
décontamination
Temps de l’essai :
3-4
semaines
(incl.
période de quarantaine)
Cette procédure est destinée à mettre en œuvre l’ensemble
des procédés à disposition afin de décontaminer les cellules,
animales ou humaines, de toute trace de mycoplasmes. Ce
système convient pour toutes cellules destinées à la recherche
ou à la production. A leur entrée en traitement, une première
détection directe des mycoplasmes est réalisée afin d’évaluer
le degré de contamination.
Après expertise, les cellules entrent simultanément dans
différents cycles d’antibiothérapie de 7 jours. Au bout de ces 7
jours, les cellules sont repiquées et à nouveau testées contre
la présence de mycoplasmes. Les cellules repartent dans un
nouveau cycle de 7 jours. En fin de traitement, la présence ou
non de mycoplasmes est évaluée par PCR et épifluorescence
directe.
Si les cellules sont décontaminées, elles peuvent alors être
renvoyées directement au client sous la forme d’un flacon de
25 cm² ou sous la forme d’ampoules congelées (congélation
en plus).
Compte tenu des phénomènes de résistances possibles des
mycoplasmes aux antibiotiques utilisés, si les cellules ne sont
pas décontaminées en fin de traitement Clean Cells, elles
peuvent
entrer
soit
dans
un
nouveau
cycle
de
décontamination, soit dans un cycle de traitement alternatif
(défini avec le laboratoire).
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est
à prévoir, réf. : DMC.05.01).
Notes :
La faible concentration du mélange d’antibiotiques utilisés lors
du traitement Clean Cells, n’entraîne aucune conséquence sur
les cellules traitées : pas de ralentissement de la croissance,
pas de variation phénotypique, pas de variation métabolique
(tests réalisés sur des cellules T murines).
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TEST DE STERILITE
TS7.05.01
TS14.05.01
Cet essai est utilisé pour rechercher la présence éventuelle
d’une contamination bactérienne ou fongique. Elle est utilisée
essentiellement pour les cellules ou produits ancillaires
Test de stérilité
utilisés dans un contexte de R&D utilisant des cellules à forte
valeur ajoutée. Les échantillons sont ensemencés dans deux
types de milieu liquide pendant 7 ou 14 jours. Tous les jours,
Sensibilité : 10-100 CFU les milieux sont observés pour vérifier s’il y a apparition d’un
trouble traduisant une contamination. Dès l’apparition d’une
contamination, nous vous contactons pour vous en informer.
Durée de l’essai :
7 jours ou 14 jours
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée.
TSRE.05.01
Test de stérilité selon
la Ph. Eu :
Ph. Eu, Sup 98 § 2.6.1
21 CFR 610.12
Sensibilité :10-100 CFU
Temps de l’essai :
14 jours
Cette technique est utilisée pour rechercher la présence
éventuelle d’une contamination bactérienne ou fongique. Elle
est réalisée pour les produits de thérapie cellulaire et génique
ainsi que pour les anticorps à usage thérapeutique qui doivent
être stériles. Les échantillons sont ensemencés sur deux
types de milieux :
Le milieu liquide au thioglycolate pour les bactéries
anaérobies, et également pour les bactéries aérobies.
Le milieu aux peptones de caséine et de soja (bouillon
trypticase soja) pour les bactéries aérobies, mais aussi pour
les champignons.
Ce test comporte trois étapes : La validation qui consiste à
observer la croissance des souches de références* sur les
milieux utilisés ; le test « propriétés inhibitrices » qui permet
de valider si l’échantillon à tester n’a pas d’effet inhibiteur sur
la croissance de ces germes ; et le test de stérilité
proprement dit qui consiste à mettre en culture l’échantillon
dans les deux milieux décris. Un contrôle négatif est réalisé,
ainsi que la validation technique par la réalisation d’un
« Touch Gants » (gélose contact avec les gants du technicien)
et de l’analyse microbienne du flux de la hotte à flux
laminaire.
Nous vous communiquons un résultat intermédiaire à J7 et
résultat définitif à J14. En cas de contamination, nous vous
informons sans attendre la fin du test.
Echantillon type :
A définir avec notre laboratoire en fonction de vos contraintes
et des recommandations des instances réglementaires
(AFSSAPS…).
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TEST DE STERILITE
TSRU.05.01
Test de stérilité selon
la Ph US :
Ph US
21 CFR 610.12
Sensibilité : 10-100 CFU
Durée de l’essai :
14 jours
Cette technique est utilisée pour rechercher la présence
éventuelle d’une contamination bactérienne ou fongique. Elle
est réalisée pour les produits de thérapie cellulaire et génique
ainsi que pour les anticorps à usage thérapeutique qui doivent
être stériles.
La technique est identique à la référence TSRE.05.01 avec
deux souches contrôles supplémentaires que sont :
-
Clostridium sporogenes ATCC 11437
Bacillus subtilis ATCC 6633 en bouillon Trypticase Soja
Echantillon type :
A définir avec notre laboratoire en fonction de vos contraintes
et des recommandations des instances réglementaires
(AFSSAPS…).
* Souches de références utilisées :
§
§
§
Bactéries aérobies
-
S. aureus, ATCC 6538
-
P. aeruginosa, ATCC 27853
-
B. subtilis, ATCC 6633
Bactéries anaérobies
-
C. sporogenes(1), ATCC 19404
Ph Eu et Ph US
-
C. sporogenes(2), ATCC 11437
Ph US seulement
Levures et moisissures
-
C. albicans, ATCC 10231
-
A.niger, ATCC 16404
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ENDOTOXINES BACTERIENNES
REC.05.01
Détection des
endotoxines
bactériennes
(Test LAL)
Temps de l’essai :
96 heures
Le test LAL chromogénique cinétique est utilisé pour détecter
les endotoxines (lipopolysaccharides) des bactéries GRAM
négatif. En présence d’endotoxines, un substrat chromogène
présent dans le réactif « LAL-substrat » libère un chromophore
jaune (paranitroanilide ou pNa) qui absorbe à 405 nm. Le
spectrophotomètre réalise des lectures en continu. Le temps
nécessaire pour obtenir une intensité de couleur jaune
prédéfinie
est
inversement
proportionnel
au
taux
d’endotoxines dans l’échantillon.
La quantité d’endotoxines présente est déterminée par une
courbe étalon.
La recherche d’endotoxines bactériennes vient en complément
de la bactériologie puisque ces substances pyrogènes (qui
provoquent de la fièvre) proviennent aussi bien de bactéries
vivantes que de bactéries mortes. Ce test constitue donc un
excellent traceur d’une contamination bactérienne même
antérieure. Ce test est agréé par la FDA (licence FDA 709) et
reconnu par la Pharmacopée Européenne.
Echantillon type :
Minimum 500 µl de milieux, de produit, de sérum, d’extraits
congelés.
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ADN RESIDUEL
RDNT.05.01
Quantification d’ADN
résiduel par le
« Threshold Total
DNA Assay »
RDNT.05.01
Analyse de routine
QDNT.05.01
Qualification initiale
Qualification Initiale
Qualification Initiale
Sensibilité :
2-200 pg/test
PPK.05.01
Digestion
protéinase K/SDS
PEW.05.01
Extraction d’ADN
par le kit Wako
Temps de l’essai :
10 jours pour
une analyse de routine
Les autorités réglementaires recommandent de quantifier
l’ADN résiduel présent dans les produits biologiques dérivés de
lignées cellulaires à usage humain (par ex. vaccins, protéines
recombinantes, anticorps monoclonaux). Le taux admissible
d’ADN contaminant est très discuté et diverge selon le Comité
de l’OMS et de la FDA. Généralement, cette quantité doit être
inférieure à 100 pg par dose unique destinée à l’homme.
Le test « Threshold Total DNA Assay » permet de doser des
quantités d’ADN total, de manière non spécifique, de l’ordre du
picogramme.
Ce test enzymatique de type sandwich se déroule en plusieurs
étapes. Après la dénaturation de l’ADN de l’échantillon, l’ADN
simple brin est marqué par une protéine biotinylée, la SSB
(Single-Stranded Binding protein) de E. Coli, qui a une forte
affinité pour l’ADN simple brin, et un anticorps monoclonal
anti-ADN conjugué à l’uréase. Le complexe protéique ainsi
formé est capturé sur une membrane de nitrocellulose
biotinylée via la streptavidine. L’activité de l’uréase est
mesurée par la dégradation de l’urée qui se traduit par des
variations de pH, proportionnels à la quantité d’ADN présente
dans l’échantillon. Cette quantité est déterminée à partir d’une
courbe standard de 2 pg à 200 pg d’ADN. La sensibilité de ce
test (2 pg/test) répond aux exigences de la FDA.
Avant l’analyse d’un échantillon en routine, une phase de
qualification initiale est nécessaire pour rechercher, d’après les
renseignements fournis sur l’échantillon (voir fiche de
renseignements de l’échantillon), la dilution de travail idéale et,
si besoin, le type de prétraitement (digestion protéinase K/SDS
ou/et extraction d’ADN) à réaliser avant son dosage. En effet,
dans certains cas, les protéines ou les constituants du tampon
de l’échantillon peuvent interférer et inhiber le test. Une
surcharge en ADN de l’échantillon permettra de définir ce
prétraitement.
Par la suite, une étude de validation de l’échantillon selon les
textes réglementaires de l’ICH (exactitude, précision, limite de
détection, limite de quantification, spécificité) peut être
proposée. Les critères à évaluer seront alors à définir avec
notre laboratoire en fonction de vos exigences.
Echantillon type :
Echantillon sous forme liquide ou lyophilisée.
Volume à définir avec notre laboratoire en fonction du type
d’analyse demandée (qualification initiale, validation ou
routine). A titre indicatif, 500 µl d’échantillon est nécessaire
pour une réaction.
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Tél : +33 (0) 2 51 09 27 57 - Fax : +33 (0) 2 51 09 27 58 - Mail : [email protected]
Clean Cells, Société Anonyme au capital de 154.720 € - RCS 432 370 526 La Roche sur Yon - APE 731 Z - N° TVA : FR 424 323 70 526
DETECTION DE VIRUS HUMAINS
Détection de virus
humains par
technique qPCR et
RT-PCR
Temps de l’essai :
72 heures
Les techniques de PCR jouent un rôle croissant dans la
détection, la quantification et/ou l'identification d'agents
contaminants, notamment viraux. En effet, l'amplification de
séquences nucléiques par PCR et la détection avec des sondes
spécifiques permet de satisfaire aux exigences de sensibilité et
de spécificité élevées. Le suivi de l'amplification en temps réel
permet la quantification précise de l'acide nucléique recherché
dans l'échantillon sur une vaste gamme de concentrations (7 à
8 Log).
Nous développons également des tests à façon pour mesurer
l'expression d'ARN messagers d'intérêt.
ECLC.05.01
Recherche d’effets cytopathiques sur lignées cellulaires Hep-2,
MRC-5 et VERO
Recherche de virus hemadsorbants
HAD.05.01
ART.05.01
ART.05.02
MET.05.01
Recherche d'activité RT (Q-PERT)
Recherche d'activité RT (Q-PERT) et test de transmissibilité sur
cellules cibles
Recherche virale par microscopie électronique
HAV.05.01
HBV.05.01
HCV.05.01
RT-PCR HAV (PCR temps réel)
PCR HBV (PCR temps réel)
RT-PCR HCV (PCR temps réel)
EBV.05.01
CMV.05.01
HSV1.05.01
HSV2.05.01
VZV.05.01
HHV6A.05.01
HHV6B.05.01
HHV7.05.01
HHV8.05.01
PCR EBV (HHV-4) (PCR temps réel)
PCR CMV (HHV-5) (PCR temps réel)
PCR HSV1(PCR temps réel)
PCRHSV2 (PCR temps réel)
PCRVZV (PCR temps réel)
PCR HHV-6A (PCR temps réel)
PCR HHV-6B (PCR temps réel)
PCR HHV-7 (PCR temps réel)
PCR HHV-8 (PCR temps réel)
HIV1.05.01
HIV1.05.02
HIV2.05.01
HIV2.05.02
PCR HIV-1 (PCR temps réel)
RT-PCR HIV-1 (PCR temps réel)
PCR HIV-2 (PCR temps réel)
RT-PCR HIV-2 (PCR temps réel)
HTLV1.05.01
HTLV1.05.02
HTLV2.05.01
HTLV2.05.02
PCR HTLV-1 (PCR temps réel)
RT-PCR HTLV-1 (PCR temps réel)
PCR HTLV-2 (PCR temps réel)
RT-PCR HTLV-2 (PCR temps réel)
PB19.05.01
PCR Erythrovirus B19 (PCR temps réel)
Echantillon type :
Différents types d'échantillons peuvent être pris en charge :
cellules, extraits ou produits dérivés de cellules (anticorps,
protéines, ADN), suspensions virales...
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DETECTION DE VIRUS ANIMAUX
Détection de virus
animaux par
technique qPCR et
RT-PCR
Temps de l’essai :
72 heures
Les techniques de PCR jouent un rôle croissant dans la
détection, la quantification et/ou l'identification d'agents
contaminants, notamment viraux. En effet, l'amplification de
séquences nucléiques par PCR et la détection avec des sondes
spécifiques permet de satisfaire aux exigences de sensibilité et
de spécificité élevées. Le suivi de l'amplification en temps réel
permet la quantification précise de l'acide nucléique recherché
dans l'échantillon sur une vaste gamme de concentrations (7 à
8 Log).
Nous développons également des tests à façon pour mesurer
l'expression d'ARN messagers d'intérêt.
ECB.05.01
Recherche d'effets cytopathiques sur cellules BT
ECS.05.01
Recherche d'effets cytopathiques sur cellules ST
BVDV.05.01
RT-PCR BVDV (PCR temps réel)
IBR.05.01
PCR Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus (PCR temps réel)
BAV3.05.01
PCR bovine adenovirus (PCR temps réel)
PI3.05.01
RT-PCR Parainfluenza 3 (PCR temps réel)
SV40.05.01
PCR SV40 (PCR temps réel)
Les autres tests virologiques
in vitro sont en cours de
développement ou en
validation. Veuillez nous
consulter pour de plus amples
informations sur leur état
d’avancement.
Echantillon type :
Différents types d'échantillons peuvent être pris en charge :
cellules, extraits ou produits dérivés de cellules (anticorps,
protéines, ADN), suspensions virales...
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QUARANTAINE CELLULAIRE
QD.05.01
Quarantaine
Cellulaire et
détection
mycoplasmes
Temps de l’essai :
3-4 semaines
Ce dispositif consiste à cultiver les cellules, animales ou
humaines, en absence de tout antibiotique pendant 10
passages.
A leur entrée en quarantaine, une première détection croisée
des mycoplasmes est réalisée. Si les cellules sont « propres »,
elles entrent alors dans un premier cycle de 7 jours de
quarantaine. Chaque cycle comporte 3 passages des cellules
avec, en fin de cycle, un test direct de détection contre une
contamination mycoplasmique. A la fin du troisième cycle, les
cellules sont testées par PCR et épifluorescence indirecte. Si ce
dernier test est négatif, les cellules sont considérées comme
exemptes de toute contamination mycoplasmique et sont
renvoyées à leur laboratoire d’origine sous la forme d’un
flacon 25 cm².
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est
à prévoir, réf. : DMC.05.01).
Notes :
Pour des quantités plus importantes de cellules ou pour un
envoi sous forme congelée, adressez-vous directement à notre
laboratoire qui vous précisera le coût et le temps nécessaire
pour ces différentes opérations.
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BANQUE CELLULAIRE - CRYOCONSERVATION
PC.05.01
Production de
cellules à façon
Temps de l’essai :
Variable
Ce service est destiné aux laboratoires et sociétés désireux
d’obtenir une production cellulaire externalisée. Clean Cells met
en place des cycles d’amplification de cellules à façon
conformément aux BPL, notamment en ce qui concerne les
tests anti-mycoplasme, de stérilité et de recherche
d'endotoxines. Cette solution peut être utilisée pour réaliser des
banques cellulaires de travail amplifiées à partir de cellules
envoyées directement à nos laboratoires ou d’un stock conservé
dans nos locaux sous la forme d’une banque sécurisée.
Cette production cellulaire peut aussi convenir à la préparation
d’extraits protéiques, d’ADN génomique ou d’ARN totaux à
partir d’échantillons cellulaires animaux ou humains.
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est
à prévoir, réf. : DMC.05.01).
Note :
Les cellules sont renvoyées au laboratoire soit sous la forme de
flacons de culture subconfluents directement utilisables par nos
clients, soit sous la forme d’ampoules congelées ou encore
d’extraits.
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PRODUCTION CELLULAIRE
BC.05.01
Banque
Cellulaire :
Cryoconservation
Temps de l’essai :
Location annuelle
Ce service est destiné à permettre la conservation des cellules,
animales ou humaines, en absence de tout antibiotique, sous la
forme d’ampoules stockées dans l’azote liquide.
Toutes les ampoules admises à entrer dans ce système de
stockage sécurisé ont été testées et certifiées sans
mycoplasme. A leur arrivée, les cellules sont testées contre
toute contamination mycoplasmique par une double détection,
puis congelées par abaissement progressif de leur température
en présence d’un agent cryoprotecteur.
En parallèle à ces tests directs sur les cellules entrant dans
notre système de banque, des tests de décongélation et de
détection sur des lignées internes contrôles sont pratiquées
régulièrement.
Echantillon type :
1 à 5.106 cellules en culture (ex. 1 flacon de 25 cm²) ou sous
forme congelée (NB : une décongélation et mise en culture est
à prévoir, réf. : DMC.05.01).
Note :
Un minimum de 3 ampoules est nécessaire pour entrer dans la
banque Clean Cells
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R&D : CARACTERISATION CELLULAIRE
RD.05.01
R&D :
Caractérisation
cellulaire
Défini dans le cadre d’une relation laboratoire Clean Cells –
laboratoire « partenaire », ce service permet aux sociétés qui le
désirent d’étudier certaines caractéristiques cellulaires comme
l’expression phénotypique, la prolifération en réponse à
différents stimuli, le cycle cellulaire ou encore l’apoptose.
Suivant un cahier des charges établi en commun, Clean Cells
met en œuvre les techniques nécessaires parmi une gamme
performante d'analyse cellulaire : depuis le simple marquage en
immuno-fluorescence jusqu’à la microscopie confocale, en
passant par la cytométrie en flux et la fluorimétrie.
Les techniques de biologie moléculaire (Northern Blot, PCR, RTPCR…) ou d'analyse biochimique (Western Blot, activité
enzymatique, développement d'ELISA…) sont également
disponibles.
Afin de définir le programme à mettre en œuvre, veuillez
contacter le laboratoire.
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INGENIERIE DES LABORATOIRES
CQ.05.01
Ce service proposé aux laboratoires est dédié aux structures
physiques et à la mise en place de Systèmes d’Assurance de la
Qualité adaptés à vos systèmes de travail.
Clean Cells vous offre ainsi une solution modulable qui s’articule
autour de 3 grands axes respectant les spécificités et les
exigences de votre laboratoire :
Bases de données
• Réalisation de progiciels de gestion de laboratoire :
conception de base de données paramétrées en fonction de votre
organisation
Progiciel : pour la gestion dédiée d’une activité spécifique
(matériel & maintenance, documentation qualité…)
LIMS : (laboratory informatic management system) pour la
gestion globale des activités du laboratoire
Etudes d’ingénierie
• Etudes techniques d’ingénierie :
Audits : Audit de l’organisation de votre laboratoire dans son
ensemble ou par zones techniques
Etudes de flux : Etudes de flux concernant les échantillons, les
personnes, les matériels, les stocks, les énergies, les déchets…
Pré-programmation &
programmation et de
biotechnologie.
Management de la
Qualité
Accompagnement
Programmation : Etudes de préprogrammation de bâtiment de
• Mise en place de Système d’Assurance de la Qualité
conforme à votre organisation et selon le ou les référentiels de
votre choix ; une nouvelle fois, cette étude est dédiée à la mise
aux normes de votre laboratoire en fonction des textes
réglementaires en vigueur ou des reconnaissances que vous
souhaitez obtenir.
Accréditation
Certification
BPF
BPL
FDA
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FORMATION AUX BPCC
FC.05.01
OBJECTIFS
Ø Définir le terme de culture cellulaire
Ø Apprendre les règles pour une bonne pratique de la culture
cellulaire (BPCC)
Ø Eviter les problèmes de contamination
Ø Déterminer les risques
Ø Identifier les aspects normatifs
FORMATION
PERSONNES CONCERNEES
AUX BONNES
PRATIQUES
DE CULTURE
CELLULAIRE
Personnel d’encadrement
Techniciens de laboratoires, Ingénieur, Etudiants
CONTENU
Ø Une Partie axée sur la théorie
Ø Introduction générale à la culture cellulaire :
Une description précise des locaux et du matériel utilisé
Une revue des techniques de culture cellulaire
•
Expansion cellulaire
•
Sélection cellulaire (cytométrie en flux, tri de cellules)
•
Cryoconservation
Une définition complète des gestes de BPCC
Des notions d’hygiène et sécurité, ainsi que des normes et
d’assurance qualité
Ø Partie axée sur la pratique :
Le Comportement en salle de culture
La Décongélation de cellules
La Culture de cellules adhérentes
La Culture de cellules en suspension
La Congélation de cellules
La mise en évidence des problèmes liées à de mauvaises
manipulations
PEDAGOGIE
Cette formation présente des aspects théoriques et des aspects
pratiques.
Elle met en application directe la théorie exposée. Elle utilise une
pédagogie active qui fait appel à la création de binômes pour
chaque cycle de formation.
Une démonstration est réalisée par l’intervenant et est suivie par
la mise en situation successive de chacun des membres du
binôme. Le nombre réduit (4 personnes) par cycle de formation
permet une optimisation du suivi de chaque participant.
Intervenants
- Marc MEICHENIN : Docteur en Biologie
- Laurent FRUCHARD : Ingénieur Qualiticien
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