BD Pseudomonas Agar P

MODE D'EMPLOI –
MILIEUX EN BOITES DE
PETRI PRETS A L'EMPLOI
PA-257018.02
Rev.: June 2003
BD Pseudomonas Agar P
APPLICATION
La BD Pseudomonas Agar P (Gélose Pseudomonas P) est utilisée pour différencier
Pseudomonas aeruginosa des autres pseudomonas sur la base de leur production de
pyocyanine.
PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE
Méthode microbiologique.
La BD Pseudomonas Agar P, basée sur la préparation décrite par King, Ward et Raney, a été
modifiée afin de satisfaire aux spécifications de la pharmacopée américaine (USP).1,2
Dans la BD Pseudomonas Agar P, la peptone Bacto apporte le carbone et l'azote nécessaires
à la croissance bactérienne. L'ajout de chlorure de magnésium et de sulfate de potassium
favorise la production de pyocyanine, et inhibe la formation de fluorescéine. Les colonies de
Pseudomonas diffusent ces deux pigments dans le milieu de croissance. Certaines souches de
Pseudomonas génèrent les deux pigments, tandis que d'autres n'en génèrent qu'un. Dans ce
milieu, la pyocyanine apparaît en bleu. Le glycérol constitue une source d'énergie et accélère la
production de pyocyanine.
La Pseudomonas Agar P est citée dans le BAM (Bacteriological Analytical Manual) de la FDA.3
Cette gélose n'est pas conçue pour servir de milieu d'isolement des pathogènes à partir
d'échantillons cliniques, mais il est possible de l'utiliser pour différencier des isolats obtenus à
partir d'échantillons cliniques mis en culture sur d'autres milieux.
REACTIFS
BD Pseudomonas Agar P
Formule* par litre d'eau purifiée
Peptone Bacto
20,0 g
Chlorure de magnésium
1,4
Sulfate de potassium
10,0
Glycérol
10,0
Gélose Bacto
15,0
pH 7,0 ± 0,2
*Ajustée et/ou complémentée en fonction des critères de performances imposés.
PRECAUTIONS
. A usage professionnel uniquement.
Ne pas utiliser de boîte de Pétri présentant des signes de contamination microbienne,
décoloration, dessiccation ou fissure, ou d’autres signes de détérioration.
Consulter le document MODE D'EMPLOI GENERAL pour plus d'informations concernant les
procédures de manipulation aseptique, les risques biologiques et l'élimination des produits
usagés.
STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION
Dès réception, conserver les boîtes de Pétri dans l’obscurité entre 2 et 8 °C, dans leur
emballage d’origine, jusqu’au moment de leur utilisation. Ne pas les congeler ni les surchauffer.
Les boîtes peuvent être ensemencées jusqu'à la date de péremption indiquée (voir l'étiquette de
l'emballage), et incubées pendant les durées recommandées.
Des boîtes provenant d’une pile ouverte de 10 boîtes sont utilisables pour une semaine
lorsqu’elles sont conservées entre +2 et +8 °C dans un endroit propre.
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CONTROLE DE QUALITE PAR L'UTILISATEUR
Ensemencer des échantillons représentatifs avec les souches suivantes (pour plus
d'informations, voir le document MODE D'EMPLOI GENERAL). Incuber à 35 ± 2 °pendant 18 à
24 h. Rechercher la croissance et examiner les colonies à l'aide d'une source lumineuse à
rayons ultraviolets de 254 à 260 nm (lampe de Wood).4
Souche de test
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ou ATCC
9027
Burkholderia cepacia ATCC 25416
Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637
Escherichia coli ATCC 25922
Sans ensemencement
Croissance
Colonies bleu-vert, pigment verdâtre se répandant
dans le milieu situé en périphérie ; fluorescence
sous lumière UV
Colonies beiges à vert clair ; aucun pigment ;
aucune fluorescence sous lumière UV
Colonies beiges ; aucun pigment ; aucune
fluorescence sous lumière UV
Colonies beiges ; aucun pigment ; aucune
fluorescence sous lumière UV
Légèrement à moyennement ambré, légère
opalescence
METHODE
Matériaux fournis
BD Pseudomonas Agar P (boîtes de Pétri Stacker de 90 mm). Produits contrôlés
microbiologiquement.
Matériaux non fournis
Milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.
Types d'échantillons
La BD Pseudomonas Agar P n'est pas conçue pour être utilisée comme milieu d'isolement de
P. aeruginosa à partir d'échantillons cliniques, mais elle peut l'être pour différencier les isolats
obtenus à partir d'échantillons clinique ou de matières non cliniques mis en culture dans d'autres
milieux (voir aussi CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA
PROCEDURE).
Mode opératoire du test
1. Prélever l'inoculum à partir d'une culture pure âgée de 18 à 24 h de la souche de test.
2. Ensemencer les boîtes de Pétri en striant l'inoculum sur la surface.
3. Incuber à 35 ± 2 °C pendant 18 à 24 h.
Résultats
Rechercher la croissance et examiner les colonies à l'aide d'une source lumineuse à rayons
ultraviolets de 254 à 260 nm (lampe de Wood).4 Prendre des précautions lors de la manipulation
de la source lumineuse à rayons ultraviolets, car elle peut avoir un effet bactéricide. Veiller à ce
que le niveau de croissance soit suffisant avant de placer la culture sous lumière UV.
L'apparition d'un pigment bleu qui se diffuse dans la gélose indique un résultat positif.
CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE
La BD Pseudomonas Agar P est un milieu standard servant différencier Pseudomonas
aeruginosa des autres pseudomonas et microorganismes associés, sur la base de leur
production de pyocyanine. Ce milieu ne doit pas servir de milieu d'isolement, mais il est utilisé
avec des cultures pures de souches isolées à partir de matériaux cliniques et non cliniques.2-4
Une modification sélective de ce milieu, la BD Pseudomonas Isolation Agar, peut être utilisée
pour l'isolement et la différenciation.
Parfois, une culture de Pseudomonas ne produit qu'une faible quantité de pigment sur BD
Pseudomonas Agar P. Dans un tel cas, une couleur bleu-vert apparaît sur le milieu. Pour
confirmer la présence de pyocyanine, il faut alors procéder par extraction au chloroforme
(CHCl3).4
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La formation de colonies non pigmentées n'exclut pas complètement la présence d'un isolat de
Pseudomonas aeruginosa. Par conséquent, les colonies non pigmentées présentes dans ce
milieu doivent faire l'objet d'une identification biochimique complète.5
En général, une souche de Pseudomonas productrice de pyocyanine produit aussi de la
fluorescéine. Elle doit, par conséquent, être différenciée des autres pseudomonas fluorescents
simples par d'autres méthodes. La température d'incubation peut être un facteur déterminant,
car la majorité des autres souches fluorescentes ne se développent pas à 35 °C mais davantage
entre 25 et 30 °C.4
REFERENCES
1. King, E. O., M. K. Ward, and D. E. Raney. 1954. Two simple media for the demonstration of
pyocyanin and fluorescein. J. Lab. Clin. Med. 44:301.
2. The United States Pharmacopeia. 1995. The United States Pharmacopeia, 23rd ed. United
States Pharmacopeial Convention, Rockville, MD, USA.
3. Bacteriological Analytical Manual, 8th edition, Revision A. 1998. AOAC International,
Gaithersburg, MD, USA.
4. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification- maintenance of medical
bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, USA.
5. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003.
Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
CONDITIONNEMENT
BD Pseudomonas Agar P
No réf. 257018
Milieux en boîtes de Pétri prêts à l'emploi, 20 unités par carton
INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES
Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
BD Diagnostic Systems Europe
Becton Dickinson France SA
11 rue Aristide Bergès
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292
http://www.bd.com
BD, BD logo and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company
Bacto is a trademark of Difco Laboratories, division of Becton, Dickinson and Company
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
 2003 Becton, Dickinson and Company
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