LaSIPS : APPEL A PROJETS EXPLORATOIRES 2012 PS : APPEL A
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LaSIPS : APPEL A PROJETS EXPLORATOIRES 2012 PS : APPEL A
LaSI PS : APPEL A PROJETS EXPLORATOIRES 2012 IMP_CELL : Puce instrumentée pour la mesure en temps réel de la bioimpédance de cellules électroperméabilisées – application au contrôle de l’électrofusion Coordinateur : Bruno Le Pioufle, CNRS SATIE – UMR 8029, ENS de Cachan, [email protected] Résumé du Projet: Le projet proposé concerne l’établissement d’un modèle électrique et thermique de cellules électroperméabilisées par un champ électrique impulsionnel. Le modèle caractérisera l’évolution de la bioimpédance d’une cellule, pendant et après l’excitation impulsionnelle de champ. Une puce microfluidique sera réalisée pour confronter le modèle théorique aux mesures d’impédance qui seront effectuée en temps réel sur la puce instrumentée à cet effet. En particulier nous appliquerons le savoir-faire issu de cette étude pour le suivi électrique en temps réel de l’électrofusion cellulaire. Une simulation par éléments finis couplant les phénomènes électriques et thermiques corroborera théorie et expérimentation. Ce projet est à la conjonction de savoir-faire en Biologie, en Génie-Electrique et en Nanotechnologie. L'électrofusion de cellules est considérée comme une voie extrêmement prometteuse pour le développement de nouveaux vaccins anticancéreux mais reste encore un processus physiologique mal maîtrisé et dont la compréhension reste un sujet à controverse. Le défi est de contrôler de manière fiable et reproductible la fusion des membranes de deux cellules par l’application d’un champ électrique extérieur, afin de combiner les fonctions de deux cellules (par exemple dans le cas d’un vaccin anti-cancéreux, fusion entre une cellule cancéreuse, porteuse d’antigènes spécifiques, et une cellule dendritique, ayant la capacité de présenter ces antigènes au système immunitaire). Traditionnellement, les effets du champ électrique sur les cellules sont étudiés en considérant un champ électrique uniforme, ce qui simplifie les hypothèses et permet, dans le cadre de l’électroperméabilisation d’appliquer l’équation de Schwann pour évaluer le niveau de champ électrique à appliquer en vue d’une électrofusion par exemple. Dans le cas d’un dispositif microfluidique dédié à l’électrofusion, cette hypothèse n’est plus valable car des forts gradients de champ sont créés pour la capture et la mise en contact des cellules à fusionner. Puce à cellules pour l’électroperméabilisation . A gauche : vue du banc expérimental, la puce est disposée sous un microscope epifluorescence et connectée au générateur d’impulsions . A droite : vue rapprochée de la puce et de ses connections microfluidiques 1 LaSI PS : APPEL A PROJETS EXPLORATOIRES 2012 Le projet IMPCELL propose de mettre en place un modèle électrique pour décrire le comportement de cellules isolées, appariées et soumises à des impulsions de champ électrique. Le modèle doit à terme permettre de prédire et caractériser le niveau d’électroperméabilisation des cellules soumises aux impulsions de champ. Dans le cadre de ce projet LaSiPS, un prototype de biopuce pour la fusion cellulaire sera conçu et fabriqué afin de valider l’approche proposée. Nous souhaitons intégrer sur ce microdispositif les fonctions qui permettront de suivre l’impédance électrique des cellules en temps réel pendant et après les impulsions d’électroperméabilisation, et d’électrofusion. Les modèles de bioimpédance proposés ci dessus seront confrontés aux résultats expérimentaux issus d’expériences de fusion qui seront réalisées sur biopuces. On cherchera à corréler l’évolution en temps réel de l’impédance cellulaire avec l’observation de l’état biologique des cellules pendant et après la fusion, caractérisés par marquage et visualisation par microscopie de fluorescence. Puce pour l’électrofusion de cellules A gauche : capture microfluidique de cellule avant fusion. A droite : modèle d’impédance cellulaire tenant compte de l’électroperméabilisation Complémentarité des partenaires : Pour mettre en œuvre ce projet, nous proposons d'allier les compétences pluridisciplinaires (Génie électrique, instrumentation, nanotechnologies et biologie) de trois partenaires de LaSiPS: SATIE-BIOMIS, porteur du projet, spécialiste dans la conception de biopuces à cellules, et de l'analyse de l'interaction entre le champ électrique et les cellules. Ce partenaire développera les aspects modélisation, simulation et définira les géométries des puces. MICRO NANO BIO et Microsystèmes -IEF, qui adossé à la plateforme technologique MINERVE aura en charge la micro/nanofabrication des puces et leur packaging. Il participera conjointement avec le laboratoire Satie au développement d’une instrumentation adaptée. CNRS-VAT à l'Institut Gustave Roussy, apportera son expertise en biologie cellulaire, en particulier sur l'électroperméabilisation cellulaire. 2