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PVE175_P34_36_Vinardell_Cordon.qxd 31/08/12 14:01 Page 34
Fiche technique
Prélèvement du cordon ombilical
et de sang placentaire
Tatiana Vinardell*, Stéphane Maddens**, Florent David***
* DVM, IPSAV, MSc, PhD
Trinity Centre for Bioengineering, Trinity College Dublin, Dublin 2, Ireland
Veterinary Nursing, School of Veterinary Medicine, University College Dublin, Belfield, Dublin 4, Ireland
** PhD, PharmD
Vetbiobank, Campus vétérinaire, 1, avenue Bourgelat, 69280 Marcy L’Étoile, France
*** DVM, MSc, Dipl. ACVS & ECVS, ECVDI Assoc., Dipl. ACVSMR
Large Animal Surgery, Veterinary Clinical Studies, School of Veterinary Medicine, University College Dublin, Belfield, Dublin 4, Ireland.
Les cellules souches néonatales peuvent être obtenues soit à partir du
tissu conjonctif entourant les vaisseaux du cordon ombilical (gelée de
Wharton), soit à partir du sang placentaire à l’intérieur du cordon ombilical
[1, 4]. Si le prélèvement du sang placentaire et celui du cordon ombilical
sont envisagés conjointement lors
d’un même poulinage, le prélèvement
du sang placentaire doit s’effectuer en
premier. Actuellement plusieurs laboratoires européens comme Vetbiobank SAS (Lyon, France) et Protectas
Health (Dublin, Irlande) proposent, de
manière commerciale, un service d’extraction et de mise en culture de cellules souches mésenchymateuses à
partir respectivement de prélèvement
de cordon ombilical ou de sang placentaire. Ces compagnies stockent
plusieurs doses de cellules souches
en vue d’une utilisation future pour
soigner une lésion. Dans seulement
60 % des cas, le sang placentaire
contient des cellules souches mésenchymateuses, ce qui en fait une source
un peu moins intéressante [2]. Dans
cette fiche technique, les différents
types de prélèvements sont décrits
pour une application sur le terrain.
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> Moment de la collecte
Le cordon ombilical et son sang sont
collectés au moment de la mise bas de
la jument. Idéalement, cet acte doit être
effectué par un vétérinaire, en respectant les règles d’asepsie afin d’optimiser la qualité bactériologique du
prélèvement. Comme il est difficile de
prédire le moment exact de la mise bas,
le vétérinaire peut ne pas être sur place
et disponible au moment de la mise
bas, ce qui pourrait gâcher l’opportu-
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Photo 1.
Kit de prélèvement pour cordon ombilical équin. L’utilisation de gants est fortement
recommandée pour limiter la contamination microbienne.
1. Boîte de transport isotherme ; 2. Solution de lavage physiologique ; 3. Container stérile
de transport ; 4. Pince hémostatique ; 5. Bac de lavage ; 6. Scalpel stérile ;
7. Brossette chlorhexidine ; 8. Compresses stériles.
Cliché :Vetbiobank SAS.
nité de collecte de sang placentaire
et/ou de cordon ombilical. Il est donc
important, dans les grosses structures
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d’élevage où il existe du personnel
dédié à la mise bas, qu’un professionnel de l’équipe de poulinage soit formé
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Prélèvement du cordon ombilical et de sang placentaire
2b
2a
Photos 2a et 2b.
Prélèvement de sang placentaire chez une jument lors du poulinage. Le cordon s’est rompu spontanément lors de ce poulinage. Un clamp a été
rapidement placé à l’extrémité du cordon pour aider la tenue du cordon et permettre une meilleure distension de la veine ombilicale
et une récolte du sang placentaire.
Notez que la jument est toujours couchée. Le poulain a été déplacé sur le côté pour pouvoir donner un meilleur accès à l’opérateur. Le site de
ponction est ensuite désinfecté et la veine ombilicale ponctionnée (2a) avec une aiguille directement connectée à une poche de sang contenant
un anticoagulant (2b). La poche de sang est placée en région déclive pour améliorer la récolte.
Clichés : C. Dubois et L.Wime.
par le vétérinaire traitant pour collecter
le cordon et le sang en respectant des
règles d’hygiène de base dans le cas où
le vétérinaire ne puisse pas être
sur place pour effectuer lui-même la
collecte.
répété trois fois [1]. Alternativement,
une solution alcoolisée de chlorhexidine peut être utilisée.
• Cordon ombilical : la portion de cordon ombilical à prélever est désinfectée de la même manière que pour une
ponction de sang placentaire.
> Préparation à la collecte
Dans la majorité des cas, les compagnies qui proposent ce service fournissent un kit de prélèvement qui
contient tous les instruments et
consommables nécessaires à la collecte afin d’optimiser la qualité du
prélèvement (photo 1). Lors de collecte du cordon ombilical et du sang
placentaire, ce dernier est toujours
collecté en premier.
• Sang placentaire : le site de ponction du cordon ombilical est soigneus e m e n t d és i n f e c t é à l ’ a i d e d e
compresses imbibées avec de la chlorhexidine, puis de l’alcool à 70 %.
Chaque nettoyage est réalisé pendant 10 secondes et ce cycle est
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> Prélèvement
Avant de commencer tout type de
prélèvement (sang placentaire ou
cordon ombilical) et si le cordon ne
s’est pas rompu spontanément lors
de la poussée finale, il est conseillé
de laisser tranquille la jument et son
poulain pendant 2 à 3 minutes. En
effet, un transfert significatif de sang
entre la mère/placenta et le nouveauné s’effectue juste après le passage
des hanches du poulain [3]. Il est peu
probable que ce délai de 2 à
3 minutes affecte la qualité des prélèvements de sang placentaire ou de
cordon ombilical. Ce petit laps de
temps permet à l’opérateur de se
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Photo 3.
Prélèvement d’une portion de cordon
ombilical chez une jument lors du
poulinage (même jument que sur les
photos 2a et 2b).
Cliché : C. Dubois et L.Wime.
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Prélèvement du cordon ombilical et de sang placentaire
Photo 5.
Photo 4.
Rinçage abondant de la portion de cordon
ombilical à l’aide d’une solution
physiologique. Cette étape s’effectue hors
du box et l’opérateur qui manipule le
cordon porte une nouvelle paire de gants.
Cliché : C. Dubois et L.Wime.
laver les mains et de se préparer pour
la ou les procédure(s) de collecte.
Sang placentaire
Dans les cas où le cordon ombilical se
rompt spontanément lors du poulinage, il convient de placer un clamp à
l’extrémité rompue pour faciliter la
procédure (maintien sous tension du
cordon et distension de la veine ombilicale) (photos 2a et 2b). Le sang est
collecté à la veine ombilicale à l’aide
d’une seringue héparinée montée sur
une aiguille de gros diamètre (14 à
18 G). Idéalement, une poche de prélèvement de sang placentaire à usage
humain peut être utilisée. Elle
contient déjà un anticoagulant
(citrate phosphate dextrose). Elle doit
être placée en position déclive et massée au fur et à mesure de l’introduction du sang placentaire. Lorsque le
flot sanguin diminue, le cordon peut
être massé à la main.
Cordon ombilical après rinçage avec
la solution saline. À gauche, se trouve
la portion distale du cordon et la zone
nacrée de rupture naturelle est visible
à gauche du clamp. À droite, se trouve
la ligature placée proximalement et qui
reste sur la portion de cordon prélevée.
Le cordon va maintenant pouvoir être
transféré dans le contenant qui renferme
la solution de transport avec des
antibiotiques. Le contenant est ensuite
immédiatement placé dans un réfrigérateur
à 4 ºC pour un stockage jusqu’à
expédition au laboratoire dès que possible.
Cliché : C. Dubois et L.Wime.
Cordon ombilical
Une première ligature ou un clamp (qui
reste sur la portion de cordon prélevée
et au niveau ombilical) est placé(e) à 6
à 8 cm de l’ombilic du poulain, au-dessus de la zone nacrée qui correspond
à la zone naturelle de rupture. Le cordon peut se rompre spontanément lors
du poulinage (ce qui facilite la tâche
car le poulain n’est plus connecté et
donne de l’espace à l’opérateur) ou
l’être manuellement au niveau de la
zone nacrée. Dans le cas d’une hémorragie ombilicale, ce qui est rare
lorsque la rupture s’effectue par étirement au niveau de la zone nacrée, la
mise en place immédiate d’un clamp
ou d’une ligature est recommandée
avant de poursuivre la collecte, car les
réserves sanguines d’un poulain nouveau-né sont limitées.
Une deuxième ligature ou un clamp
(qui reste sur la portion de cordon
prélevée et du côté placentaire) est
placé(e) à 15 à 20 cm de distance du
premier clamp (photo 3). Enfin, une
troisième ligature ou clamp (qui subsiste chez la jument jusqu’à ce
qu’elle délivre son placenta) est
placé(e) 1 ou 2 cm au-dessus de la
précédente pour éviter une hémorragie d’origine placentaire tant que le
placenta n’est pas expulsé. Un scalpel à usage unique est utilisé pour
séparer la portion de cordon ombilical à prélever entre les deux dernières ligatures ou clamps placé(e)s.
> Devenir des prélèvements
Les étapes suivantes sont réalisées
en dehors du box.
La portion du cordon ombilical prélevé
est nettoyée par trois lavages successifs au minimum avec une solution
isotonique stérile de NaCl 0,9 % (photos 4 et 5). Ensuite, le cordon est
placé intact avec ses clamps ou ligatures dans un conteneur adapté pour
le conditionnement et le transport des
tissus/organes. Ce conteneur contient
un liquide de transport physiologique
additionné d’un cocktail d’antibiotiques (pénicilline 100 UI/ml, streptomycine 0,1 mg/ml, amphotéricine B
0,25 µg/ml et gentamicine 0,1 mg/ml)
dont le spectre d’action est adapté au
microbisme ambiant [4].
Dans les cas où le prélèvement de
sang placentaire est également effectué, la seringue ou la poche contenant le sang placentaire et le
conteneur avec le cordon ombilical
sont placés dans un réfrigérateur à
4 °C pour minimiser le développement bactérien jusqu’à expédition du
prélèvement au laboratoire. L’expédition a lieu dès le lendemain matin ou
le même jour, si le poulinage se passe
en journée. Le laboratoire va traiter le
prélèvement et en extraire les cellules
souches mésenchymateuses de cordon et/ou de sang placentaire.
Références
1 - Bartholomew S, Owens SD, Ferraro GL
et coll. Collection of equine cord blood and
placental tissues in 40 thoroughbred mares.
Equine Vet. J. 2009;41:724-728.
2 - Bieback K, Kluter H. Mesenchymal
stromal cells from umbilical cord blood.
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Current stem cell research & therapy.
2007;2:310-323.
3 - Rossdale PD, Mahaffey LW. Parturition
in the Thoroughbred mare with particular
reference to blood deprivation in the
newborn. Vet. Rec. 1958;70:142-152.
- P r a t i q u e
V é t é r i n a i r e
4 - Toupadakis CA, Wong A, Genetos DC
et coll. Comparison of the osteogenic
potential of equine mesenchymal stem cells
from bone marrow, adipose tissue,
umbilical cord blood, and umbilical cord
tissue. Am. J. Vet. Res. 2010;71:1237-1245.
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