conseil oleicole international

Transcription

COI/T.20/Doc. nº 20/Rév. 2
2008
CONSEIL
OLEICOLE
INTERNATIONAL
FRANÇAIS
Original: ANGLAIS
Príncipe de Vergara, 154 – 28002 Madrid – Espagna Tel.: +34 915 903 638 Fax: +34 915 631 263 - e-mail: [email protected] - http://www.internationaloliveoil.org/
MÉTHODE D’ANALYSE
DÉTERMINATION DE LA DIFFÉRENCE ENTRE LA COMPOSITION RÉELLE
ET THÉORIQUE DES TRIGLYCÉRIDES À ECN 42
1.
Objet
Détermination de la différence entre la composition théorique des triglycérides TG à ECN
42, en terme d’indice d’équivalent carbone 42 (ECN 42théorique), calculée à partir de la
composition en acides gras, et les résultats expérimentaux (ECN42HPLC), obtenus par
analyse directe de l’huile par chromatographie en phase liquide haute performance
(HPLC).
2.
Domaine d'application
La norme s'applique aux huiles d'olive. La méthode vise à détecter la présence de faibles
quantités d'huiles de graines (riches en acide linoléique) dans chaque catégorie d'huile
d'olive.
3.
Principe
La composition des triglycérides à ECN 42 déterminée expérimemtalement par HPLC ou
de façon théorique calculée à partir de la composition en acides gras par chromatographie
en phase gazeuse (CPG) donne dans certaines limites pour l’huile d’olive authentique, des
résultats équivalents. Une différence supérieure aux valeurs adoptées pour chaque catégorie
d’huile indique que l’huile contient des huiles de graines.
4.
Méthode
La méthode permettant de calculer la différence entre la composition théorique et
expérimentale des triglycérides à ECN 42 comprend trois phases :
- Détermination de la composition en acides gras par CPG
- Calcul de la composition théorique des triglycérides à ECN 42 par HPLC.
- Détermination de la composition des triglycérides à ECN 42
COI/T.20/Doc. nº 20/ Rév. 2
page 2
4.1.
Appareillage
4.1.1 Ballons à fond rond de 250 et 500 ml.
4.1.2 Béchers de 100 ml
4.1.3. Colonne en verre pour chromatographie (diamètre intérieur: 21 mm, longueur 450
mm) avec robinet et cône normalisé (femelle) au sommet
4.1.4. Ampoules à décanter de 250 ml avec cône normalisé (mâle) à la base, pouvant
s’adapter au sommet de la colonne
4.1.5.
4.1.6.
4.1.7.
4.1.8.
Baguette en verre de 600 mm de longueur
Entonnoir en verre de 80 mm de diamètre
Ballons tarés de 50 ml
Ballons tarés de 20 ml
4.1.9. Évaporateur rotatif
4.1.10. Chromatographe en phase liquide haute performance, équipé d’un chauffe colonne
thermostatique
4.1.11. Boucles d’injection chromatographique pour 10 µl
4.1.12 Détecteur chromatographique de type réfractomètre différentiel. La sensibilité
pleine échelle doit atteindre au moins 104 unités d’indice de réfraction
4.1.13 Colonne chromatographique d’acier inoxydable de 250 mm de longueur et de 4,5
mm de diamètre interne, rempli de particules de silice de 5 µm de diamètre, avec 22
à 23% de carbone sous forme de greffons octadécyl*
4.1.14 Enregistreur-intégrateur du signal.
*Exemples de colonne :
4.2.
Lichrosorb (Merck) RP18 Art 50333
Lichrosphere ou équivalent (Merck) 100 CH18 Art 50377
Réactifs
Les réactifs doivent être de pureté analytique. Les solvants d'élution doivent être dégazés et
peuvent être recyclés plusieurs fois sans que les séparations n'en soient affectées.
4.2.1. Éther de pétrole 40-60° C pour chromatographie
4.2.2. Éther éthylique, exempt de peroxydes, fraîchement distillé
4.2.3. Solvant d’élution pour la purification de l’huile par chromatographie sur colonne :
mélange d’éther de pétrole/éther éthylique selon les proportions 87 : 13 (v/v)
4.2.4. Gel de silice, granulométrie 70-230, type Merck 7734, hydraté avec 5% d’eau
(m/m)
4.2.5. Laine de verre
page 3
4.2.6. Acétone pour HPLC
4.2.7. Acétonitrile pour HPLC
4.2.8. Solvant d'élution pour HPLC: acétonitrile + acétone (dont les proportions doivent
être ajustées pour obtenir la séparation souhaitée ; commencer avec un mélange
50:50 (v/v) ou propionitrile
4.2.9. Solvant de solubilisation des échantillons : acétone
4.2.10. Triglycérides de référence :
soit des triglycérides que l'on trouve dans le commerce (tripalmitine, trioléine,
etc.) ; les temps de rétention sont alors reportés sur un graphique conformément au
-
4.3.
nombre équivalent de carbone,
soit des chromatogrammes de référence obtenus à partir d'huile de soja, d'un
mélange d'huile de soja et d’huile d'olive 30:70 (v :v) et d'huile d'olive pure (voir
notes 1 et 2 et figures 1, 2, 3, 4).
Préparation des échantillons
Certains composés peuvent provoquer des interférences et donner ainsi des résultats
positifs erronés lors de l’analyse par HPLC. De ce fait, l’échantillon doit toujours être
purifié selon la méthode IUPAC 2.507, utilisée pour la détermination des composés
polaires dans les graisses de friture.
4.3.1. Préparation de la colonne de chromatographie
Remplir la colonne (4.1.3.) avec 30 ml environ de solvant d’élution (4.2.3.) ; introduire
ensuite un tampon de laine de verre (4.2.5.) dans la colonne, l’enfoncer jusqu’au fond de la
colonne au moyen de la baguette en verre (4.1.5.).
Préparer dans un bécher de 100 ml une suspension avec 25 ml de gel de silice (4.2.4.) dans
80 ml de mélange d’élution (4.2.3.) ; la transférer ensuite dans la colonne au moyen d’un
entonnoir en verre (4.1.6.).
Afin que la totalité du gel de silice soit transférée dans la colonne, laver le bécher avec le
mélange d’élution et transférer également le liquide de lavage dans la colonne.
Ouvrir le robinet et laisser le solvant s’écouler jusqu’à ce que son niveau se situe à 1 cm
au-dessus du gel de silice.
page 4
4.3.2. Chromatographie sur colonne
Peser, avec une précision de 0,001g, 2,5 ± 0,1 g d’huile, préalablement filtrée,
homogénéisée et, si nécessaire, déshydratée, dans un ballon taré de 50 ml (4.1.7.). Diluer
dans 20 ml environ de solution d’élution (4.2.3.). Si nécessaire, chauffer légèrement pour
faciliter la dissolution. Refroidir à température ambiante et porter au volume avec du
solvant d’élution.
À l’aide d’une pipette jaugée, introduire 20 ml de solution préparée conformément au point
4.3.1., ouvrir le robinet et éluer le solvant jusqu’au niveau supérieur de la silice dans la
colonne.
Éluer ensuite avec 150 ml de solvant d’élution (4.2.3.), en réglant le débit du solvant à un
débit de 2 ml/min. environ (de telle sorte que 150 ml soient élués en 60-70 min.).
Recueillir l’éluat dans un ballon à fond rond de 250 ml (4.1.1.) préalablement taré et pesé
avec précision. Éliminer le solvant sous pression réduite (Rotavapor) et peser le résidu qui
sera utilisé pour préparer la solution pour l’analyse HPLC et pour la préparation des esters
méthyliques.
Après passage dans la colonne, l’échantillon doit être récupéré au moins à 90% pour les
catégories : huile d’olive vierge extra, huile d’olive vierge courante et huile d’olive
raffinée, et à 80% pour les huiles d’olive vierges lampantes et les huiles de grignons
d’olive.
4.4.
Séparation par HPLC des triglycérides
4.4.1. Préparation de l’échantillon pour l’analyse chromographique
Préparer une solution à 5% de l’échantillon à analyser en pesant 0,5 ± 0,001 g de
l’échantillon dans une fiole jaugée de 10 ml et complétée à 10 ml avec le solvant de
solubilisation (4.2.9.).
4.4.2. Protocole expérimental
Mettre en marche le système chromatographique. Pomper le solvant d'élution (4.2.8.) à un
débit de 1,5 ml/minute de façon à purger l'ensemble du système. Attendre d'avoir une ligne
de base stable. Injecter 10 µl de l’échantillon préparé selon le point 4.3.
page 5
4.4.3. Calcul et expression des résultats : composition expérimentale en triglycérides
Utiliser la méthode de normalisation interne, c'est-à-dire admettre que la somme des aires
des pics correspondant aux triglycérides à ECN compris entre 42 et 52 (inclus) est égale à
100. Calculer le pourcentage relatif de chaque triglycéride selon la formule suivante :
% triglycéride = aire du pic x 100 / somme des aires de tous les pics
Les résultats doivent comporter au moins deux chiffres après la virgule.
Voir notes 1, 2, 3 et 4.
4.5.
Détermination de la composition théorique des triglycerides (moles %) à partir
des données de composition en acides gras (% obtenu par CPG)
4.5.1. Détermination de la composition en acides gras
La composition des acides gras est déterminée selon la méthode ISO 5508 au moyen d’une
colonne capillaire. Les esters méthyliques sont préparés selon la méthode COI/T.20/Doc.
nº 24.
4.5.2. Acides gras intervenant dans le calcul de la composition théorique en TG
Les tryglycérides sont regroupés en fonction de leur nombre équivalent de carbone (ECN),
compte tenu des relations suivantes entre ECN et acides gras. Seuls les acides gras ayant 16
ou 18 atomes de carbone ont été pris en considération, car ce sont les acides gras
majoritaires de l'huile d'olive.
Acide gras (AG)
Acide palmitique
Acide palmitoléique
Acide stéarique
Acide oléique
Acide linoléique
Acide linolénique
Abréviation
P
Po
S
O
L
Ln
Poids moléculaire
(PM)
256,4
254,4
284,5
282,5
280,4
278,4
ECN
16
14
18
16
14
12
page 6
4.5.3. Conversion en moles du pourcentage centésimal de chaque acide gras :
moles P = % aire P
PM P
moles S = % aire S
PM S
moles Po = % aire Po
PM Po
moles O = % aire O
PM O
moles L = % aire L
PM L
moles Ln = % aire Ln
PM Ln
(1)
4.5.4. Composition en acide gras exprimée en moles % (normalisation interne)
moles % P (1,2,3) =
moles P * 100
moles (P +S + Po + O + L + Ln)
moles % S (1,2,3) =
moles S * 100
moles % Po (1,2,3) =
moles Po * 100
moles (P +S+ Po + O + L + Ln)
(2)
moles % O (1,2,3) =
moles O * 100
moles (P +S+ Po + O + L + Ln)
moles % L (1,2,3) =
moles L * 100
moles % Ln (1,2,3) =
moles Ln * 100
Le résultat indique le pourcentage de chaque acide gras exprimé en moles % de l’ensemble
des positions (1,2,3-) des TG.
Calculer alors la somme des acides gras saturés P et S (SAG) et des acides gras insaturés
Po, O, L et Ln (AGI) :
moles % SAG =
moles % P + moles % S
moles % AGI =
100 - moles % SAG.
(3)
page 7
4.5.5. Calcul de la composition des acides gras en positions 2 et 1-3 du glycérol :
Les acides gras sont répartis en trois ensembles de la manière suivante : deux ensembles
identiques pour les positions 1 et 3 et un autre ensemble pour la position 2. Des coefficients
différents sont attribués aux acides gras saturés (P et S) et aux acides gras insaturés (Po, O,
L et Ln).
4.5.5.1. Acides gras saturés en position 2 [P(2) et S(2)] du glycérol :
moles % P (2)
= moles % P (1,2,3) * 0,06
moles % S (2)
= moles % S (1,2,3) * 0,06
(4)
4.5.5.2. Acides gras insaturés en position 2 [(Po(2), O(2), L(2) et Ln(2)] du glycérol :
moles % Po (2) =
moles % Po (1,2,3)
* (100 - moles % P (2) - moles % S (2)
moles % UFA
moles % O (2)
=
moles % O (1,2,3)
* (100 - moles % P (2) - moles % S (2)
moles % UFA
moles % L (2)
moles % L (1,2,3)
=
* (100 - moles % P (2) - moles % S (2)
moles % UFA
(5)
moles % Ln (2) =
moles % Ln (1,2,3)
* (100 - moles % P (2) - moles % S (2)
moles % UFA
4.5.5.3 Acides gras en positions 1 et 3 [(P(1,3), S(1,3), Po(1,3), O(1,3), L(1,3) et
Ln(1,3)] du glycérol :
moles % P(1,3) =
moles % P(1,2,3) - moles % P(2)
+ moles % P(1,2,3)
2
moles % S(1,3) =
moles % S(1,2,3) - moles % S(2)
+ moles % S(1,2,3)
2
moles % Po(1,3) =
moles % Po(1,2,3) - moles % Po(2)
+ moles % Po(1,2,3)
2
(6)
page 8
moles % O(1,3) =
moles % O(1,2,3) - moles % O(2)
+ moles % O(1,2,3)
2
moles % L(1,3)
moles % L(1,2,3) - moles % L(2)
+ moles % L(1,2,3)
2
=
moles % Ln(1,3) =
(6)
moles % Ln(1,2,3) - moles % Ln(2)
+ moles % Ln(1,2,3)
2
4.5.6. Calcul du pourcentage en moles des différents types de triglycérides
4.5.6.1. TG avec un acide gras (AAA, ici LLL, PoPoPo)
moles % AAA
=
moles % A(1,3) * moles % A(2) * moles % A(1,3)
10.000
(7)
4.5.6.2 TG avec deux acides gras (AAB, ici PoPoL, PoLL)
moles % AAB
=
moles % A(1,3) * moles % A(2) * moles % B(1,3) * 2
10.000
(8)
moles % ABA
=
moles % A(1,3) * moles % B(2) * moles % A(1,3)
10.000
4.5.6.3. TG avec trois acides gras différents (ABC, ici OLLn, PLLn, PoOLn, PPoLn)
moles % ABC
=
moles % A(1,3) * moles % B(2) * moles % C(1,3) * 2
10.000
moles % BCA
=
moles % B(1,3) * moles % C(2) * moles % A(1,3) * 2
10.000
moles % CAB
=
moles % C(1,3) * moles % A(2) * moles % B(1,3) * 2
10.000
(9)
page 9
4.5.6.4. Composition théorique des triglycérides à ECN 42
Les triglycérides à ECN42 sont calculés selon les équations 7, 8 et 9, et figurent ci-après
par
ordre
d'élution
attendu
en
HPLC
(on
observe
généralement
trois
pics
chromatographiques seulement).
LLL
PoLL et l’isomère de position LPoL
OLLn et les isomères de position OLnL et LnOL
PoPoL et l'isomère de position PoLPo
PoOLn et les isomères de position OPON ET OLnPo
PLLn et les isomères de position LLnP et LnPL
PoPoPo
SLnLn et l'isomère de position LnSLn
PPoLn et les isomères de position PLnPo et PoPLn
La composition théorique des triglycérides à ECN42 s'obtient en calculant la somme des
neuf glycérides, y compris leurs isomères de position. Les résultats doivent comporter au
moins deux chiffres après la virgule.
5.
Évaluation des résultats
Comparer la composition théorique calculée et celle déterminée par HPLC. Si la différence
entre les « données HPLC moins les données théoriques » est supérieure à la valeur fixée
par la norme en vigueur pour la catégorie d’huile appropriée, l’échantillon contient de
l’huile de graines.
Les résultats de la différence sont exprimés avec un chiffre après la virgule.
6.
Exemple (la numération se réfère aux sections du texte de la méthode)
page 10
- 4.5.1. Calcul des acides gras par le % de moles à partir des données obtenues par
CPG (% centésimal)
On obtient les données suivantes pour la composition en acides gras par CPG :
AG
PM
Centésimal %
P
256,4
10,0
S
284,5
3,0
Po
254,4
1,0
O
282,5
75,0
L
280,4
10,0
Ln
278,4
1,0
- 4.5.3. Conversion du % centésimal en moles pour tous les acides gras
moles P
=
10
= 0,03900 moles P
256,4
moles S
=
3
= 0,01054 moles S
284,5
moles Po =
1
= 0,00393 moles Po
254,4
voir formule (1)
moles O
=
75
= 0,26549 moles O
282,5
moles L
=
10
= 0,03566 moles L
280,4
moles Ln
=
1
= 0,003594 moles Ln
278,4
Total
=
0,35822 moles TG
- 4.5.4. Composition en acides gras exprimée en moles % (normalisation interne)
moles % P(1,2,3)
=
0,03900 moles P *100
= 10,888%
0,35822 moles
moles % S(1,2,3)
=
0,01054 moles S *100
= 2,944%
0,35822 moles
page 11
0,00393 moles Po *100
= 1,097%
0,35822 moles
moles % Po(1,2,3) =
voir formule (2)
moles % O(1,2,3) =
0,26549 moles O *100
= 74,113%
0,35822 moles
moles % L(1,2,3)
0,03566 moles L *100
= 9,956%
0,35822 moles
=
moles % Ln(1,2,3) =
Total moles %
=
0,00359 moles Ln *100
= 1,003%
0,35822 moles
100,0%
Somme des acides gras saturés et insaturés dans les positions 1,2 et 3 du glycérol :
moles % SAG
moles % AGI
= 10,888% + 2,944%
= 100,000% - 13,831%
=
=
13,831%
86,169%
voir formule (3)
- 4.5.5. Calcul de la composition en acides gras dans les positions 2 et 1-3 du glycérol
- 4.5.5.1. Acides gras saturés en position 2 [P(2) et S(2)]
moles % P(2)
moles % S(2)
= 10,888% * 0,06 =
= 2,944% * 0,06 =
0,653 moles %
0,177 moles %
voir formule (4)
- 4.5.5.2. Acides gras insaturés en positions 2 [Po(2), O(2) L(2) et Ln(2)]
moles % Po(2)
=
1,097%
* (100--0,659-0,177) = 1,263 moles %
86,169%
moles % O(2)
=
74,113%
* (100--0,659-0,177) = 85,295 moles %
86,169%
voir formule (5)
moles % L(2)
=
9,956%
* (100--0,659-0,177) = 11,458 moles %
86,169%
moles % Ln(2)
=
1,003%
* (100--0,659-0,177) = 1,154 moles %
86,169%
page 12
- 4.5.5.3. Acides gras en position 5, 1 et 3 [P(1,3), S(1,3),Po(1,3), O(1,3, L(1,3) et Ln(1,3)]
moles % P(1,3)
=
10,888 - 0,659
+ 10,888 = 16,005 moles %
2
moles % S(1,3)
=
2,944 - 0,177
+ 2,944
2
= 4,327 moles %
1,097 - 1,263
+ 1,097
2
= 1,015 moles %
moles % Po(1,3) =
voir formule (6)
moles % 0(1,3)
74,113 - 85,295
=
+ 74,113 = 68,522 moles %
2
moles % L(1,3)
=
moles % Ln(1,3) =
9,956 - 11,458
+ 9,956
2
= 9,205 moles %
1,003 - 1154
,
+ 1,003
2
= 0,927 moles%
- 4.5.6. Calcul de la compositiom théorique des triglycérides à ECN 42
À partir de la composition calculée en acides gras dans les positions sn-2 et sn-1,3 :
AG en
P
S
Po
O
L
Ln
Total
position 1,3
16,005%
4,327%
1,015%
68,522%
9,205%
0,927%
100,0%
position 2
0,653%
0,177%
1,263%
85,295%
11,458%
1,154%
100,0%
calculer les triglycerides suivants:
LLL
PoPoPo
PoLL avec 1 isomère de position
SLnLn avec 1 isomère de position
PoPoL avec 1 isomère de position
page 13
PPoLn
OLLn
PLLn
PoOLn
avec 2 isomères de position
- 4.5.6.1 TG avec un acide gras (LLL, PoPoPo)
moles%LLL
=
moles%PoPoPo =
voir formule (7)
9,205% * 11,458% * 9,205%
10.000
=
0,09708 mol LLL
1,015% * 1,263% * 1,015%
10.000
=
0,00013 mol PoPoPo
- 4.5.6.2 TG avec deux acides gras (PoLL, SLnLn, PoPoL)
moles%PoLL+LLPo
=
moles%LPoL
=
voir formule (8)
1,015% * 11,458% * 9,205% * 2
=
10.000
9,205% * 1,263% * 9,205%
10.000
=
0,02141
0,01070
0,03211 mol PoLL
moles%SLnLn+LnLnS =
moles%LnSLn
=
4,327% * 1,154% * 0,927% * 2
10.000
=
0,00093
0,927% * 0,177% * 0,927%
10.000
=
0,00002
0,00095 mol SLnLn
moles%PoPoL+LPoPo =
1,015% * 1,263% * 9,205% * 2
=
10.000
0,00236
moles%PoLPo
1,015% * 11,458% * 1,015%
10.000
0,00118
=
=
0,00354 mol PoPoL
page 14
- 4.5.6.3 TG avec trois acides gras différents (PoPLn, OLLn, PLLn, PoOLn)
moles%PPoLn
=
16,005% * 1,263% * 0,927% * 2
= 0,00375
10.000
moles%LnPPo
=
0,927% * 0,653% * 1,015% * 2
10.000
=
0,00012
moles%PoLnP
=
1,015% * 1154%
,
* 16,005% * 2
10.000
=
0,00375
0,00762
moles%OLLn
=
68,522% * 11,458% * 0,927% * 2
=
10.000
0,14577
moles%LnOL
=
0,927% * 85,295% * 9,205% * 2
=
10.000
0,14577
moles%LLnO
=
9,205% * 1,154% * 68,522% * 2
=
10.000
0,14577
0,43671
moles%PLLn
=
16,005% * 11,458% * 0,927% * 2
=
10.000
0,03400
moles%LnPL
=
0,927% * 0,653% * 9,205% * 2
10.000
=
0,00111
moles%LLnP
=
9,205% * 1,154% * 16,005% * 2
=
10.000
0,03400
0,06911
moles%PoOLn
=
moles%LnPoO
=
moles%OLnPo
=
1,015% * 85,295% * 0,927% * 2
=
10.000
0,927% * 1,263% * 68,522% * 2
=
10.000
68,522% * 1154%
,
* 1,015% * 2
=
10.000
Composition théorique des TG à
ECN42 =
voir formule (9)
mol PPoLn
mol OLLn
mol PLLn
0,01605
0,01605
0,01605
0,04815
mol PoOLn
0,69540
mol TG
page 15
Note 1 : l'ordre d'élution peut être déterminé en calculant le nombre équivalent de carbone,
souvent défini par la relation ECN = CN - 2n, dans laquelle CN est le nombre de carbone et
n le nombre de doubles liaisons ; il peut être calculé de manière plus précise en tenant
compte de l'origine de la double liaison. Si n0, nl et nln sont les nombres de doubles liaisons
attribuées respectivement aux acides oléique, linoléique et linolénique, le nombre
équivalent de carbone peut être calculé selon la formule suivante :
ECN = CN - dono- dlnl – dlnnln,
dans laquelle les coefficients do, dl et dln sont calculés à partir des triglycérides de
référence. Dans les conditions énoncées dans cette méthode, la relation obtenue est voisine
de :
ECN = CN - (2,60 no) - (2,35 nl) - (2,17 nln)
Note 2 : Avec plusieurs triglycérides de référence, il est également possible de calculer la
résolution d’un triglycéride par rapport à la trioléine :
α = TR' / TR de trioléine
en utilisant le temps de rétention réduit TR' du soluté = TR de soluté - TR du solvant.
Le graphique représentant le logarithme α en fonction de f (nombre de doubles liaisons)
permet de déterminer les valeurs de rétention pour tous les triglycérides des acides gras
contenus dans les triglycérides de référence (voir figure 1).
Note 3 : L'efficacité de la colonne doit permettre de séparer nettement le pic de la
trilinoléine des pics des triglycérides dont le TR est proche. L’élution est effectuée jusqu’au
pic ECN 52.
Note 4: Une mesure correcte des aires de tous les pics à prendre en compte dans la présente
détermination est garantie si la hauteur du deuxième pic correspondant à ECN 50 est égale
à 50 % du maximum de l'échelle.
page 16
Figure 1: Évolution du log α en fonction de f (nombre de doubles liaisons)
Nombre de doubles liaisons
Note: La: acide laurique; My: acide myristique; P: acide palmitique; St: acide stéarique;
O: acide oléique; L: acide linoléique; Ln: acide linolénique.
page 17
Figure 2: Huile de soja
Figure 3: Huile de soja / huile d’olive 30:70
page 18
Figure 4: Huile d’olive
page 19
MARGES DE PRÉCISION DE LA MÉTHODE
1. Analyse des résultats de l’essai collaboratif
Les marges de précision de la méthode figurent dans le tableau ci-après.
L’essai collaboratif proposé par le Secrétariat exécutif en 1999 aux laboratoires
agréés par le Conseil Oléicole International à cette date, a été réalisé par 19 laboratoires de
8 pays.
L’essai a porté sur cinq échantillons:
A:
B:
C:
D:
E:
huile d’olive vierge extra
huile d’olive vierge + huile de tournesol raffinée
huile d’olive vierge + huile de grignons d’olive raffinée
huile d’olive vierge + huile de soja raffinée + huile de tournesol raffinée
huile d’olive raffinée + huile de grignons d’olive raffinée + huile de soja
raffinée + huile d’olive vierge lampante.
L’analyse statistique des résultats de l’essai collaboratif réalisée par le Secrétariat
exécutif du Conseil Oléicole International a suivi les règles établies dans les normes ISO
5725 Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes de mesure; l’examen des
valeurs aberrantes a été réalisé par l’application du test de Cochran et du test de Grubbs sur
les résultats des laboratoires pour chaque détermination (réplicats a et b) et chaque
échantillon.
Le tableau fait état des informations suivantes :
n
Nombre de laboratoires ayant pris part à l’essai
outliers
Nombre de laboratoires aux résultats aberrants
mean
Moyenne des résultats acceptés
r
Valeur sous laquelle est située, avec une probabilité de 95 % , la valeur
absolue de la différence entre deux résultats d’essai individuels
indépendants, obtenus en applicant la même méthode sur un échantillon
identique soumis à l’essai, dans le même laboratoire avec le même opérateur
utilisant le même appareillage et pendant un court intervalle de temps
Sr
Écart-type de répétabilité
RSDr (%)
Coefficient de variation de répétabilité (Sr x 100 / mean)
page 20
R
Valeur sous laquelle est située, avec une probabilité de 95 %, la valeur
absolue de la différence entre deux résultats d’essai individuels obtenus en
applicant la même méthode sur un échantillon identique soumis à l’essai,
dans des laboratoires différents, avec des opérateurs différents utilisant un
appareillage différent
SR
Écart-type de reproductibilité
RSDR (%)
Coefficient de variation de reproductibilité (SR x 100 / mean)
Différence entre la composition réelle et théorique des triglycérides à ECN 42
n
outliers
mean
r
Sr
RSDr (%)
R
SR
RSDR(%)
A
B
C
D
E
19
1
0.04
0.08
0.02
82.24(not sig.)
0.12
0.05
127.56 (not sig.)
19
0
1.66
0.12
0.04
2.77
0.25
0.09
5.42
19
0
0.04
0.09
0.03
76.11(not sig.)
0.16
0.05
132.17(not sig.)
19
0
0.18
0.11
0.04
22.51
0.22
0.08
46.19
19
3
0.82
0.11
0.041
5.07
0.24
0.08
10.85
2. Bibliographie
ISO 5725-1:1994
Exactitude (justesse et fidélité) des résultats et méthodes
de mesure – Partie 1: Principes généraux et définitions
ISO 5725-2: 1994
de mesure – Partie 2: Méthode de base pour la détermination de la répétabilité
et de la reproductibilité d’une méthode de mesure normalisée
ISO 5725-5: 1998
de mesure – Partie 5: Méthodes alternatives pour la détermination de la fidélité
d’une méthode de mesure normalisée
ISO 5725-6:1994
de mesure – Partie 6: Utilisation dans la pratique des valeurs d’exactitude
LOGICIEL

conseil oleicole international

Transcription

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