français - Thermo Fisher Scientific

FRANÇAIS
Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Advanced Testing
Colorant de Schiff acide périodique (PAS) – bleu alcian pH 2,5
Mode d’emploi
Discussion technique
Résultats
Microtome
Effectuer des coupes de 4 à 6 microns.
Fixation
Formol 10%, Pen-Fix de Thermo Scientific ou de Carnoy. Éviter les fixateurs contenant du glutaraldéhyde afin
de prévenir une coloration du fond non-spécifique.
Contrôle de qualité
Une coupe de rein ou de mucine contenant un tissu (comme l’intestin grêle) doit être utilisée.
Mucosubstances acides : bleues
Polysaccharides neutres : magenta
D’autres substances et mélanges cités plus haut peuvent apparaître violets. La couleur peut varier de bleu-violet
à violet.
Noyaux : bleus si l’étape de contre-coloration facultative à l’hématoxyline 7211 est utilisée
Procédure technique
Protocole de coloration standard
1. Déparaffiner et hydrater les coupes à l’eau déminéralisée.
2. Placer les coupes dans la solution de coloration bleu alcian pH 2,5 pendant 30 minutes à température
ambiante.
3. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
4. Placer les coupes dans une solution d’acide périodique pendant 5 minutes à température ambiante.
5. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
6. Colorer les coupes dans un réactif de Schiff pendant 15 minutes.
7. Rincer les coupes sous l’eau tiède du robinet pendant 10 minutes.
8. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
9. Coloration nucléaire facultative :
a. Hématoxyline 7211 pendant 1 minute.
b. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
c. Colorer les coupes dans un réactif bleuissant pendant 1 minute.
d. Rincer les coupes sous l’eau du robinet pendant 1 minute.
10. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
11. Déshydrater les coupes à l’alcool absolu changé deux fois, pendant 1 minute à chaque fois.
12. Eclaircir les coupes dans un agent clarifiant changé trois fois, pendant 1 minute à chaque fois, puis monter.
Protocole de coloration au four à micro-ondes
1. Déparaffiner et hydrater les coupes à l’eau déminéralisée.
2. Placer les coupes dans une jarre de Coplin en plastique, contenant la solution de coloration bleu alcian pH
2,5.
3. Passer au four à micro-ondes pendant 25 secondes à une puissance de 80% afin d’atteindre 60°C.
4. Incuber les coupes 1 minute supplémentaire dans la solution de bleu alcian chauffée.
5. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
6. Placer les coupes dans une solution d’acide périodique pendant 5 minutes à température ambiante.
7. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
8. Placer les coupes dans une jarre de Coplin en plastique, contenant un réactif de Schiff.
9. Passer au four à micro-ondes pendant 25 secondes à une puissance de 80% afin d’atteindre 60°C.
10. Retirer les coupes du four à micro-ondes et agiter la solution pour répartir la température équitablement.
11. Laisser reposer les lames dans la solution chaude pendant 5 minutes supplémentaires.
12. Rincer les coupes sous l’eau tiède du robinet pendant 10 minutes.
13. Coloration nucléaire facultative :
a. Hématoxyline 7211 pendant 1 minute.
b. Rincer les coupes à l’eau déminéralisée, changée plusieurs fois.
c. Colorer les coupes dans un réactif bleuissant pendant 1 minute.
d. Rincer les coupes sous l’eau du robinet pendant 1 minute.
14. Rincer à l’eau déminéralisée.
15. Déshydrater les coupes à l’alcool absolu changé deux fois, pendant 1 minute à chaque fois.
16. Eclaircir les coupes dans un agent clarifiant changé trois fois, pendant 1 minute à chaque fois, puis monter.
Remarques
Il est fortement recommandé de conserver le réactif de Schiff bien fermé au réfrigérateur à 2-8°C dans le
laboratoire. Cela lui garantit une stabilité plus longue. S’il est mal entreposé, le réactif de Schiff peut former un
précipité blanc. La plupart du temps, les petits volumes de précipité blanc n’entraveront pas la performance de la
coloration. Cependant, un volume de précipité blanc plus important peut affaiblir la réaction du colorant de Schiff.
Tous les réactifs des colorants doivent être conservés dans un réfrigérateur à 2-8°C. Les réactifs du colorant bleu
alcian/PAS sont réservés à l’utilisation « In Vitro ». Certains réactifs utilisés dans cette trousse sont considérés
comme toxiques. Pour les informations de santé et de sécurité, référez-vous à la fiche de données de sécurité du
matériau. Tous les réactifs sont stables et ne doivent pas former de précipités dans les conditions d’entreposage
recommandées. Pour de meilleurs résultats, il est recommandé de jeter l’acide périodique et le réactif de Schiff
après utilisation. La solution de coloration bleu alcian pH 2,5 peut être filtrée et réutilisée. Les réactifs utilisés lors
de la technique au four à micro-ondes devront être jetés après utilisation. Tous les colorants entrant dans ces
compositions sont certifiés par la Biological Stain Commission (Commission de la coloration biologique).
Commentaires techniques
Laisser le temps adéquat à une complète déparaffinisation et réhydration des coupes avant de les colorer. Une
réhydratation incomplète peut conduire à une mauvaise coloration avec la solution bleu alcian pH 2,5. Les
fréquences du four à micro-ondes varient selon le modèle ; il est possible de devoir ajuster le niveau de puissance ou la durée pour obtenir les résultats souhaités. La solution de coloration bleu alcian pH 2,5 peut être
utilisée indépendamment pour détecter des mucosubstances acides à la fois carboxylées et sulfatées.
Mode d’action probable
Le bleu alcian réagit aux composants contenant des groupes anioniques comme des mucosubstances et des mucines acides. À un pH de 2,5, les mucosubstances acides à la fois carboxylées et sulfatées se colorent en bleu.
L’acide périodique est utilisé pour oxyder le tissu afin de former des groupes aldéhydes qui sont mis en évidence
par le réactif de Schiff. Le réactif de Schiff va colorer le glycogène et les mucosubstances neutres, ainsi que les
membranes basales, en magenta. Un rinçage à l’eau du robinet développe et intensifie les tons de magenta du
réactif de Schiff. Une contre-coloration peut être utilisée afin d’apporter le détail nucléaire. L’hématoxyline 7211
est recommandée. Cependant, le rouge rapide nucléaire Kernechrot peut être utilisé pour obtenir une coloration
nucléaire rouge.
Références
1. Bancroft, J.D. and Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York,
NY, 1977.
2. Sheehan, D.C. and Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972.
5. Carson, F.L. Histotechnology : A Self-Instructional Text, 2nd Edition. ASCP Press, Chicago, 1997.
Informations de commande
Produit
ContenanceQté.
Kit PAS - bleu alcian
1 Kit
1
87023
Solution de coloration bleu alcian pH 2,5
500 ml
1
88043
Solution d’acide périodique (0,5%)
500 ml
1
88016
Réactif de Schiff
500 ml
1
88017
Hématoxyline 7211 (non incluse dans ce kit) 50 cl
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4/cs.
REF
7211