Richard-Allan Scientific Chromaview: Advanced Testing Periodic

FRANÇAIS
DEUTSCH
Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Coloration avancée
Coloration par l’acide périodique-réactif de Schiff
Mode d’emploi
Discussion technique
Mode d’action probable
Microtomie
Faire des coupes de 4 à 6 microms.
Fixation
Pas de prescriptions spéciales; fixation au formol est adéquate. Le fixateur de Carnoy peut être
utilisé également.
L’acide périodique oxyde différentes fractions de tissu en aldéhydes. Le réactif de Schiff se lie alors avec les
complexes tissus-aldéhydes induits dans sa forme leucodérivée (décolorée). Le rinçage à l’eau retire l’acide
sulfurique, permettant au réactif de Schiff de retrouver sa forme colorée rose.
Procédure technique
Il est fortement recommandé de conserver le réactif de Schiff bien fermé au réfrigérateur à 2-8°C dans le
laboratoire. Cela lui garantit une stabilité plus longue. S’il est mal entreposé, le réactif de Schiff peut former un
précipité blanc. La plupart du temps, les petits volumes de précipité blanc n’entraveront pas la performance de
la coloration.Tous les réactifs de coloration doivent être stockés dans un réfrigérateur a 2-8°C. La contamination causera le Réactif de Schiff de décolorer; il doit être jeté. Les réactifs de coloration par l’acide périodique
de Schiff sont prévus seulement pour l’usage “In Vitro”. Faites référence à la Fiche de Données de Sécurité par
rapport à l’Information de Sante et Sécurité. Tous les réactifs sont stables et ne doivent pas former des agents
précipitant selon des paramètres de stockage ordinaires. La Solution Acide Périodique et le Réactif de Schiff doivent être jetées après l’usage. L’hématoxyline 1 peut être filtrée et réutilisée au besoin. Tous les colorants utilisés
dans ces formulations sont certifiés par la Commission de Coloration Biologique.
Discussion
Protocole de coloration standard
1. Déparaffiner et hydrater les coupes à l’eau déminéralisée.
2. Placer les coupes dans une Solution Acide Périodique pendant 5 minutes a temperature ambiante.
3. Rincer les coupes dans des bains d’eau déminéralisée renouvellée pendant 1 minute.
4. Colorer des sections dans le réactif de Schiff pendant 15 minutes afin de réaliser le contraste désiré.
5. Rincer les coupes dans l’eau du robinet courante et tiède pendant 10 minutes.
6. Colorer les coupes à hématoxyline 1 pendant 1 minute afin de réaliser le contraste désiré.
7. Rincer les coupes dans des bains d’eau déminéralisée pendant 30 secondes.
8. Placer les coupes dans le réactif bleuissant pendant 1 minute.
9. Rincer les coupes dans des bains d’eau déminéralisée pendant 30 secondes.
10. Déshydrater les coupes dans deux bains successifs d’alcool absolu,pendant une miniute chacun.
11. Eclaircir les coupes dans trois bains successifs d’agent clarifiant, pendant 1 minute et monter les.
Protocole de coloration au four à micro-onde.
1. Déparaffiner et hydrater les coupes à l’eau déminéralisée.
2. Placer les coupes dans une Solution Acide Périodique pendant 5 minutes a temperature ambiante.
3. Rincer les coupes dans des bains d’eau déminéralisée renouvellée pendant 1 minute.
4. Placer les coupes dans une jarre Coplin plastique contenant le réactif de Schiff.
5. Passer les coupes au micro-onde puissance forte pendant 30 secondes afin de maintenir une temperature
de 30°C.
6. Retirer les coupes du micro-onde et agiter la solution pour équilibrer la temperature. Permettre aux coupes
de rester dans une solution chaude pendant 5 minutes de plus.
7. Rincer les coupes dans l’eau du robinet courante et tiede pendant 10 minutes.
8. Colorer les coupes avec l’ en hématoxyline 1 pendant 1 minute.
9. Rincer les coupes dans des bains d’eau déminéralisée pendant 30 secondes.
10. Placer les coupes dans le réactif bleuissant pendant 1 minute.
11. Rincer les coupes dans des bains d’eau déminéralisée pendant 1 minute.
12. Déshydrater les coupes dans deux bains successifs d’alcool absolu,pendant une miniute chacun.
13. Eclaircir les coupes dans trois bains successifs d’agent clarifiant, pendant 1 minute et monter les.
Commentaire technique
Une coloration plus forte est réalisée par la procédure à température ambiante. Les fixateurs de Bouin et Zenker
ont montre les effets défavorables sur les résultats de coloration. Les fréquences de la micro-onde varient d’un
modèle à l’autre. Il peut être nécessaire de régler les niveaux de puissance ou temps afin de réaliser les résultats
désirés.
Références
1. B ancroft, J.D. and Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York,
NY, 1977.
2. Sheehan, D.C. and Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972.
Information de commande
Produit
FormatQté. RÉF
Kit à l’acide périodique de Schiff
1 Kit
1
87007
Solution Acide Périodique (0,5%)
500ml
1
88016
Réactif de Schiff
500ml
1
88017
Hématoxyline 1
500ml
1
88018
Résultats
Glucides, Glycogène, Membranes Basales, Fongus – Magenta
Noyaux – Bleu
Fond – Violet clair
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