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DE L’IDENTIFICATION DES SALMONELLES
APRES INCUBATION DANS LE SOL
A. BAKHROUF1*, A. DHIAF1, N, CHNITY1, M. BAHRI1, F. MECHERGUI1 ET A. SAID1.
1
Laboratoire d’Analyse et de Contrôle des Polluants Chimiques et Microbiologiques. Ministère de la Recherche
Scientifique et de la Technologie. Faculté de Pharmacie de Monastir 5000 Monastir Tunisie.
Laboratoire de Recherche en Microbiologie et Santé. Hôpital de circonscription de Ksour Essef. Ministère de la
Santé Publique Tunisie.
* Auteur correspondant
RESUME
ABSTRACT
Nous avons essayé au cours de ce travail d'étudier
le devenir de Salmonella dans le sol. Les modifications des caractères biochimiques et culturaux des
souches atypiques obtenues ont été suivies.
Nous nous sommes intéressés notamment aux
formes données par les salmonelles stressées ainsi
qu’à celles obtenues au cours de la reviviscence des
cellules stressées dans du bouillon nutritif.
Nous avons pu trouver que la b galactosidase (b
gal), négative sur des galeries Api 20E chez la
souche initiale, devient positive après deux
semaines d'incubation des cellules dans le sol. Les
cellules stressées deviennent également capables de
produire l’acétoïne à partir du glucose. La lysine
décarboxylase, positive chez la souche initiale,
devient négative. Ces modifications s'avèrent réversibles et dépendent des conditions de culture des
bactéries. En effet, l'incubation dans le bouillon
nutritif pendant quatre semaines des cellules
modifiées, stressées pendant six mois, leur permet
de reverser vers des formes normales.
Un travail mené simultanément pour rechercher
les salmonelles dans les boues résiduaires en dessèchement dans une station de traitement des eaux
domestiques, nous a permis d'isoler des souches de
Salmonella atypiques comparables aux souches
stressées modifiées trouvées au laboratoire. Par des
repiquages successifs dans du bouillon nutritif,
nous avons vérifié ces souches de Salmonella
typiques après une longue période d'incubation et
des repiquages dépassant un mois. Au cours de
cette reviviscence, des souches de salmonelles atypiques ont été obtenues.
Les modifications de caractères observées au cours
de cette étude rendent impossible l’identification
des salmonelles stressées.
We have tried to study the fate of Salmonella strains
in soil. We have looked at their biochemical
modifications during their evolution to dormant
state and during their reviviscence.
The β galactosidase which is negative in the parent
strain became positive after two weeks of cells
starvation in soil. Stressed cells became able to
produce acetoin. Some stressed cells did not
produce the lysine décarboxylase, which is positive
in parent cells. These modifications are reversible
and depend on cultural conditions. Incubation of
stressed cells in nutrient broth for more than four
weeks helped them to reverse to normal forms.
Simultaneous search for atypical Salmonella was
done in dissect sludge of a domestical wastewater
treatment plant and in soil irrigated with treated
water. Atypical strains of Salmonella are found. We
have seen that, after incubation in nutrient broth
for more than four weeks, atypical strains
characters evolved generally to their parental
characters.
All modifications of Salmonella in soil samples can
make their identification very difficult and perhaps
impossible.
Key words: Salmonella, soil, stress, β galactosidase.
Mots clefs : Salmonella, sol, stress, β galactosidase.
A r c h s . I n s t . P a s t e u r T u n i s , 2002, 7 9 (1-4)
35
IDENTIFICATION DES SALMONELLES INCUBEES DANS LE SOL
INTRODUCTION
Les salmonelles sont des entéropathogènes isolées de
différents milieux naturels : eaux douces et marines,
sol(1) denrées alimentaires et milieux hospitaliers :
Plus de 2600 sérovars sont actuellement connus(2).
Ce genre bactérien s’adapte aux stress de l’environnement et donne des formes dormantes viables mais
non cultivables, au niveau du sol(1) et au niveau de
l’eau de mer(3,4,5).
Ce passage doit se faire à la suite de modifications
progressives des caractères culturaux, biochimiques
et morphologiques(4,6) des cellules donnant lieu à des
formes atypiques telles que les formes naines et
rondes, données par Salmonella paratyphi β incubée
dans l’environnement(7).
On a rarement considéré les conséquences de ces
modifications au cours de la recherche des salmonelles dans l’environnement.
Notre travail consiste à incuber des salmonelles dans
du sol non stérile et de suivre les variations des caractères culturaux, biochimiques et morphologiques de
ces bactéries durant une longue période d’incubation.
Cette recherche présente un intérêt appliqué dans la
mesure où la connaissance et la caractérisation de ces
formes intermédiaires aident à les retrouver dans l’environnement, et à éviter les problèmes sanitaires
qu’elles engendrent.
MATERIEL ET METHODES
Milieux de culture utilisés : Les milieux
suivants sont utilisés :
Bouillon nutritif (BN), bouillon sélénite (BS), gélose
nutritive (GN), milieu sélectif des entérobactéries
(ENDO), milieu sélectif Salmonella - Shigella : (SS),
galeries Api 20E (Api System bio-Mérieux)
Sols utilisés : Les sols suivants sont testés :
Sol de jardin non stérile, non planté et exposé au
soleil ; sol de jardin non stérile planté avec l'orge et
exposé au soleil ; sol calcaire non stérile planté de
romarin et exposé au soleil.
Souches utilisées :
- Une souche de Salmonella spp fournie par l’Institut
Pasteur de Tunis; une ré-identification sérotypique
ainsi que biochimique de la souche fournie a été
effectuée.
- Deux souches de Salmonella Arizona (S1 et S2) ont
été isolées à partir de boues résiduaires, étalées
36
dans des bassins exposés au soleil, provenant d’une
station d’épuration des eaux domestiques à boues
activées.
La souche S1 a été isolée à partir de boues résiduaires
exposées pendant trois semaines au soleil, S2 a été
isolée à partir de boues résiduaires exposées pendant
deux semaines au soleil.
Les prélèvements de boues ont été effectués à la surface, à dix heures de matin.
La recherche de Salmonella dans les boues résiduaires a été effectuée après un pré-enrichissement
de vingt quatre heures en bouillon nutritif suivie d’un
enrichissement en bouillon sélénite. L’ensemencement a été fait sur gélose SS, les colonies suspects ont
été testées sur Api 20 E.
Les caractères biochimiques des souches S1 et S2 ont
été suivis en fonction de leur incubation en bouillon
nutritif.
- Une souche de référence ATCC, Salmonella typhimurium a été utilisée pour l’étude de la stabilité des
caractères biochimiques après incubation prolongée en bouillon nutritif.
- Une souche de référence ATCC, Salmonella
Arizona a été utilisée pour l’étude de la stabilité des
caractères biochimiques après incubation prolongée dans différents types de sol.
Préparation des souches pour l’étude de
leur survie :
Les différents types de sol se trouvent à 100 mètres
de la route liant Salacta à Ksour-Essef, à trois kilomètres de la mer.
Le sol calcaire est composé approximativement de
60% de CaCO 3,5 % argile rouge, 8 % silice et 20 %
feuilles et humus de romarin.
Le sol de jardin est composé approximativement de
35 % silice, 60 % argile rouge et d’humus d’herbe.
Les différents types de sol utilisés n’ont été pas stérilisés mais le contrôle de l’absence des salmonelles a
été fait.
La contamination a été faite de la manière suivante :
chaque type de sol a été étalé dans des réservoirs en
plastique d’un m2 de surface et de 20 cm d’épaisseur.
Les cellules bactériennes de Salmonella spp ont été
préalablement ensemencées sur GN et incubées à 37°C
pendant 18 heures puis lavées après centrifugation trois
fois de suite. Le dernier culot a été mis en suspension
dans de l'eau physiologique stérile jusqu'à une densité
A r c h s . I n s t . P a s t e u r T u n i s , 2002
BAKHROUF ET COLL.
de10(6) bactéries/ml. Chaque type de sol a été irrigué
par la suspension bactérienne d’une façon homogène.
Les différents réservoirs ont été exposés aux conditions environnementales du village Salacta.
L’irrigation des réservoirs a été faite seulement à la
tombée de pluie.
Le suivie des caractères biochimiques de Salmonella,
incubée dans différents types de sol, a été réalisé
chaque jour au cours de la première semaine puis
chaque semaine et par la suite chaque mois.
Les prélèvements ont été faits à la surface par raclage
de sol à l’aide de couvercle de boite à Pétrie stérile.
A chaque expérience, cinq échantillons de sol ont été
analysés. La masse moyenne de sol prélevé est de
l’ordre de 30.
Chaque prélèvement de sol de surface est mis en suspension dans 100 ml d’eau physiologique stérile en
présence de quelques gouttes de Tween 80; ce produit facilite le détachement des cellules bactériennes
des particules de sol. Le mélange a été homogénéisé
à l’aide d’un mortier stérile pendant cinq minutes; le
surnageant a été dilué plusieurs fois ensuite étalé sur
milieu SS.
Apres 24 heures d’incubation à 37°C, 10 colonies isolées ont été ensemencées sur des galeries Api 20 E.
La lecture directe des caractères se fait toutes les 24
heures durant une semaine mais les réactions complémentaires ne se font qu’après une semaine.
Etude de l’évolution des caractères
biochimiques des souches (S1 et S2) de
Salmonella Arizona :
Les deux souches de Salmonella Arizona (S1 et S2),
isolées à partir de boues résiduaires, ont été incubées
en bouillon nutritif à température ambiante. Le
renouvellement du milieu d’incubation a été effectué
chaque semaine.
Toutes les deux semaines, on fait ensemencer sur
milieu SS à partir du milieu d’incubation. 20 colonies
bien isolées poussant sur ce milieu ont été utilisées
pour l’étude des caractères biochimiques sur des
galeries Api 20 E.
RESULTATS
Evolution des caractères biochimiques de
salmonella Spp en fonction de son séjour
dans le sol :
L'évolution des caractères biochimiques de la souche
de Salmonella spp a été suivie sur des galeries Api
20E en fonction de son séjour dans différents types
de sol (Tableau I).
Tableau I- Evolution des caractères biochimiques sur Api 20 de Salmonella Spp en fonction de son
séjour dans différents types de sol.
Souche initiale
Après un séjour de cinq
mois dans un sol calcaire
planté de romarin et exposé
au soleil
Après un séjour de six mois
dans un sol de jardin
plantéd’orge et exposé
au soleil
Après un séjour de deux mois
dans un sol de jardin
exposé au soleil
Après un séjour de cinq mois
dans un sol de jardin
exposé au soleil
Sej Api ON
24 à 1sem 24h
(+)
48h
(+)
3j
(+)
1 sem
(+)
24h
(+)
48h
(+)
3j
(+)
4j
(+)
1sem
(+)
24h
48h
3j
4j
1sem
24h
48h
3j
-
AD
+
+
++
+
(-)
+
+
+
+
(-)
(-)
+
+
+
(-)
+
+
LD
+
(-)
(-)
(-)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
(-)
+
+
CIT
+
+
+
+
+
(-)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
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+
HS
+
(-)
(-)
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(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
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+
+
+
+
+
+
+
UR
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
VP
nd
nd
nd
(+)
nd
nd
nd
nd
(-)
nd
nd
nd
nd
(+)
nd
nd
nd
GE
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
-
GL
+
+
+
(-)
(-)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
MA
+
+
+
(-)
(-)
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
IN
+
(-)
(-)
(-)
(-)
+
+
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
+
+
+
SO
+
+
+
+
+
+
+
+
(-)
(-)
+
+
+
+
+
+
+
+
RH
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
SA
(+)
(+)
(+)
-
Abréviations du tableau I et du tableau II:
ON: ortho-nitrophényl-B-D-galacto-pyranoside, AD: arginine dihydrolase, LD: Lysine décarboxylase, CIT: Utilisation du citrate, HS: production
d’hydrogène sulfuré ; UR: urate, VP: production d’acétoine, GE: gélatine, GL: Glucose, MAN: mannitol, INO: inositol, SOR: sorbitol, RHA:
rhamnose, SAC: saccharose, ME: mellifique. Séj Api: Séjour dans les galeries Api 20 E, Séj BN: séjour dans le bouillon nutritif, h: heure, J: jour,
sem: semaine, M: mois, nd: non déterminé, (): caractères modifiés, S1 et S2: souches de Salmonella arizona isolées à partir des boues activitées,
S11 et S12: souches données par S1 après un séjour d’un mois et demi dans le bouillon nutritif, S21 et S22: Souches données par S2 après un
séjour d’un mois et demi dans le bouillon nutritif.
Tome 7 9 (1-4)
37
IDENTIFICATION DES SALMONELLES INCUBEES DANS LE SOL
Evolution des caractères biochimiques de
salmonella Arizona en fonction de son
séjour dans le bouillon nutritif :
Après un séjour de deux semaines dans les différents
types de sol, la souche mère se dissocie en colonies
β gal (+) et colonies β gal (-). La fréquence de cellules
modifiées augmente en fonction du temps
d’incubation des bactéries dans le sol.
Après un séjour de cinq mois dans un sol calcaire
planté de romarin et exposé au soleil, 40 % des
cellules testées de Salmonella spp ont présenté les
caractères biochimiques donnés par le tableau I; 60 %
des cellules ont gardé les caractères biochimiques de
la souche initiale avant son incubation dans le sol.
Après une incubation de six mois dans un sol de
jardin planté d’orge et exposé au soleil, 58 % des
cellules testées ont présenté les caractères
biochimiques donnés par le tableau I; le reste des
cellules ont gardé les caractères biochimiques de la
souche initiale.
Après un séjour de deux mois dans un sol de jardin
exposé au soleil, 85 % des cellules testées ont
présenté les caractères biochimiques donnés par le
tableau I; le reste des cellules ont présenté une
activité β galactosidase positive.
Après un séjour de cinq mois dans un sol de jardin
exposé au soleil, 64 % des cellules testées ont présenté
les caractères biochimiques représentés par le tableau
I; le reste des cellules ont présenté une activité β
galactosidase positive avec dégradation de la gélatine.
Deux souches de Salmonella (S1 et S2), dont l'activité β gal est positive, ont été isolées à partir de boue
résiduaire en dessèchement ; elles sont ensuite mises
dans du bouillon nutritif à 37° C pendant 48 heures
puis à température ambiante. Le suivi des modifications biochimiques des souches au cours de cette
incubation, a été fait durant quatre mois. Les résultats
sont donnés par les Tableaux IIA et IIB.
Tableau IIA- Variation quantitative de colonies β
Gal (+) de Salmonella Arizona (S1 et S2) en fonction de leur incubation en bouillon nutritif.
Période
d’incubation
en BN
(S1) 0 jour
(S1) 2 semaines
(S1) 1.5 mois
(S1) 4.5 mois
(S2) 0 jour
(S2) 1.5 mois
(S2) 3 mois
% de
colonies
β Gal (+)
100
100
70
9
100
100
46
% de
colonies
β Gal (-).
0
0
30
91
0
0
64
Tableau IIB- Evolution des carastères biochimiques sur Api 20E de deux souches de Salmonellesa Arizona
isolées à partir des boues en dessèchement en fonction de la durée d’incubation dans un bouillon nutritif.
Sej
BN
Sej Api
ON
AD
LD
OD
CI
H2
VP
GL
MA
SO
RH
SA
ME
AM
24h
48h
3 j . 1 sem
+
+
+
(-)
+
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
+
+
+
nd
nd
(+)
(-)
(-)
+
(-)
(-)
nd
(-)
(-)
nd
(-)
(-)
nd
nd
(+)
(+)
nd
nd
1,5 M---SI1
24h
48h
3 j . 1 sem
(-)
(-)
+
+
(-)
+
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
+
+
(+)
nd
nd
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
-
+
+
-
1,5 M---SI2
24h
48h
3 j . 1 sem
+
+
+
+
(-)
+
+
(-)
+
+
(-)
+
+
(-)
+
+
(-)
(-)
+
nd
nd
+
+
+
(-)
+
+
(-)
+
+
(-)
+
+
(+)
(+)
-
-
24h
48h
3j
+
+
+
+
(-)
+
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
(-)
nd
nd
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
(+)
(+)
(+)
-
(+)
-
3 M---S21
24h
48h
3 j . 1 sem
+
+
+
+
(-)
+
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
+
(-)
(-)
nd
nd
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
(+)
(+)
(+)
-
(+)
-
3 M----S22
24h
+
+
+
+
+
+
(-)
+
+
+
+
(+)
-
(+)
0j--S1
0j---S2
38
A r c h s . I n s t . P a s t e u r T u n i s , 2002
BAKHROUF ET COLL.
Nous avons observé que la souche S1 a donné, au
bout d'un mois et demi, des cellules β gal (-) tandis
que la souche S2 n'a donné des cellules β gal (-)
qu'après trois mois de séjour dans le bouillon nutritif.
Pour S1, le pourcentage de cellules β gal (-) atteint
30 % au bout d'un mois et demi et 91% au bout de
quatre mois et demi d’incubation dans le bouillon
nutritif. Pour S2, il est de 0% au bout d'un mois et
demi et il atteint 64 % au bout de trois mois (Tableau
II A).
Au cours de son séjour dans du sol stérile pendant
cinq mois, S2 garde ses caractères initiaux et n’évoluent pas vers des cellules β gal (-).
Stabilité des caractères
biochimiques de Salmonella
typhimurium ATCC au cours de son
séjour en bouillon nutritif :
Après une incubation de quatre mois en bouillon nutritif, les caractères biochimiques de Salmonella typhimurium ont été conservés sur des galeries Api 20 E.
Stabilité de la β galactosidase de
Salmonella Arizona après incubation
dans les différents types de sol :
La β galactosidase de Salmonella Arizona ATCC a été
conservée après une incubation de trois mois dans le
sol calcaire ainsi que dans le sol de jardin.
DISCUSSION
La détermination de Salmonella se fait généralement
en se basant sur des caractères clefs qui permettent
de la différencier des autres entérobactéries. Il s’agit
de la β galactosidase qui doit être négative chez
toutes les salmonelles sauf chez Salmonella du groupe III ou Arizona. Celle-ci ne présente pas un grand
risque sanitaire.
Ce travail montre que Salmonella β gal (-) donnent,
après incubation dans le sol, des bactéries β gal (+)
qui sont toujours prises pour Salmonella Arizona.
Par ailleurs, nous avons pu voir que ces salmonelles
deviennent Vp (+), c'est à dire qu’elles n’utilisent plus
le glucose par voie acide mixte mais par voie butanediol ce qui les éliminent du genre Salmonella. Ces
résultats concordent bien avec ceux trouvés par
Denden et al. (2000)(8) ; ils ont bien trouvé que
Salmonella typhimurium stressée acquiert une activité β gal , produit l'acétoïne à partir du glucose et
devient également capable de dégrader le saccharoTome 7 9 (1-4)
se. Salmonella, incubée en eau de mer, acquiert également une activité β gal et produit l'acétoïne(9).
Les salmonelles du groupe I ainsi que celles du groupe II sont caractérisées par une activité β galactosidase négative. Cependant, des cas de Salmonella
typhi à β gal positive, ont été signalés au Japon(10). Ils
ont décrit un cas de Salmonella typhi à activité β gal
positive isolée chez un malades souffrant de fièvre
typhoïde.
On a décrit une épidémie au Brésil, au cours de
laquelle deux salmonelles β gal(+) ont été isolées :
Salmonella typhimurium et Salmonella oriemburg,
on a expliqué cette activité par un déterminisme plasmidique(11).
Par ailleurs, plusieurs caractères biochimiques telle
que la lysine décarboxylase qui apparaît après 24
heures chez la souche mère inoculée sur des galeries
Api 20 E, n’apparaissent chez les souches stressées
qu’après des périodes plus longues (Tableaux I et II).
Ceci nous conduit à des résultats faussement négatifs
car la lecture des caractères biochimiques, sur ces
galeries, se fait selon la recommandation des fabricants, après 24 à 48 heures d’incubation à 37°C.
On a rarement considéré les conséquences de ces
modifications sur le plan appliqué, par exemple sur
l'identification des bactéries pathogènes provenant
du sol, de l'eau ou des denrées alimentaires et sur
leur pouvoir pathogène. La dérive progressive des
caractères culturaux et métaboliques de salmonelles
dans le sol concerne ici certaines propriétés phénotypiques qui jouent un rôle clef pour la recherche et
l'identification des salmonelles dans le sol. C'est le cas
de la production de la β galactosidase et à moindre
titre la production d'acétoïne qui sont considérés
absentes chez Salmonella du groupe I et II(12). Sur les
galeries Api 20 E, les codes correspondants aux
souches de Salmonella stressées dans le sol les éliminent du genre Salmonella du groupe I et II sur la
base du seul caractère production d'acétoïne positive.
Cette production d'acétoïne pourrait être liée à la
modification transitoire de certains mécanismes qui
permettent la synthèse ou le catabolisme de l'acétoïne ou du 2-3 butane-diol conduisant à l'accumulation
de l'acétoïne jusqu'à un niveau décelable par la réaction de Voges-Proskauer (Juni et Heym , 1956).
L'apparition de l'activité β galactosidase permet de
classer les souches de Salmonella du groupe I et II
39
IDENTIFICATION DES SALMONELLES INCUBEES DANS LE SOL
étudiées dans le groupe III des Salmonella Arizona
connues pour leur origine environnementale et pour
leur pouvoir pathogène très limité pour l'homme.
Il semble, cependant, que ces deux modifications
(production d'acétoïne et de la β galactosidase) soient
provisoires et les souches reversent facilement vers
leur état initial par simple incubation en bouillon
nutritif pendant des périodes plus ou moins longues
(Tableau II). Sur le plan pratique, ces modifications
mêmes transitoires pourraient donc générer des résultats faussement négatifs lors de la recherche et de
l'identification des Salmonella dans le sol.
On a montré que le sérotypage des souches de
Salmonella Arizona du groupe III donne souvent des
réactions croisées avec des salmonelles du groupe I(12).
Ceci peut confirmer nos travaux et nous pouvons
penser que Salmonella Arizona correspond à des salmonelles du groupe I modifiées, puisque la différence essentielle entre les deux groupes est l'activité de
la β galactosidase. Nous avons observé (Tableaux I et
II) que cette activité n'est pas stable et dépend des
conditions de culture externes.
White et Kauffman ont proposé une classification
basée sur les caractères antigéniques, somatiques et
flagellaires, qui aboutit à la caractérisation de variants
sérologiques ou sérovars. Les expériences que nous
avons faites ont montré qu’au cours de la reviviscence des salmonelles stressées, une même espèce de
Salmonella donnent les profils biochimiques de nombreuses espèces (Tableau II). Ceci est en partie
confirmé par l’étude des génomes de différentes
espèces de Salmonella qui à conduit à réduire ce
nombre d’espèces du genre Salmonella en deux
espèces avec des biovars qui correspondraient aux
anciennes espèces(14).
Les techniques classiques pour la recherche des bactéries pathogènes se basent généralement sur la culture en milieux sélectifs, suivie d’une identification
phénotypique (biochimique et sérologique).
Cependant, ces méthodes traditionnelles ne sont pas
très efficaces pour l’identification des germes d’origine environnementale. Les techniques se basant sur
l’identification génétique et moléculaire sont des instruments rapides et efficaces pour la détection et
l’identification des germes d’origine environnementaux(15,16,17).
40
CONCLUSION
Sur le plan pratique, les résultats obtenus montrent
que les techniques classiques peuvent conduire à une
sous-estimation des espèces du groupe I et du groupe
II dans les prélèvements d’échantillons de sol et de
légumes contaminées et ce au cours de la surveillance
et du contrôle sanitaire par des techniques classiques.
Les salmonelles peuvent également évoluer vers des
formes atypiques et dans ce cas, elles ne peuvent pas
être détectées par les méthodes classiques. Ces
formes atypiques peuvent redevenir typiques au bout
d'un mois d'incubation dans le bouillon nutritif à température ambiante ; par suite, elles ne restaurent leurs
activités biochimiques perdues qu'après des périodes
plus ou moins longues d'incubation dans des milieux
de culture artificiels.
REMERCIEMENTS
Nous tenons à remercier Monsieur Tligèni Salah,
Directeur de l’Hôpital de Circonscription de Ksour
Essef, pour son aide et ses encouragements.
REFERENCES
1- P. E Turpin, K. A. May Croft, C. L Rowlands and E.
M. H. Wellington (1993). Viable but non-culturable Salmonella in soil. Journal of applied
Bacteriology, 73, 421-427. Microbioloy, 57, 17771782.
2- T. Ezaki, Y. Kawmura and E. Yabouchi (2000).
Recognition of nomenclatural standing of
Salmonella typhi (Approved list 1980),
Salmonella enteritidis (Approved list 1980) and
Salmonella typhimurium. Request for an opinion, 2000: Department of microbiology, Gofu
university school of Medicine, 40 Tsukasa tsukaomachi, Gifu 500-8705, Japon. International
Journal of systematic and Evolutionary
Microbiology, 50, 945-947.
3- K. Turner, J. Porter, R. Pickup C. and Edwards
(2000). Changes in viability and macromolecular
content of long-term batch cultures of
Salmonella typhimurium measured by flow cytometry. J. Appl. Microbiol., 89, 90-9.
4- D. B. Roszak, Grimes. D. J. and R. R. Crawell
(1984). Viable but non recoverable stage of
Salmonella enteritidis in aquatic systems.
Canadian Journal of Microbilogy, 30, 334-338.
A r c h s . I n s t . P a s t e u r T u n i s , 2002
BAKHROUF ET COLL.
5- G. Bogosian , Morris P. J. L. , and Neil J. P. O.
(1998). A mixed culture recovery methode indicate that enteric bacteria do not enter the viable
but non culturable state. Agriculture sector,
Monsantor Company, Chesterfield, Missouri.
Appl. Microbiol., 64(5), 1736-1742,.
6- K. L. Mattick, F. Jorgensen, J. D. Legn, M.Β. cole,
J., Porter, H. M. Lappin-Scott, and T. J. Humphrey.
(2000). Survival and filamentation of Salmonella
entrica serovar enteritidis PT4 and Salmonella
enterica serovar typhimurium DT 104 at low
water activity. PHLS Food Research Group,
Univirsity of Exeter Ex4 4ps, United Kingdom,
and Nabisco, Inc, East Hanover, New Jersey.
Applied and Environment Microbiology, 666,
1274-1279.
7- A. Bakhrouf, A.Jeddi. M. et M.J. Gauthier (1992).
Modification des caractères culturaux et biochimiques de Salmonella Paratyphi ß après incubation dans l’eau de mer. Canadian Journal
Microbiol., 38, 871-874.
8- I Denden, Bakhrouf A, Mahdouani K, Bouraoui W,
Kilani H. et M. Dhidah (2000). Evaluation de la
contamination bactériologique du sol et des cultures irriguées par les eaux usées traitées. Cahier
de l’Association Scientifique Européenne pour
l’eau et la santé, 5(1), 71 - 84.
Tome 7 9 (1-4)
9- A. Bakhrouf, Zaafrane S., Mzoughi R., Maatoug K.,
MJ. Gauthier (1994). Dérive des caractères phénotypiques des salmonelles provenant de porteurs sains dans l’eau de mer. Marine Life, 4, 3-8.
10- S. Khorbata, Takahashi M. et E. Yabuuchi. (1983).
Lactose-fermenting multiple drugresistant Salmonella Typhi strains isolated from a patient with
post typhoid fever. Journal Microbiology, 18 (1),
920-925.
11- Le Minor, Oynault C. et G. Pessoa. (1974).
Determinisme plasmidique du ceste atypique
(lactose positif) des souches de S. Typhinirium et
riemburg isolées au brésil lors des épidémies de
1971 à 1973. Annales Institut Pasteur, 125 A,
261-285.
12- Le Minor, Buîere J. et G. Brault (1979). Intérêt de
la recherche de la fermentation du galadumnate
pour différencier les salmonella des sous-genres
I et III monophasiques des autres salmonelles
des sous-genres II,III dysprosodiques, IV et de
Citrobater et Hajnia alve. Ann. Microbiol.
Inst.Pasteur, 13 Β, 305-312.
13- E. Juni et G.A. Heym, (1956). A cyclic pathway for
the bacterial dissimulation of 2,3-butadiène, acethylmethycarbinol, and diocèse.’I. The synthesis
of diacetylmethylcarbinol from diacetyl, a new
diphosphothiamin catalyzed reaction. J. Bacteriol.,
72,746-772
41