Pathromtin® SL

Pathromtin® SL
Intended Use and Application
Reagent for the determination of the activated partial thromboplastin time (aPTT)
in citrated human plasma.
Summary and Explanation
Pathromtin SL enables rapid screening for disorders of the intrinsic coagulation
system and sensitively detects Factors VIII and IX as well as the contact factors.
In conjunction with deficient plasmas it enables the individual factors of the intrinsic system to be quantified and permits diagnosis of haemophilia. In addition it can
be used for monitoring heparin therapy1.
The use of the aPTT as a screening test for coagulation disorders is indicated
particularly prior to surgical interventions as this allows potential haemophiliacs to
be diagnosed and given special therapeutic protection.
The presence of non-specific inhibitors such as the lupus-like anticoagulant2, may
prolong the aPTT but this effect is variable and generally recognized as being
related more to the nature of the aPTT reagent employed.
Principle of the Method
Incubation of plasma with the optimal quantity of phospholipids and a surface
activator leads to activation of factors of the intrinsic coagulation system. The
addition of calcium ions triggers the coagulation process; the time to formation of
a fibrin clot is measured.
Reagents
Materials provided
Pack for 8 x 5 ml, Code No. OQGS 23
Pack for 20 x 5 ml, Code No. OQGS 35
Composition
Pathromtin SL: Silicon dioxide particles, vegetable phospholipids, sodium chloride (2.4 g/l), Hepes (14.3 g/l), pH 7.6
Preservative:
Sodium azide (< 1 g/l)
Warnings and Precautions
1. For In Vitro Diagnostic Use.
2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:
Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodium azide can
form explosive azides when contacting heavy metals such as copper or lead!
3. Since absence of infectious agents cannot be proven, all samples (e. g. patient plasma) and products (e. g. standard and control plasma) obtained from
human blood should always be handled with due care, observing the precautions recommended for biohazardous material3.
Preparation of the Reagent
Pathromtin SL must be shaken briefly before first use and is used at room temperature (+15 to +25 °C). If the reagent sediments after a few days the suspension
must be briefly reshaken before use.
Calcium chloride solution 0.025 mol/l: warm to +37 °C.
Storage and Stability
Stored unopened at +2 to +8 °C Pathromtin SL may be used by the date given on the
label. Once opened Pathromtin SL must be used within 2 weeks (store at +2 to +25 °C).
Materials required but not provided
Calcium chloride solution 0.025 mol/l, Code No. ORHO
Standard Human Plasma, Code No. ORKL
Control Plasma N, Code No. ORKE
Control Plasma P, Code No. OUPZ
Pathoplasma I and II, Code Nos. OTXK and OTXL, resp.
timer or automated coagulometer
pipettes
plastic test tubes
Citrated plasma
100 µl
Pathromtin SL
100 µl
Incubate for 2 minutes at 37 °C
Calcium chloride solution (37 °C!)
100 µl
On adding the calcium chloride solution start the
stopwatch or timer on the coagulometer and measure the coagulation time.
Automatic processing:
Consult the instruction manual of the instrument manufacturer. Special assay protocols
for running the test on Dade Behring coagulation analyzers are available on request.
Results
The result is given in seconds.
Internal Quality Control
Normal range:
Control Plasma N or Standard Human Plasma
Pathological range:
Control Plasma P or Pathoplasma I and II
During each 24 hour shift in which an assay is performed, controls should be
evaluated. Test control plasma in the same manner as patient samples. The analytical value obtained must be within the assigned range given for the control in
the lot-dependent table of values.
Interferences
Interferences of aPTT are reported in bibliography4, 5.
Pathromtin SL has not been tested for interferences like lipemic or icteric samples.
Limitations
Preactivation of the sample due to poor withdrawal technique (implicated by systematic deviations from the reference range) can lead to false results.
"Referencing the Sample handling and Collection section and NCCLS Document
H21-A2 (US Guidelines), it is recommended that test tubes with non-wettable surfaces (e. g., plastic) be used rather that glass test tubes".
Expected Values
In a study of 158 ostensibly healthy individuals using Pathromtin SL, the following
values were found: 26 seconds (5th percentile) to 36 seconds (95th percentile).
Systematic deviations from these ranges, which cannot be explained by incorrect
withdrawal technique, may be due to the instrument used. If necessary, the laboratory may have to establish its own reference range.
Specific Performance Characteristics
Precision and Reproducibility
Using opto-densitometric detection, precision studies were run over a 5 day period, twice per day (n=8 replicates per day), to total n=40 for normal and pathological control plasmas as well as a heparin plasma pool. Intra-assay precision was
calculated from the individual n=4 precision values for the AM and PM daily runs
over the 5 days. Intra-assay precision ranged from 0.3 - 2.5 % CV, while the interassay precision ranged from 0.7 - 3.3 % CV.
Bibliography
To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/l) with
9 parts venous blood, avoiding the formation of foam. Immediately centrifuge for
10 minutes at approximately 3000 rpm (1500 x g), remove the supernatant plasma and keep at +15 to +25 °C until use in the test (max. 4 hours). In the US please
refer to the NCCLS Document H21-A2, entitled "Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and Performance of Coagulation Assays".
Method
Pathromtin SL can be used with a variety of manual and automatic coagulometers.
1
Pipette into a test tube pre-warmed to +37 °C:
Method Comparison
Results of a comparison of aPTT determinations using Pathromtin SL and another
commercially available aPTT reagent with 212 plasma samples gave a correlation
coefficient of 0.96 and a y-intercept of 2.1, and a slope of 0.99.
Sample Handling and Collection
OQGS G17 E0532 (310) W
Procedure
Manual:
Edition January 2000
1. Thomas L. (ed.): Partielle Thromboplastinzeit, Labor und Diagnose (4. erw.
Auflage), Med. Verl.-Ges., Marburg (1992), 694-698
2. Brandt J. T., Triplett D. A., Rock W. A., Bovill E.G. and Arkin Ch. F. Effect of
Lupus Anticoagulants on the Activated Partial Thromboplastin Time. Arch Pathol Lab Med 115, (1991), 109-114
3. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U. S. Department of
Health and Human Services, Washington 1993 (HHS Publication No. (CDC)
93-8395)
4. Poller L., Thomson J. M. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In:
Jespersen J., Bertina R. R., Haverkate F. A Manual of Laboratory Techniques,
Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, (1992), 35-40
5. Brack M. J., More R. S., Hubner J. B., Gershlick A. H. The effect of low dose
nitroglycerine on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood. Coagul. Fibrinol. 4, (1993), 183-186
Manufacturer:
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg/Germany
USA Distributor: Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
Pathromtin® SL
Methodik
Anwendungsbereich und -zweck
Testdurchführung
Manuell:
In ein auf 37°C vorgewärmtes Teströhrchen pipettieren:
Pathromtin SL kann mit einer Vielzahl manueller und automatischer Koagulometer verwendet werden.
Reagenz zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (aPTT) in
menschlichem Citratplasma.
Diagnostische Bedeutung
Die Bestimmung der aPTT mit Pathromtin SL ist ein schneller Suchtest auf
Gerinnungsstörungen des endogenen Systems und erfaßt empfindlich die Faktoren VIII und IX sowie die Kontaktfaktoren. Zusammen mit Mangelplasmen ist
Pathromtin SL geeignet für die Bestimmung von Einzelfaktoren des endogenen
Systems und zur Diagnose einer Hämophilie. Außerdem kann es zur Überwachung der Heparintherapie benutzt werden1.
Die Messung der aPTT ist indiziert als Suchtest auf Gerinnungsstörungen insbesondere vor chirurgischen Eingriffen, um potentielle Bluter unter besonderen therapeutischen Schutz stellen zu können.
Die Anwesenheit von unspezifischen Inhibitoren, wie der des Lupus-ähnlichen
Antikoagulans2, können die aPTT verlängern. Dieser Effekt ist jedoch variabel
und ist generell als ein natürlicher Effekt des verwendeten aPTT-Reagenz bekannt.
Prinzip der Methode
Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Phospholipiden und einem
Oberflächenaktivator führt zur Aktivierung von Faktoren des endogenen
Gerinnungssystems. Durch Zugabe von Calcium-Ionen wird der Gerinnungsvorgang ausgelöst; gemessen wird die Zeit bis zur Bildung eines Fibringerinnsels.
Reagenzien
Citratplasma
100 µl
Pathromtin SL
100 µl
2 min bei 37 °C inkubieren
Calciumchlorid-Lösung (37 °C!)
100 µl
Mit Zugabe von Calciumchlorid-Lösung Stoppuhr
bzw. Meßstelle am Koagulometer starten und die
Gerinnungszeit messen.
Automatisch:
Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten!
Spezielle Vorschriften für die Abarbeitung an Gerinnungsanalyzern von Dade
Behring sind auf Anfrage erhältlich.
Auswertung
Das Meßergebnis wird in Sekunden angegeben.
Interne Qualitätskontrolle
Normalbereich:
Pathologischer Bereich:
Kontroll-Plasma N oder Standard-Human-Plasma
Kontroll-Plasma P oder Pathoplasma I und II
Inhalt der Handelspackungen
Packung für 8 x 5 ml, Bestell-Nr. OQGS 23
Packung für 20 x 5 ml, Bestell-Nr. OQGS 35
Kontrollen sollten an jedem Arbeitstag gemessen werden. Dabei ist die Kontrolle
wie eine Patientenprobe einzusetzen. Der erhaltene Analysenwert muß innerhalb
des Sollwertbereichs liegen, der für die Kontrolle in der chargenabhängigen Wertetabelle angegebenen ist.
Zusammensetzung
Pathromtin SL: Siliciumdioxid-Partikel, pflanzliche Phospholipide, Natriumchlorid (2,4 g/l), Hepes (14,3 g/l), pH 7,6
Konservierungsmittel:
Natriumazid (< 1 g/l)
Einschränkungen und Fehlerquellen
Über Störungen der aPTT wird in der Literatur berichtet4, 5. Störungen durch lipämische oder ikterische Proben sind für Pathromtin SL nicht untersucht worden.
Eine abnahmebedingte Voraktivierung der Probe, erkennbar an systematischen
Abweichungen vom Referenzbereich, kann zu falschen Ergebnissen führen.
Im Abschnitt über Probennahme und -handhabung der NCCLS (U.S. Richtlinien)
wird empfohlen, Teströhrchen mit nicht-benetzbarer Oberfläche (z.B. Plastik) anstelle von Glasröhrchen einzusetzen.
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in vitro diagnostischen Anwendung
2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostica ist zu beachten:
Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kann mit Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden.
3. Alle aus menschlichem Gewebe oder Körperflüssigkeiten gewonnenen Materialien sollten wegen nie völlig auszuschließender Gefährdung durch Krankheitserreger mit angemessener Sorgfalt unter Einhaltung der bei Biogefährdung empfohlenen Sicherheitsmaßnahmen gehandhabt werden3.
Vorbereitung der Reagenzien
Pathromtin SL ist nach kurzem Aufschütteln gebrauchsfertig und wird bei
Raumtemperatur (+15 bis +25 °C) eingesetzt. Sollte das Reagenz nach einigen
Tagen sedimentieren, ist die Suspension vor Gebrauch wieder kurz aufzuschütteln.
Calciumchlorid-Lösung 0,025 mol/l auf 37 °C erwärmen.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Pathromtin SL ist, ungeöffnet bei +2 bis +8 °C gelagert, bis zu dem auf dem Etikett
angegebenen Datum verwendbar. Nach dem erstmaligen Öffnen ist Pathromtin SL
2 Wochen bei +2 bis +25 °C stabil.
Zusätzlich benötigte Materialien
Calciumchlorid-Lösung 0,025 mol/l, Bestell-Nr. ORHO
Standard-Human-Plasma, Bestell-Nr. ORKL
Kontroll-Plasma N, Bestell-Nr. ORKE
Kontroll-Plasma P, Bestell-Nr. OUPZ
Pathoplasma I und II, Bestell-Nr. OTXK bzw. OTXL
Koagulometer (manuell oder automatisch)
Pipetten
Teströhrchen aus Plastik
Referenzbereich
In einer Studie an 158 offensichtlich gesunden Probanden wurden mit Pathromtin
SL folgende Werte gefunden:
26 Sekunden (5. Percentile) bis 36 Sekunden (95. Percentile).
Systematische, nicht abnahmebedingte Abweichungen von diesen Bereichen
können gerätebedingt sein. Gegebenenfalls muß ein eigener Referenzbereich
durch das Labor erstellt werden.
Leistungsmerkmale des Tests
Präzision und Reproduzierbarkeit
Auf einem opto-densitometrischen Meßverfahren wurden Präzisionsuntersuchungen an normalen und pathologischen Plasmen, sowie einem Heparin-Plasmapool,
über 5 Tage, zweimal täglich (n=8 Bestimmungen pro Tag), mit insgesamt 40 Bestimmungen durchgeführt. Der Variationskoeffizient in der Serie wurde aus den
einzelnen 4fach-Bestimmungen berechnet. Er lag zwischen 0,3 und 2,5 %, während der Variationskoeffizient von Tag zu Tag zwischen 0,7 und 3,3 % lag.
Methodenvergleich
Bei einem Vergleich von aPTT-Bestimmungen mit Pathromtin SL und einem anderen aPTT-Reagenz ergab sich mit Pathromtin SL ein Korrelationskoeffizient
von 0,96 bei einem y-Achsenabschnitt von 2,1 und einer Steigung von 0,99.
Literatur
Untersuchungsmaterial
Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorgfältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens
10 min bei mindestens 1500 x g zentrifugieren, überstehendes Plasma abhebern
und bis zum Test bei +15 bis +25 °C aufbewahren (max. 4 Stunden).
1. Thomas L. (ed.): Partielle Thromboplastinzeit, Labor und Diagnose (4. erw.
Auflage), Med. Verl.-Ges., Marburg (1992), 694-698
2. Brandt J. T., Triplett D. A., Rock W. A., Bovill E.G. and Arkin Ch. F. Effect of
Lupus Anticoagulants on the Activated Partial Thromboplastin Time. Arch Pathol Lab Med 115, (1991), 109-114
3. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U. S. Department of
Health and Human Services, Washington 1993 (HHS Publication No. (CDC)
93-8395)
4. Poller L., Thomson J. M. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In:
Jespersen J., Bertina R. R., Haverkate F. A Manual of Laboratory Techniques,
Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, (1992), 35-40
5. Brack M. J., More R. S., Hubner J. B., Gershlick A. H. The effect of low dose
nitroglycerine on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood. Coagul. Fibrinol. 4, (1993), 183-186
Hersteller:
OQGS G17 E0532 (310) W
2
Ausgabe Januar 2000
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
Pathromtin® SL
Réalisation du test
Manuelle :
Distribuer dans un tube à essai préchauffé à +37°C :
Domaine d’utilisation et indication
Réactif pour la détermination du Temps de Céphaline Activé (TCA) dans le plasma citraté humain.
Plasma citraté
100 µl
Pathromtin SL
100 µl
Intérêt diagnostique
Laisser incuber 2 min à +37 °C
La détermination du TCA à l'aide de Pathromtin SL est un test de dépistage rapide
des troubles du système endogène de la coagulation, sensible aux Facteurs VIII,
IX, et aux facteurs de la phase contact. Utilisé en association avec des plasmas
exempts, Pathromtin SL permet le dosage des différents facteurs du système endogène de la coagulation, ainsi que le diagnostic d'hémophilie. Il peut également
être utilisé pour la surveillance des traitements à l'héparine1.
La détermination du TCA est indiquée comme test de dépistage des troubles de la
coagulation, en particulier avant une intervention chirurgicale, afin de pouvoir
prendre les mesures thérapeutiques appropriées chez les patients susceptibles
de faire une hémorragie.
La présence d’inhibiteurs non spécifiques, tel l’anticoagulant de type lupus2, peut
allonger le TCA, même si cet effet est variable et généralement considéré comme
lié à la nature du réactif TCA utilisé.
Solution de chlorure de calcium (+37 °C !)
Principe de la méthode
L'incubation du plasma avec une quantité optimale de phospholipides et d'un activateur de surface entraîne l'activation des facteurs du système endogène de la
coagulation. L'addition d'ions calcium déclenche le processus de la coagulation.
On mesure alors le temps écoulé jusqu'à la formation du caillot de fibrine.
Réactifs
Contenu des coffrets
Coffret pour 8 x 5 ml, code OQGS 23
Coffret pour 20 x 5 ml, code OQGS 35
Composition
Pathromtin SL : particules de dioxyde de silicium, phospholipides végétaux,
chlorure de sodium (2,4 g/l), Hépès (14,3 g/l), pH 7,6
Agent de conservation : azide de sodium (< 1 g/l)
Mises en garde et précautions d’emploi
1. Ne doit être employé que pour un usage in vitro
2. Les réactifs contenant de l’azide de sodium doivent être manipulés avec précaution :
ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses. L’azide de
sodium peut devenir explosif au contact de métaux lourds comme le cuivre ou
le plomb.
3. Tout produit obtenu à partir de tissu ou de liquide humain doit être manipulé
avec les précautions recommandées en cas de risque biologique, dans la mesure où on ne peut exclure avec certitude tout risque d'infection3.
Préparation des réactifs
Agiter brièvement Pathromtin SL, il est prêt à l'emploi ; l'utiliser à la température
ambiante (à +15/+25 °C). S'il se produit une sédimentation au bout de quelques
jours, réagiter brièvement la suspension avant emploi.
Porter la Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l à +37 °C.
Stabilité et conditions de conservation
Conservé non ouvert à +2/+8 °C , Pathromtin SL peut être utilisé jusqu’à la date
indiquée sur l’étiquette. Après ouverture, il reste stable 2 semaines à +2/+25 °C.
Autres réactifs nécessaires
Solution de chlorure de calcium 0,025 mol/l, code ORHO
Plasma standard humain, code ORKL
Plasma de contrôle N, code ORKE
Plasma de contrôle P, code OUPZ
Pathoplasmas I et II, codes OTXK et OTXL
Coagulomètre (manuel ou automatique)
Pipettes
Tubes à essai en plastique
100 µl
Déclencher le chronomètre ou la chambre de mesure
du coagulomètre au moment de l'addition de la Solution de chlorure de calcium, et mesurer le temps de
coagulation.
Automatique :
Suivre les instructions du fabricant de l’automate !
Des protocoles d’adaptation sur différents automates de coagulation peuvent être
demandés auprès de Dade Behring.
Exploitation
Le résultat est exprimé en secondes.
Contrôle de qualité interne
Domaine normal :
Plasma de contrôle N ou Plasma standard humain
Domaine thérapeutique :
Plasma de contrôle P ou Pathoplasmas I et II
Les contrôles doivent être testés à chaque nouvelle journée de travail. Traiter
chaque contrôle comme un échantillon de patient. La valeur obtenue doit être
trouvée à l'intérieur du domaine-cible indiqué pour le contrôle dans le tableau des
valeurs de chaque lot.
Limite du test et source d’erreurs
Les perturbations du test TCA sont décrites dans la littérature4, 5. L’influence éventuelle d’échantillons lipémiques ou ictériques n’a pas été remarquée avec le Pathromtin SL.
Une préactivation des échantillons due à un mauvais prélèvement et reconnaissable à des déviations systématiques par rapport au domaine de référence, peut
entraîner des résultats erronés.
Dans le paragraphe du NCCLS (recommandations US) concernant le prélèvement et le traitement des échantillons, il est recommandé d’utiliser des tubes à
essai non mouillables (par ex. en plastique) et non des tubes en verre.
Domaine de référence
Une étude portant sur 158 sujets considérés comme sains a donné les valeurs
suivantes pour le Pathromtin SL :
26 secondes (5ème percentile) à 36 secondes (95ème percentile).
Des déviations systématiques par rapport à ce domaine, qui ne sont pas dues au
mode de prélèvement, peuvent dépendre de l'appareil. Éventuellement, le laboratoire doit établir son propre domaine de référence.
Caractéristiques du test
Précision et reproductibilité
Une étude de précision a été effectuée selon un procédé photo-densitométrique
sur des plasmas normaux et pathologiques, ainsi que sur un pool de plasmas
héparinés. Les échantillons ont été testés sur 5 jours, deux fois par jour (n = 8
dosages par jour). Un total de 40 dosages a été effectué. Les coefficients de
variation de répétabilité ont été calculés à partir des dosages en quadruple, et
trouvés entre 0,3 et 2,5%. Les coefficients de variation de reproductibilité ont été
trouvés entre 0,7 et 3,3%
Comparaison avec d’autres méthodes
La comparaison des dosages de TCA effectués avec Pathromtin SL et de ceux
effectués avec un autre réactif TCA a permis d’obtenir pour Pathromtin SL un
coefficient de corrélation de 0,96, avec une intersection de l’axe des y à 2,1 et une
pente de 0,99.
Littérature
Échantillons de patients
Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11
mol/l) avec 9 volumes de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la
formation de mousse. Centrifuger aussitôt pendant au moins 10 min à au moins
1500 g, prélever le plasma surnageant, et le conserver à +15/+25 °C (max. 4
heures) jusqu'au test.
Méthode
Pathromtin SL peut être utilisé sur un grand nombre de coagulomètres manuels
ou automatiques.
1. Thomas L. (ed.): Partielle Thromboplastinzeit, Labor und Diagnose (4. erw.
Auflage), Med. Verl.-Ges., Marburg (1992), 694-698
2. Brandt J. T., Triplett D. A., Rock W. A., Bovill E.G. and Arkin Ch. F. Effect of
Lupus Anticoagulants on the Activated Partial Thromboplastin Time. Arch Pathol Lab Med 115, (1991), 109-114
3. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U. S. Department of
Health and Human Services, Washington 1993 (HHS Publication No. (CDC)
93-8395)
4. Poller L., Thomson J. M. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In:
Jespersen J., Bertina R. R., Haverkate F. A Manual of Laboratory Techniques,
Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, (1992), 35-40
5. Brack M. J., More R. S., Hubner J. B., Gershlick A. H. The effect of low dose
nitroglycerine on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood. Coagul. Fibrinol. 4, (1993), 183-186
France:
Fabriqué par Dade Behring Marburg GmbH, Marburg (Allemagne), et
commercialisé en France par Dade Behring S.A., Immeuble Berkeley,
19/29 rue du Capitaine Guynemer, 92081 Paris-La Défense
Ce test est enregistré auprès de l'Agence Française de Sécurité Sanitaire des Produits de Santé.
OQGS G17 E0532 (310) W
3
Edition Janvier 2000
Pathromtin® SL
Esecuzione del test
Manuali:
Distribuire in una provetta preriscaldata a 37° C:
Settori d'impiego e funzione
Reagente per la determinazione del tempo di tromboplastina parziale attivato
(aPTT) nel plasma citratato umano.
Plasma citrato
100 µL
Pathromtin SL
100 µL
Significato diagnostico
incubare per 2 minuti a 37 °C
Soluzione di cloruro di calcio (37 °C!)
100 µL
Il Pathromtin SL permette una rapida valutazione dei disturbi legati al sistema
endogeno della coagulazione e rivela con sensibilità deficit dei fattori VIII, IX e dei
fattori di contatto. Utilizzato con plasmi carenti, il Pathromtin SL è adatto per la
determinazione dei singoli fattori della via intrinseca e per la diagnosi di emofilia.
Inoltre, può essere impiegato nel monitoraggio della terapia eparinica1.
La misura dell'aPTT è indicata per rilevare potenziali soggetti emofilici, in modo da
sottoporli ad un adeguato trattamento terapeutico prima di un intervento chirurgico.
La presenza di inibitori non-specifici, come l’anticoagulante lupus-like2, possono
prolungare l’aPTT. Questo effetto, però, è variabile e generalmente noto come un
effetto collegato alla natura del reagente aPTT utilizzato.
Automatica:
Attenersi alle modalità d’uso del produttore dello strumento!
Sono disponibili, su richiesta, protocolli speciali per gli analizzatori per coagulazione della Dade Behring.
Principio del metodo
Valutazione
Il risultato del test è espresso in secondi.
L'incubazione del plasma con una quantità ottimale di fosfolipidi e di un attivatore
di superficie determina l'attivazione dei fattori del sistema endogeno della coagulazione. L’aggiunta di ioni calcio innesca il processo della coagulazione; viene
quindi misurato il tempo di formazione del coagulo di fibrina.
Reagenti
Contenuto delle confezioni
Confezione da 8 x 5 mL, codice QGS 23
Confezione da 20 x 5 mL, codice QGS 35
Composizione
Pathromtin SL: particelle di biossido di silicio, fosfolipidi vegetali, cloruro di sodio
(2,4 g/L), Hepes (14,3 g/L), pH 7,6
Conservante:
sodio azide (< 1 g/L)
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in-vitro.
2. Quando si impiegano diagnostici in vitro contenenti sodio azide osservare le
seguenti precauzioni: non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose.
La sodio azide a contatto con metalli pesanti, come rame e/o piombo, può formare azidi esplosive.
3. Tutti i derivati da tessuti o fluidi umani devono essere trattati con le necessarie
precauzioni rispettando le norme di sicurezza sul rischio biologico, in quanto
non è possibile escludere con assoluta certezza il pericolo di agenti patogeni3.
Preparazione dei reagenti
Il Pathromtin SL è pronto per l'uso. Portare a temperatura ambiente (a +15/+25 °C)
ed agitare prima dell'uso. In caso di eventuale sedimentazione, occorre agitare brevemente la sospensione prima dell'uso.
Riscaldare la soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/L a +37 °C.
Conservazione e validità
Prima dell'apertura il Pathromtin SL può essere utilizzato fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta del flacone se conservato, sigillato, a +2/+8 °C.
Dopo la prima apertura il Pathromtin SL è stabile per 2 settimane se conservato
a +2/+25 °C.
Materiale necessario, ma non fornito
Soluzione di cloruro di calcio 0,025 mol/L, codice RHO
Plasma umano standard, codice RKL
Plasma di controllo N, codice RKE
Plasma di controllo P, codice UPZ
Pathoplasma I e II, codice TXK oppure TXL
Coagulometro (manuale o automatico)
Pipette
Provette in plastica
Dopo l’aggiunta della soluzione di cloruro di calcio azionare il cronometro o il dispositivo di misura sul coagulometro e determinare il tempo di formazione del coagulo.
Controllo di qualità interno
Ambito normale: Plasma di controllo N oppure Plasma umano standard
Ambito patologico: Plasma di controllo P oppure Pathoplasma I e II
I controlli dovrebbero essere misurati ogni giorno. Il controllo deve essere inserito
insieme ai campioni in esame. Il valore analitico del risultato ottenuto deve essere
compreso nell'ambito dei valori nominali riportati nella tabella dei valori allegata
alle rispettive confezioni dei controlli.
Limitazioni e fonti di errore
Interferenze sull'aPTT vengono riportate in letteratura4,5. Non sono state rilevate
interferenze per il Pathromtin SL dovute a campioni lipemici o itterici.
Una preattivazione del campione dovuta al prelievo, riconoscibile da variazioni
sistematiche rispetto all’ambito di riferimento, può portare a risultati inesatti.
Il paragrafo Prelievo e manipolazione del campione dell'NCCLS (linee guida
USA) suggerisce di utilizzare provette test con superficie non porosa (es. plastica)
anziché in vetro.
Valori di riferimento
Da uno studio condotto su 158 soggetti sani sono stati riscontrati con il Pathromtin SL i seguenti valori:
da 26 secondi (5° percentile) a 36 secondi (95° percentile).
Deviazioni sistematiche rispetto all’ambito di riferimento indicato, non dovute ad
una preattivazione del campione durante il prelievo, potrebbero essere dovute
alla strumentazione utilizzata. E’ quindi opportuno che ogni laboratorio determini il
proprio ambito di riferimento.
Caratteristiche del test
Precisione e accuratezza
Sono state eseguite delle verifiche di precisione mediante procedimento di
misurazione ottico-densitometrico su plasmi normali e patologici, e su un pool di
plasmi eparinizzati, per 5 giorni, due volte al giorno (n=8 determinazioni al giorno),
per un totale di 40 determinazioni. Il coefficiente di variazione nella serie è stato
calcolato sulle singole determinazioni in quadruplo ed è risultato essere compreso tra 0,3 e 2,5%, mentre il coefficiente di variazione di giorno in giorno è risultato
essere compreso tra 0,7 e 3,3%.
Confronto tra i metodi
Confrontando i valori di aPTT ottenuti con il Pathromtin SL e i valori ottenuti con
altri reagenti per aPTT è stato determinato un coefficiente di correlazione di 0.96
con intercetta 2.1 e coefficiente angolare di 0.99 (y= 0.99x + 2.1).
Bibliografia
Campioni in esame
Per ottenere il plasma mescolare accuratamente 1 parte di soluzione di citrato sodico (0,11 mol/L) con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di
schiuma. Centrifugare subito per almeno 10 min. ad almeno 1500 x g, separare il plasma sovranatante e conservarlo a +15/+25 °C sino al momento
dell’esecuzione del test (massimo 4 ore).
Metodica
Il Pathromtin SL può essere utilizzato con numerosi tipi di coagulometri sia manuali che automatici.
1. Thomas L. (ed.): Partielle Thromboplastinzeit, Labor und Diagnose (4. erw.
Auflage), Med. Verl.-Ges., Marburg (1992), 694-698
2. Brandt J. T., Triplett D. A., Rock W. A., Bovill E.G. and Arkin Ch. F. Effect of
Lupus Anticoagulants on the Activated Partial Thromboplastin Time. Arch Pathol Lab Med 115, (1991), 109-114
3. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U. S. Department of
Health and Human Services, Washington 1993 (HHS Publication No. (CDC)
93-8395)
4. Poller L., Thomson J. M. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In:
Jespersen J., Bertina R. R., Haverkate F. A Manual of Laboratory Techniques,
Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, (1992), 35-40
5. Brack M. J., More R. S., Hubner J. B., Gershlick A. H. The effect of low dose
nitroglycerine on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood. Coagul. Fibrinol. 4, (1993), 183-186
Confezioni originali:
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
Rappresentante per l'Italia:
OQGS G17 E0532 (310) W
4
Edizione Gennaio 2000
Dade Behring SPA
Via Lampedusa 11/A
20141 Milano/Italy
Procedimiento
Pathromtin® SL
Manual:
En un tubo de ensayo precalentado a +37°C, pipetear:
Campos de aplicación y objetivos
Reactivo para la determinación del tiempo de tromboplastina parcial activado
(aPTT) en plasmas humanos citratados.
Plasma citratado
100 µl
Pathromtin SL
100 µl
Significado diagnóstico
Incubar 2 min. a +37 °C
La determinación del aPTT con Pathromtin SL es un test rápido para la búsqueda
de anomalías del sistema endógeno de la coagulación, que además registra con
precisión tanto los factores VIII y IX como los factores de contacto. Pathromtin SL,
en colaboración con plasmas deficientes, es apropiado para la determinación individual de los factores del sistema endógeno y para el diagnóstico de la hemofilia.
Además, puede también emplearse para el control de la terapéutica heparínica1.
La medida de aPTT es indicada como test de búsqueda de los trastornos de la
coagulación, especialmente antes de intervenciones quirúrgicas, con el fin de
poder someter a tratamientos preventivos a hemofílicos en potencia.
La presencia de inhibidores no específicos, como los anticuoagulantes similares
al lúpico2, puede prolongar el aPTT. Este efecto es, sin embargo, variable y es
generalmente reconocido como un efecto más relacionado con la naturaleza del
reactivo aPTT empleado.
Solución de cloruro de calcio (¡37 °C!)
Principio del método
La incubación del plasma con cantidades óptimas de fosfolípidos y un activador
de superficie conduce a una activación de los factores del sistema endógeno de
la coagulación. Mediante la agregación de iones de calcio se desencadena el
proceso de coagulación; se mide el tiempo transcurrido hasta la formación de un
coágulo de fibrina.
Reactivos
Contenido de los envases comerciales
Envase para 8 x 5 ml, N° de pedido OQGS 23
Envase para 20 x 5 ml, N° de pedido OQGS 35
Composición
Pathromtin SL: Partículas de bióxido de silicio, fosfolípidos vegetales, cloruro de
sodio (2,4 g/l), Hepes (14,3 g/l), pH 7,6
Medio de conservación: Azida de sodio (< 1 g/l)
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.
2. En el manejo de diagnóticos in-vitro que contengan azida sódica se debe observar:
No ingerir y evitar el contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede
formar azidas explosivas con metales pesados como cobre y plomo.
3. Todos los materiales obtenidos a partir de tejidos humanos o de líquidos humanos deben ser manipulados con las precauciones necesarias, siguiendo
las medidas de seguridad recomendadas en caso de riesgo biológico, puesto
que nunca se puede excluir completamente el peligro de una contaminación
por medio de agentes patógenos3.
Preparación de reactivos
El reactivo Pathromtin SL, después de una breve agitación, está listo para el uso y
se agrega a temperatura ambiente (entre +15 y +25 °C). Si después de unos días el
reactivo presenta sedimentación, agitar la suspensión de nuevo, brevemente, antes de usarla.
Calentar la solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l a 37 °C.
Estabilidad y almacenaje
Pathromtin SL, conservado cerrado entre +2 y +8 °C, es estable hasta la fecha de
vencimiento dada en la etiqueta. Una vez abierto Pathromtin SL es estable durante 2 semanas si se mantiene entre +2 y +25 °C.
Reactivos adicionales necesarios
Solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l, N° de pedido ORHO
Plasma humano estándar, N° de pedido ORKL
Plasma control N, N° de pedido ORKE
Plasma control P, N° de pedido OUPZ
Pathoplasma I y II, N° de pedido OTXK o OTXL
Coagulómetro (manual o automático)
Pipetas
Tubos de ensayo de plástico
Material a investigar
Para obtener el plasma, mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de citrato
de sodio (0,11 mol/l) con 9 partes de sangre venosa, evitando la formación de
espuma. Centrifugar inmediamente por lo menos durante 10 min. a por lo menos
1500 x g, retirar el plasma sobrenadante y mantenerlo entre +15 y +25 °C hasta la
realización del test (máx. 4 horas).
Método
Pathromtin SL se puede emplear en una gran variedad de coagulómetros manuales o automáticos.
OQGS G17 E0532 (310) W
5
Edición Enero 2000
100 µl
Agregar la solución de cloruro de calcio y simultáneamente accionar el cronómetro o el coagulómetro y medir el tiempo de coagulación.
Aotomáticamente:
Observar las instrucciones para el manejo del fabricante del aparato!
Instrucciones especiales para el trabajo en el analizador de la coagulación de
Dade Behring se pueden obtener sobre consulta.
Valoración
El resultado de la medida se da en segundos.
Control de calidad interno
Rango normal:
Plasma control N o Plasma humano estándar
Rango patológico:
Plasma control P o Pathoplasma I y II
Los controles se deben medir cada día de trabajo y deben ser tratados como las
muestras de pacientes.El valor obtenido debe estar dentro del rango del valor
teórico del control, el cual está dado en la Tabla de valores dependiente del lote.
Limitaciones y fuentes de error
En la literatura se encuentra información sobre alteraciones del aPTT4,5. No existen estudios sobre alteraciones de Pathromtin SL mediante muestras lipémicas
o ictéricas.
Una pre-activación de la muestra, dependiente de la toma de ésta y reconocible
por la desviación sistemática del rango de referencia, puede conducir a resultados equivocados.
En el parágrafo sobre Toma de muestras y su manejo del NCCLS (Normas americanas) se recomienda utilizar tubos de ensayo con una superficie no-impregnable (por ej. plástico) en lugar de los tubos de vidrio.
Valores de referencia
En un estudio de 158 sujetos evidentemente sanos se encontraron con Pathromtin SL los siguientes valores:
de 26 segundos (5. percentile) hasta 36 segundos (95. Percentile).
Desviaciones sistemáticas no dependientes de la toma de la muestra, pueden ser
ocasionadas por el aparato. En estos casos cada laboratorio deberá establecer
sus propios valores de referencia normal.
Características del test
Precisión y reproducibilidad
Con un procedimiento de medición optodensitométrico se realizaron medidas de
precisión de plasmas normales, patológicos y de un pool de plasmas heparínicos
durante 5 días, dos veces al día (n = 8 determinaciones por día), con un total de
40 determinaciones. El coeficiente de variación en la serie se cálculo a partir de
cada una de las determinaciones cuádruples y se encontró entre 0,3 y 2,5%,
mientras que el coeficiente de variación día a día estuvo entre 0,7 y 3,3%.
Comparación de métodos
Al comparar una determinación de aPTT con Pathromtin SL y una con otro reactivo para aPTT se encontró para Pathromtin SL un coeficiente de correlación de
0,96 para un corte de eje-y de 2,1 y una pendiente de 0,99.
Bibliografía
1. Thomas L. (ed.): Partielle Thromboplastinzeit, Labor und Diagnose (4. erw.
Auflage), Med. Verl.-Ges., Marburg (1992), 694-698
2. Brandt J. T., Triplett D. A., Rock W. A., Bovill E.G. and Arkin Ch. F. Effect of
Lupus Anticoagulants on the Activated Partial Thromboplastin Time. Arch Pathol Lab Med 115, (1991), 109-114
3. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U. S. Department of
Health and Human Services, Washington 1993 (HHS Publication No. (CDC)
93-8395)
4. Poller L., Thomson J. M. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In:
Jespersen J., Bertina R. R., Haverkate F. A Manual of Laboratory Techniques,
Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, (1992), 35-40
5. Brack M. J., More R. S., Hubner J. B., Gershlick A. H. The effect of low dose
nitroglycerine on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood. Coagul. Fibrinol. 4, (1993), 183-186
Fabricante:
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg/Germany
Procedimento
Manual:
Pipetar para um tubo de ensaio pré-aquecido a 37 °C:
Pathromtin® SL
Campo de aplicação e objectivo
Reagente para determinação do tempo de tromboplastina parcial activado
(TTPa) em plasmas humanos citratados.
Princípio metodológico
A incubação do plasma com quantidades óptimas de fosfolípidos e um activador
de superfície leva a uma activação dos factores do sistema intrínseco da coagulação. Mediante a agregação de iões de cálcio é desencadeado o processo de
coagulação. Mede-se o tempo transcurso até à formação de um coágulo de fibrina.
Reagentes
Conteúdo da embalagem comercial
Embalagem 8 x 5 ml, código OQGS 23
Embalagem 20 x 5 ml, código OQGS 35
Composição
Pathromtin SL: Partículas de dióxido de silício, fosfolípidos vegetais, cloreto de
sódio (2,4 g/l), Hepes (14,3 g/l), pH 7,6
Agente de conservação: azida sódica (<1 g/l)
Advertências e medidas de precaução
1. Só para uso diagnóstico in vitro.
2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnóstico in vitro que
contenham azida sódica:
Evitar ingerir e todo o contacto com a pele ou mucosas!
Com metais pesados, como cobre ou chumbo, a azida sódica pode formar
azidas explosivas!
3. Todos os materiais obtidos de tecido ou líquidos do corpo humano devem ser
tratados com as precauções devidas, seguindo as medidas de segurança recomendadas em caso de risco biológico, uma vez que nunca se pode excluir
inteiramente o risco de contaminação por agentes patogénicos3.
Preparação dos reagentes
Basta agitar brevemente para que Pathromtin SL fique pronto para o uso. Este
deve efectuar-se à temperatura de ambiente (+15 a +25 °C). Se após alguns dias
o reagente apresentar sedimentação, agitar de novo brevemente a suspensão
antes do uso.
Aquecer a solução de cloreto de cálcio 0,025 mol/l a 37 °C.
Estabilidade e condições de conservação
Não aberto, e conservado entre +2 e +8 ° C, Pathromtin SL mantém-se utilizável
até à data indicada no rótulo. Uma vez aberto, mantém-se estável durante 2 semanas à temperatura de +2 a +25 °C.
100 µl
Simultaneamente com a adição de solução de
cloreto de cálcio, pôr em marcha o cronómetro
ou medidor do coagulómetro e determinar o tempo
de coagulação.
Automático:
Seguir as instruções do manual de utilização do aparelho!
Fornecem-se, a pedido, protocolos especiais para analisadores da coagulação
Dade Behring.
Avaliação dos resultados
O resultado da medição é expresso em segundos.
Controlo interno de qualidade
Área normal: Plasma-controlo N ou Plasma humano standard
Área terapêutica: Plasma-controlo P ou Pathoplasma I e II
Os controlos devem ser medidos em cada dia de trabalho e tratados do mesmo
modo que as amostras de pacientes. O valor analítico obtido deve estar compreendido no escalão de valores teóricos indicado na tabela adjunta a cada lote.
Limitações e fontes de erro
Sobre perturbações do TTPa veja-se a literatura respectiva4,5. Não há investigações sobre alterações de Pathromtin SL imputáveis a amostras lipémicas ou
ictéricas.
Uma pré-activação da amostra devida a uma má colheita e reconhecível por desvios
sistemáticos em relação ao escalão de referência pode levar a resultados falsos.
No parágrafo sobre colheita e tratamento das NCCLS (Normas americanas) recomenda-se utilizar tubos de ensaio com uma superfície não impregnável (p. ex.
plástico) em vez de tubos de vidro.
Escalão de referência
Num estudo de 158 indivíduos obviamente sãos foram apurados os seguintes
valores com Pathromtin SL:
de 26 segundos (5.° percentil) até 36 segundos (95.° percentil).
Divergências sistemáticas não dependentes da colheita da amostra podem ser
devidas ao aparelho utilizado. Em tais casos deve o laboratório determinar o seu
próprio escalão de referência.
Características do teste
Precisão e reprodutibilidade
Com um processo de medição optodensitométrico foram efectuadas medições
de precisão de plasmas normais, patológicos e de um pool de plasmas heparínicos durante 5 dias, 2 vezes por dia (n = determinações por dia), com um total de
40 determinações. Os coeficientes de variação intra-assay foram calculados a
partir de cada uma das determinações quádruplas e obtiveram-se resultados
compreendidos entre 0,3 e 2,5%, enquanto que, para os coeficientes de variação
inter-assay, foram achados valores situados entre 0,7 e 3,3%.
Comparação de métodos
A comparação de uma determinação do TTPa com Pathromtin SL com outra
efectuada com outro reagente para TTPa revelou para Pathromtin SL um
coeficiente de correlação de 0,96 com uma intersecção do eixo y de 2,1 e um
coeficiente angular de 0,99.
Bibliografia
código ORHO
código ORKL
código ORKE
código OUPZ
código OTXK ou OTXL
Material a investigar
Para obter o plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de solução de citrato de
sódio (0,11 mol/l) com 9 partes de sangue venoso, evitando formação de espuma. Centrifugar imediatamente durante 10 min, pelo menos, a uma velocidade
de, pelo menos,1.500 x g, retirar o plasma sobrenadante e conservá-lo até à
realização do teste (máx. 4 horas) entre +15 e 25 °C.
Método
Pathromtin SL pode ser utilizado com um grande número de coagulómetros manuais e automáticos.
6
100 µl
Solução de cloreto de cálcio (37 °C!)
A determinação do TTPa com Pathromtin SL é um teste rápido para detecção de
transtornos do sistema intrínseco da coagulação e que detecta de modo sensível
os factores VIII e IX, assim como os factores de contacto. Usado com plasmas
deficitários, Pathromtim SL é um instrumento apropriado para a determinação de
factores singulares do sistema intrínseco e o diagnóstico da hemofilia. Além disso, pode ser utilizado para o controlo da terapia heparínica1.
A medição do TTPa está indicada como teste de triagem de perturbações da
coagulação especialmente antes de intervenções cirúrgicas, a fim de poder submeter potenciais hemofílicos a um tratamento preventivo.
A presença de inibidores não específicos, como os anticoagulantes lúpicos2,
pode prolongar o TTPa, mas este efeito é variável e geralmente atribuido à natureza do reagente de TTPa utilizado.
OQGS G17 E0532 (310) W
100 µl
Pathromtin SL
Deixar incubar 2 min a +37 °C
Significado diagnóstico
Outros materiais necessários
Solução de cloreto de cálcio 0,025 mol/l,
Plasma humano standard,
Plasma-controlo N,
Plasma-controlo P,
Pathoplasma I e II,
Coagulómetro (manual ou automático)
Pipetas
Tubos de ensaio de plástico
Plasma citratado
Edição Janeiro 2000
1. Thomas L. (ed.): Partielle Thromboplastinzeit, Labor und Diagnose (4. erw.
Auflage), Med. Verl.-Ges., Marburg (1992), 694-698
2. Brandt J. T., Triplett D. A., Rock W. A., Bovill E.G. and Arkin Ch. F. Effect of
Lupus Anticoagulants on the Activated Partial Thromboplastin Time. Arch Pathol Lab Med 115, (1991), 109-114
3. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, U. S. Department of
Health and Human Services, Washington 1993 (HHS Publication No. (CDC)
93-8395)
4. Poller L., Thomson J. M. The activated partial thromboplastin time (aPTT) In:
Jespersen J., Bertina R. R., Haverkate F. A Manual of Laboratory Techniques,
Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA, (1992), 35-40
5. Brack M. J., More R. S., Hubner J. B., Gershlick A. H. The effect of low dose
nitroglycerine on plasma heparin concentrations and activated partial thromboplastin times. Blood. Coagul. Fibrinol. 4, (1993), 183-186
Fabricante:
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg/Germany
Distribuidor:
Dade Behring Portugal
Meios de Diagnóstico Médico Lda.
Estrada Nacional Lisboa/Sintra, Km 15
Apartado 145
P-2726 Mem Martins Codex