RIDA QUICK Legionella - R

RIDA®QUICK Legionella
Réf. : N8003
R-Biopharm AG, An der neuen Bergstrasse 17, D-64297 Darmstadt, Allemagne
Téléphone : +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax : +49 (0) 61 51 81 02-20
C
1. Application
Pour usage diagnostique in vitro. RIDA®QUICK Legionella est un test immunochromatique
rapide pour la détection qualitative des antigènes de Legionella pneumophila dans les
échantillons d'urine.
2. Résumé et explication du test
La souche de Legionella, qui appartient à la famille des Legionellaceae, se divise en
40 espèces et plus de 70 sérogroupes. Les légionelles sont des bactéries intracellulaires gramnégatives facultatives, dont le pic d'infection est atteint en été et au début de l'automne. Dans le
cas de la maladie du légionnaire, on distingue les infections acquises en extérieur, dues à un
déplacement, et les infections nosocomiales. Aux États-Unis, le taux de mortalité dû aux
infections nosocomiales atteint 15 à 20 %.1,2 En Europe, 12 % des cas de maladie du
légionnaire sont fatals. Parmi le grand nombre d'espèces de Legionella, deux représentent
d'importants pathogènes humains. L'infection par L. pneumophila provoque principalement la
maladie du légionnaire (également appelée légionellose) et L. longbeachae provoque une fièvre
de Pontiac. La fièvre de Pontiac est une maladie aiguë spontanément résolutive, qui ressemble
à la grippe, mais sans pneumonie. Environ 7 % des patients souffrant de la maladie du
légionnaire développent une fièvre de Pontiac.3
L. pneumophila se décompose en 16 sérogroupes ; en Europe, plus de 70 % des infections à
Legionella sont dues au sérogroupe 1 de L. pneumophila. Les autres souches pouvant
provoquer une infection par Legionella incluent L. micdadei, L. bozemanii, L. dumoffii et L.
Longbeachae.4
La malade du légionnaire est une infection respiratoire aiguë principalement due à L.
pneumophila. Elle a été décrite pour la première fois en 1976, lors d'un congrès de la Légion
américaine à Philadelphie, aux États-Unis, où elle a reçu le nom de maladie du légionnaire.
Deux autres épidémies plus récentes de la maladie du légionnaire ont fait 6 morts en 2013 à
Brisbane en Australie et à Reynoldsburg dans l'Ohio aux États-Unis. Fièvre, toux (sèche ou
avec production de crachat) et frissons en sont les symptômes. La diarrhée, les vomissements,
la bradycardie et l'hyponatrémie sont d'autres symptômes, moins fréquents.3 Des individus de
tous âges peuvent être infectés par la maladie du légionnaire, mais les personnes âgées, ainsi
que les fumeurs et les patients souffrant de troubles pulmonaires chroniques sont plus
sensibles à ce type d'infections. Même dans les pays dotés d'un système de soins de santé
efficace, jusqu'à 90 % des cas de maladie du légionnaire ne sont pas diagnostiqués car les
symptômes cliniques sont très diffus et la maladie ne se déclare qu'assez rarement. En outre, il
est difficile de distinguer la maladie du légionnaire d'autres formes de pneumonie sur la seule
base des symptômes ou d'examens radiologiques.
Les antigènes solubles spécifiques à Legionella étant détectables très tôt dans l'urine des
patients souffrant de la maladie du légionnaire, l'urine est une matrice d'examen idéale pour les
stades précoces et tardifs de la légionellose5,6. Le test rapide RIDA®QUICK Legionella est
spécialement conçu pour la détection de l'antigène soluble de Legionella dans l'urine des
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patients infectés par Legionella pneumophila du sérogroupe 1, ainsi que pour la détection de
sérogroupes moins fréquents de Legionella pneumophila.
3. Principe du test
Ce test rapide est un test immunochromatique à flux latéral et en une seule étape qui utilise des
anticorps anti-Legionella aussi bien biotinylés que marqués à l'or. Dès qu'un échantillon positif
pour l'antigène de Legionella apparaît, les complexes immunes développent des anticorps antiLegionella marqués qui traversent la membrane. La streptavidine de la ligne de test T se lie aux
complexes immunes par l'intermédiaire de la biotine associée aux anticorps anti-Legionella, de
sorte qu'il se produit une coloration rouge-violette de la ligne T. Les anticorps non liés et
marqués à l'or se lient à la ligne suivante de contrôle C. En cas d'échantillon négatif, il ne se
produit pas une formation de complexes immunes marqués à l'or sur la ligne T mais
uniquement sur la ligne C. La ligne C rouge indique toujours si la procédure d'évaluation est
valable.
4. Contenu du paquet
Les réactifs fournis dans la trousse permettent de faire 25 tests.
Cassette
25 tests
25 tests d'analyse conditionnés individuellement
Reagent │A
13,5 ml
Anticorps spécifiques anti-Legionella ; contient
0,05 % d'azoture, prêt à l'emploi et de couleur bleu
Reagent │B
13,5 ml
Anticorps spécifiques anti-Legionella ; contient
0,05 % d'azoture, prêt à l'emploi et de couleur jaune
Pipette
25 unités
Sachet de 25 pipettes jetables
Reagent vial
25 unités
Sachet de 25 cuves de réaction
Pipet Tip
100 unités
4 sachets contenant chacun 25 pointes pour pipette
Microlit Pipet
1 unité
Pipette pour des volumes de 100 µl
5. Instructions de conservation des réactifs
L'emballage doit être entreposé entre 2 et 25 °C et peut être utilisé jusqu’à la date de
péremption imprimée sur l’étiquette. Après la date de péremption, la qualité n’est plus garantie.
La validité des tests ne peut pas non plus être garantie si l'emballage est endommagé.
6. Autres réactifs et matériel nécessaires
— Agitateur vortex (en option)
— Conteneurs de déchets avec une solution d'hypochlorite de sodium à 0,5 %
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7. Mesures de précaution
Uniquement pour le diagnostic in vitro.
Ce test ne doit être réalisé que par un personnel de laboratoire formé. Il convient de respecter
les directives de travail dans les laboratoires médicaux. Les instructions d’exécution du test
doivent être respectées à la lettre.
Les réactifs contiennent de l'azoture de sodium comme conservateur. Cette substance ne doit
pas entrer en contact avec la peau ou les membranes muqueuses.
Ne pas pipeter les échantillons ou les réactifs avec la bouche. Éviter tout contact avec les plaies
ou les membranes muqueuses. Porter des gants jetables pour manipuler les échantillons et se
laver les mains une fois le test terminé. Ne pas fumer, manger, ni boire dans les zones où des
échantillons sont manipulés.
Tous les réactifs et matériaux entrant en contact avec des échantillons potentiellement
infectieux doivent être traités comme tel avec des désinfectants adaptés (p. ex. l'hypochlorite de
sodium) ou passés à l'autoclave à 121°C pendant au moins 1 heure.
8. Prélèvement et conservation des échantillons
Les échantillons d'urine doivent être prélevés dans des récipients standards propres ; ils
peuvent être conservés jusqu'à 24 heures à température ou entre 2 et 8°C avant utilisation. Ils
peuvent également être conservés pendant 3 jours supplémentaires entre 2 et 8°C. Si une
conservation plus longue est nécessaire avant utilisation, les échantillons d'urine doivent être
conservés à -20 °C. Éviter de congeler et décongeler les échantillons plusieurs fois. Les
échantillons d'urine ne doivent pas être recueillis dans des conteneurs de transport renfermant
un milieu de transport et des conservateurs, du sérum animal, des ions métal, des agents
oxydants ou des détergents car ces substances peuvent interférer avec le test RIDA® QUICK
Legionella test.
9. Procédure du test
9.1. Informations générales
Les échantillons, les réactifs et les tests doivent être ramenés à température ambiante (20 à
25 °C) avant utilisation. Les cassettes de test doivent être retirées de l'emballage
supplémentaire peu avant leur utilisation. Ne pas réutiliser les cassettes une fois utilisées. Le
test ne doit pas être réalisé à la lumière directe du soleil. Ne pas remettre les réactifs
excédentaires dans les cuves à cause du risque de contamination.
9.2. Préparation des échantillons
Bien mélanger toute l'urine avant de l'utiliser dans le cadre du test sans dilution.
Les éventuels cristaux de sel se formant pendant la conservation des échantillons d'urine
doivent être entièrement dissous en chauffant à 37 °C avant de pouvoir utiliser l'urine dans le
test.
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Si l'urine contient des particules pour une raison quelconque, elle doit être filtrée avant
utilisation.
9.3. Préparation des échantillons
Remarque :
Utiliser une nouvelle pointe de pipette Pipet Tip à chaque étape de pipetage.
Ajouter 100 µl de réactif A Reagent│A et de réactif B Reagent│B dans une cuve de réaction
marquée Reagent vial . Ensuite, 2 x 100 µl de l'échantillon d'urine qui doit être examiné et
préparé selon les indications de la section 9.2 sont ajoutés au mélange de réactifs dans la cuve
de réaction Reagent vial composée du réactif A et du réactif B.
La cuve de réaction Reagent vial doit être bien fermée et le contenu bien mélangé (en option :
agitation au vortex). Postérieurement, introduire la cuve de réaction Reagent vial dans l'insert
de réactifs du kit de test et laisser réagir le mélange pendant 10 minutes à TA, et permettre que
les solides sédimentent.
9.4. Analyse des échantillons
Extraire la cassette de test Cassette de l'emballage supplémentaire et la placer sur une
surface plate. Ensuite, placer une nouvelle pointe de pipette Pipet Tip dans la pipette Microlit
Microlit Pipet et prélever 100 µl de plus du mélange de réactifs d'urine, puis pipeter dans le
champ d'application de la cassette de test. Veiller à ce que le liquide puisse s'écouler à travers
la membrane sans difficulté. Si cela s'effectue correctement, la bande de contrôle apparaîtra sur
la ligne de contrôle C au bout d'environ 1,5 minute. Si la ligne de contrôle n'est toujours pas
visible au bout de 1,5 minute, il faudra centrifuger le mélange pendant 5 minutes à 5000 g pour
que sédimentent toutes les particules solides de l'échantillon qui affectent le test, avant de
l'ajouter à un mélange fraîchement préparé de réactif A et de réactif B. Les résultats du test
peuvent toujours être lus au bout de 10 minutes. La couleur des bandes et leur intensité
peuvent passer du rouge-violet au bleu et au gris-violet pendant toute la phase de
développement et après le séchage de la bande.
10. Contrôle qualité – signes de réactif périmé
Le test doit être évalué seulement si la cassette de test est intacte avant de pipeter la
suspension de l'échantillon et si aucune modification de la couleur ou des bandes n'est
observée. De même, après une période d'incubation de 10 minutes, les bandes de contrôle
doivent apparaître de couleur rouge-violet. Si ce n'est pas le cas, avant de répéter le test, il
convient de faire les vérifications suivantes :
- Durée de conservation des cassettes de test et des réactifs utilisés.
- Procédure de test correcte.
- Contamination des réactifs.
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Si, après avoir répété le test avec une nouvelle cassette, les bandes de contrôle ne sont
toujours pas visibles, contactez le fabricant ou votre distributeur local R-Biopharm.
11. Évaluation et interprétation
Un maximum de deux bandes doit apparaître, vues dans le champ d'application de l'échantillon,
avec la séquence suivante : une bande de réaction rouge-violet sur la ligne T du test et une
bande de contrôle rouge-violet sur la ligne C de contrôle. Si la bande de contrôle n'apparaît pas,
le test ne peut pas être évalué et il ne sera pas valide.
Les interprétations suivantes sont possibles :
-
positif pour Legionella : les deux bandes sont visibles.
négatif pour Legionella : seule la bande de contrôle est visible.
Non valide : aucune bande n'est visible ou une option différente de celles
susmentionnées est observée. De même, les colorations des bandes qui apparaissent
bien au-delà de 10 minutes n'ont pas de valeur diagnostique et ne doivent pas être
évaluées.
12. Limites de la méthode
Le test RIDA®QUICK Legionella évalue la présence d'antigènes solubles spécifiques de
Legionella pneumophila dans les échantillons d'urine. Il n’est pas possible d’associer l'intensité
des bandes spécifiques visibles à l’apparition ou la gravité des symptômes cliniques. Les
résultats obtenus doivent toujours être interprétés conjointement aux signes et
symptômes cliniques.
Un résultat positif n’exclut pas la présence d’autres agents pathogènes infectieux ou d'autres
causes.
Un résultat négatif n'exclut pas la possibilité d'infections par Legionella. Un tel résultat peut être
causé par l’élimination temporaire des antigènes solubles ou par une quantité trop faible
d’antigène dans l’échantillon. Si l'anamnèse est en faveur d'une suspicion d'une infection par le
pathogène en question, le test doit être répété avec un autre échantillon d'urine du patient.
13. Performances
13.1. Sensibilité et spécificité cliniques
Une étude de validation rétrospective avec RIDAQUICK Legionella a analysé 100 échantillons.
Ces échantillons ont été prélevés pour un examen diagnostique de routine au Legionella
Reference Laboratory de Dresde, en Allemagne, où ils ont été conservés par la suite à -20 °C.
Après décongélation, les échantillons ont subi un examen comparatif avec RIDA QUICK
Legionella et un autre test disponible dans le commerce. Les résultats de l’étude sont indiqués
dans le tableau 1.
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Tableau 1. Corrélation entre RIDAQUICK Legionella et un autre test rapide disponible dans le
Commerce.
Test rapide
RIDAQUICK
Legionella
Positif
Négatif
Positif
44
7
Négatif
1
44
Correspondance positive :
Correspondance négative :
91,7 %
91,7 %
13.2. Précision
Pour déterminer la précision des tests RIDA®QUICK Legionella, on a analysé la reproductibilité
intra-essai (10 répétitions/1 jour/1 opérateur/1 lot), la reproductibilité inter-jour (3 répétitions/10
jours/1 opérateur/1 lot), la reproductibilité inter-opérateur (3 répétitions/1 jour/3 opérateurs/1 lot)
et la reproductibilité inter-lot (3 répétitions/1 jour/1 opérateur/3 lots). Cinq références ont été
mesurées à chaque analyse : une négative, deux positives faibles et deux positives moyennes.
Les résultats attendus ont été observés dans 100 % des mesures effectuées avec le test
RIDA®QUICK Legionella.
13.3. Réactivité croisée
Plusieurs germes pathogènes du tube digestif ont été analysés avec le test RIDA®QUICK
Legionella et, à l'exception de Staphylococcus aureus (utilisé à la concentration de 1,6 x 107
KBE/ml), il ne s'est produit aucune réactivité croisée. Les analyses ont été faites avec des
suspensions de bactéries (106 à 109 KBE/ml), avec des surnageants de cultures de cellules
infectées par des virus et avec des préparations d'antigènes à utiliser dans le cadre du test
ELISA. Les résultats de cette étude sont indiqués dans le tableau 2.
Tableau 2. Germes avec possibilité de réaction croisée dans RIDA®QUICK Legionella
Organisme
Adénovirus
Bacillus cereus
Origine
Surnageant de culture
cellulaire
Culture
Résultats
Négatif
Négatif
Campylobacter coli
Culture
Négatif
Campylobacter jejuni
Culture
Négatif
Candida albicans
Culture
Négatif
Candida glabrata
Culture
Négatif
Chlamydia pneumoniae
Culture
Négatif
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Citrobacter freundii
Culture
Négatif
Enterobacter cloacae
Culture
Négatif
Enterococcus faecalis
Culture
Négatif
Escherichia coli
Culture
Négatif
Haemophilus influenza
Culture
Négatif
Influenza A/Beijing
AG pour ELISA
Négatif
Influenza A/Sydney
AG pour ELISA
Négatif
Influenza B/Harbin
AG pour ELISA
Négatif
Culture
Négatif
Mycoplasma pneumoniae
AG pour ELISA
Négatif
Virus parainfluenza
AG pour ELISA
Négatif
Proteus mirabilis
Culture
Négatif
Proteus vulgaris
Culture
Négatif
Pseudomonas aeruginosa
Culture
Négatif
Virus respiratoire syncytial
AG pour ELISA
Négatif
Serratia liquefaciens
Culture
Négatif
Serratia marcescens
Culture
Négatif
Staphylococcus aureus
Culture
Positif
Staphylococcus epidermidis
Culture
Négatif
Staphylococcus saprophyticus
Culture
Négatif
Streptococcus agalactiae
Culture
Négatif
Streptococcus pneumoniae
Culture
Négatif
Klebsiella pneumoniae
13.4. Substances interférentes
Les substances mentionnées ci-dessous n’ont pas présenté d’effet sur les résultats du test
lorsqu’elles ont été mélangées dans les échantillons d'urine positifs et négatifs pour le
Legionella dans les concentrations indiquées :
Amoxicilline (antibiotique ; 0,72 % p. v.), lévofloxacine (antibiotique ; 0,15 % p. v.),
érythromycine (antibiotique ; 0,06 % p. v.), sang humain (10 % v. v.), paracétamol (antibiotique ;
1,08 % p. v.), albumine (0,5 % p. v.), sirop contre la toux (0,25 % v. v.), glucose (2,0 % v. v.),
acide ascorbique (vitamine C ; 0,1 % v. v.), bilirubine (0,02 % v. v.), acide borique (0,26 %
p. v.).
13.5 Sensibilité analytique
La sensibilité analytique de RIDA®QUICK Legionella a été déterminée par 2 opérateurs dans 2
lots différents du produit, et le résultant obtenu a été d'environ 6,0 ng d'antigène de
Legionella/ml en analysant une dilution sériée. La limite de détection de 6,0 ng/ml a été
confirmée avec 60 mesures pendant 5 jours dans 2 lots par 2 opérateurs, avec 100 % de
résultats positifs.
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Annexe
Symboles spécifiques au test :
Cassette
Cassette de test
Reagent A
Réactif A
Reagent B
Réactif B
Reagent vial
Cuve de réaction
Pipet Tip
Pointe de pipette
Microlit Pipet
Micropipette 100 µl
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Bibliographie
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