Controle des Performances d`un Spectrophotomètre
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Controle des Performances d`un Spectrophotomètre
Technique instrumentale. Contrôle des performances d'un spectrophotomètre. Contrôle de justesse d'affichage, de largeur de bande passante (monochromatisme), de justesse des absorbances et de linéarité de réponses. 1. Contrôle de justesse d'affichage des longueurs d'onde et de largeur de bande passante à l'aide de nitrate d'holmium Le nitrate d'holmium en solution aqueuse présente des bandes d'absorption très étroites dont les maximums sont de longueurs d'onde bien définies. On peut ainsi contrôler la justesse d'affichage des longueurs d'onde d'un spectrophotomètre. Comme les bandes d'absorption du nitrate d'holmium sont très étroites, l'absorbance mesurée pour chacun des pics du spectre rend compte de la qualité de largeur de bande passante du spectrophotomètre utilisé (voir l'exposé de cours). Plus les absorbances mesurées seront proches des valeurs de référence - valeurs déterminées avec des appareils de référence de bande passante étroite devant la largeur des bandes d'absorption du nitrate d'holmium - meilleur sera la qualité de monochromatisme du spectrophotomètre utilisé dans le cadre de mesures pour absorptiométrie moléculaire. Utiliser une solution de nitrate d'holmium à 50,00 g/L. Mettre en œuvre le spectrophotomètre double faisceau ou simple faisceau à contrôler de façon convenable. En particulier, si l'emploi de 2 cuves est nécessaire, s'assurer de leur identité photométrique (voir protocole annexe). Voici le tableau des valeurs références : pics d'absorption 1 ° maximum 2° maximum 3° maximum 4° maximum 5° maximum 6° maximum 7° maximum 8° maximum le minimum situé entre 250 et 270 nm solution de nitrate d'holmium à 50,00 g/L longueur d'onde au maximum absorbance (bande passante de 1 nm) valeurs de référence : 641 nm 0,39 appréciation des 537 nm 0,56 résultats obtenus : appréciation des résultats obtenus : 485 nm 0,21 les longueurs le dernier chiffre indiqué doit être considéré 473 nm 0,09 d'onde comme juste à + ou - 1 près. 451 nm 0,49 déterminées ne doivent pas différer D'après documentation « Biotrol -Holnicob 416 nm 0,29 de + ou - 1 nm de 1120». 361 nm 0,24 celles proposées. 345 nm 0,08 262 nm 0,61 La norme T 01-030 de décembre 1982 ISO 6286 donne les valeurs suivantes : Perchlorate d'holmium à 50 g/L Filtre oxyde d'holmium 345,0 241,4 444,0 360,9 279,0 451,9 415,0 287,1 453,1 420,0 289,9 472,0 449,5 33,2 482,0 450,0 347,2 486,0 466,0 360,0 531,5 483,0 381,1 632,5 634,0 385,9 643,0 648,0 417,6 656,0 652,0 423,5 Fanny Demay – BTS BioAnalyses & Contrôles 1/2 2. Contrôle de la justesse des mesures et de la linéarité de réponse à l'aide de sels de nickel et de cobalt Les bandes d'absorptions du nitrate de nickel et du nitrate de cobalt en solution dans HNO 3 0,1 mol/L sont bien référencées et assez larges de bande passante pour permettre de contrôler les performances d'un spectrophotomètre en ce qui concerne la justesse des absorbances mesurées et la linéarité de réponse. Utiliser un témoin « zéro » HNO3 0,1 mol/L. Utiliser convenablement le matériel et mettre en œuvre des cuves parfaitement appariées (identité photométrique). Travailler entre 18 et 25 °C. nitrate de nickel Longueur d'onde : 1° maximum 720 nm 2° maximum 655 nm A température de 18 à 25 °C, absorbance d'une solution aqueuse en HNO 3 0,1 mol/L à : 0,1 mol/L 0,2 mol/L 0,4 mol/L 0,21 0,42 0,84 0,18 0,36 0,73 3° maximum 394 nm 0,49 0,98 2,00 1° minimum 345 nm 0,05 0,10 0,19 4° maximum 301 nm 1,38 >2 >2 2°minimum 262 nm 0,30 0,62 1,35 nitrate de cobalt Longueur d'onde : 1° maximum 512nm 2° maximum 302 nm 3° minimum 263 nm pour les valeurs proposées ci-dessus, le dernier chiffre peut être considéré comme exact à + ou - 1 unité près. D'après documentation « Biotrol -Holnicob 1120». A température de 18 à 25 °C, absorbance d'une solution aqueuse en HNO 3 0,1 mol/L à : 0,025mol/L 0,050 mol/L 0,1 mol/L 0,2 mol/L 0,12 0,24 0,47 0,95 0,36 0,71 1,41 >2 0,08 0,18 0,35 0,70 pour les valeurs proposées ci-dessus, le dernier chiffre est exact à + ou - 1 unité près. D'après documentation«Biotrol -Holnicob 1120». La norme T 01-030 de décembre 1982 ISO 6286 donne les valeurs suivantes : Ni(NO3)2, 6 H2O à 2,5 g/L en HNO3 0,1 mol/L : Longueur d'onde en nm Absorbance 720 0,377 660 0,389 395 1,074 300 1,950 Co(NO3)2, 6 H2O à 1,5 g/L en HNO3 0,1 mol/L : Longueur d'onde en nm Absorbance 510 0,632 302 1,484 Fanny Demay – BTS BioAnalyses & Contrôles 2/2