Controle des Performances d`un Spectrophotomètre

Technique instrumentale.
Contrôle des performances d'un spectrophotomètre.
Contrôle de justesse d'affichage, de largeur de bande passante
(monochromatisme), de justesse des absorbances et de linéarité de réponses.
1. Contrôle de justesse d'affichage des longueurs d'onde et de largeur de bande
passante à l'aide de nitrate d'holmium
Le nitrate d'holmium en solution aqueuse présente des bandes d'absorption très étroites dont les
maximums sont de longueurs d'onde bien définies. On peut ainsi contrôler la justesse d'affichage des
longueurs d'onde d'un spectrophotomètre.
Comme les bandes d'absorption du nitrate d'holmium sont très étroites, l'absorbance mesurée pour
chacun des pics du spectre rend compte de la qualité de largeur de bande passante du
spectrophotomètre utilisé (voir l'exposé de cours). Plus les absorbances mesurées seront proches des
valeurs de référence - valeurs déterminées avec des appareils de référence de bande passante étroite
devant la largeur des bandes d'absorption du nitrate d'holmium - meilleur sera la qualité de
monochromatisme du spectrophotomètre utilisé dans le cadre de mesures pour absorptiométrie
moléculaire.
Utiliser une solution de nitrate d'holmium à 50,00 g/L. Mettre en œuvre le spectrophotomètre double
faisceau ou simple faisceau à contrôler de façon convenable. En particulier, si l'emploi de 2 cuves est
nécessaire, s'assurer de leur identité photométrique (voir protocole annexe). Voici le tableau des valeurs
références :
pics d'absorption
1 ° maximum
2° maximum
3° maximum
4° maximum
5° maximum
6° maximum
7° maximum
8° maximum
le minimum situé
entre 250 et 270 nm
solution de nitrate d'holmium à 50,00 g/L
longueur d'onde au maximum
absorbance (bande passante de 1 nm)
valeurs de
référence :
641 nm
0,39
appréciation des
537 nm
0,56
résultats obtenus :
appréciation des résultats obtenus :
485 nm
0,21
les longueurs
le dernier chiffre indiqué doit être considéré
473 nm
0,09
d'onde
comme juste à + ou - 1 près.
451 nm
0,49
déterminées ne
doivent pas différer
D'après documentation « Biotrol -Holnicob
416 nm
0,29
de + ou - 1 nm de
1120».
361 nm
0,24
celles proposées.
345 nm
0,08
262 nm
0,61
La norme T 01-030 de décembre 1982 ISO 6286 donne les valeurs suivantes :
Perchlorate d'holmium à 50 g/L
Filtre oxyde d'holmium
345,0
241,4
444,0
360,9
279,0
451,9
415,0
287,1
453,1
420,0
289,9
472,0
449,5
33,2
482,0
450,0
347,2
486,0
466,0
360,0
531,5
483,0
381,1
632,5
634,0
385,9
643,0
648,0
417,6
656,0
652,0
423,5
Fanny Demay – BTS BioAnalyses & Contrôles
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2. Contrôle de la justesse des mesures et de la linéarité de réponse à l'aide de sels
de nickel et de cobalt
Les bandes d'absorptions du nitrate de nickel et du nitrate de cobalt en solution dans HNO 3 0,1 mol/L
sont bien référencées et assez larges de bande passante pour permettre de contrôler les performances
d'un spectrophotomètre en ce qui concerne la justesse des absorbances mesurées et la linéarité de
réponse.
Utiliser un témoin « zéro » HNO3 0,1 mol/L. Utiliser convenablement le matériel et mettre en œuvre des
cuves parfaitement appariées (identité photométrique). Travailler entre 18 et 25 °C.
nitrate de nickel
Longueur d'onde :
1° maximum
720 nm
2° maximum
655 nm
A température de 18 à 25 °C, absorbance d'une solution aqueuse en HNO 3
0,1 mol/L à :
0,1 mol/L
0,2 mol/L
0,4 mol/L
0,21
0,42
0,84
0,18
0,36
0,73
3° maximum
394 nm
0,49
0,98
2,00
1° minimum
345 nm
0,05
0,10
0,19
4° maximum
301 nm
1,38
>2
>2
2°minimum
262 nm
0,30
0,62
1,35
nitrate de cobalt
Longueur d'onde :
1° maximum
512nm
2° maximum
302 nm
3° minimum
263 nm
pour les valeurs proposées ci-dessus, le dernier chiffre peut être considéré
comme exact à + ou - 1 unité près.
D'après documentation « Biotrol -Holnicob 1120».
A température de 18 à 25 °C, absorbance d'une solution aqueuse en HNO 3
0,1 mol/L à :
0,025mol/L
0,050 mol/L
0,1 mol/L
0,2 mol/L
0,12
0,24
0,47
0,95
0,36
0,71
1,41
>2
0,08
0,18
0,35
0,70
pour les valeurs proposées ci-dessus, le dernier chiffre est exact à + ou - 1
unité près.
D'après documentation«Biotrol -Holnicob 1120».
La norme T 01-030 de décembre 1982 ISO 6286 donne les valeurs suivantes :
Ni(NO3)2, 6 H2O à 2,5 g/L en HNO3 0,1 mol/L :
Longueur d'onde en nm
Absorbance
720
0,377
660
0,389
395
1,074
300
1,950
Co(NO3)2, 6 H2O à 1,5 g/L en HNO3 0,1 mol/L :
Longueur d'onde en nm
Absorbance
510
0,632
302
1,484
Fanny Demay – BTS BioAnalyses & Contrôles
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