Colorations topographiques Hémalun, Phloxine, Safran
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Colorations topographiques Hémalun, Phloxine, Safran
Colorations topographiques Hémalun, Phloxine, Safran (H.P.S.) Principe Coloration histologique topographique standard, associant à une coloration nucléaire par l’hémalun, une coloration cytoplasmique par la phloxine et une coloration du collagène par le safran. C’est une coloration trichromique. Réactifs Hématoxyline de MAYER : Solution aqueuse saturée d’alun de potassium (≅ 2%) 1000ml Hématéine (CI 75290) 2g Acide Acétique 20 ml Faire bouillir la solution d’alun de potassium. Arrêter le chauffage et ajouter au liquide bouillant l’hématéine. Laisser bouillir à nouveau pendant 5 minutes. Refroidir Filtrer. Ajouter l’acide acétique Eau chlorhydrique à 1% dans l’eau distillée. Eau ammoniacale à 1% dans l’eau distillée. Phloxine (CI 45410) à 2 o/oo dans l’eau distillée. Safran en solution alcoolique (CI 75100) 1Sécher à 56°C, pendant 24H00, 20g de safran du Gâtinais 2Pulvériser au mortier. 3Ajouter 200ml d’alcool éthylique absolu. 4Remettre à l’étuve pendant 3 jours, en agitant tous les jours. 5Laisser décanter et récupérer l’alcool surnageant. Renouveler à 5 reprises les étapes 3, 4 et 5 et regrouper le colorant dans un même flacon. Résultats : - Les Les Les Les noyaux sont bleus violets cytoplasmes sont roses hématies sont rouges ou non colorées fibres de collagène sont roses – orangées Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour AVRIL 2007 Colorations topographiques Hémalun, Phloxine, Safran (H.P.S.) Technique Plonger la lame dans trois bains de xylène en agitant 3x5 min Plonger dans deux bains d’alcool absolu en agitant les lames 2x3 min Plonger dans un bain d’alcool à 80% en agitant 2 min Réhydrater à l’eau courante puis à l’eau distillée Colorer à l’Hémalun 5 min Rincer à l’eau courante Plonger dans l’eau chlorhydrique Rincer à l’eau courante Plonger dans l’eau ammoniacale Rincer à l’eau courante Contrôler la différenciation au microscope Rincer à l’eau distillée Colorer à la Phloxine 3 min Rincer à l’eau courante Plonger dans l’alcool absolu en agitant la lame ≈1 min Plonger dans un deuxième bain d’alcool absolu ≈2 min Colorer au Safran 4 à 6 min Rincer dans deux bains d’alcool absolu en agitant la lame Plonger dans trois bains de xylène en agitant la lame Monter sous lamelle à l’aide de résine Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour AVRIL 2007