LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE

LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE
HAUTE PERFORMANCE
(CLHP OU HPLC)
I. DEFINITION
Regroupe les méthodes chromatographiques où la
phase mobile est un liquide
Chromatograhie en
phase liquide
Sur colonne
Classique
Planaire
CLHP
CCM
• Classique: la PM s’écoule lentement, par gravité
• CLHP: la PM est pompée sous pression et les PS sont plus performantes
II. APPAREILLAGE
Eléments reliés par tubes
( Ø 0,1 mm) en inox ou PEEK
A : réservoir de PM
B : Vanne électro
magnétique de
mélange des PM
C : Pompe
D : Egaliseur de pression
E : Chambre de mélange
F : Injecteur
G : colonne
H : Unité HPLC
I : Détecteur
J : Interface PC
1. Réservoir de solvant
Module de dégazage sous vide
2. Pompes
a. Pompe à un seul piston
Came
Clapet de sortie
Clapet d’entrée
Réservoir de solvant
b. Pompe à deux têtes en série
c. Gradients basse-pression ou haute pression
Electrovannes
Système basse pression
Une seule pompe → chambre
de mélange basse pression
Chambre de mélange
Basse pression
Pompe
Haute pression
Exemple de configuration
pour gradient haute pression
Système haute pression
3. Injection
• Avec une vanne à boucle d’échantillonnage
• Manuellement ou automatiquement avec un passeur d’échantillon
1. Remplissage de la boucle:
Le solvant d’élution circule librement
de la pompe (en 1). L’injection est
réalisée (en 6) dans la boucle.
Le surplus de solvant est évacué
dans l’effluent (en 4).
2. Injection de l’échantillon
On bascule la vanne par action d’un
levier et le solvant va alors balayer
la boucle (de 1 à 4) et entraîner
l’échantillon dans la colonne.
4. Colonnes
5. Phases stationnaires
a. Gel de silice
Particules sphériques de gel
Vue au microscope électronique
Matériau d’une
colonne monolithe
b. Phases stationnaires à base de silices greffées
Phases stationnaires greffées
+++
c. Chromatographie en phase normale ou inversée
Phase normale
Phase inverse
6. Phases mobiles
Pouvoir d’élution des solvants
sur
sur
t R diminue
t R augmente
7. Détecteurs
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