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Réactions de
fixation du
complément
Année 2008
Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS)
DURAND - POCHET
1
Rappels

Système du complément = ensemble de
protéines
synthétisées par les hépatocytes
 à l’état inactif
 présentes dans le plasma et la lymphe

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Rappels

Activation des protéines du complément (C’)



par contact avec les enveloppes des microorganismes.
par liaison à un site particulier des Ac, démasqué lors
de la formation d’un complexe immun
Activation des protéines du C’ en cascade
produisant des composés à action :



cytolytique par formation du complexe d’attaque
membranaire (CAM),
chimiotactique
opsonisante.
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animations


Lien site
Vidéo complément
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Cytolyse provoquée in vitro
par le Complément (C’)
1) Formation d’un système hémolytique
>
Globules rouges de mouton (GRM)
sensibilisés par des anticorps antiGRM
2) Activation du C’ en cascade
3) Hémolyse provoquée par la
formation de CAM
Année 2008
C’
C’
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RFC réactions de
fixation du complément


Lien site
animation
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Principe des réactions de
fixation du complément
Préliminaire :
Décomplémentation du sérum par
chauffage 30 min. à 56°C
Élimination de toute autre source de complément que le réactif
Calibration de la quantité de C’ présent lors de la réaction
Titrage du C’ qui sera utilisé dans la
réaction de fixation
Préparation d’une gamme de dilution du C’
Mise en contact avec le système hémolytique
Détermination du titre : plus forte dilution présentant une hémolyse
totale
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Principe des réactions de
fixation du complément
1ère étape : Fixation
Mise en contact : Sérum + Ag + C’
Sérum positif
Sérum négatif
C’
C’
C’ fixé :
activité résiduelle nulle
C’
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C’ libre :
activation possible par
un complexe immun
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Principe des réactions de
fixation du complément
2ème étape : Révélation
Ajout du système hémolytique
Sérum positif
Sérum négatif
C’
C’
C’
Pas d’hémolyse (NH)
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Hémolyse (HT)
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Conditions opératoires

Nécessaires aux activités enzymatiques
de la cascade d’activation du complément
Température : 37°C
 Tampon VCM : Véronal, Calcium, Magnésium

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Témoins
Témoin GR
Témoin
GRS
Témoin C’
Témoin Ag
Témoin
Sérum
Tampon
Tampon
GR
GRS
Tampon
GRS
C’
Tampon
GRS, C’ Ag
Tampon
GRS, C’
Sérum
Résultat
attendu
NH
NH
HT
HT
HT
Validation
Stabilité
des GR
Stabilité
des GRS
Activité du
C’ sur le
SH
Absence
d’activité
antiC’ de
l’Ag
Absence
d’activité
antiC’ du
sérum
Nom
Composition
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Résultats
Sédimentation
= NH
Hémolyse partielle
= HP
Fixation complète
du C’
Hémolyse totale
= HT
Fixation partielle
du C’
Présence d’Ac spécifiques
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C’ non fixé
Absence d’Ac
spécifiques
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Interprétation

Analyse des témoins




Témoins GR et GRS = NH : Globules Rouges de Mouton Sensibilisés ou
non utilisés stables dans les conditions opératoires
Témoins C’ = HT : Système Hémolytique GRM-antiGRM totalement
hémolysé par le C’ (bonne quantité de complément et bon équilibrage
sur SH)
Témoin Ag = HT : Antigène utilisé sans activité anticomplémentaire
Témoin Sérum = HT : Sérum à tester sans activité anticomplémentaire.

Conformité de tous les témoins = validation des réactifs
et du sérum.

Titre du sérum = plus forte dilution du sérum qui fixe
totalement (ou partiellement) l’activité du complément.
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